Pwopriyete anti-tirozinaz nan diferan espès timerik ak izolasyon konpoze aktif soti nan kurkuma amada.

Jesmin Akter1 ● Md. Zahorul Islam1,2 ● Md. Amzad Hossain1 ● Kensaku Takara1

1 Fakilte Agrikilti, University of the Ryukyus, Okinawa, Japon

2 Depatman Farmakoloji, Fakilte Syans Veterinè, Inivèsite Agrikòl Bangladèch, Mymensingh, Bangladèch

Pou plis enfòmasyon:Scotty.Wang@wecistanche.com

Résumé

Timerik se tradisyonèlman itilize kòm yon kosmetik po nan kèk okazyon relijye ak kiltirèl sou subcontinent Endyen an. Nan etid sa a, nou konpare pwopriyete inhibitor tirozinaz kat Curcuma spp., sètadi, C. xanthorrhiza, C. aromatic, C. amada, ak C. zedoaria. Bioassay-gide izòlman ak pirifikasyon nan inibitè tirozinaz lè l sèvi avèk kolòn jèl silica ak segondè-pèfòmans likid kromatografi. Idantifikasyon estriktirèl konpoze yo te fèt lè l sèvi avèk 1 H NMR, 13C

NMR, ak likid chromatografi-tandem mas spectrométrie. C. amada te montre aktivite inhibition tirozinaz ki pi wo a, ak yon IC50 nan 53.4 ug/mL. Se poutèt sa, li te chwazi pou izolasyon an ak pirifikasyon nan inibitè tirozinaz. Konpoze yo pirifye yo te zederone (1), furanodienone (2), 1,5-epoxy-3-idwoksi-1-(3,4-dihydroxy-5-metoksifenil){ {13}}(4-hydroxyphenyl) heptanes (3), 3,5-dihydroxy-1-(3,4-dihydroxy phenyl)-7-({{22 }}idwoksi-3-metoksifenil) eptan (4) ak 1,5- epoksidik 3-idoksid-1-(3,4-dihydroxy-5-metoksifenil) -7-(4-idwoksi-3-metoksifenil) eptan (5). Valè IC50 pou djondjon ananti-tirozinazaktivite konpoze 1, 2, 3, 4, ak 5 yo te 108.2, 89.2, 92.3, 21.7, ak 41.3 µM, respektivman. Konpoze sa yo tou inibit aktivite tirozinaz intraselilè, kidonk diminye sentèz melanin nan selil melanom B16F10. Konpoze 4 te montre siyifikativman pi fòanti-tirozinazaktivite pase sa yo ki nan arbutin (yon dwòg kontwòl pozitif). Pa gen okenn diferans enpòtan yo te obsève nan efè inhibition tirozinaz ant konpoze 5 ak arbutin. Konklizyon nou yo fòtman sijere ke C. Amanda se yon sous pwomèt nan inibitè tirozinaz natirèl yo anpeche melanogenesis epi yo ta ka itilize kòm yon kosmetik blanchiman.

Mot: Curcuma amada ● Konpoze aktif ● NMR ● Anti-tirozinaz ● Antimelanogenic

Cniche Cistanche pou anti-tirozinaz

Entwodiksyon

Melanin se pigman nwa nan cheve ak po epi li esansyèl pou pwoteje po kont radyasyon UV. Pigman an pwodui pa selil melanosit, ki prezan nan kouch fondamantal dèrm la atravè yon pwosesis fizyolojik ki rele melanogenesis. Sepandan, pwodiksyon anòmal nan melanin lakòz maladi dèrmatolojik tankou freckles, melasma, lentigins, tach laj, efelid, ak ipèpigmantasyon apre enflamatwa [1]. Nan endistri manje a, ipèpigmantasyon fwi ak legim mennen nan pèt enpòtan nan bon jan kalite nitrisyonèl ak valè sou mache [2]. Melanogenesis ka kontwole pa anpeche aktivite tirozinaz, yon anzim ki limite vitès pou sentèz melanin nan mamifè, plant, mikwo-òganis, ak fongis [3]. Se poutèt sa, anpèchman nan aktivite tirozinaz anpeche ipèpigmantasyon ak mennen nan blanchiman po. Li kontwole tou bon jan kalite legim ak fwi lè li kontwole mawon an endezirab nan legim ak manje. Pifò ajan eklere po, tankou idrokinòn, asid azelaik, asid kojik, ak arbutin se inibitè tirozinaz ki pisan. Sepandan, yo gen plizyè efè endezirab tankou sitotoksisite, okronoz, vitiligo, iritasyon, dekale po, ak wouj [4]. Anplis, asid kojik ak -arbutin demontre estabilite fòmilasyon pòv ak kapasite pénétration po, ak efikasite ki ba nan vivo [5]. Gen kèk sèl mèki òganik ak inòganik ki gen efè anti-melanogenic epi yo itilize nan ajan blanchi po yo. Sepandan, atravè absòpsyon kutane, konpoze mèki ka lakòz efè toksik tankou dekolorasyon po, domaj ren, reyaksyon alèjik, ak sikatris [6]. Se konsa, ankèt la nan mwens toksik ak pi efikas inibitè tirozinaz bezwen. Timerik (fanmi: Zingiberaceae; genus: Curcuma), yon plant medsin tradisyonèl ki grandi sitou nan rejyon twopikal ak subtropikal nan pwovens Lazi ak Lafrik, gen yon gwo spectre nan fonksyon famasi. Li te tradisyonèlman itilize nan rituèl pre-matrimonial pou dè milye ane nan subcontinent Endyen an kòm yon ajan eklere po. Yo kwè ke timerik amelyore po a lè li diminye kwasans cheve nan figi, akne, ak aje po [7, 8]. Se poutèt sa, pwodwi swen pou po ki konplete ak timerik yo disponib nan mache a [9]. Yo te idantifye plis pase 70 espès/varyete timerik ak diferan pwopriyete chimik ak famasi. Sepandan, gen yon mank de enfòmasyon syantifik sou pwopriyete yo anti-melanogenic nan diferan espès timerik ak potansyèl konpozan aktif prezan nan timerik. Curcuminoids yo se prensipal konpoze aktif ki responsab pou majorite aktivite byolojik timerik yo. Curcuminoids gen potansyèl nan cosmeceuticals kòm yonantioksidan, anti-enflamatwa,ak ajan eklere po [7, 8]. Sepandan, nan yon etid anvan, nou te jwenn varyasyon enpòtan nan kontni kurkuminoid nan timerik, ak kèk espès (C. amada, C. zedoaria) pa t 'menm genyen kurkumin [10]. Nou rapòte tou antifonjik la,antioksidan, ak aktivite vazodilatwa nan diferan espès ak varyete timerik [10-13]. Se poutèt sa, etid sa a te vize evalye efè yo nan espès diferan nan timerik, sètadi, C. xanthorrhiza, C. aromatica, C. amada, ak C. zedoaria, sou anzim nan tirosinaz ak idantifye konpoze chimik espesifik ki responsab pou la.anti-tirozinazaktivite. Nou menm tou nou evalye aktivite inhibitor tirozinaz la ak efè anti-melanogenic nan pirifye konpoze aktif sou sentèz melanin nan selil melanom B16F10.

Rezilta ak diskisyon

Pami kat espès timerik diferan yo, ekstrè MeOH nan C. amada te montre efè a maksimòm djondjon tirozinaz inhibitor ak yon valè IC50 nan 53.4 ± 2.7, ki te swiv pa C. xanthorrhiza, C. aromat, ak C. zedoaria (Fig. 1a). Kurkumin se pi gwo eleman aktif nan timerik (Curcuma longa) epi li posede yon pakèt aktivite byolojik, ki gen ladan aktivite anti-kansè, anti-enflamatwa, anti-bakteri, anti-chanpiyon, ak antioksidan. Li te montre 75-pli plis aktivite anti-tirozinaz pase arbutin ak asid kojik [14]. Sepandan, nan yon etid anvan, nou te rapòte ke te gen varyasyon enpòtan nan kontni kurkumin nan diferan espès timerik [10].

Kurkumin te prezan nan C. xanthorrhiza ak C. aromat men absan nan C. zedoaria ak C. amada [10]. Konklizyon yo enteresan nan etid sa a se ke, san yo pa kurkumin, C. amada te montre gwo aktivite inhibition tirozinaz. Rezilta sa a endike ke dwe gen kèk konpoze aktif nan C. amada atribiye nan efè fò anti-tirozinaz li yo. Aktivite anti-tirosinaz C. xanthorrhiza ak C. aromatica ta ka akòz sa ki nan kurkumin yo. Sepandan, nou pa t 'kapab eskli posibilite pou prezans nan lòt konpoze. Ekstrè MeOH nan C. amada te fraksyon ak dlo, n-hexane, ak EtOAc. Pami twa fraksyon sa yo, EtOAc te montre yon efè inhibition siyifikativman pi fò pase dlo ak n-hexane (Fig. 1b). Se poutèt sa, pati EtOAc la te pran pou plis fraksyon. Aktivite anti-tirozinaz nan sis fraksyon [n-hexane:EtOAc; 100:0 (F1), 80:20 (F2), 60:40 (F3), 40:60 (F4), 20:80 (F5), ak 0:100 (F6)] jwenn soti nan pati EtOAc nan C. amada yo te konpare. Pami sis fraksyon sa yo, F6 ak F3 te montre siyifikativman pi wo aktivite anti-tirozinaz pase lòt yo (figi 1c). Lè sa a, estrikti chimik senk konpoze ki soti nan fraksyon F3 ak F6 yo te idantifye dapre spectre 1 H NMR ak 13C NMR yo. Done pik yo te jan sa a:

Konpoze 1:

San koulè zegwi fòm kristal; UV λmax: nm 234, 285. ESI-MS (plis) m/z: 247.3 [M plis H] plis, 229.4 [M plis H-H2O] plis. 1H-NMR (CD3OD): δ 7.22 (1H, s, H-12), 5.59 (1H, br d, J=12 Hz, H{{20}}) , 3.99 (1H, s, H-5), 3.85 (1H, d, J=16 Hz, H{-9a), 3.69 (1H, d, J=16 Hz, H-9b), 2.57 (1H, dddd, J=13, 13, 12, 4 Hz, H{-2a), 2.26 (1H, m, H{{46) }}a), 2.20 (1H, m, H{{50}}b), 2.09 (3H, s, H{-13), 1.57 (3H, s, H-15), 1.32 (1H, ddd, J=13, 13, 4 Hz, H{-3 b), 1.28 (3H, s, H{-14). 13C-NMR (CD3OD): δ 194.2 (C-6) 160.2 (C{-8), 139.7 (C12), 132.8 (C{-1), 132.0 (C{-10 ), 124.3 (C{-11), 123.0 (C{-7), 67.8 (C{-5), 65.2 (C{-4), 42.5 (C{-9 ), 39.0 (C-3), 25.4 (C{-2), 15.7 (C{-15), 15.4 (C{-14), 10.7 (C{-13 ) (Done Siplemantè). Soti nan konparezon an nan done sa yo ak sa yo rapòte nan literati a [15, 16], yo te idantifye sibstans la kòm zederone (Fig. 2). Li se yon sesquiterpene, te deja izole nan C. amada ak C. zedoaria e li te rapòte pou efè analgesic, anti-enflamatwa, anti-chanpiyon ak sitotoksik [12, 17-20].

Konpoze 2:

lwil san koulè; UV λmax: nm 243, 280. ESIMS ( plis ) m/z: 231.0 [M plis H] plis , 223.3 [M plis H-H2O] plis . 1H-NMR (CD3OD): δ 7.16 (1H, s, H-12), 5.83 (1H, s, H-5), 5.21 (1H, dd, J=12 Hz , 5 Hz, H-1), 3.73 (1H, d, J=16 Hz, H{-9a), 3.63 (1H, d, J=16 Hz, H -9b), 2.45 (1H, ddd, J=15 Hz, 11 Hz, 4 Hz, H{-3a), 2.31 (1H, m, H{-2a ), 2.20 (1H, dddd, J=12 Hz, 12 Hz, 12 Hz, 4 Hz, H{-2b), 2.06 (3H, s, H{{57} }), 1.92 (3H, s, H-14), 1.89 (1H, m, H{-3b), 1.25 (3H, s, H{-15). 13C-NMR (CD3OD): δ 191.8 (C-6), 158.6 (C{-8), 147.6 (C{-4), 140.0 (C{-12), 136.1 ( C-10), 133.3 (C{-5), 132.0 (C{-1), 124.6 (C{-11), 123.1 (C{-7), 42.4 ( C-9), 41.4 (C{-3), 27.3 (C{-2), 19.3 (C{-14), 15.9 (C{-2), 9.9 ( C-13) (Done Siplemantè). Soti nan konparezon an nan done sa yo ak sa yo rapòte nan literati a [21], yo te idantifye sibstans la kòm furanodienone (Fig. 2). Li te izole nan Lindera pulcherrima (Nees.) Benth. ansyen zen. f [22], Curcuma zedoaria [19], Curcuma amada [12] ak Curcuma wenyujin [23]. Li se yon furanosesquiterpenoid ki montre anti-chanpiyon [12], anti-enflamatwa [19], anti-kansè [24], aktivite anti-bakteri ak anti-oksidan [22].

Konpoze 3:

Lwil jòn; UV λ max: nm 275. ESIMS (plis) m/z: 383.3 [M plis Na] plis , 361.3 [M plis H] plis , 343.2 [M plis H-H2O] plis . 1H-NMR (CD3OD): δ 6.99 (2H, dd, J=9, 2 Hz, H-2´´, -6´´), 6.67 (2H, d, J=9 Hz, H{-3´´, -5´´), 6.52 (2H, s, H-2´, -6´), 4.63 (1H , br b, J=12 Hz, H-1), 4.21 (1H, m, H-3), 3.89 (1H, m, H-5), 3.85 ( 3H, s, 5'-OCH3), 2.63 (2H, m, H-7), 1.82 (1H, m, H{-2a), 1.78 (1H, m, H{{6{ {107}}}}a), 1.73 (1H, m, H-2b), 1.69 (1H, m, H{-4a), 1.68 (1H, m, H{{72} }b), 1.53 (1H, m, H-4b). 13C-NMR (CD3OD): δ 156.3 (C-4''), 149.5 (C{-5'), 146.4 (C{-3'), 134.5 (C{-4 ´), 134.44 (C-1´), 134.41 (C{-1´´), 130.4 (C{-2´´, {-6´´), 116.1 (C-2´´ {104}}´´, -5´´), 108.0 (C{-2'), 102.8 (C{-6'), 75.2 (C{-1), 72.6 ( C-5), 65.6 (C3), 56.6 (5'-OCH3), 41.1 (C{-2), 39.5 (C{-4), 39.2 (C{-6) 31.8 (C-7) (Done Siplemantè). Soti nan konparezon done sa yo ak sa yo rapòte nan literati a [25], yo te idantifye sibstans la kòm 1,5-epoxy-3-hydroxy-1-(3,4-dihydroxy{ {145}} methoxyphenyl)-7-({4-hydroxyphenyl) heptanes (Fig. 2). Li te izole nan rizom yo nan Zingiber officinale, ak pwopriyete antioksidan yo te etidye [25].

Konpoze 4:

Siwo gluan; UV λ max: nm 281. ESIMS (plis) m/z: 385.3 [M plis Na] plis , 363.3 [M plis H] plis , 345.2 [M plis H-H2O] plis . 1H-NMR (CD3OD): δ 6.75 (1H, d, J=2 Hz, H{-2'), 6.68 (1H, d, J=8 Hz, H{{21 }}´), 6.64 (1H, J=8 Hz, H-5´´), 6.61 (1H, J=2 Hz, H-2´´), 6.60 (1H, dd, J=8, 2 Hz, H-6´), 6.49 (1H, dd, J=8, 2 Hz, H-6´´), 3.80 (3H, s, 3´-OCH3), 3.73 (2H, m, H-3, -5), 2.64-2.47 (4H, m, H{{59 }}a, -1b, -7a, -7b), 1.71-1.65 (4H, m, H-2a, {{ 68}}b, -6a, -6b), 1.61 (2H, m, H-4a, -4b). 13C-NMR (CD3OD): δ 148.8 (C-3'), 146.1 (C{-3''), 145.4 (C{-4'), 144.2 (C{-4 ´´), 135.24 (C-1´ oswa C-1´´), 135.22 (C-1´ oswa C{-1´´), 121.8 (C{{101 }}´), 120.6 (C-6´´), 116.5 (C{{-2´´), 116.3 (C{-5´´), 116.1 (C{-5´´ ), 113.2 (C-2´), 70.94 (C-3 oswa C-5), 70.92 (C{-3 oswa C{-5), 56.4 (3 ´-OCH3), 44.9 (C-4), 40.8 (C{-2, -6), 32.3 (C{-1), 32.1 (C{-7) (Done Siplemantè). Soti nan konparezon done sa yo ak sa yo rapòte nan literati a [26, 27], yo te idantifye sibstans la kòm lwil 3,5-dihydroxy-1-(3,4-dihydroxyphenyl){{150 }} (4-idwoksi{-3-metoksifenil) heptanes (Fig. 2). Li te izole nan rizom Tacca chantrieri [26] ak Curcumalonga L. [27]. Yo se diarylheptanoid ki montre sitotoksik [26] ak aktivite anti-timè [27].

Konpoze 5:

lwil san koulè; UV λ max nm: 279. ESI-MS (plis) m/z: 413.3 [M plis Na] plis, 391.3 [M plis H] plis, 373.3 [M plis HH2O] plis. 1H-NMR (CD3OD): δ 6.76 (1H, s, H-2´´), 6.67 (1H, d, J=8 Hz, H{{20}} ´´), 6.21 (1H, dd, J=8, 2 Hz, H{-6´), 6.53 (2H, s, H-2´, -6´´ ), 4.63 (1H, br d, J=12 Hz, H-1), 4.21 (1H, m, H-3), 3.83 (3H, s, 5'-OCH3) , 3.78 (3H, s, 3-OCH3), 2.65 (2H, m, H{-7), 1.84 (1H, m, H{-2a), 1.79 (1H, m, H-6a), 1.74 (1H, m, H{-2b), 1.69 (1H, m, H{-4a), 1,68 (1H, m, H{{ 75}}b), 1.53 (1H, m, H-4b). 13C-NMR (CD3OD): δ 149.5 (C-5'), 148.8 (C{-3''), 146.4 (C{-3'), 145.4 (C{-4 ´´), 135.3 (C-1´), 135.2 (C{-1´´), 134.4 (C{-4´), 121.9 (C{-6´´), 116.1 (C-5´´), 113.4 (C{-2´´), 108.0 (C{-2´), 102.7 (C{-6´), 75.2 (C{{ {121}}), 72.5 (C{-5), 65.6 (C{-3), 56.6 (5´-OCH3), 56.3 (3´´-OCH3), 41.2 (C{{140} }), 39.4 (C-4), 39.3 (C-6), 32.2 (C{-7) (Done Siplemantè). Soti nan konparezon done sa yo ak sa yo rapòte nan literati a [20], yo te idantifye sibstans la kòm 1,5-epoxy-3-hydroxy-1-(3,4-dihydroxy{ {157}}metoksifenil)- 7-(4-idwoksi-3-metoksifenil) heptanes (Fig. 2) epi pa gen okenn enfòmasyon sou aktivite byolojik yo. Nou izole konpoze 3, 4, ak 5 pou premye fwa nan C. amada. Tout konpoze yo te montre aktivite inhibitor kont tirozinaz djondjon

Senk konpoze, sètadi, zederone, furanodienone, 1,5-epoxy-3-idwoksi-1-(3,4-dihydroxy-5-metoksifenil)- 7-( 4-hydroxyphenyl) heptanes, 3,5-dihydroxy-1-(3,4-dishy hydroxyphenyl)-7-({4-idroksi-3- metoksifenil) eptan ak 1,5-epoxy-3-idwoksi-1-(3,4-dihydroxy-5-metoksifenil)- 7-(4- idroksi-3-metoksifenil) eptan, yo te izole nan fraksyon F3 ak F6. Konpoze izole yo te montre aktivite anti-tirozinaz nan yon fason ki depann de konsantrasyon. Pami senk konpoze yo, konpoze 4 te montre siyifikativman pi fò aktivite anti-tirozinaz pase arbutin. Pa te gen okenn diferans enpòtan nan efè anti-tirozinaz ant konpoze 5 ak arbutin (Fig. 3). Efè konpoze izole a sou viabilite selilè yo te etidye sou selil B16F10 melanom murin yo. Selil yo te trete ak 50, 100, 200, ak 400 μM konsantrasyon nan konpoze an pou 48 èdtan. Konpoze izole yo pa t montre efè sitotoksik jiska 200 μM, sepandan, apeprè senkant pousan nan lanmò selilè yo te obsève nan tout ka yo nan konsantrasyon 400 μM (Fig. 4). Se konsa, konsantrasyon jiska 200 μM yo te itilize pou evalye antityrosinase intraselilè ak efè anti-melanogenic yo.

Pou detèmine aktivite anti-melanogenic ak anti-tirozinaz nan konpoze izole yo, efè yo sou kontni melanin ak aktivite tirozinaz yo te evalye nan selil melanom B16F10. Jan yo montre nan Tablo 1, konpoze izole nou yo depann de dòz la anpeche kontni melanin entraselilè ak aktivite tirozinaz. Konpoze 4 te siyifikativman pi fò pase arbutin dwòg kontwòl pozitif nan tou de efè inhibition melanin ak tirosinaz. Pa te obsève diferans enpòtan ant konpoze 5 ak arbutin. Kòm selilè tirozinaz amelyore pwodiksyon melanin, rediksyon nan aktivite tirozinaz se yon estrateji efikas pou devlopman ajan anti-melanogenic. Pou sa, nou evalye pwopriyete inhibitor aktivite tirozinaz entraselilè ak melanogenesis nan selil melanom B16F10. Menm jan ak rezilta yo nan aktivite inhibition tirozinaz djondjon, konpoze izole yo anpeche aktivite tirozinaz entraselilè ak melanogenesis nan yon fason ki depann de dòz la. Efè anti-tirosinaz nan konpoze izole yo te lakòz pwopriyete anti-melanogenic yo. Lòd anti-tirosinaz ak aktivite anti-melanogenic nan konpoze sa yo te konpoze 4> arbutin> 5> 2> 3> 1. Valè IC50 kalkile nan konpoze 4 te siyifikativman pi ba pase sa yo ki nan arbutin. Efikasite konpoze 4 la te 1.9- a 5-pliye pi wo pase lòt kat konpoze yo. Konpoze 5 te montre tou gwo aktivite anti-tirozinaz ki te konparab ak sa ki nan arbutin. Rezilta nou yo te endike ke konpoze 4 ak 5 ta ka itilize kòm potansyèl inhibiteur natirèl tirozinaz ak pwodui kosmetik blanchi po. Yo pwopoze estrès oksidatif pou patisipe nan mekanis ki kache nan surpwodiksyon melanin [28]. Se poutèt sa, yo te envestige wòl antioksidan nan yon pakèt maladi po, ki gen ladan fotokarsinogenesis oswa melanom [9]. Nou menm ak lòt moun te deja rapòte pwopriyete antioksidan C. amada [13, 29] ki ta ka responsab efè antimelanogenic konpoze izole yo. Nan etid sa a, nou detekte efè inhibition nan konpoze izole yo sou sentèz melanin entraselilè ak aktivite tirozinaz pwovoke pa -MSH. Kidonk, konpoze izole nou yo ka itilize kòm ajan nan pwodui kosmetik fonksyonèl pou devlope tretman efikas pou blanchi po.

Konklizyon

Nou sijere fòtman ke C. amada ka jwe yon wòl enpòtan kòm yon inibitè tirozinaz efikas. C. amada ak konpoze bioaktif li yo ta ka itilize nan endistri kosmetik kòm ajan blanchi natirèl, endistri manje a kòm ajan antibrowning, ak jaden medikal pou tretman ipèpigmantasyon. Men, plis etid yo nesesè pou mennen ankèt sou efè anti-melanogenic konpoze izole yo nan modèl bèt.

Materyèl ak metòd

Pwodwi chimik yo

Tirozinaz ki soti nan djondjon ak arbutin yo te achte nan men Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). L-Tyrosine te soti nan Wako pi bon kalite endistri chimik Ltd (Osaka, Japon). Methanol (MeOH), etil acetate (EtOAc), ak n-hexane te achte nan men Nacalai Tesque (Kyoto, Japon). Jèl silica (63-200 μm, Kanto Chemical Co Tokyo, Japon) ak MeOH-d4 (CD3OD, Merck KGaA, Almay) te achte.

Preparasyon materyèl plant Kat diferan espès timerik sètadi C. xanthorrhiza, C. aromatica, C. amada, ak C. zedoaria yo te kiltive nan yon jaden nan tè gri (sab koryas 3.6 pousan, sab amann 30.9 pousan). , limon 24.3 pousan, ajil 32.8 pousan, pH 7.4, NO{{10}}N 0.07 pousan, NH{4-N 0.08 pousan, P 4.6 ng/g, K 42.9 ng/g) nan Subtropical Field Science Center, University of Ryukyus, Okinawa, Japon. Tanperati mwayèn chak mwa, imidite, ak presipitasyon pandan peryòd kiltivasyon an te 17-29 degre, 61-83 pousan, ak 22-369 mm, respektivman. Yo te bay pratik agronomik komen tankou angrè ak irigasyon. Rizom yo te rekòlte lè tout lans yo nan espès yo cheche nèt. Rizòm yo te lave, tranche, epi seche nan yon fou lè cho a 50 degre pou 72 èdtan.

Ekstraksyon echantiyon yo

Ekstraksyon yo te pote soti nan fonn diferan poud timerik la (300 g) nan MeOH (3 L) nan tanperati chanm (25 degre) ak presyon atmosferik epi kenbe pou de jou ak vibran mayetik kontinyèl yo anpeche oksidasyon pa lè ak pwoteksyon kont limyè solèy la. Konpoze sòlvan-idrosolubl yo te filtre lè l sèvi avèk papye filtre (No 2, Advantec, Tokyo Roshi Kaisha Ltd., Tokyo, Japon). Solvang fre (MeOH) yo te ajoute nan materyèl plant itilize a epi pwosesis la te repete twa fwa. Solisyon yo filtre ki gen konpoze plant yo te cheche pa yon evaporateur rotary anba presyon redwi a 40 degre. Yo te kenbe pwodiksyon an nan tout ekstrè nan frijidè a nan 4 degre pou analiz eksperimantal.

Tirozinaz anpèchman tès

Yo te detèmine aktivite anpèchman tirozinaz dapre metòd anvan an [30], ki mezire konsantrasyon DOPA chrome ki te pwodwi pa aksyon anzim tirozinaz sou substra tirozin. Yon ti tan, yo te fonn echantiyon tès la nan 80 pousan MeOH pou jwenn diferan konsantrasyon (25, 50, ak 100 µg/mL). Plak 96-byen an te mete nan lòd sa a: 120 μL tanpon fosfat (20 mM, pH 6.8), 20 μL echantiyon an, ak 20 μL tirozinaz djondjon (500 U/mL nan 20 mM fosfat. tanpon). Apre enkubasyon pou 15 min nan 25 degre, yo te kòmanse reyaksyon an lè w ajoute 20 μL nan 0.85 mM L-tirozin solisyon epi li te enkube pou 10 minit nan 25 degre. Aktivite Tyrosinase te detèmine pa mezire absorpsyon nan 470 nm lè l sèvi avèk yon lektè mikwoplak (Biotek Powerwave XS2 spectrophotometer). Arbutin te itilize kòm yon kontwòl pozitif, tandiske 80 pousan MeOH te itilize kòm yon kontwòl negatif. Pousantaj nan anpèchman tirozinaz te kalkile jan sa a:

kote C se absorpsyon kontwòl negatif la, B se absorpsyon vid la, ak S se absorpsyon echantiyon tès la.

Izolasyon nan konpoze bioaktif soti nan ekstrè a brit nan Curcuma amada

Lè ou konsidere rezilta yo nan kat ekstrè timerik yo, C. amada te montre siyifikativman pi wo aktivite anti-tirozinaz pase lòt yo. Se poutèt sa, pirifikasyon byoassay-gide nan konpoze aktif soti nan ekstrè a brit nan C. amada te fèt. Pou idantifye konpoze anti-tirosinaz yo, yo te fè fraksyon nan ekstrè brit C. amada jan sa dekri nan Fig. 5. Ekstrè brit la te dilye ak dlo distile ak Lè sa a, ekstrè ak n-hexane, ki te swiv pa EtOAc. Lè sa a, volim egal nan chak sòlvan ak solisyon ekstrè brit yo te melanje pa souke pou 3 minit nan yon antonwa separasyon. Tout fraksyon yo te konsantre nan sechrès pa yon evaporateur rotary nan 40 degre. Aktivite anti-tirozinaz twa fraksyon sa yo te detèmine dapre pwosedi ki anwo a. Kòm fraksyon EtOAc te montre aktivite anti-tirozinaz ki pi wo a, li te chwazi pou izolasyon ak pirifikasyon konpoze bioaktif la. Fraksyon EtOAc aktif la te evapore nan sechrès epi li te sibi kwomatografi sou yon kolòn jèl silica (75 g) (30 × 3 cm). Elisyon te fèt lè l sèvi avèk n-hexane ak EtOAc ak ogmante kantite EtOAc [100:0 (F1), 80:20 (F2), 60:40 (F3), 40:60 (F4), 20:80 (F5) , ak 0:100 (F6)]. Aktivite anti-tirozinaz nan sis fraksyon sa yo te fèt dapre pwosedi ki anwo a, epi pifò aktivite yo te jwenn nan F3 ak F6. Fraksyon F3 ak F6 yo te pirifye pa C18 ranvèse-faz HPLC (COSMOSIL 5C18-AR-II; Nacalai Tesque, Inc., Kyoto, Japon) ekipe ak dlo ak asetonitrile kòm faz mobil ak yon pousantaj koule 2.5 mL. min-1, detekte nan 280 nm.

Twa pik soti nan F3 eliye nan 9.55, 13.66, ak 16.47 min, ak kat pik soti nan F6 elite nan 11.56, 12.20, 12.75, ak 15.{03 min kòm sibstans blan san koulè, nan ki inhibitor. aktivite te detekte nan senk fraksyon pik eliye nan 9.55 ak 16.47 min soti nan F3 ak 11.56, 12.75, ak 15. 0 3 min (Done siplemantè) soti nan F6 (Fig. 5). Konpoze izole yo (~10 mg) yo te fonn nan MeOH-d4 ak Lè sa a, sibi analiz espèk. Yo te anrejistre espèk nikleyè sonorite mayetik (NMR) sou espektromèt BRUKER NMR (500 MHz pou 1 H ak 125 MHz pou 13C) nan tanperati chanm. Chanjman chimik (δ) yo te anrejistre kòm pati pa milyon (ppm) parapò ak tetramethylsilane (TMS) kòm estanda entèn la. Eksperyans mas spèktrometri yo te fèt sou yon Waters Mass Spectrometer lè l sèvi avèk yon sond iyonizasyon electrospray (ESI - MS) nan kondisyon enstrimantal sa yo: Kolòn: COSMOSIL 5C18-AR-II, (2 × 150) mm. Solvants A: Dlo (0.1 pousan asid fòmik), Solvan B: asetonitrile, pousantaj koule: 4 mL/min, volim piki: 100 µL, tan kouri: 35 min, pwogram tan pou F3: 75 pousan B (0 min) → 75 pousan B (20 min) → 100 pousan B (20.1 min) → 100 pousan B (27 min) → 75 pousan B (27.1 min) → 75 pousan B (35 min). Pwogram tan pou F6: 45 pousan B (0 min) → 45 pousan B (14 min) → 100 pousan B (14.1 min) → 100 pousan B (20 min) → 45 pousan B (20.1 min) → 45 pousan B (25 min). Mòd ponp: binè gradyan. Detay fou: CTO-20AC, tanperati 40 degre. Mòd iyonizasyon MS: ES (plis), vòltaj kapilè: 4.0 kV, vòltaj kòn: 20 V, tanperati sous: 120 degre, tanperati desolvasyon: 350 degre, koule gaz kòn: 100 L / h, koule gaz desolvasyon: 800 L /h (Done siplemantè).

Aktivite anti-tirozinaz nan konpoze izole yo

Konpoze izole yo te fonn nan MeOH nan konsantrasyon 5, 10, 30, 50, 100, ak 200 μM pou chak konpoze. Aktivite anti-tirozinaz te detèmine lè l sèvi avèk pwosedi ki dekri anvan an.

Anpèchman entraselilè nan tirozinaz ak melanogenesis pa konpoze izole yo

Kilti selilè

Selil melanom B16F10 yo te kiltive nan mwayen Eagle's modifye Dulbecco a (DMEM) ki te konplete ak 10 pousan serom fetal bovine chalè inaktive (FBS) ak 1 pousan penisilin (10,000 U/mL)/streptomycin (100 ug/mL) nan 37 degre nan yon atmosfè imidite ki gen 5 pousan CO2.

Viabilite selilè

Selil B16F10 yo te plake nan yon dansite 5 × 104 selil/byen nan yon plak 96-byen. Apre 24 èdtan, selil yo te ekspoze a divès kalite konsantrasyon nan konpoze izole a ak enkubasyon pou yon lòt 48 èdtan nan 37 degre. Apre enkubasyon, vibilite selil yo te detèmine pa tès MTS la. Ven mikrolit solisyon MTS yo te ajoute ak enkube pou 60 min. Apre enkubasyon, yo te detèmine absorbans selil yo nan 490 nm lè l sèvi avèk yon lektè microplate (Benchmark Plus).

Anti-tirozinaz ak aktivite anti-melanogenic nan konpoze yo izole

Detèminasyon kontni melanin selilè ak tès aktivite tirozinaz yo te fèt jan sa te dekri anvan [31], ak modifikasyon ti tay. Selil melanom B16F10 yo te plake nan yon dansite 5 × 104 selil/pi nan yon plak 96-byen. Apre 24 èdtan, selil yo te ekspoze a divès konsantrasyon nan konpoze izole a oswa arbutin. Apre 1 èdtan, yo te ajoute 100 nM òmòn-melanocyte-stimulating (-MSH), epi selil yo te enkube pou yon lòt 48 èdtan nan 37 degre. Pou etid aktivite anti-tirosinaz la, selil yo te lave ak tanpon fosfat glas-frèt ak lysed ak tanpon fosfat (pH 6.8) ki gen 1 pousan Triton-X (90 μL / byen). Plak yo te jele nan -80 degre pou 30 minit. Apre dekonjle ak melanje, yo te ajoute 10 μL nan 1 pousan L-DOPA nan chak pi. Apre enkubasyon nan 37 degre pou 2 èdtan, yo te mezire absòbe a nan 490 nm. Pou tès kontni melanin, selil yo te lave de fwa ak tanpon fosfat ak Lè sa a, fonn nan 100 μL NaOH (1 N) ki gen 10 pousan DMSO. Echantiyon yo te enkube nan 80 degre pou 1 èdtan ak melanje yo solubilize melanin. Dansite optik omojene melanje a te mezire nan 490 nm.

Analiz estatistik

Rezilta yo eksprime kòm mwayèn ± SEM. Diferans estatistik ant de mwayen yo te evalye pa Tès Elèv la. Konparezon miltip yo te fèt lè l sèvi avèk yon analiz yon sèl-fason nan divèjans ki te swiv pa tès Bonferroni la. Diferans yo te konsidere kòm enpòtan nan P <>

Sa a se pwodwi anti-fatig nou an! Klike sou foto a pou plis enfòmasyon!

Referans

1. Solano F, Briganti S, Picardo M, Ghanem GH. Ajan Hypopigmented: yon revizyon ajou sou aspè byolojik, chimik ak klinik. Pigman selil Res. 2006;19:550–71.

2. Loizzo MR, Tundis R, Menichini F. Inibitè tirozinaz natirèl ak sentetik kòm ajan antibrowning: Yon aktyalizasyon. Compr Rev Food Sci Food Saf. 2012;11:378–98.

3. Lin YS, Chen HJ, Huang JP, Lee PC, Tsai CR, Hsu TF, et al. Sinetik nan aktivite inhibitor tirozinaz lè l sèvi avèk ekstrè fèy vinifera Viti a. Biomed Res Int. 2017:5232680.

4. Manini P, Napolitano A, Westerhof W, Riley PA, d' Ischia M. Yon ortho-quinone reyaktif ki te pwodwi pa oksidasyon tirosinaz katalize nan ajan depigmantasyon po a monobenzone: reyaksyon pwòp tèt ou ak thiol-konjigezon ak enplikasyon posib pou melanosit. toksisite. Chem Res Toxicol. 2009;13:1398–405.

5. Couteau C, Coiffard L. Apèsi sou ajan blanchiman po: dwòg ak pwodui kosmetik. Kosmetik. 2016;3:27.

6. Al-Saleh I, Shinwari N, El-Doush I, Billedo G, Al-Amodi M, Khogali F. Konparezon nan nivo mèki nan divès tisi nan sourit albino ak pigman trete ak de mak diferan nan mèki po-eklèjman krèm. Biometals: Int J wòl Met ions Biol, Biochem, Med. 2004;17:167–75.

7. Gopinath H, Karthikeyan K. Turmeric: yon kondiman, kosmetik ak gerizon. Indian J Dermatol Venereol Leprol. 2018;84:16–21.

8. Vaughn AR, Branum A, Sivamani RK. Efè timerik (Curcuma longa) sou sante po: yon revizyon sistematik nan prèv klinik la. Phytother Res. 2016;30:1243–64.

9. Baliga MS, Katiyar SK. Chimyoprevansyon nan fotokarsinogenesis pa seleksyon botanik dyetetik. Photochem Photobio Sci. 2006;5:243–53.

10. Akter J, Hossain MA, Sano A, Takara K, Islam MZ, Hou DX. Aktivite antifonjik nan divès espès ak tansyon timerik (Curcuma spp.) Kont Fusarium Solani Sensu Lato. Pharm Chem J. 2018;52:292–7.

11. Akter J, Islam MZ, Hossain MA, Kawabata S, Takara K, Nguyen H, et al. Endothelium-endepandan ak kalsyòm chanèl-depandan detant nan atè a serebral porsin pa diferan espès ak tansyon nan timerik. J Tradit Complement Med. 2018;9:297–303.

12. Akter J, Takara K, Islam MZ, Hossain MA, Sano A, Hou DX. Izolasyon ak elisid estriktirèl nan konpoze antifonjik soti nan Curcuma amada. Azyatik Pac J Trop Med. 2019;12:123–9.

13. Akter J, Hossain MA, Takara K, Islam MZ, Hou DX. Aktivite antioksidan nan diferan espès ak varyete timerik (Curcuma spp): Izolasyon nan konpoze aktif. Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharm. 2019;215:9–17.

14. Khunlad P, Tundulawessa Y, Supasiri T, Chutrtong W. Tyrosinase aktivite inhibition nan kurkuminoid soti nan poud lan nan timerik (Curcuma longa Linn.). J SWU Sci. 2008;24:125–39.

15. Giang PM, Pitit PT. Izolasyon sesquiterpenoids soti nan rizom yo nan Vietnamese Curcuma aromat Salisb. J Chem. 2000;38:96–9.

16. Asem SD, Laitonjan SW. Ankèt sou relasyon estrikti-nonlinearite zederone ki soti nan rizòm Curcuma caeca Roxb. Ind J Chem. 2012;51:1738–42.

17. Faiz Hossain C, Al-Amin M, Rahman KM, Sarker A, Alam MM, Chowdhury MH, et al. Prensip analgesic soti nan Curcuma amada. J Etnopharmacol. 2015;163:273–7.

18. Ahmed Hamdi OA, Syed Abdul Rahman SN, Awang K, Abdul Wahab N, Looi CY, Thomas NF, Abd Malek SN. Konstitiyan sitotoksik ki soti nan rizom Curcuma zedoaria. Sci World J. 2014;2014:321943.

19. Makabe H, Maru N, Kuwabara A, Kamo T, Hirota M. Antiinflammatory sesquiterpenes soti nan Curcuma zedoaria. Nat Prod Res. 2006;20:680–5.

20. Kikuzaki H, Nakatani N. Cyclic diarylheptanoids soti nan rizom nan Zingiber officinale. Fitochimi. 1996;43:273–7.

21. Dekebo A, Dagne E, Sterner O. Furanosesquiterpenes soti nan Commiphora sphaerocarpa ak adiltè ki gen rapò ak lami vre. Fitoterapia. 2002;73:48–55.

22. Joshi SC, Mathela CS. Aktivite antioksidan ak anti-bakteri nan lwil esansyèl fèy ak furanodienone konstitiyan li yo ak curzerenone soti nan Lindera pulcherrima (Nees.) Benth. ansyen zen. f. Pharmacogn Res. 2012;4:80–4.

23. Yang FQ, Li SP, Zhao J, Lao SC, Wang YT. Optimizasyon kondisyon GC-MS ki baze sou rezolisyon ak estabilite analit pou detèminasyon similtane nèf sesquiterpenoids nan twa espès rizom Curcuma. J Pharm Biomed Anal. 2007;43:73–82.

24. Li YW, Zhu GY, Shen XL, Chu JH, Yu ZL, Fong WF. Furanodienone anpeche pwopagasyon selilè ak siviv lè li elimine siyal ER nan selil MCF-7 kansè nan tete imen yo. J Cell Biochem. 2011;112:217–24.

25. Tao QF, Xu Y, Lam RY, Schneider B, Dou H, Leung PS, et al. Diarylheptanoids ak yon monoterpenoid ki soti nan rizom yo nan Zingiber officinale: pwopriyete antioksidan ak cytoprotective. J Nat Prod. 2008;71:12–17.

26. Yokosuka A, Mimaki Y, Sakagami H, Sashida Y. Nouvo diarylheptanoids ak glikozid diarylheptanoid ki soti nan rizom Tacca chantrieri ak aktivite sitotoksik yo. J Nat Prod. 2002;65:283–9.

27. Jiang JL, Jin XL, Zhang H, Su X, Qiao B, Yuan YJ. Idantifikasyon konstitiyan antitumor nan kurkuminoid soti nan Curcuma longa L. ki baze sou relasyon konpozisyon-aktivite. J Pharm Biomed Anal. 2012;70:664–70.

28. Marrot L, Meunier JR. Fotodomaj ADN po ak konsekans byolojik li yo. J Am Acad Dermatol. 2008;58:139–48.

29. Policegoudra RS, Abiraj K, Channe Gowda D, Aradhya SM. Izolasyon ak karakterizasyon nan antioksidan ak anti-bakteri konpoze soti nan jenjanm mango (Curcuma amada Roxb.) rizòm. J Chromatogr B Anal Technol Biomed Life Sci. 2007;852:40–8.

30. Tadtong S, Viriyaroj A, Vorarat S, Nimkuntat S, Suksamrarn S. Antityrosinase ak aktivite anti-bakteri nan ekstrè pericarp mangosteen. J Sante Res. 2009;23:99–102.

31. Li X, Guo L, Solèy Y, Zhou J, Gu Y, Li Y. Baicalein inibit melanogenesis atravè aktivasyon chemen an siyal ERK. Int J Mol Med. 2010;25:923–7.