ACKR4a pwovoke otofaji pou bloke siyal NF-kB ak apoptoz pou fasilite enfeksyon Vibrio Harveyi.

REZIME

Autophagy ak apoptoz se de mekanis rekonèt rezistans nan envazyon bakteri. Sepandan, bakteri yo te menm evolye kapasite nan evade iminite. Nan etid sa a, nou idantifye ACKR4a, yon manm nan yon fanmi reseptè chemokine atipik, kòm yon sipresyon nan chemen an NF-kB, ki kolabore ak Beclin-1 pou pwovoke otofaji anpeche siyal NF-kB ak bloke apoptoz, fasilite. Vibrio harveyi enfeksyon. Mekanistikman, V. harveyi-induit Ap -1 aktive ACKR4a transcription ak ekspresyon. ACKR4a fòme yon konplèks ak Beclin-1 ak MyD88, respektivman, pwovoke otofaji ak transpòte MyD88 nan lizozom nan pou degradasyon siprime pwodiksyon sitokin enflamatwa. Pandan se tan, ACKR4a-pwovoke otofaji bloke apoptoz pa anpeche caspase8. Etid sa a pwouve pou premye fwa ke V. harveyi itilize tou de otofaji ak apoptoz pou evade iminite natirèl, sijere ke V. harveyi te evolye kapasite nan kont iminite pwason. 

cistanche tubulosa-amelyore sistèm iminitè

ENTWODIKSYON

Sistèm iminitè a jeneralman divize an iminite natirèl ak akeri, ak pifò òganis yo depann prensipalman sou iminite natirèl pou siviv.1 Iminite natirèl la se yon mekanis defans ki fòme nan òganis yo. Li rekonèt modèl molekilè ki asosye ak patojèn (PAMP) atravè reseptè rekonesans modèl yo (PRR), fè yon repons rapid nan enfeksyon patojèn, epi li pwoteje lame a kont enfeksyon.2,3 Kòm yon PRR enpòtan, reseptè toll-like (TLRs) ka kòmanse yon pakèt repons soti nan fagositoz rive nan pwodiksyon sitokin, kidonk amelyore repons enflamatwa ak iminitè natirèl yo.4 Nan pifò ka yo, TLR yo siyal prensipalman atravè yon chemen depandan MyD88-, ki transmèt siyal atravè reyaksyon kaskad pou aktive nikleyè. faktè-kappa B (NF-kB).5 NF-kB se youn nan faktè kle nan inisyasyon iminite natirèl la epi li esansyèl pou kowòdinasyon repons enflamatwa a, iminite natirèl, diferansyasyon selil, pwopagasyon, ak siviv. konsidere kòm inisyatè prensipal la nan repons enflamatwa a.6 Lè bakteri enfekte lame a, efè en nan repons iminitè natirèl la tankou sitokin ak chemokin yo sentèz, epi finalman mennen nan yon repons enflamatwa bloke kwasans lan nan bakteri. Sepandan, nan ko-evolisyon ak lame yo, bakteri yo te devlope tou divès estrateji regilasyon pou evade ak subverti defans lame yo.

Yo panse otofaji ak apoptoz yo se de wout enpòtan kont envazyon bakteri.7 Otofaji se yon pwosesis konsèvatif ki transpòte pwoteyin nòmal nan lizozom pou degradasyon epi li jwe yon wòl enpòtan nan iminite natirèl ekaryot kont envazyon bakteri.8,9 Sepandan, kèk bakteri evade iminite lè yo itilize otofaji nan mamifè yo. Nòmalman, selil yo vize pou retire bakteri ki anvayi ekstraselilè ak bakteri kolonize nan sitoplasm nan atravè otofaji,10 men kèk bakteri ka 'detounen' otofaji pou konplete kwasans pwòp tèt yo ak repwodiksyon.11–13 Pa egzanp, Unc-51-tankou kinaz 1. (ULK1), Beclin1, chèn limyè pwoteyin ki asosye ak mikrotubul 3 (LC3), ak pwoteyin ki gen rapò ak otofaji (ATGs) kolabore pou fòme otofagosòm, ki ankapsile mikwo-òganis anvayi yo epi transpòte yo nan lizozom pou degradasyon.14–16 Sepandan, Mycobacterium tibèkiloz desann. -regleman Beclin-1 pou anpeche fòmasyon otofagozòm, finalman anpeche otofagi ak ankouraje enfeksyon.17 Kontrèman ak anpèchman fòmasyon otofagozòm, kèk bakteri itilize otofagosòm pou konplete sit ki replike pwòp tèt ou pou ankouraje pwopagasyon.11,18 Anplis otofaji, apoptoz se tou yon mwayen pou defans lame kont patojèn anvayi yo.7 Apoptoz se yon modèl lanmò selil yo itilize pou retire selil ki domaje yo pou kenbe estabilite anviwònman sistemik la.19 Lè li resevwa yon siyal envazyon bakteri, lame a pwovoke apoptoz nan enfekte. selil yo anpeche enfeksyon bakteri.20 Se poutèt sa, kolonizasyon bakteri siksè depann de kapasite li pou anpeche apoptoz ak pwoteje replikasyon bakteri. Pou egzanp, Edwardsiella tarda asire siviv li nan anpeche apoptoz apre enfeksyon nan zebrafish selil ZF4, 21 Shigella reyalize kolonizasyon siksè pa anpeche apoptoz, 22 ak pwoteyin S ki te pwodwi pa gwoup A streptococcus (GAS) mare nan manbràn eritrosit la pou evade deteksyon iminitè a. system.23 Malgre ke anpil bakteri yo te evolye kapasite nan evade iminite, gen kèk rapò sou patojèn maren. Vibrio harveyi fè pati fanmi Vibrionaceae, ki rekonèt kòm yon ajan trè patojèn nan pwason maren; li lakòz gastroanterit, nekwoz nan misk, ak maladi ilsè po, epi li se youn nan kòz prensipal mòtalite pwason maren.24

cistanche plant-ogmante sistèm iminitè

Eksepte pou otofaji ak apoptoz, kèk bakteri (egzanp, Staphylococcus aureus) ka menm itilize reseptè chemokine lame yo pou evade iminite.25 Reseptè chemokine yo se G-protein-coupled receptors (GPCRs) yo jwenn sitou sou sifas leukocytes. Yo genyen sèt estrikti transmembran, ki enplike nan ligand ligand ak siyal, epi jwe yon wòl kle nan inisyasyon ak antretyen nan repons iminitè ak enflamatwa.26 Kòm rechèch chemokine pwogrese, reseptè atipik chemokine (ACKRs) te dekouvri.27 Malgre ke ACKR yo se estriktirèl menm jan ak lòt reseptè chemokine epi yo ka entèrnalize ligand yo, yo pa ka aktive chemen transdiksyon siyal la akòz mank nan domèn DRYLAIV, ki rele tou ''reseptè silans''.28 Fonksyon ACKR yo ka reflete nan fason sa yo. : 1. Yo ka fè konpetisyon ak reseptè tipik pou mare chemokine, epi kidonk, kontwole transdiksyon siyal chemotaxis selil; 2. Lè yo entèrnalize chemokine nan selil yo, konsantrasyon chemokine nan anviwònman an diminye pou afekte rekritman selil epi aji kòm yon chemokine scavenger. 3. Yo ede chemokines pou konplete transpò selil yo atravè baryè selil stromal yo.29 Fanmi ACKR yo sitou ki gen ladan DARC,30 D6 31,32, CXCR7,33 ak CCRL1,34 CCRL1 yo konnen tou kòm reseptè atipik chemokine. 4 (ACKR4). Kounye a, kèk etid yo montre ke ACKR4 sanble reyalize transdiksyon siyal atravè chemen endepandan pwoteyin G,35-37 epi li gen wòl ki pa redondants nan kontwole enflamasyon ak repons iminitè.38 Wòl li nan iminite adaptasyon byen li te ye, men li yo. fonksyon nan iminite natirèl raman etidye.

Nan iminite natirèl, transdiksyon siyal chemen TLR a trè konsève soti nan envètebre rive nan mamifè. Kòm yon pwoteyin debaz nan siyal TLR, MyD88 te lajman etidye nan vertebre. Anplis de sa, akòz estrikti MyD88 ki trè konsève, homolog li yo nan pwason yo ka gen fonksyon menm jan ak sa yo ki nan mamifè.39,40 Nan pwason zèb, MyD88 patisipe nan clearance nan enfeksyon bakteri.41 Etid anvan yo te konfime tou ke V. harveyi evade iminite lè li detwi transdiksyon siyal MyD88.42 Sepandan, mekanis ki jan V. harveyi evade iminite yo rete mal konprann nan pwason teleost. Nan etid sa a, ACKR4a te rapidman moute-reglemante nan V. harveyi-stimile Miichthys muy. ACKR4a ki te kontwole moute a tou de siprime iminite natirèl nan pwovoke otofaji pou bloke chemen NF-kB MyD88-medyatè ak pwovoke otofaji pou bloke apoptoz, pou amelyore enfeksyon V. harveyi. Dapre sa nou konnen, rapò sa a se premye moun ki fè konnen V. harveyi itilize tou de otofaji ak apoptoz pou evade iminite natirèl.

cistanche tubulosa-amelyore sistèm iminitè

REZILTA

V. harveyi enfeksyon pwovoke ekspresyon ACKR4a ankouraje pwoliferasyon pwòp tèt ou

Pou idantifye jèn ki potansyèlman patisipe nan règleman enfeksyon V. harveyi, nou trete miiuy croaker ak V. harveyi pou 48 èdtan, epi nou itilize analiz RNA-seq pou analize diferan jèn ekspresyon (DEG) ant V. harveyi trete ak trete. echantiyon larat. Soti nan done sekans pwofon yo, nou idantifye 145 jèn ki kontwole ak 28 0 jèn ki kontwole anba (Figi 1A). Sou baz sa a, nou te chwazi 10 pi gwo ak 10 pi piti DEG yo (log2 nan chanjman pliye te 1.0) pou clustering heatmap, ak rezilta a te montre ke echantiyon respektif yo nan tou de echantiyon yo V. harveyi trete ak non yo te byen repwodui (Figi 1B) . Yo te egzamine ACKR4a mRNA yo epi yo te jwenn li trè eksprime nan sèvo M mizik apre enfeksyon V. harveyi (Figi S1A). Se konsa, liy selil sèvo M. muiiy (MBrC) yo te itilize pou eksperyans ki vin apre yo. Efikasite knockdown nan ACKR4a-si1 se 46.1% ak ACKR4a-si2 se 63.7% nan MBrC (Figi S1B), se konsa ACKR4a-si2 (yo te rele ACKR4a-si) te itilize pou eksperyans ki vin apre. Imedyatman, nou konsantre sou jèn ACKR4a a, ki ka gen yon fonksyon iminitè, ak rezilta tès inite yo (CFU) te revele ke ACKR4a ankouraje pwopagasyon V. harveyi (Figi 1C, 1D, ak S1C). Pou plis envestige mekanis ki ACKR4a ankouraje pwopagasyon V. harveyi, yo te analize modèl ekspresyon ACKR4a. ACKR4a nan selil MBrC te reglemante pa V. harveyi. Rezilta yo te montre yon fason ki depann de tan ak enfeksyon V. harveyi nan nivo mRNA ak pwoteyin (Figi 1E ak 1F). Anplis de sa, silansman ACKR4a efektivman siprime ekspresyon ACKR4a nan tou de nivo mRNA ak pwoteyin (Figi 1E ak 1G). Rezilta ki anwo yo endike ke regilasyon ACKR4a ka fasilite enfeksyon V. harveyi.

Figi 1. V. harveyi-induced ACKR4a fasilite pwoliferasyon pwòp tèt li

ACKR4a inibit siyal NF-kB V. harveyi-deklanche 

Nou te jwenn ke pousantaj nan pwopagasyon selil te afekte lè MBrC te enfekte ak V. harveyi, epi verifye konklizyon sa a nou fè tès pwopagasyon selil. Rezilta yo te montre ke enfeksyon V. harveyi te redwi pwopagasyon MBrC (Figi S1D). Eksperyans ki vin apre yo te konfime ke ACKR4a sou ekspresyon redwi pwopagasyon selilè, tandiske ACKR4a silans pwopagasyon selil amelyore (Figi 2A ak S1E). Plizyè etid yo te demontre ke aktivasyon NF-kB ankouraje pwopagasyon selil yo. Li te jwenn ke BAY 11-7082, inibitè a nan NF-kB, te kapab tou redwi pwopagasyon MBrC (Figi 2A ak S1E). Menm jan ak rapò anvan yo,43 ogmantasyon nan NF-kB-luc te asosye ak enfeksyon an V. harveyi nan yon fason ki depann de tan (Figi S1F).

Figi 2. ACKR4a inibit siyal NF-kB V. harveyi-deklanche

Pou plis detèmine efè ACKR4a sou siyal NF-kB V. harveyi-deklanche, yo te fè yon tès repòtè luciferase. ACKR4a siyifikativman anpeche V. harveyi- ak LPS-deklanche NF-kB aktivite luciferase; V. harveyi-deklanche IL-1b ak TNFa aktivite luciferase te tou inibit pa ACKR4a (Figi 2B-2D). Endogenous ACKR4a te silans pou valide wòl li nan iminite natirèl. Lè sa a, modèl ekspresyon p65 ak sitokin pro-enflamatwa (IL-1b ak TNFa) te detekte plis, silansman ACKR4a ogmante drastikman mRNA p65, IL-1b mRNA, ak mRNA TNFa (Figi 2E-2G). ). Rezilta yo nan MLC ak MKC tou endike ke ACKR4a ta ka anpeche siyal NF-kB (Figi S1G-S1J). Rezilta ELISA yo te sanble tou; Silansman ACKR4a siyifikativman ogmante TNFa ak ACKR4a twòp ekspresyon inibit TNFa (Figi 2H). Pou evalye aktivasyon NF-kB, li pi nesesè pou analize fòm transliterate a, se sa ki fosforilate NF-kB, epi li se yon mezi aktivite NF-kB sou jèn sib yo. Sou eksitasyon NF-kB, p65 se fosforilite epi li antre nan nwayo a pou kontwole transkripsyon sitokin pro-enflamatwa. Pou eksplore règleman fosforilasyon p65 pa ACKR4a, nou mezire nivo fosforilasyon p65 apre silansman ACKR4a ak ekspresyon ACKR4a pa imunoblot. V. harveyi enfeksyon amelyore p65 fosforilasyon, ki te pwouve ke V. harveyi efektivman aktive NF-kB. Sou baz sa a, ACKR4a silansman amelyore fosforilasyon p65, tandiske ACKR4a-overexpression diminye fosforilasyon p65, ki endike ke ACKR4a se yon inibitè nan siyal NF-kB (Figi 2I ak 2J). Nan zebrafish, knockdown nan ACKR4a ogmante fosforilasyon p65 la. Anplis de sa, tès CFU a te montre BAY 11-7082 siyifikativman ogmante pwopagasyon MBrC (Figi 2K). An jeneral, done sa yo sijere ke ACKR4a fonksyone kòm yon regilatè negatif nan siyal NF-kB pou anpeche iminite natirèl pandan enfeksyon V. harveyi.

Figi 3. ACKR4a reyaji ak MyD88 ak pwomotè MyD88 degradasyon nan otofaji

ACKR4a reyaji ak MyD88 epi li ankouraje MyD88 pou degradasyon otofajik

Apre sa, nou te chèche detèmine ki sib nan siyal NF-kB ki medyatè fonksyon sipresyon ACKR4a0. Egzamen repòtè NF-kB-luciferase revele ke twòp ekspresyon nan ACKR4a te lakòz yon rediksyon nan aktivite luciferase, ki te pwovoke pa MyD88 nan yon fason ki depann de dòz (Figi 3A). Sepandan, ekspresyon ACKR4a pa te montre okenn efè sou aktivite luciferase kondwi pa TRAF6 oswa TAK1 (Figi 3B ak 3C). Yon rezilta immunoblot te sanble ak tès repòtè luciferase la; ekspresyon de ACKR4a anpeche MyD88 nan yon fason ki depann de dòz, men pa te gen okenn efè sou TRAF6 ak TAK1 (Figi 3D). Rezilta sa yo sijere ke ACKR4a fonksyone nan nivo MyD88.

Tout TLR mamifè yo, eksepte TLR3, depann omwen an pati sou adaptè MyD88 pou transmèt siyal yo, sa ki fè règleman dirèk MyD88 pi efikas.44 Apre sa, nou te egzamine ekspresyon MyD88 nan diferan moman enfeksyon V. harveyi epi nou jwenn silans ACKR4a. amelyore ekspresyon MyD88 (Figi 3E), ak ACKR4a-overexpression inibit ekspresyon MyD88 nan yon fason ki depann de tan (Figi 3F). Yo te jwenn yon rezilta enteresan ke byenke silans ACKR4a amelyore ekspresyon MyD88 deklanche pa V. harveyi, amelyorasyon sa a pa t prezan lè selil yo te repoze (Figi 3G ak 3H). Pou pi byen konprann mekanis molekilè ki kache aksyon ACKR4a nan siyal NF-kB MyD88-medyatè, nou te fè tès Co-immunoprecipitation (Co-IP) pou detèmine si ACKR4a reyaji ak MyD88. Flag-ACKR4a a te kapab iminoprecipite ak Myc-MyD88 (Figi 3I ak S1K). Konfòm ak sa, nou te jwenn ke Flag-MyD88 ta ka kominike avèk andojèn ACKR4a (Figi 3J). Eksperyans lokalizasyon subselilè ki vin apre yo te montre ACKR4a pa te gen okenn ko-lokalizasyon enpòtan ak MyD88 (Figi S1L). Kidonk, rezilta sa yo sipòte konsèp ke ACKR4a reyaji fizikman ak MyD88, epi entèraksyon yo gen anpil chans rive nan sitoplasm la. Apre sa, nou te envestige mekanis kote ACKR4a te siprime ekspresyon MyD88 la. Swa NH4Cl oswa 3-Methyladenine (3-MA), inhibiteurs nan chemen degradasyon otofaji-lyzosome-depandan, te lakòz yon akimilasyon enpòtan nan MyD88 nan prezans ACKR4a, ak MG132 pa t afekte degradasyon an nan MyD88 (Figi 3K). Anplis, rezilta menm jan an te montre ke 3- MA ak NH4Cl siyifikativman bloke degradasyon MyD88 nan yon fason ki depann de dòz (Figi 3L ak 3M). Konklizyon sa yo sanble sijere ke bloke otofaji a efektivman anpeche degradasyon MyD88 ki vize ACKR4a. Flux otofajik vle di pwosesis dinamik otofaji, ki se yon endikatè serye nan aktivite otofajik. Paske fluoresans GFP etenn nan lizozom nan, etap otofaji a ka detèmine nan fluoresans GFP ak RFP.42 Obsèvasyon fliyoresans jòn nan panèl Merge a te montre plis fliyoresan wouj nan prezans ACKR4a, sa ki endike ACKR4a ankouraje fizyon an. otofagosòm ak lizozom; tandiske chloroquine inhibiteur otofaji a (CQ) anpeche fizyon otofagosòm ak lizozom, ki montre plis fliyoresans jòn (Figi 3N). Pou plis valide ke ACKR4a vize MyD88 pou degradasyon otofajik, yo te fè yon tès lokalizasyon lizozomal, MyD88 (vèt) ak lizozòm (wouj) yo te ko-lokalize nan selil MBrC (Figi 3O), sijere ke MyD88 te transpòte nan lizozom. Ansanm, rezilta sa yo sijere ke ACKR4a reyaji ak MyD88 epi li vize MyD88 pou degradasyon otofajik.

Figi 4. ACKR4a patisipe nan règleman otofaji atravè Beclin-1

ACKR4a patisipe nan règleman otofaji atravè Beclin-1

Gen kèk bakteri ki sèvi ak otofaji pou ankouraje kwasans yo ak enfeksyon, yo pral redwi replikasyon yo lè otofaji yo absan.13 Pou teste si V. harveyi patisipe nan règleman otofaji nan selil MBrC yo, selil yo te enfekte ak V. harveyi epi answit modèl ekspresyon an. nan LC3 te egzamine. Nan selil MBrC, ekspoze V. harveyi ogmante otofaji a jan sa endike nan akimilasyon nan GFP-LC3 puncta, ki te akonpaye pa yon ogmantasyon depandan tan nan enfeksyon V. harveyi (Figi 4A). ACKR4a twòp ekspresyon amelyore otofaji V. harveyi-induced jan yo montre pa yon ogmantasyon remakab nan akimilasyon puncta nan RFP-LC3, nan Kontrèman ak silansman ACKR4a ki siyifikativman redwi V. harveyi-induit otofaji (Figi 4B ak 4C). Anplis de sa, silans ACKR4a te lakòz yon rediksyon nan ekspresyon LC3-II V. harveyi-induit (Figi 4D).

ULK1, Beclin-1, ak ATG5 se te pwoteyin kle regilasyon otofaji yo. Rezilta qPCR yo te montre ke ACKR4a siyifikativman amelyore ekspresyon Beclin -1, men se pa ULK1 ak ATG5 (Figi 4E). Egzamen repòtè luciferase ULK1, ATG5, ak Beclin-1 te revele ke twòp ekspresyon ACKR4a sèlman te lakòz yon ogmantasyon nan aktivite Beclin-1luciferase (Figi 4F). Apre sa, nou te detekte ke ekspresyon ACKR4a amelyore ekspresyon Beclin -1, men se pa ULK1 ak ATG5 (Figi 4G). Epitou, otofaji ACKR4a-induit te inibit pa Beclin-1-si, tandiske ATG{5-si te sèlman anpèchman pasyèl (Figi 4H). Rezilta ki anwo yo te endike ke ACKR4a te vize sou Beclin-1. Se poutèt sa, yo te envestige fonksyon ak mekanis Beclin-1 nan degradasyon otofajik ACKR4a nan MyD88. Nan pwason zèb ki enfekte ak V. harveyi, kraze ACKR4a pa t lakòz chanjman enpòtan nan ULK1 pandan y ap diminye anpil Beclin-1 ak ATG5 (Figi S2B-S2D). Beclin-1 ogmante plis ACKR4a-induit flux otofajik ak Baf1A ak CQ trete (Figi 4I), ak Beclin{-1 amelyore degradasyon an nan MyD88 pa ACKR4a (Figi 4J). Lè sa a, nou te fè tès Co-IP yo pou detèmine si ACKR4a reyaji ak Beclin-1, epi nou te jwenn ke ACKR4a reyaji ak Beclin-1, epi V. harveyi enfeksyon amelyore entèraksyon ki genyen ant ACKR4a ak Beclin{{51. }} (Figi 4K). Yon tès lokalizasyon lizozomal endike ke ACKR4a amelyore fuse autophagosome la ak lizozom nan (Figi 4L). Imedyatman, ACKR4a ogmante ekspresyon andojèn Beclin -1 (Figi 4M) ak silans ACKR4a atenue V. harveyi-induit Beclin -1 ekspresyon (Figi 4N). Anplis de sa, silans Beclin-1 amelyore fosforilasyon p65 deklanche pa V. harveyi, ki plis sijere ke V. harveyi pwovoke otofaji pou kontwole negatif siyal NF-kB (Figi 4O). Apre sa, nou te chèche detèmine enpòtans byolojik Beclin-1 nan enfeksyon V. harveyi, patikilyèman nan kontwole pwopagasyon V. harveyi. Yo te fè tès CFU a epi li te jwenn tou de silans Beclin-1 ak otofaji CQ-bloke te redwi pwopagasyon V. harveyi, ki pwouve ke V. harveyi itilize otofaji pou ankouraje pwopagasyon li (Figi 4P). Rezilta ki anwo yo ansanm revele ke ACKR4a pwovoke ak fòme konplèks ak Beclin-1 pou ankouraje otofaji, epi answit fasilite enfeksyon V. harveyi.

benefis cistanche pou gason-ranfòse sistèm iminitè

Klike la a pou w wè pwodwi Cistanche Enhance Immunity

【Mande plis】 Imèl:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

ACKR4a pwovoke otofaji bloke apoptoz

Lanmò selil otofajik konsidere kòm yon altènatif rezonab pou apoptoz, ak apoptoz se tou yon mekanis anti-bakteri rekonèt; enfeksyon bakteri siksè ranpli pwòp tèt ou-replikasyon pa anpeche apoptosis.22 Pou detèmine relasyon ki genyen ant otofaji V. harveyi-induit ak apoptoz, apoptoz la nan selil MBrC ak tretman diferan anvan ak apre enfeksyon V. harveyi yo te detèmine, ak silans ACKR4a ogmante V. Harveyi-induit apoptoz (Figi 5A ak 5B, panèl gòch la). Paske caspase3 ak caspase7 enpòtan nan inisyasyon apoptoz, yo lajman aksepte kòm endikatè serye nan apoptoz. Yon tès caspase Glo 3/7 te montre ke ACKR4a overexpression inibit V. harveyi-induit caspase3/7 aktivite, tandiske ACKR4a silansman amelyore V. harveyi-induced caspase3/7 aktivite (Figi 5B, panèl adwat). V. harveyi ak exogenously te ajoute recombinant aktif caspase8 pwovoke caspase3/7 aktivite te inibit pa ACKR4a (Figi 5C), sijere ke ACKR4a se kapab avèk efikasite bloke siyal apoptoz. Malgre ke ACKR4a-pwovoke otofaji yo te demontre, plis etid yo bezwen mennen ankèt sou wòl nan otofaji nan bloke apoptoz. Jan yo montre nan Figi 5D ACKR4a silansman ogmante siyifikativman caspases efèktè yo (caspase7) ak caspases yo inisyatè (caspase8). Anplis de sa, ACKR4a overexpression inibit caspase7 ak caspase8 mRNAs (Figi 5E) ak ACKR4a knockdown siyifikativman ogmante caspase7 ak caspase8 nan zebrafish (Figi S2E ak S2F). Etid anvan yo te montre ke Beclin-1 se yon switch molekilè ki medyatè pwosesis apoptoz ak otofaji,45 kidonk patisipasyon Beclin-1 nan règleman apoptoz la te eksplore. Nan etid nou an, Beclin-1 overexpression down-regulated V. harveyi-induced caspase8, tandiske Beclin-1 silans up-regulated V. harveyi-induced caspase8 (Figi 5F). Yo te jwenn yon rezilta enteresan ke caspase8 te siyifikativman upregulated nan 3 h nan enfeksyon V. harveyi; li te ankò inibi ak ogmante dire nan enfeksyon, ak LC3-II te korelasyon negatif ak caspase8 (Figi 5G). Dapre rezilta ki anwo yo, ACKR4a pwovoke otofaji pou bloke siyal apoptotik ak fasilite enfeksyon V. harveyi, ak Beclin-1 ta ka yon sib potansyèl nan kaskad otofaji ak apoptoz.

Figi 5. ACKR4a pwovoke otofaji pou bloke apoptoz

Ap-1 amelyore otofaji ACKR4a-induit nan enfeksyon V. harveyi

Imedyatman, yo te envestige mekanis V. harveyi enfeksyon-induit ekspresyon ACKR4a. Kat diferan plasmid pwomotè ACKR4a yo te konstwi an premye dapre sekans prediksyon pwomotè yo (Figi 6A). Egzamen luciferase la te montre ke aktivite ACKR4a-p-3 te pi wo a (Figi 6B). Pou idantifye aktivatè a en nan ekspresyon ACKR4a pandan enfeksyon V. harveyi, rejyon pwomotè ACKR4a yo te analize, epi li te jwenn ke ACKR4a gen potansyèl sit obligatwa nan Sp-1 ak Ap{-1 (Figi 6C). Esè ACKR4a-luc la te montre ke Sp-1 pa t 'kapab amelyore aktivite lisiferaz la ak Ap{-1 amelyore aktivite luciferase la (Figi 6D ak 6E), ki te ogmante posiblite pou ACKR4a ta ka yon sib dirèk nan Ap. -1. Pou egzaminen sa a, yo te konstwi de vektè luciferase ki gen mutan ACKR4a (Figi 6F). Egzamen luciferase la te montre mutan ki manke Ap -1 sit obligatwa yo anpeche aktivite lisiferaz la kontrèman ak kalite sovaj (Figi 6G). Pou konfime ke Ap-1 ankouraje ekspresyon ACKR4a, nou fèmen oswa amelyore ekspresyon Ap-1 atravè ekspresyon twòp oswa knockdown, epi yo te evalye ekspresyon ACKR4a nan selil MBrC transfekte yo. Ap-1 silansman siyifikativman redwi ekspresyon ACKR4a V. harveyi-induit (Figi 6H), tandiske Ap-1 ekspresyon siyifikativman amelyore ekspresyon ACKR4a (Figi 6I). Rezilta immunoblot yo te konsistan avèk rezilta qPCR yo, Ap-1 twòp ekspresyon ogmante ekspresyon ACKR4a, tandiske silans Ap-1 diminye ekspresyon ACKR4a (Figi 6J). Analiz ChIP te montre ke Ap -1 mare ak pwomotè ACKR4a a nan selil MBrC nan kondisyon fizyolojik nòmal, ak eksitasyon V. harveyi amelyore lyezon Ap-1 ak pwomotè ACKR4a a (Figi 6K). Rezilta ki anwo yo konfime ke ACKR4a se yon potansyèl sib transkripsyon Ap-1. Lè sa a, yo te eksplore fonksyon Ap-1 nan otofaji; Silansman Ap-1 efektivman redwi akimilasyon GFP-LC3 ki te pwovoke enfeksyon V. harveyi (Figi 6L), epi li te diminye tou regilasyon LC3-II ki te pwovoke nan enfeksyon V. harveyi (Figi 6M). ). Yo te fè tès CFU a pou eksplore wòl Ap-1 nan enfeksyon V. harveyi epi li te jwenn ke AP{-1 fasilite pwopagasyon V. harveyi (Figi 6N). Ansanm, rezilta ki anwo yo endike ke Ap-1 aktive transkripsyon ak ekspresyon ACKR4a epi li kontribye nan enfeksyon V. harveyi.

Figi 6. Ap-1 amelyore ACKR4a pwovoke otofaji nan enfeksyon V. harveyi

Figi 7. Yon modèl k ap travay sou fason ACKR4a fasilite enfeksyon V. harveyi

DISKISYON

ACKR yo te montre yo patisipe nan plizyè pwosesis byolojik tankou règleman sistèm chemokine, entèrnalizasyon ligand chemokine, degradasyon intraselilè, ak repons enflamatwa, 4,26 ki enpòtan pa sèlman pou iminite adaptasyon, men tou kòm yon eleman enpòtan nan sistèm iminitè natirèl la. .33,34 Sepandan, wòl ACKR yo nan repons enflamatwa a nan enfeksyon bakteri nan pwason pa te envestige. Etid sa a demontre pou premye fwa ke ACKR4a, yon manm fanmi ACKR, ankouraje enfeksyon V. harveyi pou teleoste pwason atravè otofaji ak apoptoz. Mekanistikman, transkripsyon ACKR4a te kontwole pa faktè transkripsyon AP -1. Lè sa a, ACKR4a ki kontwole moute a te synergized ak Beclin-1 pou pwovoke otofaji ak transpòte MyD88 nan lizozom pou degradasyon. Pandan se tan, ACKR4a pwovoke otofaji bloke apoptoz ak Lè sa a, fasilite enfeksyon V. harveyi (Figi 7). Iminite natirèl jwe yon wòl enpòtan nan pwoteje ekaryot kont envazyon patojèn andojèn ak ekzojèn.46 Kòm rezilta ekspoze alontèm nan mikwo-òganis, pwason yo te evolye iminite natirèl ki pi optimize pou pwoteje yo kont enfeksyon.47 TLR yo rekonèt PAMP lè enfeksyon bakteri rive, ak inisye yon repons iminitè natirèl atravè MyD88-chemen depandan ak endepandan, ki pwovoke pwodiksyon cytokin pro-enflamatwa pou elimine enfeksyon bakteri. MyD88 se yon adaptè esansyèl nan siyal TLR, eksepte TLR3, tout TLR mamifè yo itilize MyD88 pou aktive siyal NF-kB.48 Se poutèt sa, li ka pi efikas pou kontwole dirèkteman MyD88. Pa egzanp, S-1-acetylcysteine ​​anpeche pwodiksyon IL-6 lè li pwovoke degradasyon MyD88. Menm jan an tou, nan pwason, yo te rapòte IRF3 ak eIF3k pou anpeche siyal NF-kB lè yo vize MyD88.42,49 Prèv akimile tou sijere ke MyD88 te enpòtan pou eliminasyon enfeksyon bakteri. Pa egzanp, sourit MyD88-defisi yo pa t kapab rekonèt eleman bakteri yo epi yo te trè sansib a S. aureus. 50 Anplis de sa, yo te montre MyD88 tou patisipe nan eliminasyon enfeksyon bakteri nan zebrafish.41 Aktivasyon sistèm iminitè natirèl la ankouraje clearance bakteri, ki konstitye yon gwo presyon selektif, ankouraje yo evolye kapasite nan siprime iminite natirèl la. .51,52 Li te demontre ke salmonèl ka kontwole repons iminitè ak manipile repons enflamatwa apre enfekte selil lame yo. Virilans salmonèl SpvC dephosphorylates ERK, p38, ak MAPK irevokabl, kidonk anpeche transkripsyon cytokines pro-enflamatwa. epi bloke siyal NF-kB. Sa a sijere ke bakteri kapab tou siprime iminite natirèl pwason an pa entèfere ak estabilite nan adaptè nan siyal TLR la nan bi pou yo levasyon iminitè.

Otofaji ak apoptoz yo se de mekanis rekonèt nan rezistans nan envazyon bakteri, ak otofaji antimikwòb yo se yon baryè kont anvayi mikwo-òganis. PRR yo ka pwovoke otofaji nan diferan etap nan kontak lame-bakteri, epi anpeche kwasans entraselilè bakteri.54 Kontrèman, bakteri yo te evolye tou mekanis efikas pou anpeche, konbat, oswa kòmande otofaji. Mekanis sa yo souvan enplike vize Beclin-1 pou bloke otofagi,55 anpeche spirasyon otofagozòm56 e menm aktive otofagi nan kèk ka pou bay nitrisyon pou kwasans bakteri.57 Yon lòt jan, nou te jwenn ke V. harveyi pwovoke Beclin{{6} }aktive otofaji atravè ACKR4a, ki vize MyD88 pou degradasyon otofajik, kidonk bloke siyal NF-kB ak ankouraje pwòp tèt ou-replikasyon. Yon lòt estrateji defans se lanmò selil pwograme (apoptoz), ki aktive lè patojèn sèvi ak selil lame pou siviv ak replikasyon. Pa egzanp, enfeksyon mycobacterium nan makrofaj yo lakòz apoptoz, ki kontribye nan eliminasyon an nan bakteri nan selil yo.58 Anplis de sa, TNF-a-medyatè apoptoz makrofaj detwi anviwònman an entraselilè pou mycobacterium repwodui epi redwi to kwasans nan mycobacterium ki enfekte.59 Pou konbat. presyon siviv apoptoz la, anpil patojèn ki gen siksè kode jèn ki gen pwodwi anpeche apoptoz nan selil lame yo, kidonk kenbe rantabilite pou replikasyon patojèn.60 Malgre ke mekanis sa yo te byen etidye nan mamifè, yo konnen ti kras sou anpèchman bakteri nan apoptoz nan pwason. Nan etid nou an, V. harveyi-induced otofaji jwe yon wòl nan etap apoptotik ak bloke siyal apoptotik. Apoptoz ak otofaji tou de ankouraje ak antagonize youn ak lòt. Nan etap pre-apoptotik, selil yo bloke chemen apoptotik la epi redwi nivo apoptoz atravè otofaji, kidonk kenbe avantaj la. Otofaji pa deklanche lanmò selil nan premye etap yo nan apoptoz, men tou ankouraje siviv selil yo.61 Otofaji pandan etap la an reta nan apoptoz ka ankouraje apoptoz, ak Lè sa a, ogmante apoptoz la anpeche ensidan an nan otofaji atravè migrasyon an nan chemen p53 ak BH3.62. Pwosesis byolojik la byen kontwole, ki gen ladan entèraksyon otofaji ak apoptoz. Anpil jèn regilasyon patisipe nan mekanis repons entèaktif nan apoptoz ak otofaji, Beclin-1 se youn nan yo.63 Anplis de règleman nan inisyasyon otofaji, Beclin-1 patisipe tou nan reglemante apoptoz.45 ,64 Etid yo montre ke Beclin-1 pèdi kapasite li pou reziste apoptoz apre yo te fennen pa kaspas aktive.65 Sa sijere ke Beclin-1 jwe yon wòl enpòtan kòm yon "switch molekilè" nan règleman an. nan otofaji ak apoptoz.

cistanche tubulosa-amelyore sistèm iminitè

V. harveyi se yon bakteri gram-negatif maren ki reprezante yon menas grav pou sante lapèch akwakilti maren yo. Enfeksyon V. harveyi lakòz menenjit ak ansefalit nan pwason,66 ak enfeksyon V. harveyi lakòz konjesyon serebral nan grouper.67 An repons a enfeksyon bakteri, repons iminitè natirèl ak enflamatwa yo se sistèm defans prensipal pwason yo. Sepandan, bakteri yo te evolye tou kapasite nan evade iminite nan senbyotik ak lame yo. An rezime, rezilta nou yo revele yon mekanis nan levasyon iminitè V. harveyi nan pwason. ACKR4a pwovoke otofaji anpeche siyal NF-kB ak bloke apoptoz, ki an vire fasilite enfeksyon V. harveyi nan pwason teleost. Sa a se tou premye fwa ke bakteri gram-negatif yo te jwenn evade iminite pa ansanm reglemante iminite natirèl ak apoptoz atravè otofaji. Etid sa a bay apèsi sou konpreyansyon efè otofaji sou entèraksyon lame-bakteri nan pwason teleost epi li bay yon pèspektiv sou rezistans mamifè nan enfeksyon bakteri.

REFERANS

1. Dinarello, CA (2018). Apèsi sou fanmi IL-1 nan enflamasyon natirèl ak iminite akeri. Imunol. Rev. 281, 8–27.

2. Gaidt, MM, Ebert, TS, Chauhan, D., Ramshorn, K., Pinci, F., Zuber, S., O'Duill, F., Schmid-Burgk, JL, Hoss, F., Buhmann, R., et al. (2017). Enflamasome ADN nan selil myeloid imen yo inisye pa yon pwogram lanmò selil STING an en nan NLRP3. Selil 171, 1110–1124.e18.

3. Xiao, TS (2017). Iminite natirèl ak enflamasyon. Selil. Mol. Imunol. 14, 1–3.

4. Koropatnick, TA, Engle, JT, Apicella, MA, Stabb, EV, Goldman, WE, ak McFallNgai, MJ (2004). Devlopman medyatè faktè mikwòb nan yon mityalism lame-bakteri. Syans 306, 1186–1188.

5. Janeway, CA (1989). Apwoche asymptot la? Evolisyon ak revolisyon nan iminoloji. Sou entènèt jwèt Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 54, 1–13.

6. Vallabhapurapu, S., ak Karin, M. (2009). Règleman ak fonksyon faktè transkripsyon NF-kB nan sistèm iminitè a. Ann. Rev Immunol. 27, 693–733.

7. Krakauer, T. (2019). Enflamasome, otofaji, ak lanmò selil: Trinite defans lame natirèl kont bakteri intraselilè. Medyatè Enflamm. 2019, 2471215.

8. Hurley, JH, ak Young, LN (2017). Mekanis inisyasyon otofaji. Ann. Rev Biochem. 86, 225–244.

9. Li, X., Zhu, Y., Zhang, Y., Geng, Y., Gong, J., Geng, J., Zhang, P., Zhang, X., Liu, N., Peng, Y. ., et al. (2019). RNF34 fonksyone nan iminite ak mitofaji selektif pa vize MAVS pou degradasyon otofajik. EMBO J. 38, 1009788–e101018.

10. Yin, L., Lv, M., Qiu, X., Wang, X., Zhang, A., Yang, K., ak Zhou, H. (2021). IFN-G manipile entèraksyon NOD1-medyatè nan otofaji ak Edwardsiella piscicida pou ogmante clearance entraselilè nan pwason. J. Immunol. 207, 1087–1098.

11. Mansilla-Pareja, ME, Bongiovanni, A., Lafont, F., and Colombo, MI (2017). Chanjman nan entegrite manbràn vakuol replikasyon Coxiella burnetii ak entèraksyon ak chemen otofaji a. Devan. Selil. Enfekte. Microbiol. 7, 112.

12. Bravo-Santano, N., Ellis, JK, Mateos, LM, Calle, Y., Keun, HC, Behrends, V., ak Letek, M. (2018). Entraselilè Staphylococcus aureus modile metabolis kabòn santral lame pou aktive otofaji. mSphere 3, 003744–003818.

13. Winchell, CG, Dragan, AL, Brann, KR, Onyilagha, FI, Kurten, RC, ak Voth, DE (2018). Coxiella burnetii subvert p62/ sequestosome 1 ak aktive Nrf2 siyal nan makrofaj imen. Enfekte. Iminitè. 86, e00608–e00617.

14. Lee, HK, Lund, JM, Ramanathan, B., Mizushima, N., ak Iwasaki, A. (2007). Rekonesans viral ki depann de otofaji pa selil dendritik plasmacytoid. Syans 315, 1398–1401.

15. Jounai, N., Takeshita, F., Kobiyama, K., Sawano, A., Miyawaki, A., Xin, KQ, Ishii, KJ, Kawai, T., Akira, S., Suzuki, K., ak Okuda, K. (2007). Konjige Atg5 Atg12 la asosye ak repons iminitè antiviral natirèl. Pwosedi. Natl. Acad. Sci. USA. 104, 14050–14055.

16. Schaaf, MBE, Keulers, TG, Vooijs, MA, ak Rouschop, KMA (2016). Pwoteyin fanmi LC3/GABARAP: fonksyon otofaji-(pa) ki gen rapò. FASEB J 30, 3961–3978.

17. Chen, Z., Wang, T., Liu, Z., Zhang, G., Wang, J., Feng, S., ak Liang, J. (2015). Anpèchman otofaji pa MiR-30A pwovoke pa Mikobakteri tibèkiloz kòm yon mekanis posib pou chape iminitè nan makrofaj imen. Jpn. J. Enfekte. Dis. 68, 420–424.

18. Kubori, T., Bui, XT, Hubber, A., ak Nagai, H. (2017). Legionella RavZ jwe yon wòl nan anpeche rekritman ubiquitin nan vakuol ki gen bakteri. Devan. Selil. Enfekte. Microbiol. 7, 384.

19. Danial, NN, ak Korsmeyer, SJ (2004). Lanmò selilè: pwen kontwòl kritik. Selil 116, 205–219.

20. Salvesen, GS, ak Ashkenazi, A. (2011). Snapshot: caspases. Selil 147, 476–476.e1.

21. Zhou, ZJ, and Sun, L. (2016). Edwardsiella tarda-induit anpèchman nan apoptoz: yon estrateji pou siviv entraselilè. Devan. Selil. Enfekte. Microbiol. 6, 76.

22. Gu¨ nther, SD, Fritsch, M., Seeger, JM, Schiffmann, LM, Snipas, SJ, Coutelle, M., Kufer, TA, Higgins, PG, Hornung, V., Bernardini, ML, et al. (2020). Bakteri Cytosolic gram-negatif anpeche apoptoz pa anpèchman kaspase efèktè atravè lipopolysaccharide. Nat. Microbiol. 5, 354–367.

23. Wierzbicki, IH, Campeau, A., Dehaini, D., Holay, M., Wei, X., Greene, T., Ying, M., Sands, JS, Lamsa, A., Zuniga, E., et al. (2019). Gwoup A streptococcal S pwoteyin itilize globil wouj nan san kòm kamouflaj iminitè epi li se yon detèminan kritik pou evazyon iminitè. Rep. selilè 29, 2979–2989.e15.

24. Chen, J., Lu, Y., Ye, X., Emam, M., Zhang, H., ak Wang, H. (2000). Aktyèl pwogrè nan Vibrio harveyi kowòm deteksyon kòm objektif dekouvèt dwòg. Lajan ewo. J. Med. Chem. 207, 112741.

25. Kimura, T., Jain, A., Choi, SW, Mandell, MA, Schroder, K., Johansen, T., ak Deretic, V. (2015). TRIM-medyatè otofaji presizyon vize regilatè sitoplasmik nan iminite natirèl. J. Cell Biol. 210, 973–989.

26. Zlotnik, A., ak Yoshie, O. (2012). Superfamiy chemokine revize. Iminite 36, 705–716.

27. Ulvmar, MH, Hub, E., ak Rot, A. (2011). Reseptè chemokin atipik. Eksp. Selil Res. 317, 556–568.

28. Bonecchi, R., Savino, B., Borroni, EM, Mantovani, A., ak Locati, M. (2010). Reseptè chemokine dekoy: fonksyon estrikti ak pwopriyete byolojik. Curr. Top. Microbiol. Imunol. 341, 15–36.

29. Comerford, I., Litchfield, W., Harata-Lee, Y., Nibbs, RJB, ak McColl, SR (2007). Règleman rezo chemotaktik pa reseptè 'atipik'. Bioessays 29, 237-247.

30. Horuk, R., Chitnis, CE, Darbonne, WC, Colby, TJ, Rybicki, A., Hadley, TJ, ak Miller, LH (1993). Yon reseptè pou parazit malarya Plasmodium vivax: reseptè chemokine eritrosit la. Syans 261, 1182–1184.

31. Bonini, JA, Martin, SK, Dralyuk, F., Roe, MW, Philipson, LH, ak Steiner, DF (1997). Klonaj, ekspresyon, ak kat kwomozòm nan yon nouvo reseptè CC-chemokine imen (CCR10) ki montre gwo affinite obligatwa pou MCP-1 ak MCP-3. ADN selil Biol. 16, 1249–1256.

32. Nibbs, RJ, Wylie, SM, Yang, J., Landau, NR, ak Graham, GJ (1997). Klonaj ak karakterizasyon yon roman reseptè beta-chemokine imen pwomèt D6. J. Biol. Chem. 272, 32078–32083.

33. Burns, JM, Summers, BC, Wang, Y., Melikian, A., Berahovich, R., Miao, Z., Penfold, MET, Sunshine, MJ, Littman, DR, Kuo, CJ, et al. (2006). Yon nouvo reseptè chemokine pou SDF-1 ak I-TAC patisipe nan siviv selil, adezyon selil, ak devlopman timè. J. Exp. Med. 203, 2201–2213.

34. Gosling, J., Dairaghi, DJ, Wang, Y., Hanley, M., Talbot, D., Miao, Z., ak Schall, TJ (2000). Koupe kwen: idantifikasyon yon reseptè chemokine roman ki mare selil dendritik ak selil T-aktif chemokines ki gen ladan ELC, SLC, ak TECK. J. Immunol. 164, 2851–2856.

35. Hall, RA, Premont, RT, ak Lefkowitz, RJ (1999). Siyal reseptè heptahelical: pi lwen pase paradigm nan pwoteyin G. J. Cell Biol. 145, 927–932.

36. Brzostowski, JA, ak Kimmel, AR (2001). Siyal nan zewo G: G-pwoteyin-endepandan fonksyon pou 7-TM reseptè yo. Tandans Biochem. Sci. 26, 291–297.

37. Solèy, Y., Huang, J., Xiang, Y., Bastepe, M., Ju¨ppner, H., Kobilka, BK, Zhang, JJ, ak Huang, XY (2007). Chanjman ki depann de dòz la soti nan G-pwoteyin makonnen ak G pwoteyin-endepandan siyal pa yon GPCR. EMBO J. 26, 53–64.

38. Nibbs, RJB, ak Graham, GJ (2013). Règleman iminitè pa reseptè chemokin atipik. Nat. Rev Immunol. 13, 815–829.

39. Lewis, BP, Burge, CB, ak Bartel, DP (2005). Konsève pè grenn, souvan antoure pa adenosines, endike ke dè milye de jèn imen yo se sib microRNA. Selil 120, 15–20.

40. Friedman, RC, Farh, KKH, Burge, CB, ak Bartel, DP (2009). Pifò mamifè mRNA yo se sib konsève nan microRNAs. Genomic Res. 19, 92–105.

41. Denli, AM, Tops, BBJ, Plasterk, RHA, Ketting, RF, ak Hannon, GJ (2004). Pwosesis mikroRNA prensipal yo pa konplèks Microprocessor la. Nature 432, 231–235.

42. Chen, Y., Cao, B., Zheng, W., Solèy, Y., ak Xu, T. (2022). eIF3k anpeche siyal NF-kB lè li vize MyD88 pou degradasyon otofajik ATG5-medyatè nan pwason teleost. J. Biol. Chem. 298, 101730.

43. Chu, Q., Solèy, Y., Cui, J., ak Xu, T. (2017). MikroRNA endivizib -214 kontribye nan repwesyon repons enflamatwa NF-kB-medyatè atravè vize jèn myd88 nan pwason. J. Biol. Chem. 292, 5282–5290.

44. Gay, NJ, Symmons, MF, Gangloff, M., ak Bryant, CE (2014). Asanble ak lokalizasyon konplèks siyal reseptè Toll-like. Nat. Rev Immunol. 14, 546–558.

45. McKnight, NC, ak Zhenyu, Y. (2013). Beclin 1, se yon eleman esansyèl ak regilatè mèt nan PI3K-III nan sante ak maladi. Curr. Patobiol. Rep. 1, 231–238.

46. ​​Mutwiri, G., Gerdts, V., Lopez, M., ak Babiuk, LA (2007). Iminite natirèl ak nouvo adjuvant. Rev Sci. Teknoloji. 26, 147–156.

47. Buchmann, K. (2014). Evolisyon nan iminite natirèl: endikasyon ki soti nan envètebre atravè pwason nan mamifè. Devan. Imunol. 5, 459.

48. Chu, Q., Solèy, Y., Cui, J., ak Xu, T. (2017b). MicroRNA-3570 modile chemen NF-kB nan pwason teleost lè li vize MyD88. J. Immunol. 198, 3274–3282.

49. Yan, X., Zhao, X., Huo, R., ak Xu, T. (2020). IRF3 ak IRF8 kontwole siyal NF-kB lè yo vize MyD88 nan pwason teleost. Devan. Imunol. 11, 606.

50. Takeuchi, O., Hoshino, K., ak Akira, S. (2000). Koupe: Sourit ki gen defisi TLR2-ak MyD88-yo trè sansib a enfeksyon Staphylococcus aureus. J. Immunol. 165, 5392–5396.

51. Keszei, AFA, Tang, X., McCormick, C., Zeqiraj, E., Rohde, JR, Tyers, M., ak Sicheri, F. (2014). Estrikti yon konplèks SspH1-PKN1 revele baz pou rekonesans substra lame a ak mekanis aktivasyon pou yon ligaz ubiquitin bakteri E3. Mol. Selil Biol. 34, 362–373.

52. Gu¨ nster, RA, Matthews, SA, Holden, DW, ak Thurston, TLM (2017). Efektè sistèm sekresyon SseK1 ak SseK3 tip III anpeche siyal NFkB ak lanmò selil nekroptotik nan makrofaj ki enfekte ak salmonèl. Enfekte. Iminitè. 85, e00010–e00017.

53. Mazurkiewicz, P., Thomas, J., Thompson, JA, Liu, M., Arbibe, L., Sansonetti, P., ak Holden, DW (2008). SpvC se yon efè salmonèl ak aktivite fosfotreonin lyase sou kinaz pwoteyin mitogen aktive lame. Mol. Microbiol. 67, 1371–1383.

54. Saitoh, T., ak Akira, S. (2010). Règleman repons iminitè natirèl pa pwoteyin ki gen rapò ak otofaji. J. Cell Biol. 189, 925–935.

55. Orvedahl, A., Alexander, D., Tallo´ czy, Z., Sun, Q., Wei, Y., Zhang, W., Burns, D., Leib, DA, ak Levine, B. (2007 ). HSV-1 ICP34.5 bay neurovirulans lè li vize pwoteyin otofaji Beclin 1 la. Selil Host Mikwòb 1, 23–35.

56. Kyei, GB, Dinkins, C., Davis, AS, Roberts, E., Singh, SB, Dong, C., Wu, L., Kominami, E., Ueno, T., Yamamoto, A., et. al. (2009). Chemen otofaji a kwaze ak byosentèz VIH-1 epi li kontwole pwodiksyon viral nan makrofaj yo. J. Cell Biol. 186, 255–268.

57. Niu, H., Xiong, Q., Yamamoto, A., Hayashi Nishino, M., ak Rikihisa, Y. (2012). Autophagosomes pwovoke pa yon bakteri Beclin 1 pwoteyin obligatwa fasilite obligatwa enfeksyon entraselilè. Pwosedi. Natl. Acad. Sci. USA. 109, 20800–20807.

58. Hussain, MA, Datta, D., Singh, R., Kumar, M., Kumar, J., ak Mazumder, S. (2019). TLR-2 cytosolic-Ca2+ vag aktive ER estrès-superoksid-NO signalosome ogmante TNF-yon pwodiksyon ki mennen nan apoptoz nan makrofaj pwason Mycobacterium smegmatis enfekte. Sci. Rep. 9, 12330.

59. Lee, J., Hartman, M., ak Kornfeld, H. (2009). Apoptoz makwofaj nan tibèkiloz. Yonsei Med. J. 50, 1–11.

60. McCormick, AL (2008). Kontwòl apoptoz pa cytomegalovirus imen. Curr. Top. Microbiol. Imunol. 325, 281–295.

61. Kuma, A., Hatano, M., Matsui, M., Yamamoto, A., Nakaya, H., Yoshimori, T., Ohsumi, Y., Tokuhisa, T., ak Mizushima, N. (2004) . Wòl otofaji pandan peryòd grangou neonatal bonè. Nati 432, 1032–1036.

62. Marin˜ o, G., Niso-Santano, M., Baehrecke, EH, ak Kroemer, G. (2014). Oto-konsomasyon: entèraksyon nan otofaji ak apoptoz. Nat. Rev Mol. Selil Biol. 15, 81–94.

63. Furuya, D., Tsuji, N., Yagihashi, A., ak Watanabe, N. (2005). Beclin-1 ogmante cis diamminedichloroplatinum pwovoke apoptoz atravè amelyore aktivite caspase 9. Eksp. Selil Res. 307, 26–40.

64. Pattingre, S., Tassa, A., Qu, X., Garuti, R., Liang, XH, Mizushima, N., Packer, M., Schneider, MD, ak Levine, B. (2005). Bcl-2 pwoteyin antiapoptotik anpeche otofaji depandan Beclin 1-. Selil 122, 927–939.

65. Djavaheri-Mergny, M., Maiuri, MC, ak Kroemer, G. (2010). Cross-talk ant apoptoz ak otofaji pa kaspase-medyatè klivaj nan Beclin 1. Onkogene 29, 1717-1719.

66. Grimes, DJ, Gruber, SH, ak Me, EB (1985). Enfeksyon eksperimantal nan reken sitwon, Negaprion brevirostris (Poey), ak espès Vibrio. J. Pwason. Dis. 8, 173–180.

67. Mohamad, N., Mohd Roseli, FA, Azmai, MNA, Saad, MZ, Md Yasin, IS, Zulkiply, NA, ak Nasruddin, NS (2019). Natirèl enfeksyon konkouran nan Vibrio harveyi ak V. alginolyticus nan groupers ibrid kiltive nan Malezi. J. Aquat. Anim. Sante 31, 88–96.