Efè antioksidan, anti-melanogenic ak anti-rid Phellinus Vaninii

Kontakte: ali.ma@wecistanche.com

1. Entwodiksyon

Radikal gratisak espès oksijèn reyaktif (ROS) yo jeneralman espès chimik enstab ak trè reyaktif. Yo sitou sòti nan chemen metabolik anzimatik ak ki pa anzimatik nan selil kò imen an atravè sistèm transpò elèktron mitokondriyo respirasyon, fagositoz, sentèz prostalandin, ak sistèm retikul endoplasmik [1]. Sepandan, radikal gratis ak ROS yo tou pwodwi nan ekspoze a sous ekzojèn, ki gen ladan metal lou, lafimen tabak, pwodui chimik, ak polyan endistriyèl [2]. Yo rapòte ke yo lakòz divès kalite maladi, tankou aje, maladi kadyovaskilè, maladi respiratwa, dyabèt melitus, rimatism, ak maladi fwa [3].

Xanthine oksidaz (XO) katalize oksidasyon ipoxantin an xanthine epi plis konvèti xanthine nan asid urik. Gout karakterize pa yon konsantrasyon ki wo nan asid asid (iperurisemia) nan san an ki mennen nan depo kristal asid asid nan jwenti yo ki lakòz enflamasyon douloure epi 5-30 pousan nan popilasyon mondyal la soufri gout, ki konsidere kòm gout. dwe yon faktè risk enpòtan pou sante moun [4,5]. Pou tretman gout, inibitè XO ki diminye konsantrasyon plasma asid urik yo jeneralman anplwaye [6]. Malgre ke allopurinol, yon inibitè XO, yo te itilize pou tretman gout, yon nouvo inibitè XO, febuxostat, te fèk devlope. Sepandan, dwòg la gen anpil efè segondè, tankou epatit, nefropati, ak reyaksyon alèjik [7]. Kidonk, rechèch la pou nouvo inibitè XO ak bon aktivite terapetik ak pi ba efè segondè kontinye.

Tirozinaz se yon anzim oksidatif ki limite pousantaj kòb kwiv mete ki souvan prezan nan plant, mikwo-òganis ak bèt. Tirozinaz patisipe nan chemen sentetik melanin yo pa idroksilasyon L-tirozin nan 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA) ak konvèsyon DOPA an dopaquinone [8]. Melanin se pwodwi pa melanosit yo nan melanosom yo epi li jwe yon wòl enpòtan nan defann epidèm la kont efè danjere nan radyasyon iltravyolèt (UV) soti nan limyè solèy la. Ipèpigmantasyon po ki soti nan ogmante aktivite anzim sentetik melanin pa ekspoze twòp nan radyasyon UV ka lakòz maladi dèrmatolojik, tankou melasma, vitiligo, ak lentigo [9,10]. Dènyèman, inibitè tirozinaz yo te vin enpòtan pou anpeche pwoblèm pigmantè ak lòt maladi ki gen rapò ak melanin. Piske anpil fanm prefere aleje plak po nwa yo, endistri medikal ak kosmetik yo te konsantre sou inibitè tirozinaz pou trete ipèpigmantasyon po [11]. Pou fè fas ak pwoblèm sa yo, konpoze òganik ki soti nan mikwo-òganis ak plant, tankou asid kojik, arbutin, asid azelaik, asid gentisic, ak lòt yo te devlope kòm ajan blanchi po [12]. Efikasite nan konpoze blanchi yo detèmine pa anpèchman tirozinaz nan sistèm san selil oswa pa anpèchman nan tirozinaz selilè ak nouvo sous inibitè tirozin ki soti nan plant ak mikwo-òganis yo ap kontinye tès depistaj [13].

Aje po a se yon pwosesis biyolojik inevitab nan òganis vivan epi ki ankouraje pa tou de faktè intrinsèques ak ekstèn. Aje intrinsèk po a, ki rele tou aje ki depann de laj oswa aje kwonolojik, se koze pa faktè entèn fizyolojik nan kò a, alòske aje ekstèn se koze pa anpil faktè ekstèn, tankou ekspoze po a nan radyasyon UV, fimen sigarèt, polisyon nan lè a. , elatriye Faktè sa yo ka lakòz ondilasyon, pigmantasyon, ak chanjman nan epesè po [14]. Po se tisi mou ekstèn ki konsiste de tisi epidèm, po ak lar. Pati ki pi ekstèn nan po a se yon matris ekstraselilè (ECM) epi li konsiste de kolagen an ak elastin [15]. Kolagen bay elastisite, fòs, ak fleksibilite nan po a. Li kenbe tou estriktirèl fondasyon po a epi li jwe yon wòl esansyèl nan kenbe fonksyon selilè nòmal nan mòfogenesis po a [16]. Elastin se yon pwoteyin kle prezan nan tisi konjonktif ECM la epi li bay elastisite nan po a. Collagenase, yon endopeptidase zenk-depandan, se kapab degrade konpozan ECM, espesyalman, kalite 1 kolagen an. Elastase, yon anzim proteaz, kraze elastin, ak kolagen an, epi detèmine pwopriyete mekanik ak estriktirèl tisi konjonktif ECM la [17]. Se poutèt sa, li se dezirab yo devlope inibitè famasi pou anpeche po aje, tankou po afesman ak ondilasyon.

Chanpiyon yo te itilize kòm bon sous manje ak medikaman popilè tradisyonèl pou dè milye ane nan anpil peyi diferan. Kò fruktifikasyon yo gen metabolit byolojik-aktif ki gen gwo valè medsin, ki gen ladan b-glukan, polisakarid, polifenol, flavonoid, tèrpenoid, ak lòt konpoze òganik, ki bay stimulation iminitè, anti-tumeur, anti-ipèglisemi, anti-ipèr-. aktivite kolesterolemi, epatopwotektif ak enflamasyon [18-20].

Phellinus vaninii, souvan ke yo rekonèt kòm 'sanghuang', fè pati Basidiomycota, Aphyllophorales, Hymenochaetacae epi li distribye nan Azi de Lès ak Larisi [21]. Plizyè espès djondjon ki fè pati genus Phellinus, ki gen ladan Ph. baumi, Ph. gilvus, Ph. linteus, Ph. merrillii, ak Ph. pini, yo te etidye pou potansyèl antioksidan medsin yo, anti-dyabetik, anti-ipèlipidemi, aktivite anti-mikwòb, ak anti-timè [22,23].

Malgre ke Ph. vaninii te vin disponib nan Kore di, gen sèlman kèk rapò sou efè medsin li yo [24]. Se poutèt sa, objektif etid sa a se te evalye antioksidan, anti-xanthine oksidaz, efè anti-melanogenic ak anti-rid nan metanol la ak ekstrè dlo cho nan Ph. vaninii fruktifikasyon kò.

2. Materyèl ak metòd

2.1. Pwodwi chimik ak reyaktif

Butyl hydroxytoluene (BHT), 1,1-diphenyl-2- picryl-hydrazy (DPPH), dimethyl sulfoxide, (DMSO) xanthine oksidaz, tirozinaz, L-3, 4-dihydroxypheny -lalanine (DOPA), xanthine oksidaz, allopurinol, asid kojik, arbutin, kolagenaz, ak elastaz pankreyas pòsin yo te achte nan men Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA), ak tout lòt pwodui chimik ak solvang yo itilize pou eksperyans etid yo te nan klas analitik.

2.2. Ekstrè djondjon

Kò yo fruktifikasyon nan Ph. vaninii yo te jwenn nan Enstiti rechèch djondjon nan Gyeonggi Agrikòl Teknoloji Enstiti nan Kore di. Kò fwi yo te cheche lè (45 degre pou 48 èdtan) ak tise byen pulverize. Pou prepare ekstrè methanol (ME), yo te kenbe 20g poud lan nan 400mL 80 pousan metanol nan yon shaker òbital (125 rpm) pou 24 èdtan nan 25 degre. Solisyon an te filtre nan papye filtre. Pou jwenn ekstrè dlo cho a (HE), yo te bouyi menm kantite lajan an nan poud lan pou 3 èdtan ak 400mL dlo distile deyonize epi filtre nan papye filtre. Lè sa a, rezidi ki rete a te ekstrè ak 400mL nan 80 pousan metanol oswa dlo cho de fwa, jan sa dekri pi wo a, respektivman. Lè sa a, ekstrè yo konbine yo te evapore nan sechrès nan 40 degre, epi yo te retire dlo ki rete a ak yon seche friz.

Cistanche ekstrè

2.3. Kontni total fenolik ak flavonoid

Yo te detèmine kontni fenolik total ME ak HE lè l sèvi avèk yon ti modifikasyon nan tès Folin-Ciocalteu [25]. Yon aliquot 1 mL ME ak HE te ajoute nan 1 mL solisyon 10 pousan Folin-Ciocalteu. Solisyon an te vortexed epi kite pou 3min nan 25 degre. Lè sa a, 3 mL 2 pousan kabonat sodyòmYo te ajoute solisyon (Na2CO3) epi kenbe pou 2h nan 25 C. Yo te mezire absorbans ak yon espektwomèt nan 760nm. Kontni fenolik total la te eksprime kòm ekivalan mg asid galik (GAE).

Kontni total flavonoid la te mezire pa yon ti jan modifye klori aliminyòm (AlCl3) tès kolorimetrik [26]. Yo te fonn yon aliquot (1 mL) ME ak HE nan 1 mL dlo deyonize. Yo te ajoute solisyon sa a (1 mL) nan 3.0 mL 95 pousan alkòl, 0.2 mL nan 10 pousan klori aliminyòm, 0.2mL acetate potasyòm (1M), ak 5.6mL dlo deyonize. Lè sa a, melanj reyaksyon an te enkube a 25 degre pou 40min, epi yo te mezire absorbans la ak yon espektwomèt nan 415 nm. Kontni total flavonoid la te eksprime kòm ekivalan mg quercetin (QE).

2.4. Tès viabilite selilè

2.4.1. Kilti selilè

Seliy selil B16-F10 melanom murin B16-F10 la te jwenn nan Korean Cell Line Bank nan Korean Cell Line Research Foundation, Seoul, Kore di. Selil yo te kiltive nan Dulbecco's Modified Eagle's Media (DMEM) complétée ak 10 pousan serom fetal bovine chalè-inaktive (FBS), ak 1 pousan penisilin-streptomycin nan 37 degre nan enkibatè imidite ak 5 pousan CO2 atmosferik.

2.4.2. Viabilite selilè

Efè ME ak HE sou viabilite selil B{{0}}F10 selil yo te estime pa tès MTT [27]. Selil yo (5 104) yo te kiltive nan yon plak 24-byen epi yo te enkube pou 24 èdtan nan 37 degre. Lè sa a, selil yo te trete ak diferan konsantrasyon ME ak HE (25-750mg / mL) ak enkubasyon pou 48h. Lè sa a, chak pi te konplete ak 200 mL nan solisyon MTT (0.5mg / mL) ak enkubasyon pou 4h nan fè nwa a. Kristal formazan koulè ki te lakòz yo te solubilize nan 200mL DMSO epi yo te mezire absorbans ak yon lektè microplate nan 570 nm.

2.5. Test antioksidan

2.5.1. Aktivite dechaj DPPH

Efè scavenging radikal ME ak HE soti nan Ph. vaninii fruktifikasyon kò yo te detèmine lè l sèvi avèk tès la DPPH [28] ak modifikasyon minè. Yon ti tan, 1mL nan diferan konsantrasyon ME ak HE (0.125-2.{0mg/mL) te melanje ak I mL nan DPPH (0.1 mM) nan metanol. Te melanj lan souke epi kenbe pou 30 minit nan 25 degre. Absorbans la te mezire ak yon espektrofotomèt nan 517nm. Yo te kalkile efè radikal DPPH ak fòmil sa a:

DPPH radikal aktivite scavenging pousan=[ (Absc—Abss) / Absc ] × 100,

kote Absc reprezante absorpsyon kontwòl veyikil la epi Abss reprezante absorpsyon echantiyon an. BHT te itilize kòm yon estanda referans.

2.5.2. Anpèchman peroksidasyon lipid

Yo te evalye aktivite inhibitor peroksidasyon lipid ME ak HE ki soti nan kò fruktifikasyon Ph. vaninii lè l sèvi avèk yon metòd ki dekri deja [29] ak modifikasyon minè. Yon ti tan, 250mL omojene jòn ze (10 pousan nan dlo distile), 5{0mL chak ME ak HE, ak 200mL dlo distile yo te ajoute nan yon tib tès. . Vennsenk mililit FeSO4 (0.07 M) te ajoute ak enkubasyon pou 30 min nan 25 C. Lè sa a, 750 mL nan 20 pousan asid acetic (pH 3.5) ak 750 mL nan 0.8 pousan asid thiobarbituric (TB) nan 1.1 pousan dodecyl sodyòm. silfat (SDS) ak 25 mL nan 20 pousan asid tri-chloroacetic (TCA) yo te ajoute epi yo te melanj lan vortexed ak enkube nan yon beny dlo pou 60min nan 100 C. Apre refwadisman a 25 C, 3.0mL nan 1- butanol te ajoute nan chak tib epi yo te santrifuje pou 10min nan 3000rpm. Yo te mezire absorbans solisyon an ak yon espektrofotomèt nan 532 nm. Efè inhibition peroksidasyon lipid yo te kalkile lè l sèvi avèk fòmil sa a:

Anpèchman peroksidasyon lipid (pousan)=[(Absc – Abs)/Absc] × 100,

kote Absc reprezante absorpsyon kontwòl veyikil la epi Abss reprezante absorpsyon echantiyon tès la. BHT te itilize kòm yon estanda referans.

2.5.3. Aktivite netwayaj radikal Hydroxyl

Yo te mezire efè hydroxyl radikal ME ak HE nan kò fruktifikasyon Ph. vaninii lè l sèvi avèk yon metòd pibliye [30] ak ti chanjman. An brèf, yo te enkube 0.5mL diferan konsantrasyon ME ak HE (0.125–2.0mg/mL) nan yon solisyon ki gen 10{ {34}}mL 2.8mM 2-deoksiriboz nan tanpon fosfat (10mM, pH 7.4), 200mL FeCl3 (200 microM)-EDTA (1.04 microM) (1:1 v/v), 100 ml nan H2O2 (1.0 mM), ak 100 mL nan asid ascorbic (1.0mM). Yo te mezire kantite degradasyon deoxyribose apre adisyon 1.0mL 1 pousan TBA, ki te swiv pa enkubasyon nan 100 C pou 20 min. Yo te mezire absorbans la sou yon espektrofotomètr nan 532nm. Yo te kalkile efè inhibition nan idroksil radikal ak fòmil sa a:

Echapman radikal idroksil (pousan)=[(Absc – Abs) / Absc] × 100

kote Absc reprezante absorpsyon kontwòl veyikil la epi Abss reprezante absorpsyon echantiyon tès la. BHT te itilize kòm yon estanda referans.

2.6. Anpèchman xanthine oksidaz

Aktivite inhibitor xanthine oksidaz (XO) ME ak HE soti nan kò fruktifikasyon Ph. vaninii te mezire lè l sèvi avèk xanthine kòm substra a pa yon metòd pibliye ak modifikasyon minè [31]. Yo te ajoute yon aliquot 1mL nan divès konsantrasyon ME ak HE (0.5–8.0 mg/mL) nan 2.9 mL tanpon fosfat (pH 7.5) ak 0 .1mL solisyon anzim xanthine oksidaz (0.1 inite/mL nan tanpon fosfat pH 7.5) epi pre-enkube a 25 C pou 15 min. Lè sa a, reyaksyon an te inisye pa adisyon nan 2mL nan solisyon an substra (150mM xanthine nan tanpon an). Te melanj lan enkube pou 30 min nan 25 C ak reyaksyon an te sispann pa adisyon a nan 1 mL 1 N HCl. Absorbans la te mezire ak yon espektrofotomèt nan 290nm. Alopurinol te itilize kòm yon estanda referans. Anpèchman Xanthine oksidaz te kalkile lè l sèvi avèk fòmil sa a:

Anpèchman xanthine oksidaz (pousan)=[(A–B)–(C–D) / (A–B) ] × 100,

kote A se aktivite anzim san ekstrè a, B se kontwòl A san ekstrè ak anzim; C se aktivite ekstrè ak XO, D se aktivite ekstrè san XO.

2.7. Efè anti-melanogenic

2.7.1. In vitro anpèchman nan tirozinaz

Aktivite inhibition tirozinaz ekstrè djondjon yo te detèmine lè l sèvi avèk yon metòd pibliye [32] ak yon ti modifikasyon. Yon ti tan, yo te prepare melanj reyaksyon yo lè yo ajoute 40mL tirozinaz (31 inite/mL) ak 40 mL nan diferan konsantrasyon ME ak HE (0. 125-2.0mg/mL), 40mL nan 1.5mM L-tirozin, ak 80mL nan 0.1M tanpon fosfat (pH 6.8). Lè sa a, melanj lan te enkube pou 10 min nan 37 C. Absòbsyon an te mezire ak yon lektè microplate nan 475nm. Yo te kalkile anpèchman tirozinaz la ak fòmil sa a:

Anpèchman tirozinaz (pousan)=[(Absc – Abs) / Absc] × 100,

kote Absc reprezante absorpsyon kontwòl veyikil la epi Abss reprezante absorpsyon echantiyon tès la. BHT te itilize kòm yon estanda referans.

Cistanche se yon inibitè tirozinaz.

2.7.2. In vitro anpèchman DOPA oto-oksidasyon

Aktivite inhibition oto-oksidasyon L-DOPA ekstrè djondjon yo te detèmine lè l sèvi avèk yon metòd yon ti kras modifye [33]. Yon ti tan, yo te prepare melanj reyaksyon yo lè yo ajoute 40mL tirozinaz (31 inite/mL) ak 4{{10}} mL nan diferan konsantrasyon ME ak HE (0.125–). 2.0 mg/mL), ak pre-enkubasyon pou 10 min nan 37 C. Lè sa a, reyaksyon an te inisye pa adisyon a nan 40mL nan 2.5mM L-DOPA solisyon (nan tanpon fosfat) ak 80mL nan tanpon fosfat (0.1M, pH). 6.8) ak enkubasyon pou 10 min nan 37 C nan fè nwa a. Absorbans la te mezire ak yon lektè microplate nan 475nm. Pousantaj anpèchman otooksidasyon L-DOPA te kalkile lè l sèvi avèk fòmil sa a:

Anpèchman DOPA otooksidasyon (pousan)=[(Absc – Abss)/Absc] × 100,

kote Absc reprezante absorpsyon kontwòl veyikil la epi Abss reprezante absorpsyon echantiyon tès la. Yo te itilize asid kojik kòm yon estanda referans.

2.7.3. Aktivite selilè tirozinaz

Aktivite tirozinaz selilè nan selil B{{0}}F10 yo te mezire lè l sèvi avèk yon ti modifikasyon nan yon metòd pibliye [34]. Selil yo (5 105 selil/pi) yo te kiltive nan 96-plak pi. Apre tretman ak plizyè konsantrasyon echantiyon (25-500mg/mL) pou 24 èdtan, selil melanom yo te lave ak PBS, epi liz ak 0.1 M tanpon fosfat (pH 6.8) ki gen 1 pousan Triton X-100. Selil yo te kenbe sou glas pou 10min epi lisat yo te santrifuje nan 10,000 g pou 10min. Lè sa a, kontni an pwoteyin nan supernatant la te detèmine pa metòd la Braford, ak albumin serik bovine (BSA) kòm yon estanda. Pou mezire aktivite tirozinaz la, yo te ajoute 100 mL solisyon selil lisat ak 100 mL L-DOPA 2.5 mM (nan menm tanpon fosfat la) epi yo te ajoute nan chak pi nan yon plak 96-byen. Apre enkubasyon nan 37 C pou 1 èdtan, yo te mezire absòbe a nan 475nm lè l sèvi avèk yon lektè microplate. Aktivite tirozinaz selilè a te kalkile lè l sèvi avèk fòmil sa a:

Aktivite selilè tirozinaz (pousan)=(Abs/Absc) × 100,

kote Abss reprezante absorbans echantiyon an epi Absc reprezante absorpsyon kontwòl la. Arbutin te itilize kòm yon estanda referans.

2.7.4. Selilè melanin sentèz

Mezi kontni melanin nan selil B{{0}}F10 melanom yo trete ak diferan konsantrasyon ekstrè djondjon yo te fèt ak metòd Hosoi et al. [35]. Selil yo (4 × 104 selil/pi) yo te kiltive nan yon plak 96-byen nan DMEM. Apre 24 èdtan nan enkubasyon, selil yo te trete ak ME ak HE (25-500 mg / mL) pou 72 èdtan ki gen 0.4 mM òmòn melanosit-stimulan (MSH). Selil yo te rekòlte pa adisyon nan 300mL nan Triton 100 (1 pousan, PBS), santrifuje pou 5 min nan 3000 rpm, epi supernatant la retire. Lè sa a, 100mL NaOH 1N ak 200mL DMSO (10 pousan) yo te ajoute nan granules selil yo epi kenbe pou 1 èdtan nan 60 C. Yo te mezire absorbans solisyon an lè l sèvi avèk yon lektè microplate nan 405 nm. Yo te detèmine efè ME ak HE sou sentèz melanin. Arbutin te itilize kòm yon estanda referans.

Cistanche inibit melanin.

2.8. Efè anti-rid

2.8.1. Elastase anpèchman

Efè inhibition elastase ME ak HE te evalye pa metòd deja rapòte [36]. Elastase pankreyas pòsin (PE-EC. 3.4.21.36) te fonn nan dlo esteril pou fè yon solisyon stock 3.33mg/mL. Substra a, N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (AAAPVN), te fonn nan 0.2M Tris-HCl tanpon (pH 8.0). Reyaksyon an te fèt nan yon 96-microplate byen. Chak byen genyen 120mL 0.2M tanpon Tris-HCl, 50mL ekstrè djondjon (0.125-2.0 mg/mL) nan tanpon Tris-HCl, 30 mL PE, ak 50 mL AAAPVN 1.6 mM. Ekstrè tès la te pre-enkube nan 25 C pou 15 minit anvan adisyon nan substra a. Yo te mezire absòbe-ance ak yon lektè microplate nan 402nm. Pousantaj anpèchman esteraz la te kalkile jan sa a:

Anpèchman esteraz (pousan)=[(Absc – Abs)/Absc] × 100,

kote Absc reprezante absorpsyon kontwòl veyikil la epi Abss reprezante absorpsyon echantiyon tès la. EGCG te itilize kòm yon estanda referans, pandan y ap dlo distile yo te itilize kòm yon kontwòl negatif.

2.8.2. Anpèchman kolagenaz

Efè inhibition kolagenaz ME ak HE soti nan Ph. vaninii fruktifikasyon kò yo te envestige lè l sèvi avèk metòd deja rapòte [37] ak kèk modifikasyon. Collagenase ki soti nan Clostridium histolyticum (ChC–EC.3.4.23.3) te solubilize nan 5 0mM nan 1.44 U/mL tanpon Tricine (pH 7.8). Substra a, 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg trifluoroacetate sèl (PZ-peptide), te fonn nan 2.5 mM tanpon Tricine. Vennsenk mikrolit ekstrè dyondyon (0.125 a 2.0 mg/mL) yo te enkube ak 20mL anzim nan 155mL tanpon pou 15 min nan 37 C anvan adisyon a nan 50 mL nan PZ-peptide kòmanse a. reyaksyon pou 60min nan 37 C. Yo te sispann reyaksyon an pa adisyon a nan 1 mL asid asid (3 pousan). Lè sa a, yo te ajoute 5 mL acetate etil epi yo te solisyon an kouray souke epi li te pèmèt yo kanpe pou 10 min. Yo te mezire absorbans supernatant a nan 320nm lè l sèvi avèk yon lektè microplate. EGCG te itilize kòm yon estanda referans. Yo te kalkile anpèchman kolagenaz ak fòmil sa a:

Anpèchman kolagenaz (pousan)=[(Absc – Abs)/Absc] × 100,

kote Absc reprezante absorpsyon kontwòl veyikil la epi Abss reprezante absorpsyon echantiyon tès la. EGCG te itilize kòm yon estanda referans.

2.9. Analiz estatistik

Tout done yo te eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda (SD) epi yo te itilize SPSS V.13 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) pou analiz estatistik. Yo te itilize analiz yon-fason nan divèjans ki te swiv pa tès miltip Duncan yo pou konpare mwayen pami gwoup yo. Diferans ant mwayen nan 5 pousan (p<.05) level="" were="" considered="" statistically="">

3. Rezilta ak diskisyon

3.1. Total fenolik ak flavonoid kontni

Kontni total fenolik ak flavonoid ME ak HE yo prezante nan Tablo 1. Rezilta yo revele ke kontni total fenolik ak flavonoid ME yo te 31.67 mg GAE/g ak 6.83 mg QE/g, respektivman, tandiske sa yo pou HE yo te 16.33mg. GAE/g ak 4.50mg QE/g, respektivman. Vamanu ak Nita [38] rapòte ke kontni total fenolik nan metanol ak ekstrè dlo cho soti nan kò fruktifikasyon nan Boletus edulis yo te 18.96 mg GAE / g epi yo te 17.22 mg GAE / g, respektivman, pandan y ap kontni flavonoid nan ekstrè metanol soti nan Boletus aestivalis. ak Leccinum carpini kò fruktifikasyon te 1.53mg CE / g ak 1.48mg CE / g, respektivman [39]. Rezilta nou yo sijere ke kontni an total fenolik ak flavonoid nan ekstrè djondjon yo te pi wo pase sa yo ki nan dyondyon yo mansyone pi wo a, epi yo ka te kontribye nan amelyorasyon nan antioksidan ki gen rapò ak anti-xanthine oksidaz, anti-melanogenic ak po anti. -aktivite rid.

3.2. Viabilite selilè

Pou detèmine si ekstrè ki soti nan kò fruktifikasyon Ph. vaninii te montre yon efè sitotoksik sou selil B16- F10 melanom murin yo, selil yo te trete ak diferan konsantrasyon ME ak HE pou 72 èdtan, e MTT te detèmine viabilite selil la. esè. Viabilite selil ME- ak HE-trete selil yo te varye ant 99.74 a 85.33 pousan ak 100.67 a 88.33 pousan nan 50 a 750mg/mL, respektivman (Figi 1). Vitabilite selil yo diminye ak ogmante konsantrasyon ekstrè djondjon yo. Depi viabilite selil yo trete ak 500mg/mL ME ak HE te plis pase 90.33 pousan ak 91 pousan, respektivman, ak valè IC50 ME ak HE yo te 4,410 mg/mL ak 5,385 mg/mL, respektivman, ME ak HE pa t '. sitotoksik nan selil melanom B16-F10 nan konsantrasyon yo teste yo. Se poutèt sa, aktivite sentèz tirozinaz selilè ak melanin selil melanom B16-F10 trete ak diferan konsantrasyon ekstrè djondjon yo te fèt.

3.3. Aktivite antioksidan

3.3.1. Efè netwayaj radikal DPPH

DPPH radikal scavenging efè ME ak HE soti nan kò yo fruktifikasyon nan Ph. vaninii ogmante ak ogmante konsantrasyon ekstrè. Aktivite radikal ME ak HE nan {{0}}.125–2.0 mg/mL te varye ant 75.83 pousan a 95.17 pousan, ak 73.33 pousan a 94.33 pousan, respektivman, ak BHT. , kontwòl pozitif la, te demontre bon aktivite scavenging (96.19-96.97 pousan) (Figi 2 (A)). Malgre ke aktivite DPPH scavenging ME ak HE te pi ba pase BHT nan konsantrasyon ki sòti nan 0.125 a 0.5 mg/mL, pousantaj anpèchman obsève nan ME ak HE nan 1.{{ 24}}–2.0 mg/mL te estatistik ensiyifyan konpare ak BHT. Rezilta sa yo sijere ke méthanol yo ak ekstrè dlo cho posede bon aktivite scavenging radikal nan pi gwo konsantrasyon teste yo.

Yo rapòte aktivite DPPH pou retire methanol ekstrè nan kò fruktyèl Pleurotus pulmonarius yo varye ant 25.67 pousan ak 92.73 pousan nan 0.125 a 2.0mg/mL [40] . Mau et al. [41] te jwenn ke efè scavenging radikal yo nan ekstrè metanol yo nan Tricholoma giganteum, Grifola frondosa, ak dyondyon Hericium erinaceus te varye ant 63.2 pousan ak 67.8 pousan nan konsantrasyon 6.4mg/mL. Se poutèt sa, rezilta eksperimantal nou yo sijere ke aktivite DPPH scavenging ME ak HE (0.125-2.0 mg/mL) nan Ph. vaninii fruktifikasyon kò ka bay yon defans adekwat nan blesi radikal gratis ak ROS.

Figi 2.Aktivite antioksidan nan metanol ak ekstrè dlo cho soti nan kò fruktifikasyon nanPhellinus vaninii.

3.3.2. Anpèchman peroksidasyon lipid

Aktivite inhibition peroksidasyon lipid ME ak HE soti nan kò fruktifikasyon P. vaninii te varye ant 44.99 ak 66.08 pousan ak soti nan 41.26 a 64.00 pousan nan {{1{{16} }}}.125-2.0mg/mL, respektivman (Figi 2(B)), ki endike ke ogmante konsantrasyon nan ekstrè djondjon ogmante anpèchman peroksidasyon lipid. Sepandan, efè inhibition peroksidasyon lipid BHT te 90.30 pousan nan 2.0 mg/mL, ki te siyifikativman pi wo (p.<.001) than="" those="" of="" me="" and="" he.="" the="" ic50="" values="" of="" me="" against="" lipid="" peroxidation="" from="" wild="" and="" cultivated="" mushrooms="" including="" pleurotus="" ostreatus,="" termitomyces="" robustus,="" pleurotus="" sajor-caju,="" and="" auricularia="" auricula="" were="" 0.15,="" 0.43,="" 0.75,="" and="" 1.51mg/ml,="" respectively="" [42].="" the="" inhibi-="" tory="" effects="" of="" hot="" water="" extracts="" on="" lipid="" peroxida-="" tion="" of="" 14="" different="" edible="" and="" medicinal="" mushroom="" species="" collected="" from="" malaysia="" ranged="" from="" 33.33%="" to="" 57.18%="" at="" the="" concentration="" of="" 10="" mg/ml="" [43].="" in="" this="" study,="" the="" lipid="" peroxidation="" inhibitory="" activity="" of="" me="" and="" he="" from="" ph.="" vaninii="" ranged="" from="" 65.87%="" to="" 78%="" at="" 2.0mg/ml="" and="" their="" ic50="" values="" were="" 0.19="" mg/ml="" and="" 0.17="" mg/ml,="" respectively.="" these="" results="" suggest="" that="" me="" and="" he="" from="" ph.="" vaninii="" fruiting="" bodies="" possessed="" good="" inhibitory="" activity="" toward="" lipid="" peroxidation="" compared="" to="" the="" mushrooms="" described="" above.="" therefore,="" p.="" vaninii="" fruiting="" bodies="" could="" be="" a="" valuable="" antioxidant="">

3.3.3. Hydroxyl radikal scavenging efè

Efè hydroxyl radikal scavenging ME ak HE soti nan Ph. vaninii te varye ant 75,6 0 a 98,19 pousan ak 65,21 a 97,55 pousan nan 0.125 a 2.0 mg/mL konsantrasyon. trations, respektivman, tandiske sa yo ki nan BHT alan soti nan 79.89 a 92.66 pousan (Figi 2 (C)). Sepandan, valè IC50 ME ak HE nan Ph. vaninii yo te 0.115 mg/mL ak 0.119, respektivman, tandiske IC5{{4{{46} }}} valè BHT te 0.111mg/mL, ki endike ke efè hydroxyl radikal scavenging ME ak HE yo te yon ti kras pi ba pase sa yo ki nan BHT. Kidonk, ME ak HE soti nan Ph. vaninii posede aktivite relativman bon ak konparab idwoksil radikal scavenging nan konsantrasyon yo teste. Aktivite ki pi wo yo te jwenn nan ME ak HE nan eksperyans sa a pi wo idroksil radikal yo te endike ke ekstrè yo efektivman anpeche dekonpozisyon 2-desoksiriboz la lè yo retire radikal idwoksil nan solisyon tès la. Ekstrè metanol ki soti nan kò fruktifikasyon Pleurotus pulmonarius yo te rapòte ke yo te gen yon efè 95.13 pousan hydroxyl radikal scavenging nan 2.0mg/mL [40], ki te pi ba pase sa yo ki nan ME (98.18 pousan) ak HE (97.55 pousan) soti nan Ph. vaninii nan konsantrasyon teste. Yo te rapòte efè hydroxyl ekstrè metanol ki soti nan kò fruktifikasyon dyondyon Hypsizigus ulmarius se 76.67 pousan nan 1.0mg/mL [44], tandiske ME ak HE te 83.00 pousan ak 77.17 pousan nan. 0.25 mg/mL. Ansanm, rezilta nou yo sijere ke efè hydroxyl radikal scavenging ME ak HE soti nan Ph. vaninii te pi bon pase sa yo nan ekstrè djondjon yo mansyone pi wo a. Se poutèt sa, ME ak HE soti nan Ph. vaninii se pisan hydroxyl scavengers radikal ki ka itilize yo anpeche pwoblèm ki gen rapò ak ROS.

3.4. Anpèchman xanthine oksidaz

Aktivite inhibitor xanthine oksidaz ME ak HE soti nan Ph. vaninii ogmante ak ogmantasyon konsantrasyon. Anpèchman xanthine oksidaz ME ak HE nan {{0}}.5 a 8.0mg/mL te varye ant 61.15 pousan ak 88.99 pousan, ak 34.13 pousan a 84.56 pousan, respektivman. Sepandan, allopurinol, estanda referans la, te demontre ekselan aktivite inhibitor XO nan 89.73 a 97.23 pousan nan menm konsantrasyon yo teste (Figi 3). Malgre ke ME ak HE te montre aktivite inhibiteur modere XO nan pi ba konsantrasyon, ekstrè djondjon yo siyifikativman anpeche XO nan pi wo konsantrasyon. Yo rapòte ke anpèchman XO pa metanol la ak ekstrè dlo cho nan kò fruktifikasyon Ph. gilvus yo varye ant 28.60 pousan a 86.20 pousan ak soti nan 36.53 pousan a 97.07 pousan nan 0.5 a 8.0mg. /mL, respektivman [45], ki endike ke efè inhibition ME ak HE nan direksyon XO yo te konparab ak sa yo ki nan Ph. gilvus.

Flavonoid, yon klas nan konpoze polifenolik, se metabolit segondè ki pi komen nan plant ak fongis, epi yo te rapòte yo posede aktivite inhibitor xanthine oksidaz [46]. Pakonsekan, pi wo konsantrasyon fenolik ak flavonoid yo detekte nan ME ak HE ka kontribye nan anpèchman xanthine oksidaz.

3.5. Efè blanchi po a

3.5.1. Nan vitro anpèchman tirozinaz

Aktivite inhibition tirozinaz ME ak HE nan kò fruktifikasyon Ph. vaninii te varye ant 55,83 pousan ak 96,16 pousan ak 30.29 pousan a 92,74 pousan nan 0.125-2.{{ 17}} mg/mL, respektivman (Figi 4(A)), ak ogmante ak ogmantasyon konsantrasyon. Sepandan, asid kojik, estanda referans la, te demontre ekselan aktivite inhibitor tirozinaz ant 98.74 ak 99.61 pousan nan {{2{{30}}}}.125-2.0mg/mL. Rezilta yo sijere ke ME a montre yon bon efè, pandan ke HE te montre yon efè modere, nan konsantrasyon yo teste. Alam et al. [47] rapòte ke anpèchman tirozinaz la pa metanol ak ekstrè dlo cho soti nan kò yo fruktifikasyon nan P. salmoneostramineus te varye ant 20.90 pousan a 63.29 pousan ak soti nan 15.25 pousan a 49.25 pousan nan 0.125-1.0mg / mL, respektivman, ki endike ke inhibitory a. aktivite Ph. vaninii sou tirozinaz yo te pi wo pase sa yo ki nan kò fruktifikasyon P. salmoneostramineus.

Konpoze fenolik yo se konpoze asid aromat ki gen bag fenolik ak asid karboksilik. Flavonoid yo se yon gwoup konpoze polifenolik. Yo jwenn yo nan anpil plant ak espès djondjon. Polifenol yo konsidere kòm substrats pou tirozinaz epi yo se pi gwo gwoup inibitè tirozinaz. Plizyè polifenol yo te rapòte pou anpeche tirozinaz lè yo mare nan sit aktif anzim tirozinaz la, sa ki lakòz inaktivasyon irevokabl nan anzim nan pa yon entèraksyon ki sanble ak substra [48]. Gen kèk flavonoid tou demontre yon efè inhibition sou tirozinaz pa chelation nan iyon yo kwiv nan tirozinaz [49].

Se poutèt sa, efè inhibition ME ak HE nan direksyon tirozinaz ta ka akòz konpoze polifenolik ak flavonoid ki prezan nan ekstrè djondjon yo. Efè antioksidan ME ak HE ka kontribye tou nan anpèchman aktivite tirozinaz.

3.5.2. Anpèchman DOPA oto-oksidasyon

L-DOPA se youn nan précurseurs de melanin pandan melanogenesis. L-DOPA se sentèz soti nan L-tirozin pa tirosinaz idroksilaz. Tyrosinase kapab tou konvèti L-DOPA nan dopaquinone, evantyèlman mennen nan melanin. En vitro, L-DOPA oto-oksidasyon aktivite inhibition nan P. vaninii yo rezime nan Figi 4 (B). Anpèchman otooksidasyon L-DOPA pa ME ak HE te varye ant 38,25 pousan ak 78,46 pousan ak ant 29,68 pousan ak 44,77 pousan nan 0.125 a 2.0 mg/mL, respektivman. , tandiske asid kojik demontre ekselan aktivite inhibition L-DOPA nan 86.14 a 98.72 pousan nan konsantrasyon an teste. Rezilta yo te montre ke ME ak HE modere inibi otooksidasyon L-DOPA. Sepandan, ME ak HE te montre mwens aktivite inhibitor sou L-DOPA oto-oksidasyon lè L-DOPA te itilize kòm yon substra pase lè L-tirozinaz te itilize kòm yon substra nan tirozinaz. Piske tirozinaz sèvi ak de sit obligatwa diferan pou tirosin idroksilaz ak L-DOPA oksidaz, rezilta eksperimantal nou yo sijere ke efikasite selektif nan tirosinaz sou de substrats yo diferan pandan melanogenesis.

3.5.3. Aktivite selilè tirozinaz

Yo te detèmine aktivite tirozinaz intraselilè apre yo fin trete selil yo ak diferan konsantrasyon ME ak HE nan kò fruktifikasyon Ph. vaninii. Efè ME ak HE sou aktivite tirozinaz B10-F10 selil melanom te varye ant 96.94 pousan ak 61.14 pousan ak ant 98.12 pousan ak 84.16 pousan nan 25-500 ug/mL, respektivman, tandiske arbutin te montre aktivite tirozinaz nan 98.52 a 58.12 pousan nan konsantrasyon teste (Figi 5 (A)), ki endike ke anpèchman tirozinaz nan arbutin te pi wo pase sa yo ki nan ME ak HE. Rezilta yo te montre tou ke aktivite tirozinaz ME te pi wo pase HE e ke ogmantasyon konsantrasyon ME ak HE te lakòz diminye aktivite tirozinaz intraselilè. Malgre ke efè inhibitor tirozinaz nan vitro ME ak HE nan 500 ug/mL te 84.39 pousan ak 45.64 pousan, respektivman, anpèchman tirozinaz selilè nan selil B16-F10 melanom selil yo te 38.86 pousan ak 15.24 pousan, respektivman nan menm konsantrasyon tès la, ki endike ke faktè yo ekstrè djondjon ki responsab pou anpèchman tirozinaz pa t 'kapab penetre selil yo efektivman. Huang et al. [50] te rapòte ke aktivite tirozinaz selilè nan ekstrè metanol soti nan kò fruktifikasyon nan Agaricus brasiliensis te 95.75 pousan -67.12 pousan nan 100-500 ug/mL nan selil melanom B16-F10, ki sijere ke aktivite tirozinaz selilè. nan Ph. vaninii te ti kras pi wo pase sa yo ki nan A. brasiliensis nan konsantrasyon an menm teste.

Pou evalye si diminye aktivite tirozinaz intraselilè a ak redwi pwodiksyon melanin yo obsève nan selil melanom B16-F10 yo te akòz sitotoksisite ekstrè djondjon yo, yo te fè yon tès MTT. Nan tès MTT la, selil B16-F10 melanom trete ak ME ak HE te montre viabilite selil 105 pousan a 90.33 pousan, ak 107 pousan a 91 pousan nan 50-500 mg/mL, respektivman, ki endike ke ekstrè djondjon yo. pa t toksik pou selil melanoma B16-F10 nan konsantrasyon yo teste yo (Figi 1).

3.5.4. Aktivite sentèz Melanin

Pou konfime si bon aktivite inhibitor tirozinaz selilè yo detekte nan eksperyans anvan an te gen rapò ak anpèchman sentèz melanin nan selil melanom B16-F1{0, pwodiksyon melanin selil melanom yo te plis envestige. Sentèz melanin B16-F1{0 selil melanom trete ak ME ak HE te varye ant 71.18 pousan ak 27.61 pousan ak ant 78.54 pousan ak 50.53 pousan, respektivman, nan 25-500 mg/mL, pandan y ap sentèz melanin pa arbutin te varye ant 73.50 pousan ak 35.16 pousan nan konsantrasyon yo teste (Figi 5(B)). Rezilta etid yo sijere ke anpèchman nan sentèz la melanin pa arbutin te pi wo pase sa yo ki nan HE men pi ba pase sa yo ki nan ME. Ogmantasyon konsantrasyon ekstrè djondjon yo te lakòz diminye sentèz melanin nan selil melanom B16-F10. Rezilta yo sigjere ke anpèchman nan sentèz melanin nan B16-F10 selil melonòm pa ME te siyifikativman pi wo pase sa yo ki nan arbutin, pandan y ap anpèchman nan pwodiksyon melanin pa HE te siyifikativman pi ba pase sa yo ki nan arbutin. Cha ak Kim [51] te demontre ke ekstrè fèrmante nan Cordyceps militaris te montre 66-47 pousan aktivite melanin sentetik nan 1.0-3.0 mg/mL nan selil melanom B16-F10, sa ki sijere ke aktivite inhibition nan sentèz melanin. nan ekstrè kò fruktifikasyon nan Ph. vaninii te pi wo pase sa yo ki nan fèrmante ekstrè nan Cordyceps militaris. Se poutèt sa, rezilta etid yo te demontre ke ekstrè djondjon yo pa sèlman anpeche aktivite tirozinaz nan vitro ak L-DOPA otooksidasyon, men tou diminye aktivite tirozinaz ak pwodiksyon melanin nan selil B16- F10 melanom. Ansanm, rezilta nou yo sijere ke ME ak HE ki soti nan Ph. vaninii kadav fwi yo ka konsidere kòm potansyèl nouvo sous anti-melanogenic pwoteksyon kont pigmantasyon po soti nan radyasyon iltravyolèt nan limyè solèy la.

3.6. Aktivite po anti-rid

3.6.1. Elastase anpèchman

Elastase, yon proteaz, responsab pou dekonpozisyon elastin ki jwenn nan ECM la.

Elastas yo ka fende elastin, osi byen ke lòt substrats, tankou kolagen an, fibronectin ak pwoteyin ECM. Sepandan, nan kondisyon natirèl, aktivite elastase esansyèl pou degradasyon pwoteyin etranje apre blese [52]. Pou retade aje po a, tankou ondilasyon, afesman, ak freckles, li nesesè pou anpeche degradasyon nan pwoteyin ki gen rapò ak ECM epi kidonk pwoteje pèt lastisite po a. Pousantaj inhibitor esteraz ME ak HE ki soti nan kò fruktifikasyon Ph. vaninii te varye ant 37,23 pousan ak 71,24 pousan ak ant 28,99 pousan ak 64,65 pousan nan 0.125-2.0 mg/mL, respektivman, tandiske EGCG demontre anpèchman esteraz nan 17.93 a 45.31 pousan nan konsantrasyon an teste (Figi 6 (A)). Pousantaj anpèchman elastase ME ak HE ta ka konsidere kòm ekselan konpare ak EGCG. Kim et al. [53] te rapòte ke ekstrè mycelia nan Tricholoma matsu- take te demontre ke aktivite inhibition elastase pa 81.4 pousan nan 1 00 mg / mL, ki endike ke efè yo inhibition nan ME ak HE soti nan Ph. vaninii sou elastase yo te pi ba pase sa yo ki an T. matsutake ekstrè. Choi ak Lee [54] demontre anpèchman elastaz pa metanol la ak ekstrè dlo cho nan kò fruktifikasyon Coriolus versi- koulè varye ant 21.5 pousan a 35.47 pousan ak soti nan 17.57 pousan a 25.86 pousan nan 1.0 a 3.0mg/mL. , respektivman, sijere ke anpèchman elastase ME ak HE yo te pi wo pase sa yo ki nan C. versi- koulè fruktifikasyon kò. Rezilta yo sijere ke ekstrè djondjon yo genyen potansyèl anti-rid pou anpeche elastin ak kolagen an soti nan degradasyon.

3.6.2. Anpèchman kolagenaz

Kolagenaz yo se metaloproteinaz ki kapab fendo plizyè molekil yo jwenn nan selil yo ak ECM, tankou kolagen an, elastin, fibronectin, jelatin, ak laminin. Kolagenaz yo itilize nan eksperyans sa a, kolagenaz bakteri (Clostridium histolyticum, ChC), tou degrade ECM la [55]. Se poutèt sa, yo te itilize kolagenaz bakteri pou teste aktivite anti-kolagenaz ekstrè djondjon yo. Aktivite inhibitor kolagenaz ME ak HE nan kò fruktifikasyon Ph. vaninii te varye ant 41.04 pousan a 63.02 pousan ak soti nan 26.40 pousan a 47.33. pousan nan 0.125-2.0 mg/mL, respektivman (Figi 6(B)), pandan y ap EGCG inibit kolagenaz 17.93 a 45.31 pousan nan konsantrasyon teste a. Rezilta yo sijere ke ME se te yon inibitè ekselan, tandiske HE revele efè inhibiteur modere nan konsantrasyon yo teste. Cheon et al. [56] rapòte ke anpèchman an kolagenaz pa etanòl ak ekstrè dlo cho soti nan kò yo fruktifikasyon nan Phellinus linteus te varye ant 3.4 pousan a 6.8 pousan ak soti nan 33.4 pousan a 89.6 pousan nan 0.05-1.0 mg / mL, respektivman, ki endike ke anpèchman kolagenaz pa ME soti nan Ph. vaninii te pi wo pase sa ki soti nan ekstrè dlo cho nan Ph. linteus kò fruktifikasyon Depi ME ak HE ekspoze bon anpèchman nan kolagenaz, ekstrè yo ka pwoteje ECM a ak kolagen an soti nan degradasyon ki te koze pa foto-aje. Malgre ke pifò aktivite inhibition elastase ak kolagenaz yo te demontre nan plant yo, ki gen ladan te blan, te vèt, jape sikomò, ak fwi jenkgo [57,58], sa a se premye rapò sou aktivite inhibition elastase ak kolagenaz ki soti nan ekstrè kò fruktyèl yo. soti nan Ph. vaninii, epi li ka reprezante yon nouvo sous ajan anti-rid.

An konklizyon, ekstrè nan kò fruktifikasyon soti nan Ph. vaninii ekspoze bon antioksidan, anti-xanthine oksidaz, tirozinaz, sentèz melanin, elastase, ak aktivite inhibitor kolagenaz. Aktivite inhibition xanthine oksidaz, tirozinaz, ak melanin sentèz yo ta ka itilize pou sous natirèl pou kontwole gout ak ajan pigmantasyon po, ak anpèchman elastaz ak kolagenaz ta ka bon sous pou trete maladi po ki gen rapò ak rid. Plis rechèch nesesè pou detèmine faktè ki bay anti-xanthine oksidaz, anti-tirosinaz, ak aktivite anti-rid nan ekstrè ki soti nan kò fruktifikasyon Ph. vaninii.

Cistanche se yon engredyan blanchiman po.

Pou plis enfòmasyon, tanpri klike sou foto a.