N-Hydroxycinnamoylphenalkylamides (36H) te montre tou de kapasite antioksidasyon ak antityrosinase. Yo te etidye konpoze an pou pwopriyete antioksidatif li yo, lè l sèvi avèk yon tès 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazul- (DPPH-), yon evalyasyon fòs antioksidan (FRAP) ki diminye ion ferrik, ak yon evalyasyon metal- tès pouvwa chelating. Rezilta yo te montre ke 36H te gen kapasite antioksidatif nan egzamen yo DPPH-scavenging ak ferrik-diminye pouvwa men tès la pouvwa chelating pa t 'demontre kapasite antioksidatif. 36H te mezire tou pou aktivite inhibitor tirozinaz aplike platfòm divès espès, ki gen ladan djondjon in vitro, melanom sourit B16F10, ak selil melanosit imen. An tèm de repwesyon tirozinaz djondjon nan vitro, 36H kenbe pwosesis melanogenesis yo. Li sipoze ke 36H bloke sit aktif tirozinaz la kòm yon inibitè konpetitif pou tirozinaz djondjon, kidonk pa diminye viabilite selilè nòmal melanosit imen an. Yon reyaksyon chèn polymerase an tan reyèl (qRT-PCR) ak Western blot te dekouvri ke 36H te desann RNA ak pwoteyin ki gen rapò ak melanogenesis, ki gen ladan pwodiksyon pigman (MITF, tirozinaz, TRP-1, ak TRP-2) , spirasyon melanozòm (Rab27a), ak transpò melanozòm (Myo5a, MLPH, ak Mreg). An jeneral, 36H montre fonksyon bio antioksidasyon ak repwesyon melanin, kidonk te gen yon posibilite pou aplikasyon li kòm yon aditif manje oswa yon ajan blanchi po.

Dapre etid ki enpòtan,sistanchse yon zèb komen ke yo rekonèt kòm "mirak lazèbki pwolonje lavi". Eleman prensipal li secistanoside, ki gen plizyè efè tankouantioksidan, anti-enflamatwa, epipwomosyon fonksyon iminitè. Mekanis ki genyen ant cistanche akpoblanchimanmanti nan efè a antioksidan nancistanche glikozid. Melanin nan po moun pwodui pa oksidasyon antirozinkatalize patirozinaz. La oksidasyonreyaksyon mande pou patisipasyon nan oksijèn, kidonk radikal yo san oksijèn nan kò a vin yon faktè enpòtan ki afekte pwodiksyon melanin. Cistanche genyencistanoside, ki se yon antioksidan ak ka diminye jenerasyon an nan radikal gratis nan kò a, konsaanpeche pwodiksyon melanin.

Klike sou Cistanche Tubulosa Supplement

Mande plis:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

1. Entwodiksyon

Po imen an se pi gwo ògàn nan kò imen an; li kenbe fonksyon kòporèl yo epi li anpeche pèt dlo, elektwolit, ak biomolekil. Po a konpoze de epidèm, dèrm ak ipodèm. Epidèm la divize an senk kouch separe: stratum corneum, stratum lucidum, stratum granulosum, stratum spinosum, ak strat basal [1]. Kouch debaz epidèm la, ki konekte ak dèrm la, se stratum basale ki gen melanosit. Melanosit gen dendrit pou transfere melanin nan keratinosit, ki detèmine sifas koulè po a akòz kontni melanin nan keratinosit sa yo [2].

Radikal lib yo konpoze de yon atòm oswa yon gwoup atòm ki gen youn oswa plis elektwon ki pa pè. Yo patisipe nan reyaksyon fizyolojik, metabolik, ak iminitè ak fonksyon transfè siyal. Malgre ke yo se yon pati nan pwosesis nòmal byochimik ki an sante nan kò a, yo menm tou yo responsab pou domaj la. Espès oksijèn reyaktif (ROS) ak divès radikal gratis yo ankouraje pa jenerasyon anion superoksid oswa peroksid idwojèn. Sa a ka lakòz mesaj konfonn, domaj nan manbràn selilè, ak domaj nan kominikasyon selil ion akòz peroksidasyon lipid. Sa a afekte molekil intraselilè ki prezante gwoup SH ak pwoteyin aji ak ADN [3]. Kantite ROS kontwole pa sistèm defans pwòp tèt ou ki se antioksidan medyatè nan eta nòmal yo, tankou antioksidan. Men sa yo enkli vitamin C, vitamin E, oswa glutatyon [4], ki retire radikal gratis pou anpeche domaj selilè. Sepandan, yo deranje balans eta oksidasyon selilè ki lakòz twòp ROS. Etid anvan yo te montre ke anpil maladi dejeneratif, tankou aje ak kansè, yo ki te koze pa espès oksijèn aktif oswa radikal gratis. Pwopriyete antioksidan yo sijere ke peroksidasyon nan lipid nan manbràn melanosit ogmante kontni an nan glutatyon entraselilè, ki ka kont pou depigmantasyon [5, 6].

Fè nwa nan po a, je, ak cheve ki te koze pa sentèz la nan melanin, ki se yon biopolymer pigman ki sentèz nan melanozòm nan melanosit. Melanin se yon mekanis pwoteksyon kont domaj nan limyè UV [7]. Jèn konjenital ka afekte koulè po, men endiksyon radyasyon UV, enflamasyon, ak chanjman ormon lakòz melanosit sentèz plis melanin. Men, twòp pwodiksyon melanin ka pwovoke maladi pigman, tankou melasma, lentigo senil, freckles, ak ipèpigmantasyon [8]. Sa yo anjeneral trete lè l sèvi avèk pwodui kosmetik oswa engredyan pharmaceutique ki gen konpozan blanchi po. Menm si eleman sa yo soti nan sous natirèl, se sèlman kèk ajan yo itilize nan pwodui kosmetik oswa medikaman paske nan enkyetid sekirite oswa enkyetid yo nan efikasite blanchi. Melanogenesis enplike nan lyezon nan òmòn nan -melanocyte-stimulan ak melanocortin -1, ki ogmante siklik adenosine monofosfat (cAMP) ak aktive faktè transkripsyon ki asosye ak mikroftalmi (MITF) [9]. MITF ogmante ekspresyon de yon anzim melanogenic, tirozinaz, ki sèvi yon fonksyon enpòtan nan idwoksilasyon L-tirozin nan dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) ak oksidasyon L-DOPA nan dopaquinone [10]. Tretman medikal ak kosmetik yo ap itilize de pli zan pli inhibiteurs aktivite tirozinaz. Pwodiksyon melanogenesis ak transfè melanosom soti nan melanosit nan keratinosit yo nesesè pou kolorasyon po a [11]. Melanosomes yo mare ak cytoskeleton aktin nan periferik melanosit atravè konplèks la triparti ki fòme pa Ras ki gen rapò ak pwoteyin Rab-27 (Rab27a), melanophilin (MLPH), ak myosin Va (Myo5a). Rab27a se yon pwoteyin manbràn ki enplike nan transpò pwoteyin ak ti transdiksyon siyal GTPase-medyatè. Melanophilin fòme yon konplèks ternary ak Rab27a nan sit GTP-bound ak Myo5a ki se pwoteyin motè a. Pigmantasyon nan mamifè vizib nan cheve a ak po se dapre konplèks tri-pwoteyin sa a pou mare òganèl ki pwodui pigman yo. Si pwoteyin konplèks la ensufizant, koneksyon ant F-aktin ak melanozòm kraze [12].

Nan konpoze potansyèl terapetik pozitif yo, yo rapòte N-hydroxycinnamoylphenalkylamides (36H) gen yon efè inhibition sou ekspresyon matris metaloproteinases- (MMP-) 9 nan THP -1, yon liy selil monositik lesemi imen, ki ankouraje. pa faktè necrosis timè- (TNF-) [7]. Yon etid anvan te montre ke ekspresyon TNF pwovoke nan MMP-9 pou tou de nivo pwoteyin ak mRNA te konplètman inibit nan yon fason ki depann de konsantrasyon (1-20 μM). Li te jwenn ke 36H ansibleman siprime faktè nikleyè-κ limyè polypeptide jèn enhancer nan selil B (NF-κB) siyal jan detekte pa NF-κB repòtè jèn tès la men pa te gen okenn efè sou degradasyon an nan (faktè nikleyè nan polipèptid limyè κ). jene enhancer nan inibitè selil B (IκB) oswa translokasyon nan NF-κB Done iminopresipitasyon chromatin montre ke afilyasyon ki genyen ant MMP-9 ak NF-κB p65 subunit (p65) jèn pwomotè te antyèman negasyon pa 36H ak fosforilasyon an. nan p65 pa te enfliyanse. An jeneral, yon rapò anvan te demontre ke 36H siprime sekresyon MMP-9 pa downregulation ki vize nikleyè nan mekanis chemen NF-κB nan THP-1. 36H se yon analòg nan asid kafeyin. phenethyl ester (CAPE), ki se yon suppressor li te ye nan metastaz kansè ak envazyon [14]. Yo te etidye aktivite antioksidan ak radikal-radikal gratis nan kèk analog CAPE, ak rezilta etid sa yo te pouse etid sa a pou detèmine si 36H redwi. aktivite tirozinaz ak RNA ak pwoteyin ki gen rapò ak melanogenesis ki desann. Etid sa a jwenn ke 36H se yon antioksidan potansyèl ak pozitif ak yon ajan blanchi po.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Reyaktif ak materyèl.Dimethyl sulfoxide (DMSO) ak L-tirozin yo te jwenn nan Sigma-Aldrich Chemical Inc. (St. Louis, MO, USA). Dulbecco a modifye Eagle's medium (DMEM) ak serom fetal bovine (FBS) te achte nan men Gibco-BRL (Gaithersburg, MD, USA). Tout reyaktif ak tanpon altènatif yo te akeri nan pite komèsyal ki pi wo a.

2.2. Chimik sentèz 36H.Pwofesè Yueh-Hsiung Kuo te bay 36H, ki te itilize metòd ki vin apre yo soti nan kouple amid-obligatwa pou jwenn konpoze yo. Benzotriazol-1-yloxytris (dimethylamino)-phosphonium hexafluorophosphate (BOP) te konbine avèk yon melanj de R2-NH2, R1-COOH, ak triethylamine (Et3N) nan dimethylformamide (DMF). Solisyon reyaksyon an te melanje pou 3{{1{{30}}}} min nan 0 degre C epi answit melanje nan 25 degre C pou 2 èdtan. Lè likid chimik la te evapore, rezidi a te divize ant H2O ak acetate etil (AcOEt). Lè sa a, rezidi a te filtre ak pirifye lè l sèvi avèk kolòn chromatografi ak yon solisyon eluting (AcOEt-CH2Cl2, 1: 1, v / v) sou jèl silica (70-230 ak 230-400 may, Merck 7734). Pwodwi yo te rkristalize nan AcOEt pou jwenn pi bon medikaman oksidatif ak lonjevite selilè ak kristal ki pi ideyal yo. Yo te itilize yon espektromèt mas Finnigan TSQ-46C pou espektrometri mas elektwonik enpak (EIMS). 1H ak 13C NMR spectre yo te jwenn lè l sèvi avèk yon espektromèt Bruker Avance 500. Yon espektrofotomèt Nicolet Magna-IR 550 anrejistre spectre IR yo. 36H te okòmansman fonn nan solisyon DMSO anvan etid sa yo. Pou chak tès, yo te itilize DMSO ak yon konsantrasyon konstan ak final 0.2 pousan (v/v). Konpoze sa a pa te konnen kòm yon antioksidan oswa blanchi po [7, 13], ak estrikti a montre nan Figi 1. Yo te fonn echantiyon nan DMSO, ak konsantrasyon divès kalite yo te prepare ak yon konsantrasyon final DMSO ki mwens pase 0.5 pousan.

2.3. Esè DPPH Kapasite Radikal-Scavenging.DPPH se 2,2-difenil-1-picrylhydrazil, ki vin wouj fonse lè li gen yon radikal lib. Lè antioksidan an elimine radikal ki soti nan DPPH˙, li diminye DPPH˙ nan yon DPPH ki estab, ki gen yon koulè jòn limyè [14]. Dòz divès kalite 36H (2 μL nan volim total) yo te konbine nan 98 μL nan DPPH (60 μM) melanj, epi yo te egzamine plak la lè l sèvi avèk yon 517 nm anzim-lye immunosorbent assay (ELISA) lektè espektroskopik. Asid L-ascorbic te itilize kòm kontwòl pozitif. Rapò rezidyèl DPPH yo te trase bò kote echantiyon an pou detèmine kantite antioksidan ki diminye ansyen konsantrasyon DPPH la. Pwopriyete scavenging (pousan) te detèmine kòm

2.4. Esè pou diminye pouvwa.Ansèyman fòs antioksidan ferrik iyon-diminye (FRAP) souvan aplike pou evalye kapasite antioksidan bwason, manje, fwi ak sipleman nitrisyonèl, ki gen ladan flavonoid oswa polifenol. Divès dòz 36H yo te entwodwi nan yon melanj tanpon fosfat 67 mM (0.085 mL, pH 6.8) ak 20 pousan ferricyanide potasyòm [K3Fe(CN)6, 2.5 μL). Solisyon an te reyaji pou 20 minit nan 50 degre C ak Lè sa a, asid trichloroacetic (10 pousan, 0.16 mL) te ajoute nan solisyon an anvan li te santrifuje nan 3000g pou 10 min [14]. Sipènatant solisyon an (75 μL) te konbine avèk 2 pousan FeCl3 (25 μL), ak Lè sa a, yon lektè espektroskopik ELISA mezire absorbans ki kapab lakòz nan 700 nm, pou yon plak byen 96-. Butylated hydroxyanisole (BHA) te anplwaye kòm kontwòl pozitif la. Plis kalifikasyon rediksyon an pi gwo, pi fò absòbe a.

2.5. Esè nan Aktivite Metal-Chelating.Chlorophyll a ion-chelating ferrous potansyèl te mezire itilize teknik Chen et al. [14]. An brèf, dòz espesifik echantiyon yo te fonn nan DMSO epi yo te prezante nan yon melanj FeCl2·4H2O (2.0 mM, 0.{05 mL). Anplis de sa nan ferrozine (5 mM, 0.2 mL) inisye reyaksyon an lè solisyon an te souke fòs ak Lè sa a, kite pou 10 min nan 25 degre C. Lè reyaksyon an te rive nan ekilib, valè yo absòbe pou solisyon an te detèmine nan 560 nm lè l sèvi avèk yon machin vid. EDTA te itilize kòm kontwòl pozitif. Fòmil kalkil pou aktivite chelating la te idantik ak (1).

2.6. Egzamen Aktivite Tirozinaz Chanpiyon.Tou de sipresyon aktivite tirozinaz djondjon ak anpèchman tirozinaz selilè yo te detèmine espektrofotometrik lè l sèvi avèk metòd anvan an, ak modifikasyon minè [2]. Asid Kojik te itilize kòm kontwòl pozitif pou tès aktivite tirozinaz la. Materyèl yo te premye fonn nan DMSO akeuz ak kiltive nan L-tirozin (2.5 mg / mL) ak tanpon fosfat (50 mm, pH 6.8). Tout modèl yo itilize DMSO, ki pa enpòtan pou aktivite tirozinaz lè DMSO konstitye<0.5% of the total volume. Subsequently, 25 U/mL of mushroom tyrosinase with an identical buffer was then added, and the solution was incubated at 37° C for 30 min. An ELISA spectroscopic reader was used to conduct the absorbance measurements for the assays at 475 nm, using 96-well microplates (Molecular Devices, CA, USA).

2.7. Kilti Selil Melanosit Imèn (HMC).Melanosit epidèm prensipal imen soti nan prepuce neonatal yo te akeri nan Cascade Biologics. Sa a te aplike tou pa Wang et al. [2]. Li te kiltive nan Medium 254 (M-254- 500; Cascade Biologics, Portland, OR, USA) ak amelyore ak sipleman kwasans melanosit imen (HMGS, nimewo cat. S-002-5). Mwayen 254 se yon mwayen fondamantal ak kèk vitamin ki pa esansyèl ak esansyèl, konpoze òganik, asid amine, sèl inòganik, ak mineral tras. Sipleman kwasans melanosit imen an gen ladan serom fetis bovin, ensilin bovine, ekstrè pitwitè bovine, transferrin bovine, idrokortizon, faktè kwasans fibroblast debaz, phorbol 12-myristate 13-acetate, ak eparin. Tout selil yo te enkube a 37 degre C nan yon enkibatè imidite ak yon atmosfè 5 pousan CO2.

2.8. Detèminasyon Viabilite selil HMC.Vitabilite selil yo te detèmine lè l sèvi avèk yon tès MTT [3]. Lè yon tetrazole jòn konbine avèk dehydrogenase mitokondriyo (ubiquinone) nan selil k ap viv yo, bag yo tetrazolyòm nan MTT fende epi redwi nan formazan koulè wouj violèt. Selil yo te simen nan yon dansite 9 × 103 selil/pi nan 96-plak pi. Lè selil yo te kiltive pou yon jou, mwayen an te chanje, epi konsantrasyon diferan nan 36H yo te ajoute nan yon volim final mwayen nan 100 μL. Apre sa yo te enkube pou 48 èdtan, mwayen an te ranplase ak yon mwayen fre (100 μL), ki gen ladan MTT (0.5 mg / mL). Lè sa a, plak la te kiltive nan yon enkibatè nan 37 degre C pou 2 èdtan ak 5 pousan CO2. Lè sa a, yo te ajoute DMSO (100 μL) nan chak pi pou fonn kristal formazan koulè wouj violèt yo. Pou asire ke asyèt yo reyalize maksimòm disolisyon, asyèt yo te dousman souke epi melanje nan fè nwa a pou 10 min ak mezire nan 595 nm. Kwasans selilè te kalkile kòm

2.9. Mezi Aktivite Tirozinaz nan HMC.Pou detèmine aktivite tirozinaz nan selil melanosit imen (HMC) (5 × 104 selil pou chak pi), yo te pozisyone yo nan plak 12-byen nan 1000 μL mwayen ak diferan dòz 36H ak kiltive pou 48 èdtan [2] . Yo te itilize tanpon PBS pou lave selil echantiyon yo te trete, epi sa yo te Lè sa a, liz ak 1 pousan Triton X-100/PBS. Lè sa a, ekstrè anzim la kolekte nan lisat selilè ki kapab lakòz ak konbine avèk 50 μL nan 2 mM L-tirozin. Lè sa a, ekstrè yo te enkube pou 3 èdtan nan 37 degre C nan fènwa. Lè sa a, yo te itilize yon espektrofotomèt pou detèmine absorbans yo nan 490 nm.

2.10. Detèminasyon kontni Melanin nan HMC.Avèk kèk modifikasyon minè, yo te itilize teknik anvan an tou pou eksperyans sa a [2]. Granules selilè yo te fonn nan 2.0 N NaOH ak 10 pousan DMSO epi yo te chofe a 90 degre C pou 1 èdtan. Sispansyon yo te separe pa santrifuje pou 10 min nan 10,000g. Sèvi ak yon espektrofotomètr, kontni melanin la te detèmine atravè done ki pwodui nan yon nivo absòbe 475 nm.

2.11. Quantitative an tan reyèl Polymerase chèn reyaksyon.Pou qRT-PCR, yon reyaksyon 20 μL te genyen yon melanj 0.4 mL de transkriptaz inverse: 10 μL 2 × QuantiTect SYBR Green Master Mix (QIAGEN, Valencia). , CA, USA) ak Taq polymerase demaraj cho a, 0.8 mL primè, ak 0.5 mL (10 ng/mL) modèl la. Yo bay sekans primè yo nan Tablo 1. Sistèm StepOnePlus™ te itilize pou tout tès PCR an tan reyèl. Reyaksyon an te konplete lè w te fè reyaksyon RT a 42 degre C pou 20 min epi apre sa aktive FastStart Taq DNA polymerase a nan 95 degre C pou 5 min. Lè sa a, sa a te anplifye pou 40 oswa 50 sik nan 95 degre C pou 5 segonn pou denaturasyon, rkwir, ak akizisyon nan 60 degre C pou 5 segonn. Li te finalman long nan 72 degre C pou 15 sec. Fliyoresans ka mezire tou apre faz elongasyon an, men pou eksperyans sa a, li te mezire apre faz nan recuit. Avèk yon plak 96-byen, yo te ajoute 9 μL nan lisat la nan 11 μL nan melanj reyaksyon an, ki konpoze de 10.6 μL MasterMix ki soti nan twous nwayo Eurogentec qPCR pou SYBR Green I (1.4 μL nan 50 mM MgCl2, 2). μL 10x tanpon reyaksyon, 0.8 μL nan 5 mM dNTP melanj, 0.6 μL SYBR Green I, 5.7 μL nan dlo san nukleaz, ak 0.1 μL nan cho GoldStar Taq polymerase), 0.1 μL MS2 RNA, 0.1 μL inibitè, ak 10. 0.1 μL Jadendanfan REV (100 μM), osi byen ke MS2 FWD pou tès SG-PERT sou sistèm qPCR ABI 7300 la. Reyaksyon qRTPCR la, aktivasyon anzim GoldStar Taq cho a, 40-anplifikasyon sik, rkwit ak akizisyon, denaturasyon nan 95 degre C, ak elongasyon nan 72 degre C itilize enstriman ABI 7300 la. Pou prepare tès la, tout reyaktif yo te kenbe swa sou yon blòk refwadisman oswa sou glas. Reyaksyon SGPERT kopi yo te fèt sou chak echantiyon lysate. Lè l sèvi avèk lojisyèl ak enstriman qPCR, yon ABI 7300 ak papòt li yo detèmine manyèlman, ak yon LightCycler® 480 ak metòd maksimòm dezyèm dérivé li yo, te pwodwi sik la nan quantification (Cq) valè. Sèvi ak lojisyèl an menm pou tou de enstriman, pik yo k ap fonn yo te tou otomatikman kalkile.

2.12. Western Blotting.Yo te trete yon total de 1 × 105 selil ak gwoup echantiyon oswa kontwòl machin vid la pandan de jou. Selil yo te rekòlte ak lysed ak lysis tanpon (50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 137 mM klori sodyòm, 50 mM fliyò sodyòm L, 10 mM pirofosfat sodyòm, 20 mM - glycerophosphate, 1 mM fenil fluorimetilsulfonilfonil). , 1 mM EDTA, 10 pousan gliserin, 1 pousan Nonidet P -40, 2 μM leupeptin, 0.1 mM orthovanadate sodyòm, ak 2 ug / mL aprotinin) [14]. Lysates yo te santrifuje nan 20,000 × g pou 30 min, epi konsantrasyon pwoteyin yo nan solisyon an supernatant yo te detèmine ak yon twous tès pwoteyin asid bicinchoninic (BCA) (Pierce, Rockford, IL, USA). Kantite egal pwoteyin yo te separe pa elektwoforèz jèl sodyòm dodecyl silfat-polyacrylamid (SDS-PAGE) ak Lè sa a, elektwotransfè nan yon manbràn nitrocellulose (PALL Life Science, Ann Arbor, MI, USA). Manbràn an te bloke pou 1 èdtan ak 5 pousan lèt san grès nan tanpon PBS-T (PBS ki gen 0.1 pousan Tween 20). Fim transfè a te retire ak anpil atansyon nan tank transfè mouye a ak plas transfè semisèk la epi mete l nan yon bwat ki te gen 5 pousan lèt ekreme nan 1x TBST pou 1 èdtan nan tanperati chanm. Apre sa, li te lave dousman ak 1x TBST pou retire tras lèt ekreme a. Lè sa a, manbràn la te enkube ak respektif antikò prensipal yo. Nan chak ka, yo te enkube manbràn yo ak antilapen oswa antikò sourit ki konjige peroksidaz ak refor epi yo te trete ak reyaktif deteksyon ECL (PerkinElmer, ECL1: ECL2=1: 1). Yo te itilize yon sistèm imaj kimiluminesan mini-gwosè ki soti nan Syans Lavi pou mezi pou detekte gwoup yo [14].

2.13. Analiz estatistik.Twa nan chak konsantrasyon pou estanda a ak echantiyon yo te itilize. Lè l sèvi avèk T-tès Elèv la, rezilta yo te konpare estatistik e yo te eksprime lè l sèvi avèk mwayèn valè yo mwayèn ± devyasyon estanda (SD).

3. Rezilta yo

3.1. DPPH Aktivite gratis Radikal-Scavenging.ROS ka jenere peroksid lipid, domaj ADN, ekspresyon pwoteyin, aje tisi, ak jenèz kansè lè balans ki genyen ant radikal gratis ak antioksidan nannan detounen. Reyaksyon chèn radikal gratis yo bloke pa netralize don yo elèktron oswa akseptasyon ak chelating pè Lone gratis. Diminye estrès oksidatif soti nan aspè intrinsèques ak ekstèn se yon fason pou ogmante sante. Etid sa a te egzamine pwopriyete antioksidan, lè li te detèmine pouvwa rediksyon ferrik la, kapasite DPPH pou retire radikal gratis, ak pouvwa metal-chelating. Ogmante jenerasyon ak akimilasyon ROS pwodui oksidasyon lipid nan manje ak pwodui kosmetik ak aktivite antioksidatif natirèl. An patikilye, pwopriyete gratis radikal-scavenging yo enpòtan anpil nan aditif nitrisyon fonksyonèl ak pwodwi swen pou po.

Premye tès inhibitor oksidasyon an te DPPH gratis radikal-scavenging tès la. Sa a se yon platfòm eksperimantal senp ak ekonomik, nan ki antioksidan aji pou anpeche pwodwi oksidasyon. Antioksidan chanje koulè ki estab reaktif DPPH radikal ki soti nan koulè wouj violèt nan jòn limyè diphenyl-picrylhydrazine. Pou detèmine pwopriyete antioksidan 36H yo, yo te aplike yon dòz 100 μM pou detèmine kapasite nan scavenging. Tablo 2 montre ke 36H te montre ekselan kapasite radikal lib scavenging ak scavenges 60 pousan nan radikal lib DPPH ak vitamin C nan menm konsantrasyon (100 μM) scavenges 85.3 pousan.

3.2. Ferrik diminye pouvwa antioksidan.Dezyèm tès inhibitor oksidasyon an se tès pouvwa rediksyon ferrik la, ki se yon fason komen ak serye pou mezire sentèz konplèks Fe(III)-ferricyanide la. Yon ajan fonksyonèl diminye konplèks Fe3 plis / ferricyanide nan fòm fereuz la. Konbinezon sa a te gen yon koulè ble nan 7{{10}}0 nm paske K4Fe(CN)6 reyaji ak Fe3 plis pou fòme Fe[Fe(CN)6]3. Nan eksperyans la, koulè a ​​nan solisyon an chanje soti nan jòn limyè nan diferan tout koulè ble ak vèt, tou depann de pouvwa a diminye nan konpoze sib la. Tablo 2 prezante ke BHA nan 100 μM te gen yon valè pouvwa rediksyon nan 0.95 ak 36H nan 100 μM te gen yon valè pouvwa rediksyon nan 0.85 konpare ak BHA. Se poutèt sa, 36H te montre gen bon pouvwa antioksidan ferrik-diminye.

3.3. Ferrous Ion-Chelating Kapasite.Aktivite chelating pou iyon FERROUS 36H yo montre nan Tablo 2. EDTA (100 μM) te itilize kòm yon kontwòl pozitif. Fe2 plis ak ferrozine fòme konplèks quantitatively. Fòmasyon nan konplèks reyaktif souvan deranje, paske nan ajan chelating, ki rezilta nan yon rediksyon nan koulè wouj nan konplèks la. 36H nan yon dòz 10 μM pa te gen okenn efè enpòtan sou Fe2 plis -scavenging kapasite, ak nan konsantrasyon nan 100 μM, li prezante 43.2 pousan anpèchman. Kontwòl pozitif la, EDTA, te gen apeprè 80 pousan kapasite ion-chelating nan 100 μM.

3.4. Efè 36H sou Aktivite Tirozinaz Chanpiyon.Anpèchman nan aktivite tirozinaz te dekri nan anpil rapò, pi fò nan yo te itilize tirosinaz djondjon kòm modèl la. Avantaj yo ap byen devlope pa syantis yo, pwosedi fasil, pri ki ba, pwosesis pigmantasyon rapid, karakteristik estriktirèl ak fonksyonèl menm jan ak mamifè, ak konvenyans nan obsève devlopman melanin. Anpèchman nan aktivite tirozinaz djondjon pa 36H te etidye, ak kapasite nan inhibitory te gen yon korelasyon pozitif ak konsantrasyon nan 36H (Figi 2 (a)). Nan kenzyèm minit, li te wè ke 36H nan diferan konsantrasyon (1, 5, ak 10 mM) konpare ak kontwòl la diminye valè OD yo. Aktivite anzim la diminye pa apeprè 10 pousan nan 1 mM, 30 pousan nan 5 mM, ak 40 pousan nan 10 mM, konpare ak kontwòl machin nan (Figi 2 (b)). Relasyon ki genyen ant aktivite tirozinaz ak konsantrasyon li nan 36H yo te etidye. Konsantrasyon diferan nan inibitè a bay yon gwoup liy ki tout pase nan orijin nan. Anpèchman nan aktivite tirozinaz pa 36H pa te afekte kantite anzim, ki montre ke 36H te yon inibitè revèsib (Figi 2 (c)). Kalite anpèchman sou tirosinaz pa 36H te konfime lè l sèvi avèk yon konplo Lineweaver-Burk doub-resipwòk. Trase 1/v kont 1/[s] te bay yon fanmi liy dwat atravè orijin, ki te montre ke 36H te yon konplèks konpetitif. Se sinetik anzim la prezante nan Figi 2 (d).

3.5. Efè Vitabilite Selilè, Tirozinaz Selilè, ak Melanin kontni sou 36H nan HMC.Kòm yon pisan po-eklèjman konpoze, eleman an ta dwe inofansif, san efè segondè cytotoxik endezirab. Gen kèk inibitè sentèz melanin byen li te ye, ki gen ladan asid kojik, arbutin, PTU, oswa idrokinon, ke yo te itilize globalman kòm engredyan kosmetik kounye a. Nou te dekouvri tou ke inibitè melanojèn sa yo ta ka pwovoke tumorigenicity po moun nan dòz segondè konsantrasyon oswa itilizasyon souvan [2]. HMC te kiltive nan 36H pou 48 èdtan nan divès konsantrasyon nan 1, 5, 10, ak 25 μM, epi yo te detèmine viabilite selil la montre toksisite selilè ki ba nan Figi 3 (a). Lè nou konsidere ajan an pou itilizasyon terapetik oswa kosmetik nan èt imen, nou te jwenn ke konsekans yo cytotoxik sou viabilite selil po imen yo te ensiyifyan. Pou konprann efè inhibition 36H sou melanogenesis, nou evalye aktivite tirozinaz intraselilè nan HMC. Rezilta yo pou aktivite tirozinaz nan HMC te montre ke te gen yon varyasyon evidan kòm konsantrasyon an ogmante, ak aktivite tirozinaz la diminye pou toksisite selil ki ba. Apre tretman an, aktivite tirozinaz la te redwi a 39 ± 2.2 pousan nan 25 μM nan yon fason ki depann de dòz la (Figi 3 (b)). Rezilta sa yo te montre ke 36H inibit aktivite tirozinaz intraselilè. Rezilta tès melanin yo te montre klèman ke 36H diminye kontni melanin nan HMC nan yon fason ki depann de dòz la (Figi 3 (c)). Pousantaj nan kontwòl reprezante kontni an melanin. Apre tretman an, kontni melanin yo te 77 pousan nan 25 μM, 84 pousan nan 10 μM, 88 pousan nan 5 μM, ak 90 pousan nan 1 μM. Rezilta sa yo te montre ke 36H te gen yon efè inhibition enpòtan sou sentèz melanin nan HMC nan 25 μM.

3.6. MRNA ak Pwoteyin ki gen rapò ak biosentèz Melanin yo te enfliyanse pa 36H nan HMC.Melanin byosentèz rive nan melanosom, ak premye substra asid amine se tirozin. Tirozin se premyèman katalize L-DOPA atravè tirozinaz, epi lè l sèvi avèk menm anzim, tirozinaz, DOPA katalize nan dopaquinone. Dopaquinone katalize pa dopachrome tautomerase (pwoteyin ki gen rapò ak tirozinaz- 2, TRP-2), TRP-1, ak tirozinaz pou fòme eumelanin. Nan HMC, 36H te kontwole RNAs ak pwoteyin selilè ki gen rapò ak melanogenesis yo jan yo montre nan Figi 4.

3.7. Efè 36H sou Matirite Melanosome la.Melanosome a se yon òganèl ki depann sou sentèz melanin nan melanosit yo. Plis melanosom yo gen matirite, se plis melanin ki fòme. Se poutèt sa, spirasyon melanozòm enpòtan nan mekanis nan blanchiman po. Pwoteyin Premelanosome 17 (Pmel17) vize a précurseurs nan òganèl pigman an, melanosome a, kote li trete proteolitik nan plizyè ti fragman. Gen kèk nan fragman sa yo ki fòme amiloid ki pa patolojik ki rasanble nan fèy epi fòme modèl striye ki kache ultrastructure melanom la. Etid sa a te demontre ke 36H downregulated Pmel17 RNA ak ekspresyon pwoteyin nan HMC (Figi 5).

3.8. Efè 36H sou transpò Melanosome.Rab27a, MLPH, ak Myo5a fòme yon konplèks tri-pwoteyin pou mare melanosom nan periferi melanosit yo. Nan pwosesis transpò melanozòm, konplèks ternary a se koneksyon ki genyen ant sitoskelèt aktin ak melanozòm. Yon mank de pwoteyin sa yo afekte transpò a, ak melanoregulin (Mreg) kondui transfè melanosom soti nan melanosit nan keratinosit atravè yon mekanis koule reglemante. Etid sa a montre ke 36H diminye transpò melanozòm pa afekte RNA ki gen rapò ak pwoteyin sa a (Figi 6).

Mande plis: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501