Akteozid nan plant natirèl Chinwa-Cistanche pou Amelyore Maladi ren--Pati I
Mar 03, 2022
Kontakte: emily.li@wecistanche.com
Yon pwodwi natirèl akteozid amelyore blesi ren nan sourit db/db dyabèt ak selil HK-2 atravè reglemante chemen siyal NADPH/oxidase-TGF-/Smad.
Qinwen Wang|Xinxin Dai et.al
Etid sa a te fèt pou mennen ankèt sou efè pwoteksyon ak mekanis yoacteosidesou DKD nan sourit gason db/db dyabèt ak selil HK-2 ki gen anpil glikoz. Sourit db/db dyabèt yo te divize owaza nan gwoup modèl, gwoup metformin, gwoup irbesartan, akacteosidegwoup. Nou obsève pwodwi natirèl la nanacteosidemontre yon efè enpòtan nanpwoteksyon renatravè analiz de endikatè byochimik ak metabolit andojèn, obsèvasyon istopatolojik, ak Western blotting. Selil HK-2 ki te sibi gwo glikoz yo te itilize nan eksperyans in vitro. Mekanis molekilè yo te envestige pa RT-PCR ak Western blot.Acteosideanpeche selil HK-2 ki pwovoke wo glikoz ak sourit db/db dyabèt lè yo anpeche chemen siyal NADPH/oxidase-TGF-/Smad.Acteosidereglemante wout metabolik deranje metabolis lipid, metabolis glyoxylate ak dicarboxylate, ak metabolis asid arachidonik. Nou dekouvri pwodwi natirèl la nanacteosidemontre yon efè enpòtan soupwoteksyon ren.Etid sa a pave wout la pou plis eksplorasyon patojèn, dyagnostik bonè, ak devlopman nan yon nouvo ajan ki ka geri pou DKD.
MO KLE acteoside, dyabetikmaladi ren, Profiling metabolik, NADPH/oxidase-TGF-/Smad siyal chemen, ROS
Pati I
1|ENTWODIKSYON
Acteosidese yon eleman reprezantan nan glikozid phenylethanoid, lajman distribiye nan 79 jener plant, tankou Rehmannia glutinosa,Cistanche deserticola, ak lòt plant medsin.Acteosidese karakterize pa asid kafeyik ak idroksitirosol mare nan yon moyete glikoz atravè lyezon ester ak glikozidik, respektivman, ak yon inite rhamnose lye nan molekil la glikoz (Zhao et al., 2015). Li rapòte keacteosideposede lajman famasi aktivite, tankourenpwoteksyon (Gan et al., 2018), antioksidasyon (He et al., 2011), neropwoteksyon (Li, Zhou, Xu, Song, & Lu, 2018), pwoteksyon fwa (Lee et al., 2004), antikansè (Ohno). , Inoue, Ogihara, & Saracoglu, 2002), ak sou sa. Sepandan, efè pwoteksyon yo nanacteosidenan dyabetikblesi nan renyo pa klè.
Dyabèt se youn nan ijans sante mondyal ki pi rapid nan 21yèm syèk la. An 2019, yo estime ke 463 milyon moun gen dyabèt e yo prevwa nimewo sa a rive nan 578 milyon dola pa 2030, ak 700 milyon dola pa 2045. Prévalence mondyal dyabèt ap grandi rapidman, espesyalman nan mond lan devlope, ak prévalence nan dyabèt.maladi ren(DKD) ak etap final lamaladi ren(ESRD) kontinye ap monte (Hu, 2011). DKD se youn nan konplikasyon mikwovaskilè kwonik dyabetik ki pi pè ak pi gwo kòz ESRD. Tout kòz mòtalite nan moun ki gen DKD se apeprè 30 fwa pi wo pase sa nan pasyan dyabetik san nefropati. Etid resan yo endike sarentranzisyon epithelial-mesenchymal tubulaires (EMT) ak akimilasyon matris ekstrasitoplasmik (ECM) nanrenentèrstisyòm jwe faktè kle nan patojèn DKD (He et al., 2015; Yao et al., 2014). Ogmante etid yo te rapòte ke pwogresyon nanrenfibwoz nan nefropati dyabetik te medyatè pa anpil chemen siyal. TGF- te enplike kòm yon faktè kle patojèn nan pifò kalite CKD ki asosye ak fibwoz, ki gen ladan DKD (Lv & Zhang, 2019). Konplèks siyal etewomerik la, ki soti nan lyezon TGF- 1 a tip II reseptè ak nan vire tip I reseptè, transduce siyal yo atravè reseptè reglemante Smads (Smad2/3) ak patnè komen Smad (Smad4), ki mennen ale nan regilasyon transkripsyon jèn sib (Sierra et al., 2015). Akimilasyon ROS ka mennen nan estrès oksidatif nan selil la, ki mennen nan domaj nan eleman selilè ki gen ladan pwoteyin ak ADN. Alafen, estrès oksidatif mennen nanrenfibwoz ak yon bès nanfonksyon ren. NADPH oksidaz (NOX) yo aksepte kòm sous prensipal jenerasyon ROS nan nefropati dyabetik ak kwonik.maladi ren. Regilasyon an moute ak hyper-activation nan NOX tou gen anpil chans kontribye nan estrès oksidatif nan etap fizyopatoloji. Elevasyon nanrenNivo ROS atravè ipèglisemi-medyatè aktivasyon NOX rezilta nan estrès oksidatif, ki pwovoke domaj nantisi ren yo, sa ki lakòz DKD (Lee, An, Kim, & Bae, 2020).
Metabolomics se yon nouvo teknoloji omik enpòtan pou analiz kalitatif ak quantitative tout ti metabolit molekilè nan selil vivan, tisi ak likid kò. Kòm yon nouvo disiplin pou idantifye chanjman metabolik yo an jeneral nan òganis vivan, metabolomik bay nouvo apèsi sou etid la nan dyabèt ak konplikasyon dyabèt (Lu, Xie, Jia, & Jia, 2013).
Objektif etid sa a se te mennen ankèt sou efè pwoteksyon pwodwi natirèlacteosidesou DKD sourit gason db/db dyabetik ak selil HK-2 pwovoke pa glikoz wo nan vitro ak mekanis li yo. Se konsa, nan etid sa a, sourit db/db yo te adopte pou evalye arenefè pwoteksyon nanacteoside, ak règleman an nan metabolit diferan nan serom te analize eklere mekanis yo nanacteoside. Anplis de sa, modèl HK-2 an vitro ki pwovoke wo glikoz la evalye efikasiteacteosidesou sourit db/db pa detèminasyon nivo ekspresyon NADPH/oxidase-TGF-/Smad.
2|MATERYÈL AK METÒD
2.1|Pwodwi chimik ak enstriman
UPLC-klas asetonitrile te achte nan men Merck (Darmstadt, Almay); asid fòmik te achte nan men Sigma-Aldrich (Sigma, St. Louis, Missouri).Acteoside(Purite pi gran pase oswa egal a 98 pousan) te achte nan men Enstiti Nasyonal pou Kontwòl Manje ak Dwòg (Beijing, Lachin). Estrikti a nanacteosideyo montre nan Figi 1A. Twous reyaktif nitwojèn ure serik (BUN), twous reyaktif aspartate aminotransferaz (GOT), twous reyaktif alanin aminotransferaz (GPT), twous reyaktif kolestewòl total (TCHO), twous reyaktif trigliserid (TG), twous reyaktif kreyatinin serik (Scr), mikwoalbumin urin. (mALB) twous reyaktif, ak twous reyaktif ensilin (INS) yo te achte nan men Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (Nanjing, Lachin). Tablèt idroklorid metformin yo te achte nan men Sino American Shanghai Squib Pharmaceutical Ltd; Irbesartan te achte nan Shenzhen Haibin Pharmaceutical Co, Ltd DMEM ak F12 te achte nan men GIBCO, Amerik; NOX1 (nimewo katalòg: ab121009), NOX2 (nimewo katalòg: ab129068), NOX4 (nimewo katalòg: ab154244), ak Smad7 (nimewo katalòg: ab216428) premye antikò te achte nan men Abcam (Cambridge, Wayòm Ini). -SMA (nimewo katalòg: 19245), E-cadherin (nimewo katalòg: 3195), NF-κB p65 (nimewo katalòg: 8242), TGF- 1 (nimewo katalòg: 3711), Smad2 (nimewo katalòg: 5339) , Smad3 (nimewo katalòg: 9523), Smad4 (nimewo katalòg: 46535), ak PSmad2/3 (nimewo katalòg: 8828) premye antikò yo te achte nan men CST. Tout lòt pwodwi chimik yo ak réactifs te itilize nan etid sa a te nan klas analyse Et te fè nan peyi Lachin.
Waters Acquity™ Ultra Performance LC sistèm (Waters) ekipe ak yon espektromèt Quattro Micro MS ak yon Waters Xevo TM G2 QTof MS (Waters MS Technologies, Manchester, New Hampshire). Dlo deyonize yo te pirifye sou yon sistèm Milli-Q (Millipore, Bedford, Massachusetts). Mass Lynx v4.1 estasyon travay te adopte pou analize done yo, epi yo te itilize yon santrifij ultra-wo vitès nan tanperati ki ba (Thermo Syantifik, Wayòm Ini) ak mikwoskòp DMI3000M (Leica, Almay).
2.2|Kondisyon eksperimantal bèt yo
Tout pwosedi eksperimantal ak pwotokòl yo itilize nan etid sa a te revize ak apwouve pa Komite Etik Enstitisyonèl Animal nan Nanjing University of Chinese Medicine (Nanjing, Lachin). Pwotokòl ki dekri nan etid prezan an te an akò ak direktiv enstitisyonèl pou swen ak itilizasyon bèt laboratwa yo. Sourit yo te achte nan Sant Rechèch Modèl Animal nan Nanjing University (Sètifika No. Su 2015-0001). Tout eksperyans yo te fèt ak 8-sourit gason db/db ki gen yon semèn ak sourit sovaj db/m littermates ki gen laj ak yon premye pwa kò 30 40 g. Modèl sourit db/db dyabetik la se yon modèl bèt dyabèt rekonèt entènasyonalman. Etid yo montre ke mekanis DKD nan sourit db/db sanble ak sa moun. Bèt yo te loje nan kaj ak yon imidite konstan (apeprè 60 pousan ± 2 pousan) ak tanperati (ca. 23 ± 2 degre) ak yon sik limyè / fè nwa nan 12 èdtan. Bèt yo te sibi yon peryòd adaptasyon 3 semèn, pandan yo te pèmèt yo aksè san limit nan manje ak dlo tiyo. Apre peryòd aklimatasyon an, sourit db/db yo te owaza divize an kat gwoup ak sis nan chak gwoup: gwoup modèl (nòmal saline, M), gwoup metformin (250 mg kg).-1 d-1, EJSG), gwoup irbesartan (50 mg kg-1 d-1, EBST),acteosidegwoup (70 mg kg-1 d-1, MRHTG), yon fwa pa jou (Gao, Peng, Huo, Liu, & Yan, 2015). Anplis, nan etid sa a, metformin ak irbesartan yo te chwazi kòm dwòg kontwòl pozitif. Li te rapòte ke irbesartan ka diminye san presyon, lipid san, aklipid ren.Li pa gen okenn efè sou glikoz nan san ak lipid fwa. Li ka amelyore fonksyon an ak chanjman patolojik nanrennan sourit db/db. Efè pwoteksyon metformin sou larense reflete nan rediksyon nan proteinuria nan rat dyabetik ak pasyan ki gen dyabèt tip 2. Dòz bèt metformin ak irbesartan te ekstrè soti nan dòz imen an chak jou, lè l sèvi avèk metòd nòmal sifas kò a. Lè sa a, sourit yo te bay dwòg korespondan an yon fwa pa jou pa lavaj gastric pou 6 semèn, ak sourit yo db / m yo te itilize kòm gwoup la kontwòl, ki te bay menm volim nan saline an menm tan an.
2.3|Koleksyon echantiyon yo
Pandan peryòd eksperimantal la, yo te anrejistre pwa kò ak nivo glikoz nan san jèn (FBG) chak semèn, nivo FBG yo te mezire pa yon sistèm siveyans glikoz nan san One Touch Ultra II (Life Scan, Milpitas, Kalifòni) pa venn ke chak lendi (a 8 am). ). Apre 6 semèn nan administrasyon, sourit yo te jèn nan kaj metabolik ak aksè gratis nan dlo pou kolekte 24 èdtan pipi. Tout echantiyon pipi yo te imedyatman santrifuge nan 3000 rpm pou 10 minit apre yo fin kolekte, epi supernatant yo te separe epi estoke nan -80 degre jiskaske analiz. Nan fen etid la, sourit yo te sakrifye anba anestezi ak 10 pousan idrat chloral (3 mg / kg), epi yo te kolekte san pou konsantrasyon nan paramèt byochimik ak etid metabolomik. Lè sa a, echantiyon san yo te santrifuge a 3000 rpm pou 10 min, epi echantiyon serom yo te separe epi estoke nan -80 degre jiskaske analiz. Yo te retire ren dwat la ak yon sèl pyès fiks ak 10 pousan fòmalin tampon net pou egzamen histolojik. Larencortical te izole nan lòt moso nan epi li te jele nan nitwojèn likid pou Western blotting.
Cistanche pou trete ensifizans ren
2.4|Kilti selil ak tretman
Liy imen RTEC HK{{0}} yo te jwenn nan Nanjing Keygen Biotechnology Development Co., Ltd. Mwayen konplè a te ba glikoz DMEM ak 1{0 pousan FBS ak 1 pousan solisyon penisilin-streptomycin. Selil HK-2 yo te kiltive nan 37 degre, 5 pousan CO2, ak imidite satire. Selil yo te subcultured nan 80 pousan confluence, ki te retire nan enkibatè a, ak mwayen orijinal la nan plat la te jete. Selil yo te rense lè l sèvi avèk 0.5 ml saline tanpon fosfat (PBS) ak dijere pa tretman ak 0.5 ml tripsin pou 1-2 minit nan 37 degre. Yo te sispann dijesyon lè l sèvi avèk yon mwayen DMEM 2 ml, epi sispansyon selil la te imedyatman santrifuje nan 450g pou 5 min nan 4C. Sipènatant la te jete epi selil yo te resuspend nan 2 ml mwayen DMEM korespondan pou jwenn yon sispansyon sèl-selil. Selil yo te simen nan diferan asyèt/microplates nan diferan dansite pou eksperimantasyon ki vin apre, jan sa dekri anba a. Selil HK-2 yo te plake sou 96-plak byen ak asyèt, pretrete ak DMEM ki ba glikoz (5 mmol/L), enkubate nan 37C ak 5 pousan CO.2pou 6 èdtan, ak Lè sa a, yo te senkronize. Gwoup eksperimantal yo te divize jan sa a: gwoup kontwòl (C), san faktè entèvansyon; gwoup modèl (M), kote selil yo te kiltive nan gwo glikoz (30 mmol / L) solisyon DMEM; gwoup kontwòl presyon osmotik (DMEM plis 24.5 mmol / L mannitol, GLC); gwoup irbesartan (25 mmol / L) akacteoside(MRHTG) gwoup nan senk dòz (5, 10, 25, 50, ak 100 μmol / L), respektivman.
2.5|Mòfoloji selilè
Selil HK-2 yo te lave de fwa ak PBS epi yo te gade anba yon mikwoskòp Envèse (OLYMPUS IX51). Mòfoloji selil yo te obsève anba 100 agrandisman.
2.6|Mezi endikatè byochimik
Efikasite terapetik nanacteosidesou sourit db/db yo te evalye pou nivo mALB nan pipi ak FBG, INS, T-CHO, TG, Scr, GOT, GPT, ak BUN nan serom, ki te detekte ki te swiv pa deskripsyon an bay pa manifakti twous la.
2.7|Analiz patolojik
Pati nanrencortical te fèt pou ematoksilin-eozin (HE) ak peryodik asid-Schiff (PAS) tach yo nan lòd yo obsève chanjman patolojik nantisi ren, degre fibwoz tisi hyperplasia, estrikti glomeruli ak tubul atravè yon mikwoskòp elèktron (400). Lè w ap pran yon foto, eseye ranpli tout jaden vizyon antisi renpou asire ke limyè a background nan chak foto se menm bagay la. Lojisyèl Image-Pro Plus 6.0 te itilize pou chwazi menm koulè wouj-vyolèt ak kritè inifye pou jije pozitif tout foto yo. Dansite optik akimile (IOD) nan manbràn sousòl ekspresyon pozitif ak zòn nan pixel nan glomerular vaskilè plexus (ZÒN) yo te jwenn nan analize chak foto, ak dansite an mwayèn optik (IOD / ZÒN) te kalkile.
2.8|Western blotting
Tisi renak selil yo te ekstrè ak tanpon lysis; lysates yo te santrifuje. Apre piroliz konplè, santrifize pou 5 minit nan 12000 rpm, epi pran supernatant la epi yo kolekte supernatant yo. Yo te itilize twous konsantrasyon pwoteyin asid Bicinchoninic (BCA) pou detèmine konsantrasyon pwoteyin. Apre kantite, pwoteyin lan te rezoud pa 10 pousan SDS-PAGE, transfere sou manbràn PVDF, Lè sa a, bloke nan 5 pousan BSA nan TBST, ak enkubasyon ak antikò prensipal ki te swiv pa antikò segondè korespondan yo. Lè sa a, ECL te detekte reyaksyon antikò a epi yo te mezire ak lojisyèl ImageJ.Tisi ren yoechantiyon yo te analize pa Western blotting pou detekte nivo ekspresyon -SMA, TGF- 1 (1:1300), Smad2 (1:3000), Smad3 (1:1000), P-Smad2/3 (1:500). ), Smad4 (1:1000), ak Smad7 (1:1000) pwoteyin.
2.9|ELISA analiz
Sekresyon pwoteyin chemoattractant monosit -1 (MCP-1), interleukin-1 (IL-1), faktè necrosis timè- (TNF-), ak interleukin-6 (IL). -6) nan supernatant chak selil yo te mezire pa twous ELISA.
2.10|PCR an tan reyèl
Anplis, selil sa yo te prepare pou PCR an tan reyèl pou egzamine nivo ekspresyon NOX1, NOX2, NOX4, -SMA, E-cadherin, NF-κB p65, TGF- 1, Smad2, Smad3, Smad4, ak Smad7 mRNA. Selil nan chak gwoup (apeprè 1 107 selil) yo te kolekte. RNA total yo te ekstrè dapre metòd yon sèl etap Trizol la, epi yo te detèmine pite li yo ak konsantrasyon. Avèk GAPDH kòm referans entèn, sekans primè a te sa ki annapre yo. TGF- 1, primè sans: 5-ACACATCAGAGCTCCGAGAA-3, primè sans: 5-GAGGTATC GCCAGGAATTGT-3; E-cadherin, primè sans: 5- ACGCATTGCCA CATACACTC-3, premye sans: 5-GGTGAATTCGGGCTTGTTGT-3; NF-κB p65, sans: 5-CTTCCTGCCCTACAGAGGTC-3, antisans: 5-AGAGCAAGGAAGTCCCAGAC-3; NOX1, sans: 5-CCTAGAAGGGCTCCAAACCA{{33} }, Jadendanfan antisans: 5-GGAAGGCATCCACAAACAGG-3; NOX2, sans: 5-ACCCTTCGCATCCATTCTCA-3, antisans: 5-TCTGCAAACCACTCAAAAGGC-3; NOX4, sans primè: 5-CAAGCAGGAGAACCAGGAGA-3, antisan primary: 5-AGTTGAGGGCATTCACCAGA-3; Smad2, sans primè: 5-TGGCACGTGAGGTGAGATT-3, premye sans: 5-CTCCATCACAGTGCACCAAG-3; Smad3, sans: 5-CAGCCGGTTTGGATTACAGG-3, antisans: 5-GAGTCAAAGTCCCTGCTCCT-3; Smad4, sans prime: 5-CACTGCCAACTTTCCCAACA-3, antisense primer: 5-ATCCATTCTGCTTGCTTGTCCT-3; Smad7, sans primary: 5-AAGAGTCAGCTGGTGCAGAA-3, antisense primer: 5-GCGGACTTGATGAAGATGGGG-3; -SMA, sans prime: 5-GGTGCTGTCTCTCTATGCCT-3, antisense primer: 5-CAGATCCAGACGCATGATGG-3; GAPDH, sans: 5-TGGTATCGTGGAAGGACTCA-3, antisans: 5-CCAGTAGAGGCAGGGATGAT-3.
2.11|Analiz estatistik
Done yo ak analiz estatistik konfòme yo ak rekòmandasyon yo sou konsepsyon eksperimantal ak analiz nan farmakoloji. Tout eksperyans yo te randomized ak avèg. Rezilta yo eksprime kòm M ± SD/SEM nan nimewo ki endike (n) eksperyans endepandan yo. Done nan etid aktyèl la prezante kòm M ± SD / SEM ki soti nan omwen twa eksperyans endepandan. Siyifikasyon diferans yo te analize pa yon sèl-fason ANOVA ki te swiv pa tès Tukey a (plis pase de gwoup) oswa yon tès t Elèv la (de gwoup). Tès post hoc yo fèt sèlman lè F reyalize p < .05,="" epi="" pa="" te="" gen="" okenn="" inhomogeneity="" divèjans="" enpòtan.="" tout="" tès="" yo="" te="" de-bò,="" epi="" yo="" te="" konsidere="" p=""><.05 estatistik="" enpòtan.="" analiz="" estatistik="" yo="" te="" fèt="" lè="" l="" sèvi="" avèk="" lojisyèl="" graphpad="" prism="">
Cistanche acteoside pou amelyore ren
2.12 | Kondisyon UPLC-QTOF/MS ak analiz done
Tout echantiyon serom yo te dekonjle nan tanperati chanm anvan preparasyon an. Yo te ajoute 300 ul acetonitrile a nan 100 ul echantiyon serom nan pwoteyin presipite, epi yo te melanje kouray pou 60 s. Tout echantiyon yo te santrifuje a 13000 rpm pou 10 minit nan 4 degre. Finalman, yo te enjekte supernatant la nan analiz UPLC-QTOF/MS. Separasyon metabolit yo te fèt ak yon sistèm Waters Acquity™ Ultra Performance LC (Waters) ekipe ak yon Waters Xevo™ G2 Q/TOF-MS (Waters MS Technologies). Yo te enjekte yon aliquot 2 ul echantiyon solisyon sou yon Acquity UPLC BEH C18 (100 mm 2.1 mm, 1.7 μm, Waters Corporation, Milford, Connecticut) nan 35 degre ak to koule a te 0.4 ml/min. Faz nan pi bon mobil fèt nan dlo (A) (ki gen 0.1 pousan asid fòmik) ak asetonitrile (B). Kondisyon optimize UPLC elisyon pou analiz serik yo te 0 3 min, 95 pousan 55 pousan A; 4 13 min, 55 pousan 5 pousan A; 13 14 min, 5 pousan A. Yo te kenbe autosampler la nan 4 degre.
Yo te fè espektrometri mas lè l sèvi avèk yon Xevo™ G2 QTof (Waters MS Technologies), yon kwadwopòl, ak yon òtogonal akselerasyon tan-de-vòl mas tromètr tandem. Leucine-enkephalin te itilize kòm mas la fèmen ki te kreye yon [M plis H]plision (m/z 556.2771) ak [MH]-ion (m/z 554.2615) nan mòd pozitif ak negatif, respektivman. Konsantrasyon leucine-enkephalin te 200 pg/ml ak pousantaj koule perfusion te 100 ul/min pou asire presizyon pandan analiz MS la atravè yon ponp sereng. Done yo te kolekte nan mòd santwoyid soti nan 100 a 1,000 m/z. Pou tou de mòd electrospray pozitif ak negatif, vòltaj kapilè ak kòn yo te fikse nan 3.0 kV ak 30 V, respektivman. Gaz desolvasyon an te mete sou 600 L/h nan yon tanperati 350 degre, gaz kòn lan te mete sou 50 L/hr ak tanperati sous la te mete sou 120 degre. Yo te fikse pousantaj akizisyon done a 30 ms, ak yon reta interscan 0.02 s.
Anplis de sa, 10 echantiyon serom yo te chwazi owaza nan chak gwoup epi melanje ansanm kòm echantiyon kontwòl kalite (QC), respektivman. Echantiyon QC la te itilize pou optimize kondisyon UPLCQTOF/MS, paske li te genyen pifò enfòmasyon nan echantiyon an antye. Echantiyon QC yo te enjekte sis fwa nan kòmansman an nan kouri a yo nan lòd yo kondisyone oswa ekilibre sistèm nan ak Lè sa a, chak 10 echantiyon yo plis kontwole estabilite nan analiz la. Chak jou, apre yo fin kalibre enstriman an, yo te analize echantiyon QC an premye pou teste estabilite enstriman an pou asire pèfòmans ki konsistan nan sistèm lan.
Tout akizisyon done ak analiz done yo te kontwole pa lojisyèl Waters MassLynx v4.1. EZinfo lojisyèl 2.0 (Waters Corp.) te analize matris done miltivarye a. Paramèt prensipal yo enkli ranje tan retansyon 0 14 min; rapò mas m/z 100 1,000, ranje tolerans mas 0.{{10}}1 Da, pik entansite papòt 50, bon jan kalite fenèt 0.05 Da, retansyon tan fenèt 0.20 min, ak deteksyon otomatik nan 5 pousan wotè pik ak bri. Entansite chak iyon te nòmalize parapò ak kantite total iyon pou jenere yon matris done ki fèt ak tan retansyon, valè m/z, ak zòn pik nòmalize a.
Matris done rezilta yo te prezante nan lojisyèl EZinfo 2.0 pou analiz eleman prensipal yo, analiz diskriminan pasyèl pi piti kare (PLS-DA), ak pwojeksyon ortogonal nan analiz estrikti inaktif (OPLS-DA). Soti nan OPLS-DA a, yo ta ka idantifye divès metabolit kòm yo responsab pou separasyon ki genyen ant gwoup kontwòl la ak gwoup modèl e se poutèt sa yo te konsidere kòm makè potansyèl yo. Makè potansyèl nan enterè yo te ekstrè nan S-plot konstwi apre analiz ak OPLS-DA, ak varyab ki te gen kontribisyon enpòtan nan diskriminasyon ant gwoup yo te sibi plis idantifikasyon nan fòmil la molekilè.
Enpòtans varyab (VIP) nan valè pwojeksyon an se yon sòm pondere kare pwa PLS yo, epi varyab ki gen VIP > 1 yo te konsidere kòm enfliyan pou separasyon echantiyon yo genyen nan simit nòt ki te pwodwi nan analiz OPLS-DA. Nan tout eksperyans, yo te fikse nivo konfyans nan 95 pousan pou detèmine siyifikasyon diferans lan (p < .{10}}5).="" yo="" te="" evantyèlman="" chwazi="" varyab="" sa="" yo="" kòm="" biomarqueurs="" potansyèl="" yo.="" yo="" te="" dekri="" trase="" nòt="" pls-da="" yo="" pa="" paramèt="" validasyon="" kwa="" r2y="" ak="" q2,="" ki="" reprezante="" varyasyon="" total="" eksplike="" pou="" matris="" x="" la="" ak="" previzibilite="" modèl="" la,="" respektivman.="" modèl="" ekselan="" yo="" jwenn="" lè="" valè="" kimilatif="" r2y="" ak="" q2="" yo="" pi="" wo="" pase="" 0.8.="" distans="" relatif="" ant="" gwoup="" administrasyon="" yo="" ak="" gwoup="" kontwòl="" la="" soti="" nan="" konplo="" nòt="" pls-da="" yo="" te="" kalkile="" ak="" valè="" an="" mwayèn="" (x-aks="" ak="" y-aks)="" nan="" tout="" echantiyon="" nan="" gwoup="" la="" kontwòl="" kòm="" pwen="" an="">
Metabolit potansyèl yo te chwazi yo te idantifye dapre detèminasyon egzat m/z, tan retansyon, ak fragman MS/MS tipik ak modèl biomarqueurs potansyèl ki anwo yo, ki te jwenn nan mòd ion pozitif ak negatif. Konstriksyon chemen metabolik la te fèt ak Metabo Analyst, ki se yon zouti ki baze sou entènèt pou vizyalizasyon metabolomik (https://www.metaboanalyst.ca/) ki baze sou sous baz done ki gen ladan KEGG (HTTP://www.genome). .jp/kegg/) ak baz done HMDB (http://www.hmdb.ca/) pou fè rechèch. Tan an retansyon ak fragman MS / MS tipik ak modèl te gen gwo pwofite etwat seri a nan molekil posib.
Acteoside nan Cistanche ka amelyore fonksyon ren
3|REZILTA
Klike la a pou jwenn enfòmasyon sou Pati II (rezilta) atik sa a.
Extrait de: ' Yon pwodwi natirèl deacteosideamelyoreblesi nan rennan sourit db/db dyabèt ak selil HK-2 atravè reglemante NADPH/oxidase-TGF-/Smad signaling pathway' -----pa Qinwen Wang|Xinxin Dai et.al
----Rechèch fitoterapi. 2021;35:5227–5240. wileyonlinelibrary.com/journal/ptr © 2021 John Wiley & Sons Ltd. DOI: 10.1002/ptr.7196