Antioksidan ak lanmidon-idrolize anzim Pwopriyete anpèchman nan ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga

Pou plis enfòmasyon, kontakte:tina.xiang@wecistanche.com

Résumé: Pifò nan benefis sante ki sòti nan sereyal yo atribiye nan konpoze byoaktif yo. Etid sa a evalye nivo yo nan konpoze bioaktif yo ak laantioksidanak lanmidon-idrolizeanzimpwopriyete inhibitor sis tiyo Striga ki reziste ibrid mayi jòn-zoranj (kode AS 1828-1, 4, 6,8, 9, 11) nan vitro. Ibrid mayi yo te grandi nan Enstiti Entènasyonal Agrikilti Twopikal (ITA), Nijerya. Konpoze bioaktif yo (fenolik total, tanen,flavonoid, ak fitat), antioksidan (DPPH" ak ABTS kapasite dechaj ak diminye pouvwa), ak lanmidon-idrolizeanzim(-amylase ak x-glucosidase) aktivite inhibition nan ibrid mayi yo te detèmine pa spectrophotometry. An menm tan an, karotenoid yo te quantifye lè l sèvi avèk yon sistèm HPLC ranvèse-faz. Ranje konpoze bioaktif yo te: 11.25-14.14 mg GAE/g (total fenolik), 3.62-4.67 mg QE/g (total flavonoid), 3.{{1{ {34}}}}.29 mg/g (tanen),3.66-4.31 pousan (phytate),8.92-12.11ug/g (total ksantofil),2.{{19 }}.89 ug/g (total -karotèn), ak 3.17-3.77ug/g (total provitamin A karotenoid). Ekstrè nan ibrid mayi yo retire DPPH"(SC50: 9. 07-26.35 mg/mL) ak ABTS*(2.{{30}}.68 TEACmmol/g), redwi Fe3 plis a Fe2 plis (0.25±0.64-0 .43±0.01 mg GAE/g), ak inibit -amylase ak -glucosidase, ak IC50 chenn nan 26.28-52.55 mg/mL ak 47.72-63.98 mg/mL, respektivman. Pami sis klon ibrid mayi yo, AS1828-9 te gen pi wo a (p<0.05)levels of="" tannins="" and="" phytate="" and="" the="" strongest="">antioksidanak lanmidon-idrolize anzim aktivite inhibition. Yo te obsève korelasyon enpòtan ant fenolik total ak sa ki annapre yo: ABTS*(p<0.01, r="0.757)," dpph"sc50=""><0.01,r=-0.867), reducing=""><0.05,r=0.633), α-amylase=""><0.01,r=-0.836) and="" α-glucosidase=""><0.05, r="-0.582).Hence," the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids(especially="" as1828-9)="" may="" be="" beneficial="" for="" alleviating="" oxidative="" stress="" and="" postprandial="">

Mo kle: fenolik total; flavonoid total; tanen; karotenoid; asid fitik; tès anpèchman alfa-glukozidaz; tès anpèchman alfa-amilaz

1. Entwodiksyon

Pwovizyon pou rekòt manje ki gen gwo rannman, nourisan ak an sante esansyèl pou abòde defi malnitrisyon ak maladi ki asosye avèk li. Pakonsekan, diferan apwòch sistematik, tankou elvaj ki reziste kont maladi ak amelyore kalite nitrisyonèl, yo te anplwaye nan pwogram rechèch elvaj plant pou satisfè bezwen dyetetik popilasyon mondyal la ki rapidman ogmante. Sa a te vin pi enperatif lè nou konsidere rediksyon radikal nan kantite ak kalite rezèv manje mondyal ki te koze pa polisyon nan anviwònman an, rechofman planèt la, ak devlopman nan.

nouvo sous biocarburant [1]. Nan Afrik Sub-Saharan, yo montre mayi (Zea mays L.) kontribye nan sekirite alimantè ak rediksyon povrete nan mitan fanmi ki gen revni fèb [2].

Genotip mayi jòn-zoranj byen li te ye pou ekselan kalite nitrisyonèl ak pwomosyon sante yo akòz konpoze bioaktif yo genyen, tankou karotenoid, konpoze polifenolik, asid fitik [3-5], ak tokoferol [6]. Sepandan, pwospè pou sekirite alimantè ak amelyore nitrisyon atravè ogmante pwodiksyon mayi nan Lafrik di Sub-Saharan menase pa rasin emiparazit plant la, Striga hermonthica(Del.)Benth ki lakòz pèt pwodiksyon jiska 100 pousan anba gwo enfeksyon akòz pèt dlo. ak eleman nitritif atravè parazitism [7,8]. An konsekans, S. hermonthica poze yon limit abyotik nan pwodiksyon mayi nan Lafrik di Sub-Saharan, ki soti nan yon chanjman paradigm soti nan sistèm tradisyonèl nan agrikilti sereyal ki enplike peryòd pwolonje frich. Tankou yon sistèm tradisyonèl nan agrikilti sereyal asire ke nivo a nan Striga semans bank nan tè a te tolerab nan plant yo9]. Pou bese pèt nan pwodiksyon ak kalite mayi ki te koze pa enfeksyon S.hermonthica, pi bon metòd kontwòl la se plante jenotip mayi ki reziste Striga. Estrateji sa a fasil adaptab, espesyalman nan konbinezon ak lòt pratik jesyon [10].

Etid resan nou an te revele ke ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga gen karotenoid, polifenol ak asid fitik [3]. Konpoze bioaktif sa yo yo konnen yo aji kòm antioksidan ak siprime ipèglisemi postprandial, pami lòt benefis sante [4,5,11,12]. Pami konpoze bioaktif nan grenn mayi zoranj, antioksidan [13,14] ak aktivite inhibitor anzim dijestif [15] yo te rapòte yo depann de konpoze fenolik yo, ki egziste sitou nan fòm nan mare. Anplis de sa, yo konnen konpoze fenolik yo genyen plizyè lòt byoaktivite tankou anpèchman xanthine oksidaz ak anjyotansin 1-konvèti anzim, ki enplike nan patojèn nan gout ak tansyon wo ki depann de renin, respektivman [11], ak anti- pwopriyete enflamatwa, anti-mikwòb, anti-kansè, anti-Alzheimer, ak anti-alèji pami lòt aktivite byolojik [16]. Pakonsekan, konpoze fenolik ki soti nan sous dyetetik yo atire anpil atansyon nan tou de syantis yo ak konsomatè yo akòz benefis yo nan sante moun [16].

Objektif etid sa a se te evalye nivo konpoze bioaktif yo, ak antioksidan ak lanmidon-hydrolyzing anzim inhibitor pwopriyete sis tiyo Striga ki reziste ibrid mayi jòn-zoranj nan vitro. Etid la tou teste asosyasyon yo nan mitan elektè bioaktif yo, ak laantioksidanak lanmidon-idrolize anzim inhibition aktivite nan sis tiyo Striga ki reziste ibrid mayi jòn-zoranj yo.

2. Rezilta ak Diskisyon

2.1.Bioaktioe konpozan nan sis tiyo Striga ki reziste jòn-zoranj mayi ibrid

Konpozan bioaktif yo detèmine nan sis tiyo ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga (AS1828-1(AS1), AS1828-4(AS4), AS1828-6(AS6), AS{{ 8}} (AS8), AS1828-9(AS9), AS1828-11(AS11))nan etid sa a enkli total fenolik,flavonoid, tanen, karotenoid, ak asid fitik. Nivo total de fenolik, flavonoid total, tanen, ak asid fitik yo prezante nan Tablo 1. Fenolik total yo te varye ant 11.25 ak 14.14 mg GAE/g nan AS4 ak AS9, respektivman; flavonoid total te varye ant 3.62 a 4.67 mg QE / g nan AS11 ak AS6, respektivman; kontni tanen varye ant 3.64 ak 6.29 mg / g nan AS1 ak AS9, respektivman; ak kontni asid fitik varye ant 3.66 pousan nan AS6 a 4.47 pousan nan AS1.

Kidonk, AS9 te genyen pi wo a (p<0.05)total phenolics="" and="" tannin="" levels,="" while="" as6="" had="" the="" highest="" total="" flavonoids="" content.="" the="" total="" phenolic="" concentrations="" detected="" in="" the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids="" are="" higher="" than="" the="" values="" previously="" reported="" in="" yellow="" maize="" hybrids,="" including="" 2.15="" mg="" gae/g[15]and="" 2.08="" mg="" gae/g[17].="" similarly,="" the="" levels="" of="" total="" flavonoids="" detected="" in="" the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids="" in="" this="" study="" are="" higher="" than="" the="" 0.93±="" 0.03="" mg="" oqe/g="" recently="" reported="" in="" provitamin="" a="" yellow="" maize="" flour="" [17].="" although="" the="" tannin="" levels="" are="" within="" the="" range(2.1-7.3="" mg/g)previously="" reported="" in="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids="" [3],="" the="" values="">

Konparativman pi wo pase seri tanen kondanse (33.70 a 158.55 mg/100g, ekivalan a 0.34 a 1.59 mg/g) rapòte nan jenotip pigman mayi [13].

Nivo ki pi wo nan fenolik total, flavonoid total, ak tanen yo obsève nan sis tiyo ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga yo, parapò ak valè nan literati ki egziste deja pou polifenolik sa yo nan jenotip mayi jòn ki pa reziste Striga yo ka lye ak posib. diferans nan makiyaj jenetik yo [3]. Li se byen li te ye ke byosentèz la nan polifenolik ak lòt metabolit plant segondè ogmante nan prezans estrès kòm yon defans selilè ak / oswa mekanis adaptasyon pa plant la kenbe tèt ak kondisyon favorab [16,18]. Anplis, jèminasyon grenn Striga ankouraje pa pwodiksyon strigolaktòn (òmòn plant) nan rasin plant mayi a, ke plant la lage anba estrès [19]. Kidonk, li posib ke karakteristik nan rezistans nan S. hermonthica ka te kontwole byosentèz la nan konpoze polifenolik nan mayi a kenbe tèt ak parazit la. Sa a se sipòte pa yon rapò pi bonè ke rezistans apre atachman nan S. hermonthica te enplike epesman nan miray selil plant la ak akimilasyon nan anpil ti vakuol ak depo fenolik ki pete tache nan selil plant la [20].

Konpoze fenolik yo remakab pou aktivite antioksidan yo akòz pwopriyete redox yo, ki pèmèt yo aji kòm kenchers nan oksijèn singlet, donatè idwojèn, ak ajan rediksyon [21]. Anplis de sa, yo te rapòte tou konpoze fenolik yo inaktive anzim dijestif yo, ki gen ladan lipaz pankreyas, -amylase, ak a-glucosidase atravè lyezon ki pa espesifik nan anzim endividyèl yo [22]. Kòm deja rapòte pa Villiger et al.[23]fenolik konpoze posede yon gwo afinite pou pwoteyin atravè idwojèn ak lyezon idrofob, amelyore kapasite yo nan anpeche anzim tankou -amylase ak -glucosidase pa denaturasyon nan pwoteyin.

The phytic acid contents were comparable (p>0.05)pami sis tiyo yo ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga. Ranje sa a dakò ak rapò anvan nou an sou kontni asid fitik nan ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga [3]. Asid phytic posede aktivite antioksidan, anplis efè inhibition li kont devlopman nan pyè nan ren [24], osi byen ke pwopriyete anti-kansè [25]. Pwopriyete antioksidan konpozan bioaktif yo, espesyalman konstitiyan fenolik (flavonoid ak tanen) nan ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga yo, ka anpeche ak/oswa ralentir degradasyon oksidatif kèk eleman nitritif andojèn nan mayi a ki gen anpil tandans fè. oksidasyon, tankou asid gra enstore ak vitamin [16]. Anplis de sa, konpozan bioaktif nan ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga yo ka diminye vitès kèk pwodui oksidatif toksik yo fòme, kidonk kenbe bon jan kalite nitrisyonèl ak pwolonje lavi etajè pwodwi manje [26] ki fèt ak yo.

The carotenoid content in the Striga-resistant yellow-orange maize hybrids is presented in Table 2. Total β-carotene (9-cis-β-carotene + 13-cis-β-carotene + all-trans-β-carotene) ranged from 2.42 to 2.89ug/g; total xanthophylls (lutein+zeaxanthin) ranged from8.92 to 12.11l ug/g; and total provitamin A carotenoids(β-cryptoxanthin+β-carotene+α-carotene） ranged from 3.17 to 3.77 μg/g,in AS6 and AS9,respectively. There were no significant differences(p>0.05) nan kontni an karotenoid nan Striga ki reziste jòn-zoranj la

ibrid mayi. Ranje karotenoid yo jwenn nan etid sa a konfime sa yo te rapòte deja pa Alamu et al. pou provitamin A biofortified ibrid mayi jòn [27]. Anplis de sa, total xanthophylls yo te pi wo nan valè pase total provitamin A karotenoid yo nan Striga-rezistan jòn-zoranj ibrid mayi yo, ki konfime rezilta yo nan Ortiz et al. [28].

Karotenoid yo ka konplete aktivite antioksidan ak anzim idroliz lanmidon nan konpoze fenolik yo nan ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga, an akò ak byoaktivite yo rapòte. Pou egzanp, karotenoid yo te rapòte yo posede aktivite antioksidan kòm mekanis prensipal ki kache benefis sante yo [29]. Yo menm tou yo bay efè pwoteksyon kont maladi kwonik ki pa kontajye tankou kansè [30] ak maladi kadyovaskilè [31]. Epitou, -cryptoxanthin te rapòte siyifikativman diminye risk pou dyabèt tip2 (T2D) ak bese rezistans ensilin [32,33].

2.2. Aktivite antioksidan nan sis tiyo Striga ki reziste jòn-zoranj mayi ibrid

Aktivite antioksidan ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga yo (Tablo 3) te revele ke sis klon tiyo yo tout te montre aktivite antioksidan lè yo retire radikal gratis (degre ABTS plis ak DPPH*) epi redwi iyon ferrik (Fe3 plis) nan iyon fèr. (Fe2 plis). Aktivite antioksidan an te varye anpil (p<0.05) among="" the="" hybrids,="" with="" as9="" having="" the="" strongest=""><0.05) free="" radicals="" scavenging="" abilities(7.28="" teac="" mmol/g="" and="" sc50,="" 9.07±="" 0.27="" mg/ml="" for="" abts+="" and="" dpph,="" respectively)and="" ferric-reducing="" power="" (0.43="" mg="" gae/g).="" it="" is="" pertinent="" to="" recall="" that="" as9-9="" also="" had="" the="" highest="" level="" of="" total="" phenolics="" and="" tannins,="" as="" presented="" earlier="" in="" table="" 1.="" the="" dpph°scavenging="" abilities="" of="" the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids="" obtained="" in="" this="" study="" (sc50:="" 9.07="" to="" 26.35="" mg/ml)="" are="" more="" potent="" than="" those="" reported="" by="" rodriguez-salinas="" et="" al.="" [13]="" for="" pigmented="" maize="" genotypes(ic50:="" 31="" to="" 52="" mg/ml)="" since="" a="" lower="" sc50="" or="" ic50="" is="" indicative="" of="" a="" stronger="" activity="" [34].="" however,="" vitamin="" c,="" a="" standard="" antioxidant="" with="" a="" lower="" sc50(4.63±0.28="" mg/ml),="" had="" a="" stronger="" dpph*scavenging="" activity="" than="" all="" of="" the="" six="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids.="" similarly,="" the="" abts·+="" scavenging="" activity="" of="" the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids="" (2.65-7.68="" teac="" mmol/g)is="" higher="" than="" the="" value="" (294.81±="" 2.23="" umol="" teac/g)reported="" by="" irondi="" et="" al.[17]="" for="" provitamin="" a="" yellow="" maize="" flour.="" the="" stronger="" antioxidant="" activity="" of="" the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="" hybrids="" over="" the="" non-striga-resistant="" pigmented="" maize="" genotypes="" may="" be="" attributed="" to="" the="" increased="" deposition="" of="" polyphenolic="" compounds="" in="" their="" defense="" against="" s.="" hermonthica="" [20],="" which="" may="" have,="" consequently,="" enhanced="" the="" antioxidant="" capacity="" of="" the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="">

Kapasite pou retire radikal gratis ak pouvwa redui ferrik nan ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga yo sijere ke yo ka benefisye nan pwoteje kò a kont atak oksidatif presipite pa radikal gratis ak espès oksijèn reyaktif. Kidonk, ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga yo ka gen yon efè pwoteksyon kont domaj oksidatif biomolekil nan kò a, ki gen ladan asid nikleyik, pwoteyin, lipid, ak idrat kabòn [35] ak maladi kwonik ki gen rapò ak estrès oksidatif [36] .

2.3.Amidon-Idrolize Anzim Inhibition Aktivite nan sis tiyo Striga-rezistan Biofortified jòn-zoranj mayi Ibrid yo

Anzim yo idrolyse lanmidon (-amylase ak -glucosidase) aktivite inhibition nan sis tiyo yo Striga-rezistan Ibrid mayi jòn-zoranj, eksprime kòm IC50 (konsantrasyon ekstrè ki inibit aktivite anzim pa 50 pousan), yo prezante nan Tablo 4. IC50 la. valè Striga ki reziste ibrid mayi jòn-zoranj sou -amylase ak -glucosidase te varye ant 26.28 a 52.55 mg/mL ak 47.72 a 63.98 mg/mL nan AS9 ak AS4, respektivman. Kidonk, pami sis ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga tiyo yo, AS9 ak valè IC50 ki pi ba yo pou tou de -amylase ak -glucosidase, parèt pi fò (p.<0.05)inhibitory activity="" on="" these="" two="" enzymes.="" interestingly,="" there="" was="" no="" significant="" (p="">0.05) diferans nan valè IC50 AS9 ak acarbose (yon dwòg antidyabetik estanda) sou -amylase, ki endike ke kapasite inhibition -amylase AS9 ak acarbose yo te konparab. Sepandan, eksepte pou kapasite inhibition -amylase AS9 ki te konparab ak sa ki nan acarbose, aktivite inhibitor -amylase ak -glucosidase nan acarbose la te pi fò pase sa yo ki nan Striga ki reziste ibrid mayi jòn-zoranj yo. Fabila-Garcia et al te rapòte kapasite diferan jenotip pigman (jòn, koulè wouj violèt, wouj ak nwa) mayi pou anpeche aktivite anzim idrolize lanmidon (-glucosidase). [15]. Konklizyon yo te revele ke ekstrè mayi jòn te gen pi wo aktivite inhibitor glukozidaz la, eksprime kòm yon pousantaj (69.8 pousan), nan mitan jenotip mayi yo. Anplis de sa, Irondi et al. [17] dènyèman rapòte o-amylase ak -glucosidase IC50 valè nan 237.12± 2.60 ak 157.18±1.05 ug/mL, respektivman, pou provitamin A jòn farin mayi. Relatif ak ekstrè swa mayi, ki te rapòte [37] anpeche a-amylase ak -glucosidase ak valè mwayèn IC50 nan 218.4 ak 221.4 ug/mL, respektivman, sis tiyo Striga ki reziste ibrid mayi jòn-zoranj yo te gen yon efè inhibition pi fèb. sou c-amilaz ak x-glikozidaz.

Tou de c-amylase ak o-glucosidase yo patisipe nan dijesyon nan idrat kabòn dyetetik. Lè nou konsidere ke -amylase nan ti trip la idrolize lanmidon -1,4 lyezon pou libere oligosakarid ak disakarid, -glucosidase nan fwontyè bwòs ti trip la konplete dijesyon an pa plis idrolize oligosakarid yo ak disakarid yo bay monosakarid absòbe, ki gen ladan glikoz. ak fruktoz [38]. Pakonsekan, anpèchman de anzim dijestif sa yo se yon apwòch terapetik ki byen etabli pou soulaje ipèglisemi postprandyal nan jesyon T2D ak yon mekanis kle nan aksyon.

nan anpil ajan anti-dyabetik [39], ki gen ladan dwòg, pwodwi natirèl, ak manje fonksyonèl. Anplis de sa, ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga yo te gen yon efè inhibitor plis sibstansyèl sou -amylase pase sou -glucosidase. Modèl sa a nan anpèchman anzim hydrolyzing lanmidon gen enplikasyon benefik terapetik epi li dakò ak modèl ki te rapòte nan etid anvan yo [17,A0]. Se konsa, sis tiyo Striga ki reziste ibrid mayi jòn-zoranj yo, espesyalman AS9, ka gen kèk benefis nan kontwole ipèglisemi postprandyal.

2.4. Korelasyon ant Konpozan Bioaktif, Antioksidan ak Anzim Hydrolyzing Lanmidon Aktivite Inhibition nan sis tiyo Striga-rezistan Ibrid mayi jòn-zoranj yo.

Pami konpozan byoaktif yo, total fenolik yo gen rapò ak ABTS· plus (p<><0.01,r=-0.867), reducing=""><0.05,r=0.633), α-amylase="" ic50=""><0.01,r=-0.836)and α-glucosidase="" ic50=""><0.05,r=-0.582) (table="" 5).="" as="" earlier="" stated,="" lower="" dpph"="" scs0="" and="" enzyme="" ics0="" values="" are="" indicative="" of="" stronger="" scavenging="" and="" inhibitory="" activities="" of="" a="" given="" sample="" on="" dpph*="" and="" enzymes,="" respectively="" [34].="" thus,="" when="" taken="" together,="" the="" negative="" correlations="" between="" total="" phenolics="" and="" dpph·sc50,="" α-amylase="" ic50="" and="" α-glucosidase="" ic50,="" as="" well="" as="" the="" positive="" correlations="" between="" total="" phenolics="" and="" abts="" scavenging="" ability="" and="" reducing="" power,="" suggest="" that="" phenolic="" compounds="" may="" have="" contributed="" majorly="" to="" the="" observed="" antioxidant="" and="" starch-hydrolyzing="" enzymes="" inhibitory="" activities="" of="" the="" striga-resistant="" yellow-orange="" maize="">

3. Materyèl ak Metòd

3.1. Pwodwi chimik ak reyaktif

Trolox, quercetin, L-ascorbic asid, asid galik, ABTS (2,2'-azino-bis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid)), DPPH (2,2-diphenyl -2-picrylhydrazyl), -glucosidase soti nan Bacillus stearothermophillus, p-nitrophenylglucopyranoside (PNPG), -amylase, lanmidon idrosolubl, ak acarbose te achte nan men Sigma (St. Louis). Yo te itilize klas analyse tout lòt pwodwi chimik yo ak solvants.

3.2. Koleksyon echantiyon

Echantiyon grenn sèk sis ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga (kode AS1828-1,4,6,8,9,11) yo tout grandi nan Saminaka (8 degre 39'E, 10 degre 34' N; altitid 760 m; lapli anyèl 1149 mm; tanperati a 18.1-37.3 degre; kalite tè, nitosol distrik) ak Zaria (7 degre 45'E, 11 degre 8'N). ; altitid 622 m; lapli anyèl 1076 mm; tanperati mwayèn 13.9-35.5 degre; kalite tè, Ferric Luvisols) yo te kolekte nan Pwogram Amelyorasyon Mayi nan Enstiti Entènasyonal Agrikilti Twopikal (IITA), Ibadan, Nijerya. Ibrid yo te plante nan mwa me pou de sezon, nan yon konsepsyon blòk konplè owaza nan twa replikasyon, pandan sezon lapli a. Echantiyon yo te moulen nan farin (0.50 mm gwosè Van) ak Perten Laboratory Hammer Mill (3102, USA) epi chaje hermetically nan sache echantiyon opak pou plis analiz laboratwa.

3.3. Preparasyon1 nan ekstrè echantiyon yo

Pou prepare yon ekstrè nan farin frans ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga, 1g farin lan te tranpe nan 10 mL metanol nan yon tib santrifij 50 mL ki kouvri lannwit lan (12 h) ak souke tanzantan. Imedyatman, yo te santrifize melanj lan nan 3000 rpm pou 10 minit, epi apre sa, supernatant la (ekstrè metanolik) yo te kolekte epi estoke nan -4 degre C jiskaske analiz [41].

3.4.Detèminasyon nan kontni total fenolik

Metòd Folin-Ciocalteu ki dekri pa Singleton et al. [42] te adopte pou detèmine total phénoliques contenu Striga-rezistan jòn-zoranj mayi hybrids'flour extrait, yon pòsyon (300 uL) extrait a te dispanse nan yon tib tès (an triple). Apre sa, yo te ajoute 1.5 mL reyaktif Folin-Ciocalteu (reyaktif Folin-Ciocalteu stock dilye 10 fwa ak dlo distile) ak 1.2 mL solisyon Na2CO3 (7.5 pousan w/v), epi yo te enkube melanj lan nan fè nwa a pou 30 minit. tanperati chanm. Apre sa, absorbans la te li nan 765 nm kont yon vid. Kontni fenolik total la te kalkile lè l sèvi avèk yon koub kalibrasyon asid galik epi eksprime kòm ekivalan asid galik (GAE) nan yon echantiyon mg / g.

3.5. Detèminasyon Kontni Flavonoid Total

Pwotokòl la dekri pa Kale et al. [43] te anplwaye pou detèmine flavonoid total de contenu Striga-rezistan jòn-zoranj mayi hybrids'farin extrait. Yon ti tan, 0.5 ml ekstrè a te dispanse nan tib tès; sa a te swiv pa ajoute 1.5 mL metanol, 0.1 ml klori aliminyòm (10 pousan), 0.1 mL 1 M acetate potasyòm, ak 2.8 mL dlo distile. Te melanj reyaksyon an toubiyon ak enkube nan tanperati chanm pou 30 min, apre sa yo te li absòbe a nan 514 nm. Kontni total flavonoid ekstrè yo te eksprime kòm ekivalan quercetin (QE) nan echantiyon mg / g.

3.6. Detèminasyon Tan1nin kontni

Kontni tanen nan ekstrè farin ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga yo te mezire pa metòd kolorimetrik Joslyn [44] te dekri deja, ak yon ti modifikasyon. Yon pòsyon echantiyon an (0.5 g) te gaye nan 5 mL 1 pousan HCl nan metanol epi kite pou 15 min. Apre sa, yo te santrifuje melanj lan nan 3{{10}}00 rpm pou 10 min. Yo te bay yon pòsyon 0.1 mL supernatant nan tib tès la ki gen 7.5 mL dlo distile, apre sa yo te ajoute 0.5 mL reyaktif Folin-Dennis ak 1 mL solisyon Na2CO3 (35 pousan), epi volim la te fè jiska. 10 mL ak 0.9 mL dlo distile Apre melanje, yo te enkube melanj reyaksyon an pou 30 min nan tanperati chanm, epi li absòbe a nan 760 nm. Kontni tanen an, eksprime kòm ekivalan asid tannik (TAE) nan echantiyon mg / g, yo te kalkile nan yon koub estanda asid tannik.

3.7. Kantifikasyon kontni karotenoid nan echantiyon an

Kontni karotenoid nan farin ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga a te detèmine pa adopte metòd ki dekri pa Howe ak Tanumihardjo [45]. Yo te retire karotenoid nan farin yo lè yo melanje 0.6 g echantiyon an ak 6 mL etanòl (ki gen 0.1 pousan butylated hydroxyl toluene). Yo mete melanj lan nan yon beny dlo a 85 degre pou 5 minit. Apre sa, lwil oliv entèfere nan melanj lan te saponifye ak idroksid potasyòm (80 pousan w/v) nan 85 degre nan yon beny dlo pou 5 min. Lè sa a, sispansyon an te melanje lè l sèvi avèk yon machin toubiyon epi li te retounen nan beny dlo a pou yon lòt 5 minit. Li te imedyatman transfere nan yon beny nan glas, epi yo te ajoute 3 mL dlo frèt deyonize Sa ki karotenoid nan melanj lan te separe twa fwa youn apre lòt ak 3 mL nan n-hexane pa santrifuje nan 1000 rpm pou 10 s. Kouch siperyè melanj lan te dispanse nan yon tib konsantratè 50 mL. Fraksyon hexane konbine a te lave twa fwa ak dlo deyonize, vortexed, ak santrifuje pou 10 s nan 1000 rpm. Yo te cheche fraksyon n-hexane lè l sèvi avèk yon konsantratè TurboVap (LIV) anba gaz nitwojèn pou 25 min. Ekstrè sèk la te rekonstitye ak metanol / dichloromethane (1 mL, 50:50 v / v), epi yo te enjekte yon aliquot 100 μL nan sistèm HPLC pou quantifier karotenoid yo. Sistèm HPLC (Water Corporation, Milford, MA, USA) te gen ladann yon kolòn gad, kolòn karotenoid C30 YMC (4.6 × 250 mm, 3 μM), ponp binè HPLC (Waters 626), oto-sampler (Waters 717), ak yon detektè etalaj fotodyòd (Waters 2996). Sistèm nan te opere ak lojisyèl Empower 1 (Waters Corporation). Faz mobil lan te fèt ak sòlvan A, ki gen metanol: dlo (92:8 v/v) ak 10 mmol/L asetat amonyòm, ak sòlvan B, ki gen 100 pousan methyl tertiary-butyl etè. Elisyon gradyan yo te fèt nan yon vitès koule 1 mL/min nan kondisyon sa yo: 29 min nan gradyan lineyè soti nan 83 pousan a 59 pousan A; 6 min nan gradyan lineyè soti nan 59 pousan a 30 pousan A;1 min nan kenbe nan 30 pousan A;4 min nan gradyan lineyè soti nan 30 pousan a 83 pousan A ak yon 4-min kenbe nan 83 pousan. Chromatogram nan karotenoid yo te pwodwi nan 450 nm, ak karotenoid yo espesifik yo te idantifye ak kantite lè l sèvi avèk metòd estanda ekstèn ki baze sou koub la kalibrasyon soti nan estanda pi bon kalite ak konparezon nan spectre nan absòpsyon ak ko-elisyon ak karotenoid estanda.

3.8. Detèminasyon kontni asid fitik

Metòd Wheeler ak Ferrel [46] te itilize pou detèmine kontni asid fitik nan farin yo. Ekstraksyon te fè mekanikman souke yon melanj de 1 g nan farin ak 25 mL nan 3 pousan asid trichloroacetic (TCA) pou 1 èdtan epi yo te sispansyon an santrifuje pou 15 min nan 35 00 rpm. Yo te melanje yon aliquot 10 mL nan supernatant la ak yon solisyon klori ferrik 4 mL, epi yo te melanj lan chofe nan yon beny dlo bouyi pou 45 min. Sispansyon ki te lakòz yo te santrifuje nan 3500 rpm pou 15 min epi yo te ak anpil atansyon decante surnatant la. Apre sa, presipite a te lave de fwa pa dispèse nan 25 mL nan 3 pousan TCA, chofaj nan yon beny dlo bouyi pou 10 min, epi santrifuje nan 3500 rpm pou 10 min. Volim presipite a te fè jiska 30 mL ak dlo distile, epi yo te melanj lan chofe nan yon beny dlo bouyi pou 30 min. Sispansyon cho a te filtre ak èd Whatman filtre papye (No 2), epi presipite a te lave ak 60 mL dlo distile cho pou asire ke nèt sou tout pwen filtration. Apre sa, presipite ki te kenbe sou papye filtre a te fonn ak 40 mL 3.2 M HNO3 cho nan yon flakon volumétrique 100 mL. Yon aliquot 0.5 mL te transfere nan yon tib santrifujeur ak dilye ak 7 mL nan dlo distile, apre sa yo te ajoute 2 mL nan 1.5 M KSCN, epi yo te fè volim nan 10 mL ak 0.5 mL dlo distile. Absorbans te li (nan 1 min) nan 480 nm. Kontni asid fitik nan farin yo te kalkile lè l sèvi avèk yon rapò atomik Fe / P nan 4:6.

3.9. 2,2-Azinobis(3-ethyl-benzothiazoline-6-sulfonic Acid) Radical Cation(ABTS· plis )ScaOenging Assay/

Kapasite Striga ki reziste ibrid mayi jòn-zoranj 'extraits farin frans pou scavenge ABTS" te envestige lè yo te adopte pwosedi ki rapòte pa Reet al. [47]. ABTS* plis reyaktif k ap travay te prepare pa byen melanje volim egal nan solisyon akeuz nan. ABTS plis (7 milimol/L) ak K2S2Os (2.45 milimol/L) ak enkubasyon melanj lan

nan yon kofr nwa nan tanperati chanm pou 16 èdtan. Apre sa, absorbans reyaktif la te ajiste a 0.70±0.02 ak etanòl (95 pousan) nan 734 nm. Lè sa a, 0.2 ml ekstrè a ak 2.0 ml reyaktif ABTS * yo te dispanse nan tib tès la, melanje byen, epi enkube nan tanperati chanm pou 15 minit nan yon kondisyon fè nwa. Finalman, yo te li absorbans la nan yon espektrofotomèt UV-Vizib (Milton Roy Company, USA) nan 734 nm. ABTSe ​​plis kapasite scavenging nan ekstrè farin frans yo te kalkile pita nan yon koub estanda Trolox epi li te eksprime kòm kapasite antioksidan ekivalan Trolox (TEAC).

3.10. 2,2-Diphenyl-2-picrylhydrazyl Radical (DPPH") Esay dekonpozisyon

Pwotokòl la rapòte pa Cervato et al. [48] ​​te anplwaye pou detèmine kapasite ekstrè farin frans yo pou elimine DPPH", lè l sèvi avèk vitamin C (asid ascorbic) kòm yon antioksidan referans. Yon ti tan, yon melanj reyaksyon ki gen 1.0 mL nan konsantrasyon diferan (8, 16). , 24, 32 mg/mL) nan ekstrè a (oswa vitamin C) ak 3.0 ml nan solisyon degre DPPH (60 μM) te enkube nan tanperati chanm nan yon kondisyon fè nwa pou 30 minit. Apre sa, absòbe a. te li nan 517 nm, epi yo te kalkile ak eksprime DPPH "kapasite scavenging (pousan) nan ekstrè yo kòm konsantrasyon nan ekstrè ki scavenged 50 pousan nan DPPH" (SC50).

3.11. Diminye esè pouvwa

Kapasite ekstrè farin frans yo pou redwi Fe3 plis a Fe2 plis te teste lè yo adopte pwotokòl ki dekri pa Oyaizu [49]. An brèf, yon melanj ekstrè a (2.5 mL), 200 mM tanpon fosfat sodyòm (pH 6.6) (2.5 mL), ak 1 pousan ferricyanide potasyòm (2.5 mL) te enkube nan 50 degre pou 20 min. , apre sa yo te ajoute 2.5 mL nan 10 pousan asid trichloroacetic. Apre sa, yo te santrifuje melanj lan nan 650 × g pou 10 min. Yon pòsyon nan 2.5 mL nan supernatant la te dispanse nan yon tib tès, ak 2.5 mL nan dlo distile ak 1 mL nan 0.1 pousan ferricchloride yo te ajoute ak melanje byen, epi yo te li absòbe a nan 700 nm. Finalman, yo te kalkile pouvwa rediksyon ekstrè yo ak eksprime nan miligram ekivalan asid galik pou chak gram echantiyon.

3.12. Esè anpèchman alfa-amilaz

Alpha-amylase anpèchman tès te fèt pa adopte pwosedi ki dekri pa Kwon et al. [50]. Pankreyas pòsin -amylase (EC3.2.1.1) ak lanmidon idrosolubl (substra) yo te itilize nan tès sa a. Diferan dilusyon ekstrè farin frans lan, ki totalize 500μL, ak 50{0μL 0.02 M tanpon fosfat sodyòm (pH6.9). ak 0.006 M NaCl) ki gen 0.5 mg/mL -amylase solisyon yo te melanje ak enkube nan 37 degre pou 10 min. Apre sa, yo te ajoute 500 μL nan 1 pousan solisyon lanmidon nan tanpon fosfat sodyòm 0.02 M, epi melanj reyaksyon an te enkube nan 37 degre pou 15 min. Apre sa, yo te sispann idroliz lanmidon ki te katalize-amylase lè yo ajoute 1.0 mL reyaktif koulè DNSA (1 pousan 35-dinitro asid salisilik, ak 12 pousan tartrat sodyòm potasyòm nan 0.4 M NaOH). Melanj reyaksyon an te enkube pou 5 minit nan yon beny dlo bouyi, refwadi nan tanperati chanm, epi dilye ak 10 mL dlo distile. Absorbans melanj lan te li nan 540 nm. Yon tès referans ki eskli ekstrè farin lan te enkli nan eksperyans la. Apre sa, pousantaj anpèchman amilaz la te kalkile jan sa a:

(A540R - A540S)× 100 pousan anpèchman =A540R

kote A540R se lekti absòbe referans lan; A540S se lekti absòbe echantiyon an.

3.13. Esè anpèchman alfa-glukozidaz

Alpha-glucosidase inhibitory activity of the flours extracts was conducted by adopting the procedure reported by Kim et al. [39], using Bacillus stearothermophillus α-glucosidase (EC3.2.1.20) and para-nitrophenylglucopyranoside (PNPG) as the substrate. Five (5)units of an aliquot of α-glucosidase were incubated with 20 μg/mL of the extract for 15 min. The hydrolytic reaction was initiated by adding 3 mM PNPG prepared in 20 mM phosphate buffer, pH6.9, which served as a substrate. The hydrolytic reaction was allowed to proceed for 20 min at37°C, after which 2 mL of 0.1 M Na>CO: te ajoute pou mete fen nan reyaksyon an. Yon tès referans san yo pa ekstrè farin lan te enkli nan eksperyans la. Absorbans jòn p-nitrophenol ki te pibliye nan idroliz PNPG ki katalize -glucosidase te li nan 400 nm epi yo te kalkile pousantaj anpèchman o-glucosidase konsa:

(A400R - A400S)× 100 pousan anpèchman =A400R

kote A400R se lekti absòbe referans lan; A400Si lekti absòbe echantiyon an.

3.14. Analiz done

Done yo jwenn nan etid sa a (ki soti nan detèminasyon triple) yo te eksprime kòm valè vle di ± devyasyon estanda (SD). Sèvi ak pake lojisyèl estatistik SPSS (16yèm vèsyon), yo te fè yon analiz yon sèl-fason nan divèjans (ANOVA) sou done yo, epi yo te konpare valè mwayèn yo lè l sèvi avèk tès post hoc Tukey a nan p.<0.05. the="" associations="" between="" the="" bioactive="" components,="" the="" antioxidant,="" and="" the="" starch-hydrolyzing="" enzymes="" inhibitory="" activities="" were="" calculated="" using="" the="" pearson="" correlation="" test.="" column="" representations="" of="" the="" mean="" values="" were="" done="" using="" graphpad="" prism="" (5th="">

4. Konklizyon

Sis tiyo Striga ki reziste ibrid mayi jòn-zoranj yo te genyen eleman bioaktif enpòtan (fenolik total, flavonoid total, tanen, asid fitik, ak karotenoid). Ekstrè yo montre gwo aktivite antioksidan ak anpeche anzim idrolize lanmidon (-amylase ak -glucosidase). Pami ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga yo, AS1828-9 te gen aktivite inhibition anzim ki pi pisan antioksidan ak lanmidon-idrolize. Yo te obsève korelasyon siyifikatif ant kontni fenolik total ak ABTS* plus, DPPH degre scavenging kapasite, diminye pouvwa, -amylase, ak -glucosidase inhibition aktivite nan Striga ki reziste ibrid mayi jòn-zoranj yo. Aktivite inhibition antioksidan ak lanmidon-idrolize anzim yo sijere ke ibrid mayi jòn-zoranj ki reziste Striga yo (espesyalman AS1828-9) ka benefisye nan anpeche ak/oswa soulaje estrès oksidatif ak ipèglisemi postprandyal.