Iridid ​​anti-enflamatwa ki soti nan tij yo nan Cistanche Deserticola Kiltive nan dezè Tarim

Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com

REZIME

Yo nan lòd yo detèmine konstitiyan yo chimik nanCistanche deserticolakiltive nan dezè Tarim, yo te fè yon ankèt sistematik fitochimik. Konstitiyan yo te izole pa jèl silica, Sephadex LH -20, jèl MCI, chromatografi kolòn ODS, ak semi-preparatif HPLC. Estrikti yo te detèmine sou baz MS ak NMR analyses spèktroskopik, pa metòd chimik, ak / oswa konparezon ak done literati. Aktivite anti-enflamatwa izola yo te evalye pou efè inhibition yo sou pwodiksyon lipopolysaccharide (LPS)-induit nitrique (NO) nan selil microglial BV-2 sourit yo. Nèf iridoid yo te izole ak idantifye kòmcistanche desertosideA (1), cistanin (2), cistachlorin (3), 6-deoxycatalpol (4), gluroside (5), kankanoside A (6), ajugol (7), bartsioside (8), ak {{9 }}asid epi-loganik (9). Konpoze 9 te montre pisan anpèchman sou pwodiksyon NO a ak yon valè IC50 ki se 5.2 μmol·L-1, konparab ak quercetin kontwòl pozitif (4.3 μmol·L-1). Konpoze 1 se te yon nouvo iridoid, ak konpoze 5, 6, ak 8 yo te izole nan espès sa a pou premye fwa.

[MO KLE] Cistanche deserticola; Iridid; elisidasyon estrikti; Aktivite anti-enflamatwa

Cistanche deserticola

Entwodiksyon

Cistanches Herba(Roucongrong nan Chinwa) ki fè pati fanmi Orobanchaceae, se sitou distribiye nan Afrik Dinò, Arabi, ak peyi Azyatik [1]. Kòm yon tonik ki byen koni nan medikaman tradisyonèl Chinwa (TCM), tij yo nanCistanchedeserticolaepiCistanchetubulosadepi lontan yo te itilize nan Lachin ak Japon pou tretman nan defisi nan ren, sterilite fi, leukorrhea morbid, neurasthenia, ak konstipasyon senil [2-3]. Ankèt fitochimik anvan yo gen

[Finansman rechèch] Pwojè sa a te sipòte finansyèman pa Fondasyon Nasyonal Syans Natirèl Lachin nan (No 81222051), Pwojè Rechèch Syantifik nan Medsin Tradisyonèl Chinwa (No 201307002), ak Nasyonal kle Teknoloji R & D Pwogram "New Drug Innovation" nan Lachin.

Otè sa yo pa gen okenn konfli enterè pou yo deklare. Pibliye pa Elsevier BV Tout dwa rezève endike prezans nanglikozid feniletanoid(PhGs), iridoids, lignans, ak polisakarid nanCistancheespès [4], ak kèk nan izole yo prezante efè neropwotektif, epatopwotektif, anti-enflamatwa, anti-bakteri, anti-viral, ak efè antioksidan [5-6].

Nan fen ane 1990 yo, yo nan lòd yo pwoteje Tazhong Oilfield ak kontwole dezè a, plant la sab-fixation Haloxylon ammodendron (CA Mey.) Bunge, lame a nanCistanchedeserticola, te prezante soti nan nò a nan sid la nan Xinjiang, ak gwo kantiteC. deserticolayo te kiltive. Kondisyon klima ak anviwònman kwasans nan sid la trè diferan de sa ki nan nò Xinjiang. Kit eleman chimik yo nanCistanchedeserticolakiltive nan sid Xinjiang varye oswa ou pa se pa klè. Yo nan lòd yo detèmine konstitiyan yo chimik nanCistanchedeserticolakiltive nan dezè Tarim, yo te fè yon ankèt sistematik fitochimik nan etid prezan an. Isit la, yo rapòte izolasyon ak elisid estriktirèl yon nouvo glikozid iridoid (1) ansanm ak uit analogue li te ye (2-9), ansanm ak aktivite anti-enflamatwa yo.

Efè anti-enflamatwa nanCistanche deserticola

Rezilta ak Diskisyon

85 pousan akeuz etanòl ekstrè nan tij yo nanCistanchedeserticolate sispann nan H2O (10 L) ak ekstrè ak EtOAc (10 L × 3) ak n-BuOH successivement. Ekstrè EtOAc ak n-BuOH yo te sibi jèl silica, Sephadex LH-20, jèl MCI, ak kromatografi kolòn ODS (CC), ak HPLC semi-preparatif pou peye yon nouvo (1) ak uit iridoid li te ye ({ {9}}) (Fig. 1).

Konpoze 1 te izole kòm yon poud blan amorphe ak wotasyon negatif optik ([a]20 -118.0, c 0.1, MeOH). Spectre IR li yo te montre gwo bann absòpsyon nan anviwon 3 393 cm-1 ki kapab atribiye ak gwoup idwoksi yo. Li gen yon fòmil molekilè C16H26O9 detèmine pa iyon kazi-molekilè nan m/z 385. 148 5 [M plis Na] plis (Kalkid. pou C16H26O9Na, 385.146 9) ak m/z 401. .122 8 [M plis K] plis (Kalk. pou CHOK, 401.120 8) korelasyon soti nan H-1 a C-1′, H-10 a C-7, C-8, ak C-9, ak soti nan H-11 rive nan C-3, C-4, ak C{{32 }} te sipòte tou elisid ki pi wo a.

Stereochimi konpoze 1 a te detèmine pa konparezon chanjman chimik yo ak konstan kouple ak done literati yo ak analiz de spectre NOESY la. Relasyon H-5 ak H-9 te detèmine kòm cis apati konstan kouple yo (10.5 Hz) [8-9]. Pou iridoid ki pi natirèl yo, konfigirasyon C-1-OH, H-5, ak H{-9 se , ak chanjman chimik 13C NMR nan C{{10}. } ak C-1′ yo jeneralman nan δC 93–98 ak 97–101, respektivman. Pandan ke, pou moun ki nan - konfigirasyon, rezonans C-1 ak C-1′ yo, an mwayèn, 5–6 deplasman anba teren [10-11]. Done 13C NMR nan com-16 26 9 nan (plis)-HR-ESIMS ak sipòte pa done 13C NMR (Tablo 1), ki endike 4 degre ensaturasyon. Idwoliz asid-1Table 1 1H NMR (500 MHz) ak 13C NMR (125 MHz) done 1 (δ nan ppm, J nan Hz) nan konpoze 1 ak 2 mol, L nan asid trifluoroacetic bay D-glikoz, ki te idantifye pa analiz de dérivés silane li yo pa analiz GC. Konfigirasyon relatif nan sant anomerik glukosil la te plase apati konstan kouple 8.0 Hz. Done 1H ak 13C NMR (Table1) nan konpoze 1, ki te plase san okenn anbigwite pa plizyè eksperyans 2D NMR, te montre siyal ki ka bay de methyls nan δH 1.23 (3H, s, H-10) ak 1.52 (3H, br). s, H-11), yon sèl metilèn nan δH 1.70 (1H, dt, J=13.5, 5.5 Hz, H{-6), ak 1.92-1.98 (1H, m, H). -6), twa metin nan δH 2.47 (1H, br d, J= 10.5 Hz, H{-9), 2.67–2.72 (1H, m, H-5 ), ak 3.62 (1H, t-tankou, J= 5.5 Hz, H{-7), ak yon gwoup acetal enstore δH 5.40 (1H, d, J=2. 0 Hz, H-1), 5.92 (1H, br s, H-3), ansanm ak yon proton anomerik -D-glucopyranosyl nan δH 4.61 (1H, d, J=8. 0 Hz, H-1′). Done 1H ak 13C NMR nan konpoze 1 yo te sanble anpil ak sa yo ki nan Lankan bò A (6) eksepte pou siyal evidan deshielded H-7 [δH 3.62 (1H, t-like, J=5 .5 Hz)] ak C-7 (δC 79.8), ki endike idroksidasyon C-7 pozisyon [7]. Dediksyon sa a te sipòte pa analiz de 1H-1H COSY nan H{-1/H-9/H{-5/H{-6/H{{127} } ak nan korelasyon HMBC yo soti nan H-7 rive nan C-5, C-6, C-8, C-9, ak C-10 ( Fig. 2). Lòt HMBC a

Pound 1 rapòte isit la (Tablo 1) endike nòmal la - konfigirasyon pou C-1-OH, H-5, ak H-9. Konfigirasyon relatif H-7 ak H3-10 yo te detèmine nan spectre NOESY (figi 2), kote NOE korelasyon ant H-1 ak H3-10, epi ant H3-10 ak H-7 endike ke pwoton sa yo tout sou menm figi. Pa gen okenn korelasyon NOESY ant H3-10 ak H-9 sijere ke H-9 ak H{3-10 yo sou fas opoze a nan molekil la. Se poutèt sa, estrikti konpoze 1 a te elisid kòm 7-hydroxyl- Lankan bò A yo te relecistadesertosideA.

Konpoze yo konnen yo te idantifye kòm sèten (2) [12],cistachlorin(3) [12], 6-deoksikatalpol (4) [13], glikozid (5) [14], Lankan bò A (6) [7], Lugol (7) [15], bartsioside (8) [16], ak 8-asid epi-òganik (9) [17] pa konparezon ak done RMN yo ak sa yo rapòte nan literati a. Aktivite anti-enflamatwa iridoid izole sa yo te evalye pou efè inhibition yo sou pwodiksyon LPS NO nan selil microglial BV-2, epi yo te teste sitotoksisite yo an premye nan selil BV-2 ak tretman LPS pou 24. h. Pite izolat yo tout pi gran pase 95 pousan baze sou analiz espektroskopik 1 H NMR. Tout izole yo pa t montre okenn sitotoksisite enpòtan nan yon konsantrasyon 40 μmol·L-1 nan selil BV-2 (Tablo 2). Konpoze 9 te montre yon efè inhibitor ki pisan sou pwodiksyon NO ak yon valè IC50 ke yo te 5.2 μmol·L-1, konparab ak quercetin nan kontwòl pozitif (4.3 μmol·L-1), pandan ke lòt yo pa t montre okenn efè remakab nan tès la. konsantrasyon nan 40 μmol·L-1 (Tablo 2). Analiz preliminè estrikti-aktivite a te endike ke prezans yon gwoup carboxyl nan pozisyon C-4 nan konpoze 9 ta ka gen rapò ak aktivite enpòtan li yo. An rezime, yon nouvo ak uit iridoid li te ye yo te izole nan tij yo nanC. deserticolakiltive nan dezè Tarim ak konpoze 9 prezante yon efè inhibition remakab sou LPS-induit NO pwodiksyon nan BV-2 selil mikroglial. Tout iridoid li te ye yo te deja rapòte nan bwa aC. deserticola[7, 12-17], epi konsa, pa gen okenn diferans evidan nan konstitisyon chimik iridoids ak fenilethanoids ant yo.C. deserticolakiltive nan dezè Tarim ak lòt abita yo, an konsiderasyon konbine dènye rapò nou an [19].

Cistanche deserticola: efè anti-enflamatwa

Eksperimantal

Pwosedi eksperimantal jeneral yo

Yo te anrejistre espèk IR yo sou yon Nicolet Nexus 470 FT Enfrawouj Spectrometer. Yo te jwenn espèk RMN yo sou yon espektromèt Varian Inova-500. Yo te mezire spectre mas HR yo sou yon sistèm mas Bruker APEX IV FT-MS (7.0 T) ekipe ak yon sous ESI. ESI-MS yo te mezire sou yon espektromèt MS Agilent 6320 iyon pèlen. Wotasyon optik yo te mezire sou yon polarimèt Rudolph AUTOPOL IV. Pwen fizyon yo te detèmine sou yon aparèy dijital X-4 (ki pa korije). HPLC semi-preparatif la te pote sou enstriman Waters 600 ak yon kolòn ODS (Alltech, 250 mm × 10 mm ID, 5 µm). Analiz GC yo te fèt sou chromatograf gaz VARIAN CP-3800 ak yon kolòn DB-5 (0.25 mm × 30 m). Kwomatografi kolòn te fèt sou jèl silica (200-300 may, Qingdao Marin Chimi Ltd, Lachin), jèl MCI (CHP20P, 75-150 μmol·L-1 , Mitsubishi Chemical Industries Ltd., Japon), Sephadex LH{{24 }} (Amersham Biosciences, Syèd), ak ODS C18 (40-63 μm; Merck, Almay). TLC a te pote soti sou vè prekouch jèl silica GF254 plak. Tach yo te parèt anba limyè UV oswa pa flite ak 5 pousan solisyon etanòl asid silfirik.

Materyèl plant

Tij yo nan C. deserticola yo te kolekte nan Tarim dezè, Xinjiang Uygur Rejyon Otonòm, Lachin, ak idantifye pa Pwofesè TU Peng-Fei. Yon echantiyon bon (No CD201011) te depoze nan èrbyòm nan Peking University Modern Research Center pou Medsin Tradisyonèl Chinwa. Ekstraksyon ak izolasyon Tij yo sèk nan C. deserticola (15.3 kg) yo te tise byen koupe ak ekstrè ak 85 pousan akeuz etanòl (120 L × 1 h × 3). Yo te sispann rezidi a konsantre (4.5 kg) nan H2O (10 L) ak ekstrè ak EtOAc (10 L × 3) ak n-BuOH (10 NAN Ze-Dong, et al. / Chin J Nat Med, 2016, 14(1) ): 6165 – 64 – L × 3) successivement. Konpoze 2-6 yo te jwenn nan ekstrè EtOAc la, pandan y ap konpoze 1 ak 7-9 yo te jwenn nan ekstrè n-BuOH.

Ekstrè EtOAc la (65.8 g) te sibi CC jèl silica (200-300 may), lè l sèvi avèk yon sistèm sòlvan gradyan nan CHCl3/MeOH ( 50: 1, 20: 1, 10: 1, 6: 1, 2: 1, ak 1: 1), pou bay dis fraksyon (Fr. 1– Fr. 10). Fr. 2 (5.3 g) te separe pa Sephadex LH-20 CC, elite ak CHCl3/MeOH (1: 1) pou bay twa fraksyon pi gwo (Fr. 2-1, Fr. 2-2, ak Fr. 2-3). Fr. 2-3 te separe pa jèl silica CC lè l sèvi avèk PE/Me2CO (50 : 1, 20 : 1, 10 : 1, 5 : 1, 2 : 1, 1 : 1, ak 0 : 1) pou bay kat fraksyon ( Fr. 2-3-1–Fr. 2-3-4). Fr. 2-3-2 te separe pa jèl silica CC, eluye ak PE/CHCl3/MeOH (8: 8: 1) pou bay konpoze 3 (20.6 mg). Konpoze 2 te jwenn nan Fr. 2-3-3 apre pirifikasyon pa kwomatografi sou jèl silica CC, eluye ak PE/CHCl3/MeOH (5: 5: 1). Fr. 4 (2.5 g) te separe pa Sephadex LH-20 CC, elite ak CHCl3/MeOH (1: 1), pou bay twa fraksyon (Fr. 4-1, Fr. 4-2, ak Fr. 4-3). Fr. 4-2 te sibi MCI jèl CC (MeOH/H2O, 10: 90 a 90: 10, V/V) pou peye twa fraksyon pi gwo (Fr. 4-2-1, Fr. 4-2-2, ak Fr. 4-2-3). Fr. 4-2-1 te pirifye pa semi-preparatif HPLC [CH3CN-H2O (10: 80)] bay konpoze 4 (32.3 mg), ak 5 (15.0 mg), pandan y ap Fr. 4-2-2 te pirifye pa semi-preparatif HPLC [CH3CN-H2O (10: 80)] pou bay konpoze 6 (8.3 mg). Ekstrè n-BuOH (536 g) te sibi CC jèl silica (200-300 may), lè l sèvi avèk yon sistèm sòlvan gradyan nan CHCl3 / MeOH (20: 1, 10: 1, 6: 1, 2: 1, 1: 1, 0: 1), pou bay dis gwo fraksyon (Fr. D1–Fr. D10). Fr. D5 (3.0 g) te sibi MCI jèl CC (MeOH/H2O, 10: 90 a 80: 20, V/V) pou peye twa fraksyon (Fr. D5-1–Fr. D5-3 ). Fr. D5-2 (120 mg) te separe pa jèl silica CC (200-300 may, 10.0 g; PE/EtOAc/MeOH 3: 3: 1) pou bay konpoze 8 (12.5 mg). Fr. D8 (4.5 g) te separe pa Sephadex LH-20 CC, elisyon ak MeOH bay twa fraksyon (Fr. D{8-1-Fr. D{8-3). Fr. D8-3 te separe sou yon kolòn ODS ouvèti (MeOH/H2O, 20: 80 a 80: 20, V/V) pou bay twa fraksyon (Fr. D8-3-1–Fr. D{{157 }}). Fr. D8-3-1 te sibi HPLC semi-preparatif [CH3CN-H2O (8: 90)] pou bay konpoze 1 (2.3 mg). Fr. D9 (10.1 g) te separe pa kolòn Sephadex LH-20, elisyon ak MeOH, bay twa fraksyon pi gwo (Fr. D{9-1-Fr. D{9-3). Fr. D9-3 te sibi yon kolòn nan jèl MCI (MeOH / H2O, 0: 100 a 50: 50, V / V) bay konpoze 7 (15.3 mg) ak 9 (45.5 mg). Cistadesertoside A (1): Blan poud amorphe. [] 20 D –118.0 (c 0.1, MeOH); IR (KBr) νmax: 3 393, 1 071, 1 028 cm−1 ; (plis)-HRESI-MS m/z 385.146 9 [M plis Na] plis (Kalk. pou C16H26O9Na, 385.148 5) ak m/z 401.120 8 [M plis K] plis (Kalk. pou C16H26O9K, 401.122 8); Done 1H RMN ak 13C NMR, gade Tablo 1.

Idwoliz asid nan konpoze 1

Konpoze 1 (1.0 mg) te brase nan 90 degre pou 5 h ak 2 mol·L-1 CF3COOH (EtOH: H2O, 1: 1, 2 mL). Apre yo te refwadi nan tanperati chanm, solisyon an te konsantre anba presyon redwi. Yo te fonn rezidi a nan 2 mL piridin ak 0.1 mol·L-1 L-cysteine ​​methyl ester hydrochloride ak brase nan 60 degre pou 1.5 èdtan. Apre yo fin refwadi ak konsantre, yo te trete melanj lan ak trimethylchlorosilane (TMSCl) ak hexamethyldisilazane (HMDS) (1: 2, V/V, 0.5 mL) nan piridin (2 mL), ki te swiv pa brase nan 60. degre pou 0.5 h. Lè sa a, solisyon an te konsantre nan sechrès, epi rezidi a te divize ak H2O ak n-hexane (2 × 3 mL) [18]. Yo te analize fraksyon n-hexane pa GC lè l sèvi avèk yon kolòn DB-5 (0.25 mm × 30 m). Tanperati enjektè a ak detektè yo tou de te fikse nan 220 degre. Yon sistèm gradyan tanperati te aplike nan fou a, kòmanse nan 140 degre pou 1 min ak ogmante jiska 250 degre nan yon pousantaj de 4 degre ·min-1. Yo te idantifye pikwa idroliz la nan derive sik pa konparezon nan tan retansyon ak echantiyon natif natal nan D-glikoz (19.24 min) apre tretman menm jan an ak TMSCl / HMDS.Anpèchman pwodiksyon NO

Yo te evalye aktivite inhibitor NO nan konpoze izole yo kont LPS-induit BV-2 selil microglial pa metòd Griess lè l sèvi avèk yon twous tès NO (Nanjing-Jiancheng BioTech Institute, Nanjing, Jiangsu, Lachin) jan yo dekri deja [19], ak quercetin yo te itilize kòm kontwòl pozitif la. Anplis de sa, vibilite selil yo te evalye pa tès MTT.

Benefis Cistanche: anti-enflamasyon

Referans

[1] Kobayashi H, Oguchi H, Takizawa N, et al. Nouvo glikozid phenylethanoid soti nanCistanche tubulosa(Schrenk) Hook. f. mwen [J]. Chem Pharm Bull, 1987, 35(8): 3309-3314.

[2] Teknik kilti Xinjiang plant medsin diskontinu [M]. Xinjiang: Xinjiang Institute of Traditional Chinese and Ethnologic Medicines Ed, Xinjiang Science and Technology Press, 2004: 84-88.

[3] Komite famakope Lachin, Farmakope Chinwa [M]. Vol. I, Beijing: China Medical Science and Technology Press, 2010: 126.

[4] Jiang Y, Tu PF. Analiz de konstitiyan chimik nan Cistanche

espès [J]. J Chromatogr A, 2009, 1216(11): 1970-1979.

[5] Pan J, Yuan CS, Lin CJ, et al. Aktivite farmakolojik ak mekanis natirèl glikozid fenilpropanoid [J]. Pharmazie, 2003, 58(11): 767-775.

[6] Fu GM, Pang HH, Wong Y. Glikozid fenylethanoid ki rive natirèlman: mennen potansyèl pou nouvo terapi [J]. Curr Med Chem, 2008, 15(25): 2592-2613.

[7] Xie HH, Morikawa T, Matsuda H, et al. Konstitiyan monoterpene soti nanCistanche tubulosa-chimik estrikti kankanosides AE ak kankanol [J]. Chem Pharm Bull, 2006, 54(5): 669-675.

[8] Foderaro TA, Stermitz FR. Chimi nan Scrophulariaceae. Pati 24. Glikozid iridoid ki soti nan espès Penstemon: AC-5, C-9 trans-iridoid ak C-8 pè epimerik [J]. Phytochemistry, 1992, 31(12): 4191-4195.

[9] Krull RE, Stermitz FR. Glikozid iridoid trans-fusion soti nan Penstemon mucronatus [J]. Phytochemistry, 1998, 49(8): 2413-2415.

[10] Takeda Y, Yagi T, Matsumoto T, et al. Nepetanudosides ak iridoid glikozid ki gen nouvo stereochimi soti nan Nepeta nuda ssp. albiflora [J]. Phytochemistry, 1996, 42(4): 1085-1088.

[11] Takeda Y, Ooiso Y, Masuda T, et al. Iridoid ak eugenol glikozid ki soti nan kamera Nepeta [J]. Phytochemistry, 1998, 49(3): 787-791.

[12] Kobayashi H, Karasawa H, Miyase T, et al. Etid sou eleman yo nan Cistanchis herba. II. Izolasyon ak estrikti nouvo iridoid,cistanin ak cistachlorin[J]. Chem Pharm Bull, 1984, 32(5): 1729-1734.

[13] Arslanian RL, Harris GH, Stermitz FR. Chimi nan Scrophulariaceae. 7. Gen kèk glikozid iridoid, ki gen ladan nouvo 6-deoxycatalpol, ki soti nan espès pens Endyen ki gen rapò ak Castilleja miniata [J]. J Nat Prod, 1985, 48(6): 957-961.

[14] Sticher O, Weisflog A. Detèminasyon ak izòlman nan glikozid iridoid soti nan Galeopsis tetrahit (Labiatae) ak elisid estrikti nan gluroside [J]. Pharm Acta Helv, 1975, 50(11): 394-403.

[15] Nishimura H, Sasaki H, Morota T, et al. Etid chimik ak byolojik sou Rehmanniae Radix. Pati 3. Sis glikozid iridoid ki soti nan Rehmannia glutinosa [J]. Phytochemistry, 1989, 28(10): 2705-2709.

[16] Junior P. Pli lwen iridoid ki soti nan espès Penstemon [J]. Planta Med, 1984, 50(6): 530.

[17] Boros CA, Stermitz FR. Iridid. Yon revizyon mete ajou. Pati I [J]. J Nat Prod, 1990, 53(5):1055-1147.

[18] Jian R, Zeng KW, Tu PF, et al. Konstitiyan anti-neuroenflamatwa soti nan Asparagus cochinchinensis [J]. Fitoterapia, 2013, 84: 80-84.

[19] Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, et al. Phenylethanoid glikozid ak aktivite anti-enflamatwa soti nan tij yo nanCistanche deserticolakiltive nan dezè Tarim [J]. Fitoterapia, 2013, 89: 167-174.