htLang
Kay / Konesans / Sanisfè

Konesans

Yon nanositokin ki baze sou IL-12-san danje ranfòse iminite antikansè atravè kontwòl espas-tanporèl nan enflamasyon pou elimine timè frèt avanse.

Dec 08, 2023

Tretman timè imunolojik frèt se yon gwo defi pou inibitè pòs iminitè yo (ICI). Interleukin 12 (IL-12) ka dinamize ICI yo kont timè frèt lè li tabli iminite antitumoral solid. Sepandan, toksisite li yo ak endiksyon sistemik nan kontrekare siyal imunosuppressive te anpeche tradiksyon. Isit la, aktivite IL-12 kontwole espas tanporèl pou ogmante efikasite san danje san yo pa eksitasyon repons iminitè entèfere nan jenere yon nano-sitokin ki rete inaktif nan pH fizyolojik men debouche tout aktivite li nan pH timè asid. Nanositokin ki baze sou IL-12-(Nano-IL{-12) akimile epi degaje IL-12 nan tisi timè yo, sa ki lakòz enflamasyon antitumoral lokalize, pandan y ap anpeche yon repons iminitè sistemik, reyaksyon iminitè kontreaktiv, ak toksisite negatif menm apre plizyè administrasyon nan venn. Nano-IL-12-kontwòl spatio-temporal nan enflamasyon ankouraje efikasite antikansè siperyè ak synergizes ak ICIs pwofondman anflame mikro-anviwònman timè a epi elimine konplètman ICI ki reziste timè prensipal ak metastatik. Estrateji a ta ka yon apwòch pwomèt nan direksyon imunoterapi ki pi an sekirite ak pi efikas.

effects of cistance-antitumor

Benefis cistanche tubulosa-Antitumor

1. Entwodiksyon

Inibitè pòs iminitè yo (ICI), tankou anti-PD-1 (nivolumab) ak anti-CTLA- 4 (ipilimumab), te revolusyone terapi kansè.[1,2] Sepandan, yon gwo kantite nan pasyan yo toujou pa benefisye de tretman sa yo.[3] Repons ensifizan sa yo te asosye ak yon fenotip timè frèt ki pa sansib pou ICI yo.[4,5] Timè frèt sa yo anjeneral prezante yon mikwo-anviwònman imunosuppressive ak nivo ki ba nan enfiltrasyon selil T ki febli efè ICI yo.[5–7. ] Kidonk, gen yon bezwen ijan pou ajan yo chanje timè a soti nan fenotip frèt la nan yon fenotip anflame (cho) ak gwo enfiltrasyon selil T nan direksyon amelyore efikasite nan ICIs ak elaji jaden flè terapetik la. Interleukin-12 (IL{-12), ki se pami pi fò sitokin pro-enflamatwa, gen yon gwo potansyèl pou ranfòse iminite antitumoral ak simonte rezistans ICI.[8–10] Sepandan, IL-12 pwovoke. evènman negatif grav ki gen rapò ak iminitè (irAEs) lè yo enjekte sistemikman.[8,10] Kidonk, yon varyete de apwòch jeni pwoteyin, ki gen ladan sitokin iminitè, [11-13] pwoteyin fizyon,[14] ak sitokin ki sansib pou proteaz,[15 ] yo anba envestigasyon entans pou amelyore sekirite IL-12 lè yo diminye ekspoze sistemik ak amelyore selektivite timè yo. Nan lòt men an, IL-12 toujou prezante dezavantaj kritik ki gen rapò ak dinamik espas tanporèl nan enflamasyon an ki mennen nan reyaksyon iminitè kontreaktiv sa afebli efikasite li.[16–19] Pa egzanp, repete piki IL-12 ankouraje ekspansyon sistemik nan anti-enflamatwa interleukin-10 (IL{-10) nan pasyan yo, ki te limite efikasite nan anti-timè.[20-22] Nan sans sa a, devlope sistèm ki kapab kontwole espas-temporalman IL la{{36. }}medyatè enflamasyon ta ka maksimize fonksyon efèktè yo ak estimile gaya iminite antitumoral, pandan y ap evite reyaksyon iminitè entèfere. Malerezman, dinamik enflamatwa yo pou sistèm pwoteyin-enjenieri mansyone anwo yo pa konprann konplètman, ak asosyasyon yo ak kontrekare repons segondè rete yo dwe klarifye. Nan la a, nou devlope nano-sitokin ki reponn a stimuli (nano cytokines) nan enkapsulasyon IL-12 natif natal ak polymère biokonpatib pou atenn kontwòl espas-temporal nan aktivite li. Nano cytokines ki baze sou IL-12-(Nano-IL{-12) yo te fèt pou debouche IL totalman aktif-12 apre yo fin santi pH entratumoral asid la, paske asidoz se yon karakteristik kansè [23] epi li lye ak imino-depresyon.[24,25] An reyalite, dènyèman nou te jwenn ke fonksyon pH-switchable a ka pèmèt deklanchman segondè ak selektif nan timè ICI ki reziste.[26] Famakokinetik, sekirite, ak efikasite nan Nano-IL-12 yo te evalye nan modèl murin nan melanom frèt ak kansè nan tete. Rezilta nou yo te montre ke NanoIL-12 pwovoke yon reyaksyon enflamatwa soutni nan tisi timè yo lè yo ogmante entansite ak dire ekspoze a IL-12 pandan y ap evite entèraksyon an ak selil iminitè yo nan tisi ki an sante pou siprime off- vize repons iminitè a. Kidonk, Nano-IL-12 efektivman bloke reyaksyon segondè kontrekare tou de sistemik ak entratumoral, ki montre efikasite nan dòz ki 10-pliye pi ba pase IL natif natal-12. Nano-IL-12 amelyore iminite anti-tumeur nan senèrjize ak ICI pou enflame mikwo-anviwònman timè a (TME), ki mennen ale nan repons konplè (CR) nan modèl melanom ki reziste ICI, ak metastaz prensipal ak nan poumon nan trip. kansè nan tete negatif (TNBC).

Desert ginseng-Improve immunity (9)

cistanche tubulosa-amelyore sistèm iminitè

2. Rezilta yo

2.1. Nano-IL-12 Sans pH intratumoral pou libere Cytokine ki totalman aktif

Pou konstwi Nano-IL-12, nou te sentetize carboxydimethylmaleic anhydride (CDM)-modifye poly(ethylene glycol)-poly(LLysine) (PEG-pLL(CDM)) atravè metòd la rapòte [27] (Scheme S1, Enfòmasyon Sipò). Polymère a gen mwatye nan gwoup amine yo nan blòk pLL konjige ak CDM atravè lyen amid la (Figi S1-S3, Enfòmasyon Sipò). Nano-IL{{10}} yo fòme jis lè yo melanje polymère a ak sitokin nan nan kondisyon akeuz san yo pa ajoute solvang òganik (Figi 1a). Gwoup amine nan polymère a fòme konplèks iyon ak moyet karboksilat nan pwoteyin yo, pandan y ap gwoup CDM yo reyaji ak gwoup amine nan IL-12 osi byen ke nan fil polymère yo pou fòme lyezon amid ki sansib pou pH. Yo te detèmine efikasite enkapsulasyon IL-12 nan nanositokin yo anviwon 80%, jan HPLC te mezire lè w konpare zòn pik Alexa Fluor 647 (A647) ki make IL gratis-12 ak IL-12 chaje nan nanositokin la (Figi 1b). Nan ka ki pa fluoresans ki make IL-12, efikasite enkapsulasyon an te valide pa mezi ELISA, depi metòd ELISA a ka sèlman detekte IL-12 ki pa enkapsulasyon gratis nan melanj ki te reyaji paske kouch polymère nan Nano. -IL-12 bloke rekonesans IL-12 ki chaje ak antikò deteksyon an. Kidonk, lè yo kalkile rapò IL-12 ki pa ankapsile a ak total IL-12 manje, yo te detèmine efikasite enkapsulasyon an tou anviwon 80% (Figi S4a, Enfòmasyon Sipò), ki konsistan avèk rezilta a soti nan mezi HPLC yo. NanoIL-12 te pirifye pa filtraj santrifujeur pou retire IL gratis-12 ak relativman ti polymère-IL-12 konjige (Figi S4b, Enfòmasyon Sipò). Pirifikasyon an te konfime pa HPLC (Figi 1b, pi ba panèl). Fòmasyon an nan plak pwotèj polymère a sou Nano-IL-12 te konfime pa mikwoskospi elektwonik transmisyon (TEM) ak gaye limyè dinamik (DLS). Nan TEM, nwayo IL-12-chaje nan NanoIL-12 ki te fòme pa blòk pLL polymère a ak IL-12 te tache pa acetate uranyl[28] epi yo te vizyalize kòm pwen nwa inifòm ak yon dyamèt mwayèn nan 23.2 ± 4 nm (Figi 1c, d). Pa DLS, dyamèt idrodinamik Nano-IL-12 te mezire 42 ± 2 nm (Figi 1e). Lè nou konpare gwosè a mezire pa TEM ak DLS, nou ka kalkile ke epesè nan koki PEG la nan patikil sa yo se apeprè 10 nm. Rezilta sa a endike yon PEGylation dans, ki ta itil pou amelyore farmakokinetik la.[29] Anplis de sa, etid fluoresans korelasyon spèktroskopi (FCS) nan A647-labeled Nano-IL-12 konfime fòmasyon nan asosye ak pi gwo pwa molekilè pase gratis A647-ki make IL-12 (Tablo S1, Enfòmasyon Sipò). Lè nou konpare konte pou chak molekil nan mezi FCS nan echantiyon A647-IL-12 ki make A647-nano-IL-12, nou detèmine chak Nano-IL{ {67}} gen apeprè 1.5 IL-12 molekil an mwayèn. Anplis de sa, yo te jwenn chaj sifas Nano-IL-12 la tou pre net (Tablo S2, Enfòmasyon Sipò), sijere ke polymère a pwoteje IL-12 ki chaje negatif. Yo rapòte lyezon amid ki nan Nano-IL-12 ki fòme ant pati CDM yo ak amine prensipal yo se pH-sansib.[30] Kidonk, Nano-IL-12 yo espere disoye nan kondisyon asid pou libere cytokine ki ankapsule a. Nou premye tès depistaj pH-sansiblite nan Nano-IL-12 nan divès valè pH ki sòti nan pH 4.5 a 8.5 pa mezi FCS pou reflete estati disosyasyon nan Nano-IL-12 pa chanjman nan koyefisyan difizyon. Ogmantasyon nan koyefisyan difizyon an, ki koresponn ak diminisyon nan pwa molekilè nan patikil yo, ta ka obsève nan kondisyon asid anba pH 7.0, sijere ke Nano-IL-12 yo estab nan pH fizyolojik, men li ka pèdi yo. entegrite nan blesi entratumoral ak anviwònman asidifye [23,31] (Figi 1f). Apre sa, nou te envestige sinetik disosyasyon Nano-IL-12 nan pH fizyolojik 7.4 ak pH entratumoral 6.5 pa mezi FCS. Mezi FCS la pèmèt evalyasyon egzak koyefisyan difizyon Nano-IL-12 ak IL la-12. Nouvo rezilta a te montre Nano-IL-12 rapidman pèdi entegrite nan pH 6.5, ak koyefisyan difizyon echantiyon an te rive nan valè IL gratis-12 apre 4 èdtan enkubasyon, sa ki sijere aktivasyon konplè nan Nano-IL. -12 nan kondisyon sa yo. Anplis, nan pH 7.4, Nano-IL-12 yo te estab (Figi 1g), kenbe koyefisyan difizyon yo menm apre plizyè jou (Figi S4c, Enfòmasyon Sipò). Obsèvasyon sa yo sipòte aktivasyon selektif Nano-IL-12 nan kondisyon pH entratumoral ak estabilite nan kondisyon fizyolojik. Piske IL-12 ka ankouraje sekresyon IFN-𝛾 ki soti nan splenosit,[32] efè pwoteksyon/de-pwoteksyon polymère sou byoaktivite Nano-IL-12 te evalye in vitro pa tès splenosit ( Figi 1h). Nano-IL-12 pwovoke nivo pi ba nan pwodiksyon IFN- 𝛾 soti nan splenosit murin, ki endike blokaj la nan IL{-12 byoaktivite pa ankapsulasyon polymère a. Nan lòt men an, Nano-IL-12 aktive pa pre-enkubasyon nan asid (pH 6.5) te montre byoaktivite ki sanble ak sa ki nan IL natif natal-12, sijere ke aktive Nano-IL-12 ka konplètman rekipere byoaktivite a nan sitokin la.

Figure 1. Nano-IL-12 activates at intratumoral pH to release the fully active cytokine. a) Formation and structure of IL-12-based nanocytokine (Nano-IL- 12). The Nano-IL-12 is self-assembled in aqueous conditions by simply mixing the polymer with IL-12. The assembly is driven by the pH-sensitive amide bonds and electrostatic interactions. b) HPLC results of free IL-12 protein, PEG-pLL(CDM) + IL-12 mixture, and purified Nano-IL-12. The IL-12 proteins are labeled with A647. c) Representative TEM image of purified Nano-IL-12 clearly shows the core structure of the particles. d) Distribution of the particle cores diameter measured from the TEM images. n = 100 particles counted. e) Distribution of the hydrodynamic diameters of Nano-IL-12 measured by DLS. f) pH-dependent Nano-IL-12 disassociation indicated by FCS measurement of Nano-IL-12 incubated under different pH for 24 h. The dotted line at 5.3 × 107 cm2 s−1 refers to the diffusion coefficient of free IL-12. g) IL-12 release profile of Nano-IL-12 measured by the FCS method. The dotted lines at 1.2 × 107 cm2 s−1 and 5.3 × 107 cm2 s−1 refer to the diffusion coefficients of intact Nano-IL-12 and released free IL-12, respectively. h) IFN-𝛾 secretion by murine splenocytes treated with Nano-IL-12, activated Nano-IL-12, and native IL-12. IFN-𝛾 was measured by ELISA. Data are shown as mean ± S.D.; for f and g, n = 3 parallel measurements. For h, n = 5 parallel measurements.


Figi 1. Nano-IL-12 aktive nan pH entratumoral pou libere cytokine totalman aktif la. a) Fòmasyon ak estrikti IL-12-nanositokin ki baze sou (Nano-IL- 12). Nano-IL-12 pwòp tèt ou rasanble nan kondisyon akeuz pa senpleman melanje polymère a ak IL-12. Se asanble a kondwi pa lyezon amid pH-sansib ak entèraksyon elektwostatik. b) rezilta HPLC nan IL-12 pwoteyin gratis, PEG-pLL(CDM) + IL-12 melanj, ak nano-IL-12 pirifye. Pwoteyin IL-12 yo make ak A647. c) Imaj reprezantatif TEM nan Nano-IL-12 pirifye montre klèman estrikti debaz patikil yo. d) Distribisyon dyamèt nwayo patikil yo mezire nan imaj TEM yo. n=100 patikil konte. e) Distribisyon dyamèt idrodinamik Nano-IL-12 DLS mezire. f) disosyasyon Nano-IL-12 ki depann de pH ki endike nan mezi FCS nan Nano-IL-12 enkubasyon anba diferan pH pou 24 èdtan. Liy pwentiye a nan 5.3 × 107 cm2 s−1 refere a koyefisyan difizyon IL gratis-12. g) IL-12 pwofil lage nan Nano-IL-12 mezire pa metòd FCS la. Liy pwentiye yo nan 1.2 × 107 cm2 s−1 ak 5.3 × 107 cm2 s−1 refere a koyefisyan difizyon nan Nano-IL-12 entak ak lage IL gratis-12, respektivman. h) Sekresyon IFN-𝛾 pa splenosit murin trete ak Nano-IL-12, aktive Nano-IL-12, ak IL natif natal-12. IFN-𝛾 te mezire pa ELISA. Done yo montre kòm vle di ± SD; pou f ak g, n=3 mezi paralèl. Pou h, n=5 mezi paralèl.

Konsèvasyon ak estabilite fòmilasyon an enpòtan tou pou tradwi Nano-IL-12 kòm yon dwòg. Se poutèt sa, nou devlope yon vèsyon lyofilize nan Nano-IL-12 lè l sèvi avèk trehalose kòm kriyoprotektant la.[33] Nano-IL-12 rekonstitye a te montre gwosè konparab ak chaj sifas ak fre Nano-IL-12, san flit kago, epi li pataje sansiblite pH konparab ak kapasite pou ankouraje IFN-𝛾 in vitro (Figi S4d-g ak Tablo S2, Enfòmasyon Sipò). Rezilta sa yo sipòte fòmilasyon lyofilize a kòm yon kontrepati nan Nano-IL-12 solid.

Figure 2. Nano-IL-12 improves pharmacokinetics and anti-tumor efficacy. a) IVCLSM images of the earlobe skin of mice after i.v. injection of 10 μg A647-labeled IL-12 or Nano-IL-12 (red color). Scale bar = 50 μm. Mean fluorescence intensity in the tissue area (white boxes) at 5 h after injection was quantified and normalized to the maximum intensity in the vasculature immediately after injection (Vmax). b) Blood circulation profiles of free IL-12 and Nano-IL-12 after i.v. injection of 10 μg IL-12 or equivalent Nano-IL-12 determined by ELISA. Also, the concentration of released IL-12 from Nano-IL-12 in the blood is plotted (data are shown as mean ± S.D., n = 5 mice per group). c) IVIS image of B16F10 melanoma tumors excised 24 h post i.v. injection of 10 μg IL-12 or equivalent Nano-IL-12 labeled with A647. d) Quantification of the IL-12 level in 4T1 TNBC tumors at 24- and 48 h post i.v. injection of 10 μg IL-12 or equivalent Nano-IL-12 by ELISA (Data are shown as mean ± S.D.; n = 3 mice per group; p values are calculated by one-way ANOVA). e) Anti-tumor activity of a single i.v. injection (injection days are indicated by the arrow (Day 8 for the B16F10 model and Day 7 for the 4T1 model)) of 10 μg IL-12 or equivalent Nano-IL-12. The results in B16F10 melanoma are shown in the upper panel and the results in the 4T1 TNBC are shown in the lower panel. The individual tumor growth curves are shown in the left panels. The average tumor volume curves are shown in the center panels, and the survival curves are shown in the right panel (Data are shown as mean ± SEM; n = 5 mice per group, p values are calculated via log-rank analysis).


Figi 2. Nano-IL-12 amelyore famakokinetik ak efikasite anti-timè. a) IVCLSM imaj po zòrèy sourit apre piki iv 10 ug A647-ki make IL-12 oswa Nano-IL-12 (koulè wouj). Ba echèl=50 μm. Mwayèn entansite fliyoresans nan zòn tisi a (bwat blan) nan 5 èdtan apre piki yo te quantifye ak nòmalize a entansite maksimòm nan vaskilè a imedyatman apre piki (Vmax). b) Pwofil sikilasyon san IL-12 ak Nano-IL-12 apre piki iv 10 ug IL-12 oswa ekivalan Nano-IL-12 ELISA detèmine. Epitou, konsantrasyon IL-12 lage nan Nano-IL-12 nan san an trase (done yo montre kòm mwayen ± SD, n=5 sourit pou chak gwoup). c) Imaj IVIS timè melanom B16F10 retire 24 èdtan apre piki iv nan 10 ug IL-12 oswa ekivalan Nano-IL-12 ki make ak A647. d) Kantifikasyon nivo IL-12 nan timè 4T1 TNBC nan 24- ak 48 èdtan apre piki iv nan 10 ug IL-12 oswa ekivalan Nano-IL-12 pa ELISA ( Done yo montre kòm mwayen ± SD; n=3 sourit pou chak gwoup; valè p yo kalkile pa yon sèl-fason ANOVA). e) Aktivite anti-timè nan yon sèl piki iv (jou piki yo endike pa flèch la (Jou 8 pou modèl B16F10 ak Jou 7 pou modèl 4T1)) nan 10 ug IL-12 oswa ekivalan Nano-IL{ {51}}. Rezilta yo nan melanom B16F10 yo montre nan panèl anwo a ak rezilta yo nan 4T1 TNBC yo montre nan panèl ki pi ba a. Koub kwasans timè endividyèl yo montre nan panno gòch yo. Koub volim timè mwayèn yo montre nan panno sant yo, epi koub siviv yo montre nan panèl dwat la (Done yo montre kòm mwayen ± SEM; n=5 sourit pou chak gwoup, valè p yo kalkile atravè analiz log-rank. ).

2.2. Nano-IL-12 Amelyore Farmakokinetik IL-12 ak Aktive nan timè yo pou ranfòse efè anti-timè.

Ankapsulasyon nan Nano-IL-12 ka amelyore farmakokinetik IL-12. Pou vizyalize sikilasyon Nano-IL-12 sou enjeksyon nan venn (iv), yo te itilize mikwoskospi lazè konfokal in vivo (IVCLSM) pou swiv Nano-IL ki baze sou A647-IL-12-. -12 nan veso zòrèy sourit apre piki nan venn ke a. IL gratis -12 te montre ekstravazasyon apre piki (Figi 2a), ki endike nan ogmante entansite fliyoresans nan entèstisyòm tisi a. Lè nou konsidere makromolekil ki gen yon gwosè ki konparab ak IL-12 (75 kDa), tankou 70 kDa dextran ak albumin (65 kDa), yo montre aksè limite nan po a,[34] flit IL-12 soti nan veso yo sijere enstabilite IL-12 pandan sikilasyon san. An reyalite, etid anvan yo te endike proteolysis IL-12 pa anzim ki prezan nan serom.[35,36] Pou sipòte plis degradasyon IL-12 nan eksperyans nou yo, estabilite A{{22} }} ki make IL-12 nan plasma sourit yo te envestige pa chromatography esklizyon gwosè (SEC). Lè nou enkubasyon ak plasma sourit, nou te jwenn ke IL-12 te degrade nan fragman ki gen pi piti pwa molekilè (Figi S5, Enfòmasyon Sipò), ki konfime enstabilite IL-12 nan san. Nan lòt men an, Nano-IL-12 te montre flit minim nan po a, ki endike estabilite yo nan sikilasyon san. Pwofil sikilasyon ki mezire nan tès ELISA la konfime an jeneral Nano-IL-12 gen sikilasyon pi long pase IL-12 gratis (Figi 2b). Pandan se tan, nivo aktive Nano-IL-12, ki te detèmine pa IL la-12 lage, te trè restriksyon nan san, ki endike estabilite nan vivo nan Nano-IL-12 pandan sistemik. sikilasyon, ki ede diminye efè segondè sistemik yo. Akimilasyon Nano-IL-12 nan kè, larat, poumon, ak ren te sanble ak sa ki nan IL gratis-12 nan tou de 24 ak 48 èdtan apre administrasyon an, pandan y ap nan fwa a, akimilasyon nan Nano-IL-12 te pi wo pase IL gratis-12 nan 24 h, men konparab nan 48 h (Figi S6, Enfòmasyon Sipò). Nano-IL-12 te montre siyifikativman pi wo akimilasyon timè pase IL gratis-12 (Figi 2c) nan 24 èdtan apre piki. Anplis, pandan ke IL gratis-12 te retire nan timè yo nan 48 èdtan apre piki, konsantrasyon nan Nano-IL-12 te rete wo (anviwon 4-pliye pi wo pase IL gratis{{59} }) (Figi 2d), sijere Nano-IL-12 ogmante zòn ki anba koub konsantrasyon (AUC) IL-12 andedan timè yo. Nan liy ak akimilasyon ki wo ak aktivasyon solid nan timè, Nano-IL-12 te montre amelyore efikasite antitumoral sou IL gratis-12 nan melanom lar B16F10 ak modèl ortotopik 4T1 trip-negatif kansè nan tete (TNBC) (Figi 2e). Nan tou de modèl, jis yon sèl piki iv nan Nano-IL-12 nan ekivalan 10 ug IL{-12 te mennen nan yon anpèchman siyifikativman amelyore nan kwasans timè pase IL-12, ki mennen nan tan siviv pi long. . Miyò, nan modèl 4T1 TNBC a, ki trè popilè pou iminosipresyon fò li yo ak rezistans kont tretman ICI,[37] tretman ak Nano-IL-12 te lakòz yon efè terapetik klèman enpòtan, tandiske IL gratis{{83} } te initil kont kwasans timè.

2.3. Nano-IL-12 Spatio-temporal Kontwole Repons Enflamatwa a

Pou plis envestige diferans ki genyen ant efè byolojik Nano-IL-12 ak IL gratis-12, yo te evalye nivo repons enflamasyon ki evoke nan tretman an pa repons cytokine tou de nan sit ki pa sib, sa vle di. , san ak ògàn ki an sante, ak nan timè (modèl ortotopik 4T1). Kat cytokins en IL-12, sètadi, IFN-𝛾, faktè necrosis timè-𝛼 (TNF-𝛼), interleukin{{10}} (IL{-6), ak interleukin. -10 (IL-10) yo te chwazi kòm endikatè nan repons enflamasyon. Pami yo, IFN-𝛾, TNF- 𝛼, ak IL-6 se sitokin proenflamatwa enpòtan ki asosye ak efè antitumoral IL-12,[20,38] pandan IL{{20} }} se yon sitokin anti-enflamatwa, ki se yon fidbak negatif ki antagonize eksitasyon IL-12.[20,39] Nano-IL-12 ak IL-12 gratis yo te enjekte de fwa nan jou 0 ak 3, epi repons enflamasyon an te swiv chak jou pou 1 semèn. Anviwònman eksperimantal sa a te pèmèt nou detèmine efè tou de piki sèl ak dòz repete sou repons enflamatwa espas-temporal la. Premye piki IL-12 gratis nan Jou 0 te mennen nan sekresyon kat sitokin yo nan san ak ògàn yo, ak yon pik nan konsantrasyon plasma obsève nan Jou 2 (Figi 3a–e, g), ki endike gwo koupe an. -enflamasyon sib ki asosye ak evènman negatif ki gen rapò ak iminitè (irAEs) IL-12.[8,10] Nan lòt men an, premye piki nan Nano-IL- 12 te montre siyifikativman pi ba nivo cytokine pase gratis IL-12 nan san ak ògàn ki an sante, ki endike règleman an nan repons enflamasyon ki pa sib la. Dezyèm piki IL-12 gratis nan 3yèm jou a ankò te ankouraje sekresyon IFN-𝛾, TNF-𝛼, ak IL-6. Sepandan, nivo pik IFN-𝛾 ak TNF-𝛼 yo te obsève nan Jou 5 te klèman pi ba pase sa yo obsève nan Jou 2 apre premye piki IL-12. Anplis, dezyèm piki IL gratis-12 te ogmante nivo IL-10 anti-enflamatwa nan plasma, ògàn, ak timè, ki te asosye ak ipè ekspansyon sistemik selil Th1 pou pwovoke. yon faz regilasyon.[40] Repons diferansye sa yo pwovoke nan tretman IL-12 repetitif yo te konfime nan esè klinik imen, epi li kontribye nan rediksyon efè byolojik IL{-12, ki gen ladan pisans antitumoral la.[20] Kontrèman ak IL-12, dezyèm piki Nano-IL-12 pa t vin pi grav sekresyon IL{-10 nan san ak ògàn yo. Epitou, konsantrasyon sitokin enflamatwa yo nan san ak tisi ki an sante yo te siyifikativman pi ba pase IL gratis -12. Rezilta sa yo sijere ke Nano-IL-12 te kapab non sèlman diminye repons enflamatwa sistemik la, men tou simonte limit yo nan repete IL-12 administrasyon, ki te pwovoke repons anti-enflamatwa kontreaktiv la. Nan timè yo, yon sèl vaksen iv nan Nano-IL-12 te ogmante pwodiksyon enflamatwa IFN-𝛾, TNF-𝛼 ak IL-6, sa ki te reyalize siyifikativman pi wo konsantrasyon intratumoral pase IL gratis{{77} } tretman (Figi 3f,g). Pandan se tan, tretman nan Nano-IL-12 pwovoke pi ba IL anti-enflamatwa-10 nan timè yo pase IL gratis-12, evite aparisyon nan kont anti-enflamatwa repons. Anplis, sou dezyèm piki nan Nano-IL-12, nivo segondè nan sitokin enflamatwa yo te kenbe nan timè yo, pandan y ap konsantrasyon nan intratumoral IL-10 te kenbe ba. Regilasyon sa a nan IFN-𝛾, TNF-𝛼, ak IL-6 ak downregulation nan IL-10 nan timè korelasyon ak nivo segondè ak soutni nan Nano-IL-12, ak sipò. yon reyaksyon enflamatwa ki wo pou Nano-IL-12, ki enpòtan anpil pou amelyore efikasite antitumoral la.[41]

Pou teste si Nano-IL-12 te kapab amelyore efikasite nan kontwòl espas-temporal li nan enflamasyon, nou repete eksperyans nan Figi 2e, men fwa sa a nou trete sourit yo ak yon dòz ki pi ba 10-pliye, sa vle di, 1 ug nan IL-12 ekivalan, lè l sèvi avèk yon orè dòz repete ki deklanche repons iminitè a kontrekare pou IL- 12 gratis. Anba tretman renouvlab ki ba-dòz sa a, Nano-IL-12 byen klè amelyore efikasite anti-timè sou IL-12 nan timè 4T1 TNBC (Figi 3h), ki mennen nan kwasans timè pi dousman ak siviv pwolonje. Nan lòt men an, tretman gratis IL-12 te montre efikasite neglijab menm apre yo te enjekte entansif pou sis fwa, ki ta ka atribiye a ekspansyon nan sitokin anti-enflamatwa tankou IL-10. Rezilta sa yo sipòte kapasite Nano-IL- 12 pou ranfòse efikasite antitumoral la lè yo kontwole enflamasyon nan espas tanporèl. Kontwòl repons enflamatwa a tou te mennen nan sekirite amelyore. Nou te fè yon evalyasyon istolojik ak analiz san pou detèmine toksisite IL{{20}} ak Nano-IL{-12 apre de piki nan Jou 0 ak 3 (Figi S7a,c, Enfòmasyon Sipò) . Rezilta yo te montre siyifikativman pi ba toksisite nan fwa a, ren, ak pankreyas sou tretman Nano-IL-12 konpare ak IL-12 gratis. Epitou, chanjman pwa kò yo pandan tretman yo te swiv kòm yon paramèt toksisite. Nano-IL-12 bèt trete yo te yon ti kras pran pwa pandan tretman an, tandiske sourit yo ki te resevwa IL-12 gratis te soufri nan yon diminisyon pwa (Figi S7b, Enfòmasyon Sipò). Kidonk, obsèvasyon sa yo endike ke Nano-IL- 12 ka preferansyèlman ankouraje repons enflamasyon an nan timè pou amelyore efikasite antitumoral la pandan y ap mete restriksyon sou efè ki pa sib nan tisi ki an sante pou diminye toksisite ak diminye repons anti-enflamatwa a.

Desert ginseng-Improve immunity (21)

benefis cistanche pou gason-ranfòse sistèm iminitè

Klike la a pou w wè pwodwi Cistanche Enhance Immunity

【Mande plis】 Imèl:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.4. Nano-IL-12 Tretman pwovoke enfiltrasyon selil iminitè antitumoral nan TME a

IL-12 konnen tou kòm yon faktè stimulan selil T, paske li ka ankouraje kwasans ak fonksyon selil T yo pou kòmanse reyaksyon iminitè antitumoral yo amelyore. Kidonk, nou evalye enfiltrasyon selil CD8+ nan timè apre tretman repete Nano-IL-12. Analiz sikometri flux de melanom B16F10 trete pa de piki IV gratis IL-12 oswa Nano-IL-12 nan 1 ug IL-12 ekivalans/piki te montre ke Nano-IL{{13} } siyifikativman amelyore enfiltrasyon CD8+ selil T nan timè a konpare ak IL gratis-12 (Figi 4a). Lè nou fè yon eksperyans deplesyon selil iminitè nan yon sourit ki gen timè 4T1 TNBC, nou te envestige kontribisyon diferan popilasyon selil iminitè yo nan repons tretman Nano-IL-12. Nano-IL-12 yo te enjekte iv senk fwa nan jou 7, 9, 11, 13, ak 15 (1 ug IL-12 ekivalans/piki). Anplis, sourit yo te enjekte intraperitoneally (ip) ak anti-CD4, anti-CD8, oswa anti-asiago GM1 nan jou 6, 8, ak 10 pou diminye CD4+, CD8+, oswa Selil NK respektivman. Rezilta yo te montre rediksyon CD8+ selil T sitotoksik, CD4+ selil T, ak selil NK siyifikativman diminye efikasite terapetik Nano-IL-12, jan sa endike nan kwasans timè ki pi rapid. ak siviv nan diminye nan gwoup yo apovri konpare ak sourit yo resevwa sèlman tretman nan Nano-IL-12 (Figi 4b). Rezilta sa a konsistan avèk fonksyon byolojik IL-12, ki gen ladan amelyore aktivite cytotoxik nan selil T CD8 [42] ak selil NK, [43] ak medyasyon diferansyasyon selil T nayif nan selil T asistan (Th) .[44]

Anplis, diferan efikasite alèjman aktivite antitumoral ki soti nan eksperyans rediksyon an sijere enpòtans chak popilasyon selil sou efikasite Nano-IL-12, ak CD8+ selil T sitotoksik yo se fraksyon ki pi enpòtan. . Analiz imunohistochimik nan seksyon timè 4T1 TNBC revele distribisyon espasyal selil efè timè ki enfiltre (Figi 4c). Pandan ke IL-12 gratis pa t amelyore prezans CD8+ selil T sitotoksik ak selil Tbet+ (Th1) nan timè yo, Nano-IL-12 te ankouraje gwo enfiltrasyon tou de selil yo nan fon. rejyon timè yo. Epitou, regilasyon nan Granzyme B nan selil CD8+ sijere yon nivo aktivasyon ki pi wo nan selil T sitotoksik apre tretman NanoIL-12 (Figi 4d). Anplis, nou te obsève ke tretman Nano-IL-12 ogmante ekspresyon PD-L1 nan timè konpare ak timè trete ak PBS ak IL gratis{{20}}. Ogmantasyon nivo PD-L1 sa a ta ka akòz timè ki pi wo a IFN-𝛾 pwovoke pa Nano-IL-12, ki te rapòte nan estimile ekspresyon PD-L1 nan tisi timè, [45] sèvi kòm yon mekanis nan imino-depresyon. reziste enfiltrasyon lenfosit. Regilasyon entratumoral PD-L1 sa a sijere potansyèl pou synergize efikasite antitumoral Nano-IL-12 lè li konbine li ak anti-PD-1 oswa anti-PD-L1 ICI. Dapre obsèvasyon ki anwo a, nou te envestige efè Nano-IL-12 kòm yon monoterapi ak nan konbinezon ak antiPD-1 antikò sou TME a (Figi 4e). Eksperyans lan te fè nan timè TNBC ortotopik ki te prepare nan selil 4T1 ki eksprime hemaglutinin (4T1-HA) paske hemaglutinin se yon iminojèn byen defini, ki ka pwovoke antijèn espesifik sitotoksik T-lenfosit nan yon modèl sourit.[46 ,47] Sourit yo te trete de fwa ak 10 ug IL-12 oswa ekivalan Nano-IL{-12 nan jou 0 ak 3, epi pou terapi konbinezon, sourit yo te resevwa an menm tan de fwa piki 100 ug anti-PD. -1 antikò. Nan jou 7, echantiyon timè yo te rekòlte pou sikometri koule.

Rezilta yo konfime ke tretman Nano-IL-12 pwovoke pi wo enfiltrasyon nan lekosit (CD45+) nan timè a pase IL-12. Konbinezon Nano-IL-12 ak anti-PD-1 yo te prezante tou selil CD45+ ki pi wo nan timè yo. Pami lekosit, selil lenfoyid ak selil T yo te kontwole pa Nano-IL-12 ak nan konbinezon Nano-IL- 12/anti-PD{-1antikò. Nano-IL-12 tretman an te lakòz yon chanjman modès nan popilasyon selil NK la men te mennen nan chanjman enpòtan nan sougwoup selil T konpare ak IL gratis-12. Miyò, enfiltrasyon selil CD8+ T nan timè 4T1-HA te byen klè nan Nano-IL-12 pase IL gratis-12. Anplis de sa, selil T HA-tetramer+, ki koresponn ak selil T antijèn espesifik yo, te ogmante anpil nan Nano-IL-12 plis anti-PD- 1 konbinezon antikò, ki sijere pwomosyon yon iminitè adaptatif. repons pa sinèrji nan Nano-IL-12 ak ICIs. Selil T CD4+ jeneral yo te montre regilasyon nan gwoup trete NanoIL-12 yo. Pou plis presize sou-popilasyon CD4+ selil T nan timè yo, nou tache selil yo ak anti-Foxp3 pou mennen ankèt sou selil T regilasyon yo (Tregs). Pandan ke monoterapi anti-PD-1 pa t montre okenn repwesyon sou Tregs nan modèl timè 4T1- HA, konbinezon Nano-IL-12 plis anti-PD-1 dramatikman. apovri Tregs yo. Anplis, timè ki te trete nan Nano-IL-12 te prezante pi wo selil Th pase IL-12 gratis. Rezilta sa yo endike ke tretman Nano-IL-12 amelyore selil iminitè anti-timè yo nan filtraj ak synergized ak anti-PD-1 antikò yo simonte TME imunosuppressive la.

Figure 3. Nano-IL-12 spatiotemporally controlled the inflammatory response. a) Proinflammatory (IFN-𝛾, TNF-𝛼, IL-6) and anti-inflammatory (IL-10) cytokine levels in blood in 4T1-bearing mice injected with 10 μg IL-12 or equivalent Nano-IL-12 twice on Days 0 and 3. The cytokine levels were measured by ELISA. The peak values after the two injections (on Days 2 and 5 for IFN-𝛾, TNF-𝛼, and IL-10; on Days 2 and 6 for IL-6) are visualized as bar graphs on the right panel. b–f) Cytokine levels in the organs and tumors of 4T1-bearing mice injected with 10 μg IL-12 or equivalent Nano-IL-12 twice on Days 0 and 3. The mice were sacrificed on Days 2 and 5 to collect the tissues. (Data are shown as mean ± S.D.; n = 6 mice per group; p values are calculated via unpaired t-test.) g) Heatmaps of the cytokine levels in blood, organs, and tumors from the average values in a-f converted to Z-score. h) Anti-tumor activity of repeated i.v. injection (injected on Days 7, 9, 11, 13, 15, and 25, indicated by arrows) of 1 μg IL-12 or equivalent Nano-IL-12 against murine TNBC. The individual tumor growth curves are shown in the left panel. The average tumor volume curves are shown in the central panel, and the survival curves are shown in the right panel (Data are shown as mean ± SEM; n = 6 mice per group, p values are calculated via log-rank analysis).

Figi 3. Nano-IL-12 espas-temporal kontwole repons enflamatwa a. a) Nivo sitokin pro-enflamatwa (IFN-𝛾, TNF-𝛼, IL-6) ak anti-enflamatwa (IL-10) nan san nan sourit ki gen 4T1-yo te enjekte ak 1{{14 }} ug IL-12 oswa ekivalan Nano-IL-12 de fwa nan jou 0 ak 3. Nivo sitokin yo te mezire pa ELISA. Valè pik yo apre de piki yo (nan jou 2 ak 5 pou IFN-𝛾, TNF-𝛼, ak IL-10; nan jou 2 ak 6 pou IL-6) yo parèt sou fòm ba graf sou la. panèl dwat. b–f) Nivo sitokin nan ògàn yo ak timè sourit ki gen 4T1-yo te enjekte ak 10 ug IL-12 oswa ekivalan Nano-IL-12 de fwa nan Jou 0 ak 3. Sourit yo te sakrifye nan Jou 2 ak 5 pou kolekte tisi yo. (Done yo montre kòm mwayen ± SD; n=6 sourit pou chak gwoup; valè p yo kalkile atravè tès t ki pa pè.) g) Heatmaps nivo cytokine nan san, ògàn, ak timè apati valè mwayèn nan af. konvèti nan nòt Z. h) Aktivite anti-timè nan piki iv repete (enjekte nan jou 7, 9, 11, 13, 15, ak 25, ki endike pa flèch) nan 1 ug IL-12 oswa ekivalan Nano-IL-12 kont TNBC murin. Koub kwasans timè endividyèl yo montre nan panèl gòch la. Koub volim timè mwayèn yo montre nan panèl santral la, ak koub siviv yo montre nan panèl dwat la (Done yo montre kòm mwayen ± SEM; n=6 sourit pou chak gwoup, valè p yo kalkile atravè analiz log-rank. ).

Figure 4. The anti-tumor effect of Nano-IL-12 is generated from the enhanced infiltration of effector cells in the TME. a) Flow cytometry analysis of CTLs infiltration in melanoma after Nano-IL-12 treatment. Mice were inoculated with B16F10 cells on Day 0. IL-12 (1 μg) or equivalent Nano-IL-12 were i.v. injected twice on Days 8 and 11. Tumor samples were collected and analyzed on Day 15 (Data shown as mean ± S.D.; n = 5 mice per group; p-values were calculated via one-way ANOVA). b) Antitumor activity of Nano-IL-12 upon depletion of CD4+, CD8+ and NK cells. Mice bearing 4T1 tumors were i.v. injected with Nano-IL-12 (1 μg IL-12 equivalent) on Days 7, 9, 11, 13, and 15. Moreover, the mice were injected with anti-CD4, anti-CD8, and anti-asiago GM1 antibodies on Days 6, 8, and 10. Tumor growth curves (Data are shown as mean ± SEM) and survival curves were recorded (n = 6 mice per group, p values are calculated via log-rank analysis). c) IHC images of 4T1 tumor sections. Mice bearing 4T1 TNBC tumors (average tumor volume: 200 mm3) were twice i.v. injected with PBS, 10 μg IL-12, or equivalent Nano-IL-12 on Days 0 and 3. On Day 7, the mice were sacrificed to collect the tumors. The CD8+, Tbet, or PD-L1+ cells in the tumors are visualized in yellow. The cell nuclei were stained with Hoechst (blue). Scale bar = 1 mm. d) Immunostaining of Granzyme B (green) and CD8 (red) in 4T1 tumor sections. The cell nuclei were stained with Hoechst (blue). Yellow pixels indicate activated CD8+ T cells. Scale bar = 100 μm. e) Analysis of lymphoid cells infiltration in 4T1-HA tumors treated with PBS, anti-PD1 antibodies, IL-12, Nano-IL-12, IL-12 plus anti-PD1 antibodies and Nano-IL-12 plus anti-PD1 antibodies. IL-12 and Nano-IL-12 were i.v. injected at 10 μg on Days 7 and 9 postinoculation. Anti-PD-1 was i.p. injected at 100 μg on Days 8 and 10 postinoculation. On Day 17, mice were sacrificed, and the tumors were homogenized for flow cytometry measurement (Data are shown as mean ± S.D., n = 5 samples per group, p values are calculated via one-way ANOVA).


Figi 4. Efè anti-timè Nano-IL-12 pwodui nan enfiltrasyon amelyore nan selil efèktè nan TME la. a) Analiz sikometri koule nan enfiltrasyon CTLs nan melanom apre tretman Nano-IL-12. Sourit yo te vaksinen ak selil B16F10 jou 0. IL-12 (1 ug) oswa ekivalan Nano-IL-12 yo te enjekte iv de fwa nan Jou 8 ak 11. Yo te kolekte echantiyon timè yo epi analize nan Jou 15 (Done yo montre kòm mwayen ± SD; n {{ 16}} sourit pou chak gwoup; p-valè yo te kalkile atravè ANOVA yon sèl-fason). b) Aktivite anti-timè nan Nano-IL-12 lè rediksyon nan CD4+, CD{8+ ak selil NK. Sourit ki gen timè 4T1 yo te enjekte iv ak Nano-IL-12 (1 ug IL-12 ekivalan) nan jou 7, 9, 11, 13, ak 15. Anplis, sourit yo te enjekte ak anti-CD4. , anti-CD8, ak anti-asiago GM1 nan Jou 6, 8, ak 10. Koub kwasans timè yo (Done yo montre kòm mwayen ± SEM) ak koub siviv yo te anrejistre (n=6 sourit pou chak gwoup, valè p yo kalkile atravè analiz log-rank). c) imaj IHC nan seksyon timè 4T1. Sourit ki te pote timè 4T1 TNBC (volim timè mwayèn: 200 mm3) yo te enjekte de fwa iv ak PBS, 10 ug IL-12, oswa ekivalan Nano-IL-12 nan jou 0 ak 3. Nan jou 7, la. sourit yo te sakrifye pou kolekte timè yo. Selil CD8+, Tbet, oswa PD-L{1+ ki nan timè yo parèt an jòn. Nwayo selil yo te tache ak Hoechst (ble). Ba echèl=1 mm. d) Immunostaining Granzyme B (vèt) ak CD8 (wouj) nan seksyon timè 4T1. Nwayo selil yo te tache ak Hoechst (ble). Piksèl jòn endike selil T CD8+ aktive yo. Ba echèl=100 μm. e) Analiz enfiltrasyon selil lenfoyid nan timè 4T1-HA trete ak PBS, anti-PD1 antikò, IL-12, Nano-IL-12, IL{-12 plis anti- Antikò PD1 ak Nano-IL-12 plis antikò anti-PD1. IL-12 ak Nano-IL-12 yo te enjekte iv nan 10 ug nan jou 7 ak 9 apre inokulasyon. Anti-PD-1 te enjekte ip nan 100 ug nan jou 8 ak 10 postinoculation. Nan jou 17, sourit yo te sakrifye, epi timè yo te omojeneize pou mezi sikometri koule (Done yo montre kòm mwayen ± SD, n=5 echantiyon pou chak gwoup, valè p yo kalkile atravè ANOVA yon sèl-fason).

2.5. Nano-IL-12 Tretman Aktive TME a soti nan Nivo Transkripsyon Pou Potansye Repons ICI

Lè sa a, nou te envestige deklanchman TME nan timè 4T1-HA apre tretman ki soti nan nivo ekspresyon jèn pa analiz transcriptom. Sekans echantiyon RNA total ki te retire nan tisi timè yo te fèt apre tretman ak PBS, anti-PD-1 antikò, IL-12, Nano-IL-12, ak konbinezon sitokin yo ak ICI yo. Map chalè ekspresyon jèn mondyal la te endike klèman pwofil jèn diferansye nan timè k ap resevwa Nano-IL-12 ak konbinezon Nano-IL-12 ak anti-PD- 1 (Figi S11, Enfòmasyon Sipò ). Pou presize pwosesis byolojik ki afekte nan tretman Nano-IL-12, nou analize jèn yo eksprime diferan nan chak gwoup epi nou te fè yon analiz anrichisman sou jèn yo regilasyon ak downregulated (Figi 5a, b). Tou de analiz GOBP ak KEGG te revele ke, konpare ak IL-12 ak PBS, tretman Nano-IL{-12 byen klè ogmante eksitasyon nan pwopagasyon, diferansyasyon, ak aktivasyon fonksyonèl nan divès selil iminitè efèktè, tankou selil T. pwopagasyon, diferansyasyon selil T nan selil Th, ak deklanchman selil T ak chemen siyal reseptè selil T. Anplis de sa, jèn ki gen rapò ak ekspresyon PD-L1 ak chemen PD-1 pòs kontwòl yo te jwenn tou yo te regilasyon sou tretman Nano-IL-12. Rezilta sa yo sipòte stimulation solid nan NanoIL-12 nan selil T yo obsève nan sitometri koule ak etid imunohistoloji. An menm tan an, jèn ki asosye ak lòt selil iminitè, tankou monosit ak selil NK, te afekte pozitivman nan tretman Nano-IL-12. Epitou, repons cytokine ak lòt pwosesis iminitè, tankou prezantasyon antijèn, yo te ogmante nan tretman Nano-IL-12. Nan lòt men an, Nano-IL-12 desann chemen ki asosye ak divizyon selilè, sijere ke tretman an ta ka siprime pwopagasyon selil timè yo (Figi S11, Enfòmasyon Sipò). Rezilta sa yo endike avantaj ki genyen nan Nano-IL-12 nan aktive tou de bra natirèl ak adaptasyon iminite entratumoral yo.

Plis envestigasyon sou terapi konbinezon yo te revele ke tretman an konbinezon nan Nano-IL-12 plis anti-PD-1 antikò amelyore iminite entratumoral la konpare ak IL-12 plis anti-PD{{6} } antikò oswa anti-PD-1 monoterapi nan estimile tou de chemen iminitè natirèl ak adaptasyon (Figi 5b ak Figi S11c, Enfòmasyon Sipò). Enpresyonan, konbinezon nan NanoIL-12 plis anti-PD{-1 antikò te lakòz anpèchman pi fò sou chemen ki asosye ak mitoz, yo dedui konbinezon sa a kapab entèmedyè yon aktivite touye pi fò nan selil efèktè enfiltre yo kont selil timè yo. Dapre rezilta RNA-seq yo, nou analize tou popilasyon selil iminitè ki enfiltre timè yo (Figi 5c, d). Menm jan ak rezilta sitometri koule, gwoup trete nan Nano-IL-12 te montre enfiltrasyon amelyore nan selil T CD8+. Anplis de sa, rezilta yo te revele tou regilasyon nan monosit ak granulosit, ki konfime enflamasyon an ranfòse nan timè ki soti nan chemen iminitè natirèl yo ranfòse. Rezilta sa yo konfime Nano-IL-12 etabli yon repons iminitè ki pisan kont timè ak konbinezon an ak anti-PD-1 ka ranfòse pwosesis sa a.

Figure 5. Nano-IL-12 treatment enhances immune activation in TME to potentiate anti-PD1 antibodies. a) Volcano plots of the differentially expressed genes in comparison between Nano-IL-12 versus IL-12 and Nano-IL-12 + anti-PD-1 versus IL-12 + anti-PD-1. The plots were obtained from RNA-seq analysis of 4T1-HA tumors treated by different treatments: 10 μg IL-12 and equivalent Nano-IL-12 were i.v. injected on Days 7 and 9 postinoculation. Anti-PD-1 was i.p. injected at 100 μg on Days 8 and 10 postinoculation. On Day 17, mice were sacrificed to collect the tumor samples. b) Enrichment analysis showing the upregulated pathways in the two comparison pairs in a. c) Heatmap of cell populations in the TME determined by RNA-seq. The populations were converted to Z-scores for plotting the figure. d) Histograms of the cell populations showing significant differences in multiple comparisons (Data are shown as mean ± S.D.; for PBS group, n = 5 samples; for other groups, n = 4 samples per group; p values are calculated via one-way ANOVA).


Figi 5. Tretman Nano-IL-12 amelyore deklanchman iminitè nan TME pou ranfòse antikò anti-PD1. a) Trase vòlkan nan jèn yo eksprime diferan an konparezon ant Nano-IL-12 kont IL-12 ak Nano-IL-12 + anti-PD-1 kont IL{{12} } anti-PD-1. Trase yo te jwenn nan analiz RNA-seq nan timè 4T1-HA trete pa diferan tretman: 10 ug IL-12 ak ekivalan Nano-IL-12 yo te enjekte iv nan jou 7 ak 9 apre inokulasyon. . Anti-PD-1 te enjekte ip nan 100 ug nan jou 8 ak 10 postinoculation. Nan jou 17, sourit yo te sakrifye pou kolekte echantiyon timè yo. b) Analiz anrichisman ki montre chemen regilasyon yo nan de pè konparezon nan a. c) Heatmap nan popilasyon selil yo nan TME a detèmine pa RNA-seq. Popilasyon yo te konvèti nan nòt Z pou trase figi a. d) Istogram popilasyon selil yo ki montre diferans enpòtan nan konparezon miltip (Done yo montre kòm mwayen ± SD; pou gwoup PBS, n=5 echantiyon; pou lòt gwoup, n=4 echantiyon pou chak gwoup; valè p yo kalkile atravè ANOVA yon sèl-fason).

2.6. Nano-IL-12 fè sinèrji ak ICI yo pou elimine timè prensipal ak metastatik yo.

Pou mennen ankèt sou potansyèl terapetik Nano-IL-12 pou fè sinèrji ak ICI yo, yo te etabli timè TNBC prensipal ortotopik nan sourit lè yo inokulasyon selil 4T1 nan pad grès mamè yo. Sourit yo te trete ak Nano-IL-12 sou diferan orè dòz ak modèl konbinezon ak ICIs pou teste efikasite antitumoral tretman ki koresponn yo. Nou te jwenn ke menm anba yon dòz ki ba (1 ug IL-12 ekivalans/piki), tretman an repete ak Nano-IL-12 egzèse yon aktivite klè anti-timè kont timè TNBC prensipal kòm yon monoterapi, tankou montre nan repwesyon to kwasans timè a ak siviv pwolonje a (Figi S12, Enfòmasyon Sipò). Sepandan, tretman IL-12 gratis anba dòz sa a pa t montre okenn efikasite, menm lè yo te konbine avèk terapi anti-PD-1. Konbinezon Nano-IL- 12 ak anti-PD-1 ogmante efikasite a, epi CR te reyalize. Lè sa a, nou etidye yon dòz ki pi wo nan Nano-IL-12 (10 ug IL-12 ekivalans/piki) epi konbine li ak cocktèl ICI (antiPD-1 ak anti-CTLA4 antikò) pou akonpli terapetik la. potansyèl. Miyò, nan dòz sa a, terapi konbinezon Nano-IL-12 ak ICI yo te sispann kwasans timè a epi elimine timè yo nèt (Figi 6a), ak tout sourit ki montre CR nan gwoup tretman sa a. Anplis, sourit geri yo te montre rezistans kont rechallenge timè ak selil 4T1, sipòte egzistans yon memwa iminitè solid nan tretman an ak terapi konbinezon Nano-IL-12 ak ICIs.

Desert ginseng-Improve immunity (15)

cistanche plant-ogmante sistèm iminitè

Yo rekonèt TNBC kòm yon timè agresif ki gen yon gwo pousantaj metastaz byen lwen.[48,49] Kidonk, nou te mennen ankèt sou pèfòmans Nano-IL-12 nan yon modèl TNBC metastaz. Yon modèl espontane metastaz TNBC te etabli pa reseksyon nan timè prensipal ortotopik 4T1, ki pral mennen nan devlopman nan metastaz nan ògàn miltip, sitou nan poumon yo.[50] Nan modèl sa a, terapi konbinezon nan Nano-IL-12 ak ICI yo te revele tou rezilta satisfezan, ki te sispann pwogresyon metastaz nan poumon (Figi 6b) epi ki te mennen nan CR nan tout sourit yo trete. Anplis, sou rechallenge ak yon piki iv nan selil 4T1, sourit ki pi geri te montre rezistans solid, ki endike yon memwa iminitè efikas nan konbinezon nan Nano-IL-12 ak ICIs. Anplis TNBC, nou teste tou Nano-IL-12 an konbinezon ak ICI nan yon modèl melanom prensipal B16F10 (Figi S13, Enfòmasyon Sipò). Rezilta yo te montre ke konbinezon Nano-IL-12 (10 ug IL-12 ekivalans/piki) ak anti-PD-1 antikò te mennen nan CR nan 4 sourit sou 6 nan gwoup la. , ak sourit geri yo te montre rezistans kont rechallenge ak selil B16F10, sijere yon memwa iminolojik fò.

3. Diskisyon

Nou devlope yon estrateji IL-12 ki ka aktive timè lè l sèvi avèk nanositokin sansib (Nano-IL-12) ki ka koupe byoaktivite IL-12 nan pH 7.4, men rekipere sitokin totalman aktif la nan pH intratumoral. Sou piki sistemik, Nano-IL-12 ki estab sikile nan san an, diminye repons iminitè a nan sit ki pa patolojik ak ensidans irAEs, menm apre administrasyon repete. Nan lòt men an, gwo akimilasyon ak aktivasyon Nano-IL-12 nan timè mennen nan yon amelyorasyon siyifikatif nan efikasite ak sinèrji ak ICIs, reyalize CR nan modèl timè frèt ki rezistan a ICIs, ak akòde yon solid. memwa iminitè apre tretman an.

Nano-IL-12 pwofondman aktive TME a lè li fè sekresyon fò nan sitokin enflamatwa, amelyore enfiltrasyon nan selil efèktè yo, ak diminye prezans nan selil imunosuppressive. Anplis, Nano-IL-12 ogmante nivo PD-L1 nan selil timè yo, ki ka ankouraje aktivite anti-PD-1 yo. Chanjman nan TME ki te koze pa Nano-IL-12 te kolabore ak antikò antiPD-1 pou estimile iminite kansè nan amelyore prezantasyon antijèn, ogmante prezans selil efèktè yo ak ranfòse aktivite yo, ak pwomosyon entèraksyon selil iminitè yo. Etid klinik yo te montre ke anti-PD1/anti-PD-L1 blokaj pòs gen yon pi gwo pousantaj repons nan PD-L1-pasyan TNBC pozitif ak yon gwo kantite lenfosit timè-enfiltre.[51,52] Sepandan, pèfòmans an jeneral nan blokaj iminitè pòs kontwòl kòm yon monoterapi kont TNBC pa t 'satisfezan [53,54] akòz ekspresyon an jeneralman ba ak TME a siyifikativman eterojèn nan TNBC [55,56] An reyalite, se sèlman PD-L1 blokaj nan konbinezon ak chimyoterapi. (Nab-Paclitaxel) te apwouve nan pasyan TNBC metastatik, ki jis bay yon benefis modès siviv jeneral nan yon ti fraksyon nan pasyan TNBC.[57] Kidonk, potansyèl Nano-IL-12 pou pase sou tèt TME imunosuppressive a ak ranfòse ekspresyon PD-L1 TNBC ka bay yon altènatif solid pou amelyore pousantaj repons nan blokaj pòs yo. Sekirite amelyore nan Nano-IL-12 se tou yon avantaj enpòtan pou aplikasyon terapetik. Syans klinik anvan yo te montre ke IL-12 enjekte sistemikman pwovoke gwo toksisite ematolojik ak epatik.[58,59] Efè segondè sa yo sitou asosye ak pwodiksyon IFN-𝛾 ak TNF-𝛼 pwovoke pa IL{{40} } tretman.[42,60] Nan etid nou an, Nano-IL-12 te montre siyifikativman pi ba nivo sitokin pase IL gratis-12 nan san ak ògàn yo, ki limite domaj ògàn yo. Kidonk, nou te kapab enjekte Nano-IL- 12 plizyè fwa nan 10 ug IL-12 pou chak sourit, sa vle di anviwon 500 ug kg-1, ki se apeprè {{52} }pliye pi wo pase dòz maksimòm tolere (MTD) IL-12 nan imen, sa vle di, 500 ng kg-1. [61] Yon lòt efè segondè enpòtan nan terapi IL-12 sistemik yo obsève nan syans klinik se aparisyon nan yon repons adaptasyon anti-enflamatwa apre yon dezyèm administrasyon IL-12, ki mennen nan rediksyon nan efikasite. [20,21] Fenomèn sa yo te asosye ak mekanis fidbak negatif ki gen rapò ak twòp pwodiksyon IL-10 anti-enflamatwa, ak bès sitokin pro-enflamatwa tankou IFN-𝛾, TNF-𝛼, ak IL{{ 67}}.[20,22] Nano-IL-12 te evite ogmantasyon IL-10 nan san ak ògàn apre dezyèm administrasyon an, sa ki ta ka pratik pou akonpli orè repete administrasyon yo san yo pa diminye. efè antitumoral. Miyò, tretman an ak Nano-IL-12 pa t ogmante konsantrasyon IL{-10 nan timè yo, kenbe nivo segondè nan IFN-𝛾, TNF-𝛼, ak IL-6.

Figure 6. Nano-IL-12 synergizes with immune checkpoint inhibitors to eradicate breast tumors. In both orthotropic and metastatic TNBC models, mice were grouped to receive PBS, IL-12 + ICIs (anti-CTLA4 and anti-PD-1), and Nano-IL-12 + ICIs therapies (dose and treatment schedule were shown in the scheme at the upper panels respectively). a) Combination therapy of Nano-IL-12 and ICIs led to the complete eradication of orthotopic tumors in all mice treated. The individual tumor growth curves are shown in the left panel. The average tumor volume and survival curves are shown in the upper-right panel. The cured mice showed robust defense against rechallenge injection with 4T1 cells to the mammary, with no tumor growth on the treated mice (lower-right panel). b) Combination therapy of Nano-IL-12 and ICIs showed strong inhibition against metastatic tumor progression. After treatment (Day 23), the lungs of mice treated with Nano-IL-12 + ICIs combination therapy showed clearly fewer metastasis, shown by the representative photos (green arrows: macroscopic metastasis) and histological evaluation (Scale bar = 100 μm) presented in the left panel. Nano-IL-12 + ICIs combination therapy finally led to a complete response in all mice treated, as indicated by the survival curves (upper-right panel). Also, the cure mice showed robust defense against tumor rechallenge by injection of 4T1 cells (lower-right panel). (Data are shown as mean ± SEM.; n = 6 mice per group; p values are calculated via log-rank analysis).


Figi 6. Nano-IL-12 fè sinèrji ak inibitè pòs iminitè yo pou elimine timè tete yo. Nan tou de modèl TNBC orthotropic ak metastatik, sourit yo te gwoupe pou resevwa PBS, IL-12 + ICIs (anti-CTLA4 ak anti-PD-1), ak Nano-IL-12 + terapi ICIs (dòz ak orè tretman yo te montre nan konplo a nan panno anwo yo respektivman). a) Terapi konbinezon nan Nano-IL-12 ak ICIs te mennen nan eradikasyon konplè timè ortotopik nan tout sourit yo trete. Koub kwasans timè endividyèl yo montre nan panèl gòch la. Volim timè an mwayèn ak koub siviv yo montre nan panèl anwo-dwat la. Sourit geri yo te montre defans solid kont piki rechallenge ak selil 4T1 nan mamè a, ki pa gen okenn kwasans timè sou sourit yo trete (panèl ki pi ba-dwat). b) Terapi konbinezon nan Nano-IL -12 ak ICI yo te montre gwo anpèchman kont pwogresyon timè metastatik. Apre tretman (Jou 23), poumon sourit ki te trete ak terapi konbinezon Nano-IL-12 + ICIs te montre klèman mwens metastaz, foto reprezantan yo montre (flèch vèt: metastaz makwoskopik) ak evalyasyon istolojik (ba echèl {{21}). }} μm) prezante nan panèl gòch la. Nano-IL-12 + terapi konbinezon ICI finalman te mennen nan yon repons konplè nan tout sourit trete, jan sa endike nan koub yo siviv (panèl anwo-dwa). Epitou, sourit geri yo te montre defans solid kont rechallenge timè pa piki selil 4T1 (panèl ki pi ba-dwat). (Done yo montre kòm mwayen ± SEM.; n=6 sourit pou chak gwoup; valè p yo kalkile atravè analiz log-rank).

Paske IL-12 yo konsidere kòm youn nan cytokins imunostimulatory ki pi pwisan, plizyè apwòch yo ap egzamine anpil pou diminye toksisite IL-12-pwovoke epi ranfòse efikasite li yo. Estrateji ki sèvi ak piki entratimoral dirèk, tankou fòmilasyon ki baze sou IL-12 ak adjuvant,[62] ak ADN plasmid[63] oswa RNA mesaje [64] ki kode IL-12 pou pwodui sitokin nan sit, kapab. maksimize endèks terapetik la.[8] Sepandan, administrasyon lokal la ka fè fas ak plizyè limit nan klinik la, ki gen ladan tretman timè k ap grandi nan pozisyon ki pa enjekte,[65] efikasite ki depann de operatè,[66] distribisyon inegal nan dwòg yo sou fòm piki nan timè a,[67] ak flit-pwovoke off-cible livrezon.[68] Anplis de sa, aktivite antikansè fòmilasyon yo enjekte intratumoralman kont metastaz byen lwen lajman depann sou efikasite varyab nan yon efè abscopal, [69] ki te montre to ensidans ki ba nan syans klinik [70-72] epi li ka pa kapab simonte siyal imunosuppressive. nan metastaz.[73] Posibilite pou administre Nano-IL-12 san danje pa piki nan venn sistemik, ki se yon pwosedi klinik estanda, ka pèmèt famakokinetik previzib epi li gen potansyèl pou jwenn aksè nan tout sit timè yo atravè rezèv san an. Pwoteyin Fc-fusion ki baze sou IL-12-[14] ak imunositokin [11–13] pataje avantaj sa yo tou ak NanoIL-12. Sepandan, eleman IL-12 nan konpoze sa yo aktif nan sistèm nan, sa ki lakòz pwoblèm sekirite. Pou egzanp, pwoteyin fizyon IL-12 ki dire lontan yo te montre nivo segondè nan serik IFN-𝛾[74,75] ak IL-12 sitokin iminitè yo te montre akimilasyon nan sit ki pa sib yo.[76, 77] Kapasite Nano-IL-12 pou kontwole deklanchman espas-temporal la ta ka bay yon estrateji ki san danje epi ki pisan ak espesifik nan vize timè yo.

effects of cistance-antitumor (2)

Benefis cistanche tubulosa-Antitumor

Yon limit nan etid nou an kounye a se ke Nano-IL-12 baze sou IL-12 sourit. Lè nou konsidere ke omoloji ant IL-12 sourit ak IL-12 imen se anviwon 60-70%, plis etid ta nesesè pou detèmine fòmilasyon yon nanositokin ki baze sou IL-12-moun ak aktivite ak pwofil sekirite ki konparab ak sistèm ki baze sou sourit la. Bonjan, tès preliminè yo te montre ke polymère yo itilize nan etid nou an kapab tou kouvwi IL-12 moun, ak sansiblite pH menm jan an. Anplis, kòm polymère yo ka byen presize, li ta posib yo devlope yon sistèm IL-12-ki baze sou moun ak pwofil espas-temporal apwopriye pou itilizasyon imen. An konklizyon, Nano-IL-12 kòm nano cytokines reyalize efikas kontwòl espas-temporal nan aktivite IL{-12 sou administrasyon sistemik, asire eksitasyon egzak nan iminite entratumoral pou jwenn sekirite satisfezan ak rezilta terapetik nan timè frèt primè ak metastatik. modèl, synergizing ak blokaj pòs. Kòm polymères yo itilize pou rasanble Nano-IL-12 ta ka enjenyè pou encapsulation yon pakèt pwoteyin ak diferan pwa molekilè ak chaj sifas, sistèm nan gen potansyèl pou kandida aplikasyon pi laj, tankou encapsulation lòt sitokin terapetik oswa menm. cocktèl sitokin. Anplis, bay sistèm polymère a ta ka plis Enjenieri pou santi lòt stimuli san konte pH, [78] nano cytokines yo ka fèt pou vize divès kalite mikro-anviwònman timè. Finalman, konsidere potansyèl la tradiksyon nan polymère yo anplwaye ak nano cytokines, estrateji sa a kenbe pwomès pou lavni nan imunoterapi kansè.

referans

[1] AJ Korman, SC Garrett-Thomson, N. Lonberg, Nat. Rev. Drug Discovery 2021, 21, 509.

[2] A. Ribas, JD Wolchok, Syans 2018, 359, 1350.

[3] A. Haslam, V. Prasad, JAMA Network Open 2019, 2, e192535.

[4] P. Sharma, BA Siddiqui, S. Anandhan, SS Yadav, SK Subudhi, J. Gao, S. Goswami, JP Allison, Cancer Discovery 2021, 11, 838.

[5] JD Martin, H. Cabral, T. Stylianopoulos, RK Jain, Nat. Rev Clin. Oncol. 2020, 17, 251.

[6] CM Fares, EM Van Allen, CG Drake, JP Allison, S. HuLieskovan, Am. Soc. Clin. Oncol. Educ. Liv. 2019, 39, 147.

[7] K. Chamoto, R. Hatae, T. Honjo, Int. J. Clin. Oncol. 2020, 25, 790.

[8] KG Nguyen, MR Vrabel, SM Mantooth, JJ Hopkins, ES Wagner, TA Gabaldon, DA Zaharoff, Front. Imunol. 2020, 11, 2510.

[9] EA Chiocca, AB Gelb, CC Chen, G. Rao, DA Reardon, PY Wen, WL Bi, P. Peruzzi, C. Amidei, D. Triggs, L. Seften, G. Park, J. Grant, K. Truman, JY Buck, N. Hadar, N. Demars, J. Miao, T. Estupinan, J. Loewy, K. Chadha, J. Tringali, L. Cooper, R. V Lukas, Neuro-Oncology 2021, 24, 951.

[10] B. Mirlekar, Y. Pylayeva-Gupta, Cancers 2021, 13, 167.

[11] A. Mansurov, J. Ishihara, P. Hosseinchi, L. Potin, TM Marchell, A. Ishihara, J.-MM Williford, AT Alpar, MM Raczy, LT Gray, MA Swartz, JA Hubbell, Nat. Biomed. Eng. 2020, 4, 531.

[12] N. Pasche, D. Neri, Drug Discovery Today 2012, 17, 583.

[13] J. Strauss, CR Heery, JW Kim, C. Jochems, RN Donahue, AS Montgomery, S. McMahon, E. Lamping, JL Marte, RA Madan, M. Bilusic, MR Silver, E. Bertotti, J. Schlom, JL Gulley, Clin. Kansè Res. 2019, 25, 99.

[14] K. Jung, JH Ha, JE Kim, JA Kim, YJ Kim, CH Kim, YS Kim, OncoImmunology 2018, 7, e1438800.

[15] A. Mansurov, P. Hosseinchi, K. Chang, AL Lauterbach, LT Gray, AT Alpar, E. Budina, AJ Slezak, S. Kang, S. Cao, A. Solanki, S. Gomes, J.- M. Williford, MA Swartz, JL Mendoza, J. Ishihara, JA Hubbell, Nat. Biomed. Eng. 2022, 6, 819.

[16] HD Chang, A. Radbruch, Ekspè Rev Clin. Imunol. 2014, 3, 709.

[17] H. Chang, A. Radbruch, D. Rheumaforschungszentrum, Ann. NY Acad. Sci. 2007, 1109, 40.

[18] S. Tugues, SH Burkhard, I. Ohs, M. Vrohlings, K. Nussbaum, J. Vom Berg, P. Kulig, B. Becher, Cell Death Differ. 2014, 22, 237.

[19] C. Asselin-Paturel, M. Isabelle Vergnon, B. Hamid Echchakir, M. Guillaume Dorothé, M. Sé vrine Blesson, M. Franç oise Gay, B. Fathia Mami-Chouaib, S. Chouaib, Kansè 2001, 91, 113.

[20] JEA Portielje, CHJ Lamers, WHJ Kruit, A. Sparreboom, RLH Bolhuis, G. Stoter, C. Huber, JW Gratama, Clin. Kansè Res. 2003, 9, 76.

[21] JP Leonard, ML Sherman, GL Fisher, LJ Buchanan, G. Larsen, MB Atkins, JA Sosman, JP Dutcher, NJ Vogelzang, JL Ryan, Blood 1997, 90, 2541.

[22] E. Bajetta, M. Del Vecchio, R. Mortarini, R. Nadeau, A. Rakhit, L. Rimassa, C. Fowst, A. Borri, A. Anichini, G. Parmiani, Clin. Kansè Res. 1998, 4, 75.

[23] C. Corbet, O. Feron, Nat. Rev. Kansè 2017, 17, 577. [24] M. Bellone, A. Calcinotto, P. Filipazzi, A. De Milito, S. Fais, L. Rivoltini, Oncoimmunology 2013, 2, e22058.

[25] S. Damgaci, A. Ibrahim-Hashim, PM Enriquez-Navas, S. PilonThomas, A. Guvenis, RJ Gillies, Imunoloji 2018, 154, 354.

[26] J. Liu, H. Cabral, B. Song, I. Aoki, Z. Chen, N. Nishiyama, Y. Huang, K. Kataoka, P. Mi, ACS Nano 2021, 15, 13526.

[27] A. Tao, GLo Huang, K. Igarashi, T. Hong, S. Liao, F. Stellacci, Y. Matsumoto, T. Yamasoba, K. Kataoka, H. Cabral, Macromol. Biosci. 2020, 20, 1900161.

[28] Y. Mochida, H. Cabral, Y. Miura, F. Albertini, S. Fukushima, K. Osada, N. Nishiyama, K. Kataoka, ACS Nano 2014, 8, 6724.

[29] JS Suk, Q. Xu, N. Kim, J. Hanes, LM Ensign, Adv. Drug Delivery Rev. 2016, 99, 28.

[30] CY Solèy, Y. Liu, JZ Du, ZT Cao, CF Xu, J. Wang, Angew. Chem., Ent. Ed. 2016, 55, 1010.

[31] A. Ibrahim-Hashim, V. Estrella, Cancer Metastasis Rev. 2019, 38, 149.

[32] G. Trinchieri, F. Gerosa, J. Leukocyte Biol. 1996, 59, 505.

[33] T. Starciuc, B. Malfait, F. Danede, L. Paccou, Y. Guinet, NT Correia, A. Hedoux, J. Pharm. Sci. 2020, 109, 496.

[34] G. Egawa, S. Nakamizo, Y. Natsuaki, H. Doi, Y. Miyachi, K. Kabashima, Stem Cells Int. 2013, 3, 1932.

[35] S. Jayanthi, BP Koppolu, KG Nguyen, SG Smith, BK Felber, TKS Kumar, DA Zaharoff, Stem Cells Int. 2017, 7, 5360.

[36] MP Hwuang, RJ Fecek, T. Qin, WJ Storkus, Y. Wang, J. Kontwole Release 2019, 318, 270.

[37] Q. Wang, Y. Wang, J. Ding, C. Wang, X. Zhou, W. Gao, H. Huang, F. Shao, Z. Liu, Nature 2020, 579, 421.

[38] G. Trinchieri, Annu. Rev Immunol. 1995, 13, 251.

[39] L. Meyaard, E. Hovenkamp, ​​SA Otto, F. Miedema, J. Immunol. 1996, 156, 2776.

[40] A. Cope, GLe Friec, J. Cardone, C. Kemper, Trends Immunol. 2011, 32, 278.

[41] SP Kerkar, RS Goldszmid, P. Muranski, D. Chinnasamy, Z. Yu, RN Reger, AJ Leonardi, RA Morgan, E. Wang, FM Marincola, G. Trinchieri, SA Rosenberg, NP Restifo, J. Clin . Envesti. 2011, 121, 4746.

[42] W. Lasek, R. Zago˙zd˙zon, M. Jakobisiak, Cancer Immunol. Immunother. 2014, 63, 419.

[43] C. Zhang, J. Zhang, J. Niu, Z. Zhou, J. Zhang, Z. Tian, ​​Hum. Imunol. 2008, 69, 490.

[44] NG Jacobson, SJ Szabo, RM Weber-Nordt, Z. Zhong, RD Schreiber, JE Darnell, KM Murphy, J. Exp. Med. 1995, 181, 1755.

[45] K. Mimura, JL Teh, H. Okayama, K. Shiraishi, LF Kua, V. Koh, DT Smoot, H. Ashktorab, T. Oike, Y. Suzuki, Z. Fazreen, BR Asuncion, A. Shabbir , WP Yong, J. So, R. Soong, K. Kono, Kansè Sci. 2018, 109, 43.

[46] T. Watanabe, S. Watanabe, G. Neumann, H. Kida, Y. Kawaoka, J. Virol. 2002, 76, 767.

[47] AS Bergot, A. Durgeau, B. Levacher, BM Colombo, JL Cohen, D. Klatzmann, Cancer Gene Ther. 2010, 17, 645.

[48] ​​R. Dent, M. Trudeau, KI Pritchard, WM Hanna, HK Kahn, CA Sawka, LA Lickley, E. Rawlinson, P. Sun, SA Narod, Clin. Kansè Res. 2007, 13, 4429.

[49] BG Haffty, Q. Yang, M. Reiss, T. Kearney, SA Higgins, J. Weidhaas, L. Harris, W. Hait, D. Toppmeyer, J. Clin. Oncol. 2006, 24, 5652.

[50] AV Paschall, K. Liu, J. Visualized Exp. 2016, 2016, 54040.

[51] A. Marra, G. Viale, G. Curigliano, BMC Med. 2019, 17, 90.

[52] R. Thomas, G. Al-Khadairi, J. Decock, Front. Oncol. 2021, 10, 3464.

[53] S. Adams, P. Schmid, HS Rugo, EP Winer, D. Loirat, A. Awada, DW Cescon, H. Iwata, M. Campone, R. Nanda, R. Hui, G. Curigliano, D. Toppmeyer, J. O'Shaughnessy, S. Loi, S. Paluch-Shimon, AR Tan, D. Card, J. Zhao, V. Karantza, J. Cortés, Ann. Oncol. 2019, 30, 397.

[54] LY Dirix, I. Takacs, G. Jerizalèm, P. Nikolinakos, HT Arkenau, A. Forero-Torres, R. Boccia, ME Lippman, R. Somer, M. Smakal, LA Emens, B. Hrinczenko, W. Edenfield, J. Gurtler, A. von Heydebreck, HJ Grote, K. Chin, EP Hamilton, Resous kansè nan tete. Trete. 2018, 167, 671.

[55] EA Mittendorf, AV Philips, F. Meric-Bernstam, N. Qiao, Y. Wu, S. Harrington, X. Su, Y. Wang, AM Gonzalez-Angulo, A. Akcakanat, A. Chawla, M. Curran, P. Hwu, P. Sharma, JK Litton, JJ Molldrem, G. Alatrash, Immunol kansè. Res. 2014, 2, 361.

[56] MT Barrett, E. Lenkiewicz, S. Malasi, A. Basu, JH Yearley, L. Annamalai, AE McCullough, HE Kosiorek, P. Narang, MA Wilson Sayres, M. Chen, KS Anderson, BA Pockaj, Breast Kansè Res. 2018, 20,71.

[57] P. Schmid, S. Adams, HS Rugo, A. Schneeweiss, CH Barrios, H. Iwata, V. Diéras, R. Hegg, S.-A. Im, GS Wright, V. Henschel, L. Molinero, SY Chui, R. Funke, A. Husain, EP Winer, S. Loi, LA Emens, N. Engl. J. Med. 2018, 379, 2108.

[58] MK Gately, U. Gubler, MJ Brunda, RR Nadeau, TD Anderson, JM Lipman, U. Sarmiento, Ther. Imunol. 1994, 1, 187.

[59] UM Sarmiento, JH Riley, PA Knaack, JM Lipman, JM Becker, MK Gately, R. Chizzonite, TD Anderson, Laboratwa. Envesti. 1994, 71, 862.

[60] VM Eng, BD Machin, B. Schnyder, M. Lorenz, S. Lugli, M. Aguet, TD Anderson, B. Ryffel, VFJ Quesniaux, J. Exp. Med. 1995, 181, 1893.

[61] JA Gollob, KG Veenstra, RA Parker, JW Mier, DF McDermott, D. Clancy, L. Tutin, H. Koon, MB Atkins, J. Clin. Oncol. 2003, 21, 2564.

[62] Y. Agarwal, LE Milling, JYH Chang, L. Santollani, A. Sheen, EA Lutz, A. Tabet, J. Stinson, K. Ni, KA Rodrigues, TJ Moyer, MB Melo, DJ Irvine, KD Wittrup , Nat. Biomed. Eng. 2022, 6, 129.

[63] ML Lucas, L. Heller, D. Coppola, R. Heller, Mol. La. 2002, 5, 668.

[64] SL Hewitt, D. Bailey, J. Zielinski, A. Apte, F. Musenge, R. Karp, S. Burke, F. Garcon, A. Mishra, S. Gurumurthy, A. Watkins, K. Arnold, J. Moynihan, E. Clancy-Thompson, K. Mulgrew, G. Adjei, K. Deschler, D. Potz, G. Moody, DA Leinster, S. Novick, M. Sulikowski, C. Bagnall, P. Martin, JM Lapointe, H. Si, C. Morehouse, M. Sedic, RW Wilkinson, R. Herbst, et al., Clin. Kansè Res. 2020, 26, 6284.

[65] RS Riley, CH June, R. Langer, MJ Mitchell, Nat. Rev. Drug Discovery 2019, 18, 175.

[66] I. Melero, E. Castanon, M. Alvarez, S. Champiat, A. Marabelle, Nat. Rev Clin. Oncol. 2021, 18, 558.

[67] LM Wein, JT Wu, DH Kirn, Cancer Res. 2003, 63, 1317.

[68] J. Hong, C.-O. Yun, BMC Biomed. Eng. 2019, 1, 17.

[69] A. Mukhopadhyay, J. Wright, S. Shirley, DA Canton, C. Burkart, RJ Connolly, JS Campbell, RH Pierce, Gene Ther. 2018, 26, 1.

[70] MA Postow, MK Callahan, CA Barker, Y. Yamada, J. Yuan, S. Kitano, Z. Mu, T. Rasalan, M. Adamow, E. Ritter, C. Sedrak, AA Jungbluth, R. Chua , AS Yang, R.-A. Women, S. Rosner, B. Benson, JP Allison, AM Lesokhin, S. Gnjatic, JD Wolchok, N. Engl. J. Med. 2012, 366, 925.

[71] EF Stamell, JD Wolchok, S. Gnjatic, NY Lee, I. Brownell, Int. J. Radiat. Onkol., Biol., Phys. 2013, 85, 293.

[72] EB Golden, S. Demaria, PB Schiff, A. Chachoua, SC Formenti, Cancer Immunol. Res. 2013, 1, 365.

[73] TY Seiwert, AP Kiess, J. Clin. Oncol. 2021, 39, 1.

[74] E. Gutierrez, M. Bigelow, C. LaCroix, P. Kirby, L. Markowitz, M. Naill, S. O'Neil, PA Hull, J. Engelhardt, J.-M. Cuillerott, A. Cheung, A. Grinberg, N. Wagtmann, Kansè Res. 2021, 81, 1714

[75] R. Varma, K. Liu, C. Bonzon, R. Rashid, N. Rodriguez, N. Hassanzadeh-Kiabi, C. Ardila, SY Chu, US Muchhal, JR Desjarlais, MJ Bernett, Cancer Res. 2020, 80, 5549.

[76] J. Sharifi, LA Khawli, P. Hu, S. King, AL Epstein, Hybrid Hybridomics 2001, 20, 305.

[77] C. Halin, S. Rondini, F. Nilsson, A. Berndt, H. Kosmehl, L. Zardi, D. Neri, Nat. Biotechnol. 2002, 20, 264.

[78] S. Mura, J. Nicolas, P. Couvreur, Nat. Mater. 2013, 12, 991.

[79] E. Becht, NA Giraldo, L. Lacroix, B. Buttard, N. Elarouci, F. Petitprez, J. Selves, P. Laurent-Puig, C. Sautès-Fridman, WH Fridman, A. de Reyniès, Genomic Biol. 2016, 17, 218

Ou ka renmen tou