Efè anti-proliferasyon Salsa Cistanches sou Pwogresyon Hyperplasia Benign Prostatic Ⅰ
Oct 18, 2022
Résumé:Cistanche Tubulosaki te itilize nan medikaman tradisyonèl pou tretman andefisi nan ren, nerasteni, maladi malfonksyònman seksyèl, epiiperplasi benign pwostatik(BPH). Objektif etid sa a se te mennen ankèt sou mekanis kote C. tubulosa ekstrè (CSE) lakòz yonefè anti-proliferatif sou tisi pwostat lanan rat BPH-induit. Efè CSE sou BPH yo te evalye an tèm de pwa pwostat, pwodiksyon seruln dihydrotestosterone (DHT), ak ekspresyon mRNA nan 5o-reductase tip 1 ak tip 2 nan tisi pwostat rat BPH-induit. Anplis de sa, tach ematoksilin ak eozin (H&E) te fèt pou egzamen histolojik nan mòfoloji glann pwostat, ak nivo ekspresyon pwoteyin nan tisi pwostat yo te envestige pa analiz Western blot. Tretman CSE diminye pwa pwostat, konsantrasyon DHT serom, ak ekspresyon mRNA 5o-reductase tip 1 ak tip 2 nan tisi pwostat rat BPH-induit. Anplis de sa, tretman CSE siprime pwopagasyon selil pa reglemante nivo ekspresyon de pwoteyin ki gen rapò ak enflamatwa (sintez oksid nitrique endivizib ak cyclooxygenase 2) ak pwoteyin ki asosye ak apoptoz (caspase -3 ak Bcl -2 pwoteyin fanmi). CSE ka yon potansyèl kandida terapetik pou BPH akòz kapasite li nan kontwole ekspresyon nan pwoteyin enflamatwa ak apoptoz ki gen rapò.
Mo kle:iperplasi benign pwostatik, Cistanche Tubulosa, dihydrotestosterone, enflamasyon, apoptoz, Bcl-2.
Entwodiksyon
Cistanche Tubulosase yon plant parazit natif natal nan nòdwès Lachin. Tij li se yon enpòtan medikaman tradisyonèl oriental ki itilize pou tretman andefisi nan renepinerasteni(Deng et al.2004).C.tubulosa tou te rapòte yo dwe efikas nan tretman an nanmaladi malfonksyònman seksyèl, tankouenpotansepiiperplasi benign pwostatik(BPH) nan liv medikaman Koreyen ki rele DonguiBogam la. Phenylethanoid glycosides (PhGs) se pi gwo konstitiyan aktif nan zèb sa a (Jimenez and Riguera 1994). Anpil PhG yo te montre yo gen yon pakèt pwopriyete byolojik, ki gen ladan efè antioksidan ak antitumoral. Acteoside, yon PhG ki soti nan C. tubulosa, anpeche apoptoz pwovoke pa 1-methyl-4- iyon fenilpiridinyòm (MMP*) nan newòn granules serebeleux (Pu et al. 2003). Malgre ke etid sou fonksyon fizyolojik C. tubulosa yo te fèt, mekanis molekilè (yo) ki kache efè C. tubulosa sou BPH yo pa te envestige.
BPH karakterize pa yon elajisman nan pwostat la, akòz kwasans ki pa kansè nan glann nan (Andriole et al. 2004). Ogmantasyon nan prévalence BPH ak ensidans ap fèt nan kontèks yon popilasyon ki aje. Nan ane 2030, 20 pousan nan popilasyon ameriken an pral gen 65 an oswa plis, yon figi ki pral genyen plis pase 20 milyon gason (Parsons 2010). Byenke BPH se yon maladi komen nan granmoun aje, etyoloji ak patoloji nan BPH yo pa konplètman defini, epi kounye a pa gen okenn tretman pafè pou BPH (Djavan et al.2010).
Opsyon tretman pou BPH gen ladan estrateji famasi ak chirijikal.
Nan dènye ane yo, kantite entèvansyon chirijikal nan pasyan ki gen pasyan BPH diminye an favè tretman famasi (Emberton et al. 2011). Akòz nati BPH, tretman famasi mande pou itilizasyon medikaman long ak kontinyèl. Se poutèt sa, tolerabilite long ak kontinyèl nan medikaman an se yon pwoblèm trè enpòtan. Plizyè kalite ajan farmako-lojik tankou inibitè 5a-reductase (finasterid ak du-tasteride) ak antagonist adrenoceptor a (alfuzosin, terazosin, doxazosin, tamsulosin) yo itilize pou tretman BPH (Lepor 2011);
Untergasser et al.2005).Pwensipal ajan famasi yo pou tretman BPH yo se 5a-reductase inhibiteurs, ki se li te ye nan regu-fen nivo 5o-dihydrotestosterone, ak o-adrenèjik bloke (Tiwari et al. 2005). Malgre ke ajan famasi sa yo konsidere kòm siyifikativman anpeche pwogrè nan BPH, anpil etid te rapòte efè segondè endezirab yo (Patel and Chapple 2006). myopati grav, akòz resanblans estriktirèl li yo ak òmòn esteroyid (McConnell et al.2003; Uygur et al.1998).Paske ajan famasi sa yo montre efè segondè endezirab, jwenn remèd èrbal ki efektivman trete BPH gen konsiderab valè medsin.
Pou evalye efè C. tubulosa sou BPH, nou te demontre ke C. tubulosa ekstrè (CSE) te kapab modile move balans ki genyen ant kwasans selil prostatik ak apoptoz nan modèl BPH testostewòn-induit rat.
Materyèl ak metòd Materyèl ak reyaktif
C.tubulosa te achte nan men Omniherb Co.Ltd. (Daegu, Repiblik Kore di) ak finasteride te jwenn nan Merck ak Co.Inc. (New Jersey, USA). Testostewòn, phenylmethylsulfonylfluoride (PMSF), Triton X-100, yòd propidium (PI), Nonidet P-40(NP{-40), ak bwason inhibitor pwoteyin (PIC) yo te achte nan men Sigma-Aldrich. Chemical Co. (St. Louis, Missouri, USA). GAPDH oligonukleotid primè ak 5o-reductase tip 1 ak tip 2 te achte nan men Bioneer (Deajeon, Kore di), epi yo te achte SYBR Primix Ex Taq nan Takara (Shuzo, Shiga, Japon). Antikò pou anti-iNOS (M{{9} }), COX-2(C-20),poly (ADP-riboz)polymerase-1(PARP-1,(D-1),caspase{{ 16}} (H-277), Bcl-2(C-2), Bcl-xL (H{-5), Bax (B{-9), ak anti- -aktin(ACTBD11B7) yo te achte nan men Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, Kalifòni, USA). Yo te achte antikò pou anti-PCNA nan BD Biosciences,Pharmingen (San Diego, Kalifòni, USA). Preparasyon C ekstrè tubulosa (CSE)
Remèd fèy C. tubulosa yo te achte nan men Omniherb Co.Ltd. (Yeongcheon, Kyungpook, Repiblik Kore di). Yo te gen yon kontni imidite nan<13% by="" weight="" and="" were="" air-dried.="" afterward,="" herbs="" underwent="" extraction="" with="" 50%(v/v)="" ethanol-water="" at="" 60="" ℃for="" 8="" h.="" the="" extract="" obtained="" was="" filtered="" through="" 20="" μm="" cartridge="" paper,="" and="" ethanol="" was="" removed="" by="" vacuum="" rotary="" evaporation="" (eyela,="" japan).="" the="" concentrate="" was="" subsequently="" freeze-dried,="" and="" the="" yield="" was="" found="" to="" be="" 12%="" w/w.="" the="" experiment="" was="" performed="" by="" dissolving="" the="" dry="" extract="" in="" distilled="" water,="" and="" the="" rest="" of="" extract="" was="" stored="" at="" -20="" ℃.="" the="" identities="" of="" the="" active="" components="" of="" the="" extract,as="" determined="" by="" hplc,="" were="" reported="" previously(jiang="" and="" tu="">
Bèt
Rat Sprague-Dawley gason ki gen dis semèn (200±20 g) yo te achte nan men Daehan Biolink (Daejeon, Repiblik Kore di). Bèt yo te loje nan kondisyon ki te an akò ak direktiv yo pou swen ak itilizasyon bèt laboratwa, adopte ak pibliye pa Komite Enstitisyonèl Swen Animal nan Sangji University (Reg. No. 2014-09). Rat yo te aklimate nan kondisyon laboratwa yo pou 2 semèn anvan yo kòmanse eksperyans la. Yo te bay aksè gratis nan manje ak dlo pou 4 semèn epi yo te kenbe anba yon sik 12 h limyè / 12 h fè nwa nan yon tanperati konstan nan 22±2 degre ak imidite relatif nan 55±9 pousan pandan tout eksperyans la. Rat yo te plase owaza nan youn nan 4 gwoup (n=6): gwoup kontwòl la (Kon, nòmal pwostat ak solisyon machin: fosfat salin tampon (PBS) 200μL, po); gwoup BPH-induced (BPH), Gwoup BPH-induit trete ak finasteride (5 mg/kg/jou, po, (Fina)); Gwoup BPH-induit trete ak CSE (200 mg/kg/jou; po). Rat yo nan gwoup kontwòl la te koupe louvri epi Lè sa a, koud moute san yo pa retire tèstikul yo apre anestezi ak zoletil @ 50 (20 mg / kg, ip); rat nan lòt gwoup yo te kastre. Apre 3 jou nan rekiperasyon, gwoup yo BPH-induit yo te sou fòm piki ak testostewòn propionate (10mg / kg). / jou, ip, fonn nan lwil mayi) pou kont li oswa ansanm ak CSE oswa finasteride chak jou pou semèn 4. Vennkat èdtan apre dènye administrasyon an, tout rat yo te sakrifye apre anestezi ak zoletil@ 50 (20 mg / kg, ip). Echantiyon san yo te pran nan venn cava kodal la, epi yo te separe serom pa santrifugasyon epi estoke nan -80 degre. Yo te retire tout glann pwostat la epi yo te peze (Guo et al.2004).
Pwa pwostat ak rapò pwa kò
Tisi pwostatik yo te retire, rense, epi peze imedyatman. Pwostat pwa a rapò pwa kò (PW / BW rapò) te kalkile jan sa dekri anba a.
Rapò PW/BW
= (chak pwa pwostat bèt nan gwoup eksperimantal/chak pwa kò bèt nan gwoup eksperimantal) x 100 Anpèchman kwasans pwa pwostat
Lè etid fini, pwostat yo te retire epi peze. Pousantaj anpèchman kwasans lan te kalkile jan sa a: 100-[(treated group-control group)(BPH group-control group)×100]. Konsantrasyon serom nan analiz dihydrotestosterone (DHT).
Konsantrasyon serik DHT yo te detèmine ak ELISA komèsyal (ALPCO Diagnostics, Salem, New Hampshire, USA). Kòm-di yo te fèt dapre enstriksyon manifakti a.
Analiz histolojik
Tisi pwostat nan chak gwoup yo te fikse nan 4 pousan solisyon fòmalin, entegre nan parafine, epi koupe an seksyon 4 pm. Seksyon yo te tache ak ematoksilin ak eozin (H&E) pou egzamen istolojik. Imaj yo te akeri lè l sèvi avèk yon mikwoskòp SZX10 (Olympus, Tokyo, Japon). Analiz histolojik ak epesè tisi epitelyal ki soti nan pwostat (TETP) te mezire pa yon histologist pwofesyonèl nan Seoul Medical Science Institute (Seoul, Kore di) lè l sèvi avèk Leica Application Suite (LAS, ver. 3.3.0) soft-ware pou evalyasyon objektif nan analiz istolojik. Kantitatif an tan reyèl polymerase chèn reyaksyon (PCR) analiz
Yo te omojènize tisi pwostatik ki soti nan chak bèt, epi yo te izole RNA total lè l sèvi avèk Easy-Blue@ Reagent (Intron Biotech-nology Inc., Gyeongi-do, Repiblik Kore di) dapre enstriksyon moun-fabrikè a. Total RNA te quantifye lè l sèvi avèk yon sistèm espektrofotomèt Epoch@micro-volume (BioTek Instruments, Inc. Winooski, Vermont, USA). RNA total ki soti nan fwa a ak tisi adipoz visceral yo te konvèti an cDNA lè l sèvi avèk yon twous transkripsyon ranvèse cDNA ki gen gwo kapasite (Applied Biosystems, Foster City, Kalifòni, USA). ). Primè oligonukleotid yo pou 5o-reductase tip 1, ki fèt nan rat, yo te GGAAGG TTT CAT GGCCTT CG (pi devan) ak TCG AGG GCA GCT GTA TG (anvers), 5o-reductase tip 2 primè, ki fèt nan rat, yo te ATG. GGG ACC CTG ATC CTG TG (pi devan) ak CGA CAC CACAAA GGA AGG CA (anvè), ak primè GAPDH yo, ki te itilize kòm yon jèn pou kenbe kay e ki fèt nan rat, yo te TGA TTC TAC CCA CGG CAA GT (devan) ak AGC. ATC ACC CCA TTT GAT GT (ranvèse).Transkripsyon ranvèse te pote soti lè l sèvi avèk yon thermocy-cler (Gene Amp⑧ PCR sistèm 9700, Applied Biosystems), ak rezilta yo te eksprime kòm rapò nan dansite optimal nan GAPDH. Analiz Western blot
Tisi pwostatsoti nan chak bèt yo te omojènize nan tanpon komèsyal liz PRO-PREP⑧(Intron Biotechnology Inc.) ak enkubasyon pou 25 min sou glas pwovoke liz selil. Ekstrè tisi yo te santrifuje nan 16 000 g (4 degre) pou 20min, epi yo te transfere supernatant la nan yon tib pwòp. Te konsantrasyon nan pwoteyin dekouraje te montre chanjman histolojik tipik, ki gen ladan yon epitelyal glandulè epè, yon sitoplasm vacuolated lonje dwèt nan direksyon lumèn nan glandulèr, ak yon zòn redwi glandulèr luminal (figi 3A). Administrasyon CSE pou 4 semèn siprime modèl ipèrplastik tipik sa yo, ki reprezante yon chanjman istolojik soti nan tisi nòmal pwostatik ipèrplasi pwostatik. An brèf, egzamen istolojik nan gwoup finasteride ak CSE-trete te montre yon tandans klè pou amelyore ipèrplasi pwostatik. Anplis de sa, jan yo montre nan Fig. 3B, analiz TETP te montre ke tisi epitelyal ki pi epè yo te obsève nan rat BPH-induit konpare ak sa ki nan nenpòt lòt gwoup etid, ak finasteride- ak CSE-trete gwoup yo te montre yon rediksyon enpòtan nan epesè pwostat. .
Pou evalye pwopagasyon selil epitelyal pwostat, nou te egzamine ekspresyon pwoteyin PCNA nan tisi pwostat rat BPH-induit. Jan yo montre nan Fig. 3C, analiz Western blot endike yon ogmantasyon nan ekspresyon pwoteyin PCNA nan gwoup BPH-induit la konpare ak nivo PCNA nan gwoup kontwòl la. Konpare ak gwoup BPH-induit, sepandan, finasteride- ak CSE-trete gwoup yo parèt redwi ekspresyon pwoteyin PCNA, ki endike efè anti-proliferasyon yo nan BPH.
Fig.2.Efè Cistanche Tubulosa ekstrè (CSE) administrasyon sou pwodiksyon serom dilhydrotestosterone (DHT) ak 5a-reductase kalite 1 ak kalite 2 nivo mRNA nan tisi pwostat nan modèl rat benign hyperplasia (BPH) pwostat-induit. (A) Konsantrasyon serik DHT yo te detèmine lè l sèvi avèk tès ELISA. (B) 5a-Reductase tip 1 ak tip 2 mRNA expressionin tisi pwostat yo te analize pa PCR an tan reyèl quantitative. Done yo montre yo reprezante mwayèn ± SEM nan 6 rat pou chak gwoup."p<><0.001 vs.con=""><0.001 vs.bph="">
