Anti-melanogenesis ak anti-tirozinaz pwopriyete Pistacia atlantica subsp. Ekstrè mutica sou selil melanom murin B16F10

Kontakte: ali.ma@wecistanche.com

Samira Eghbali-Feriz1, Akram Taleghani2, Hadi Al-Najjar3, Seyed Ahmad Emami1, Homa Rahimi4, Javad Asili1, Samira Hasanzadeh1, ak Zahra Tayarani-Najaran5,*

Résumé:Pistacia atlantica (P. atlantica) subsp. mutica te itilize nan medikaman tradisyonèl e li se popilè pou pwopriyete medsin li yo. Objektif etid sa a se te evalye efè metanol (MeOH), n-hexane, dichloromethane (CH2Cl2), n-butanol (BuOH), acetate etil (EtOAc), ekstrè dlo ak lwil esansyèl nan P. atlantica subsp. mutica sou sentèz melanin ak estrès oksidatif nan liy selil B16F10 melanom. Vitabilite selil B16F10 yo apre tretman ak ogmantasyon konsantrasyon diferan ekstrè plant lan (0.2-200 µg/mL) te mezire lè l sèvi avèk resazurin. Konpozisyon lwil esansyèl te idantifye pa analiz gaz-kromatografi-mass spèktrometri (GC-MS) ak efè inhibition sou sentèz melanin, djondjon.tirozinazaktivite, tirozinaz selilè, ak estrès oksidatif yo te evalye pa metòd kolorimetrik ak fliyometrik. Done yo te montre ekstrè nan konsantrasyon 0.2-200 µg/mL, pa t 'montre siyifikatif toksisite sou selil melanom men konsantrasyon 200 µg/mL nan lwil esansyèl te gen efè sitotoksik. Pistacia atlantica subsp. mutica ta ka anpeche djondjon antirozinazaktivite. Epitou, kantite melanin nan selil B16F10 te bese. Anplis de sa, kapasite nan P. atlantica subsp. Ekstrè mutica nan diminye kantite espès oksijèn reyaktif nan selil melanom revele remakabantioksidanaktivite. Anplis de sa, tout konsantrasyon lwil esansyèl pa te gen okenn efè enpòtan nan etid sa a. Lamelanogenesisinhibitory akantioksidanefè P. atlantica subsp. mutica sou selil B16F10 ka sijere aktivite blanchi potansyèl plant la pou itilize nan pwodwi swen po dèrmatolojik ak pou prevansyon aje po nan endistri kosmetik.Mo kle:anti-tirozinaz; Melanogenesis; P. atlantica subsp. mutica.

Klike soubenefis cistanche pou anti-oksidan

ENTWODIKSYON

Melanin se yon pigman po ki sentèz nan melanosom epi li transfere nan keratinosit pandan tout pwosesis fizyolojik yo rele.melanogenesis. Melanin jwe yon wòl enpòtan nan pwoteksyon kont domaj UV epi detèmine koulè po, cheve ak je yo. Pwodiksyon depase melanin atribiye nan melanom ak pigmantasyon nòmal nan po a (1-3). Anzim kle nan biosentèz melanin lan se tirozinaz ki katalize de reyaksyon separe, oksidasyon 3,4-dihydroxy-phenylalanine (DOPA) nan dopaquinone ak idroksilation L-tirosin nan DOPA (4).Tirozinazoswa polifenol oksidaz se yon kòb kwiv mete ki gen fonksyon melanje anzim yo jwenn nan mikwo-òganis, bèt, ak plant (5). Tirozinaz se faktè ki pi enfliyanse pou mawon fwi ak legim yo. Surpwodiksyon ak akimilasyon melanin ka lakòz yon gwo kantite maladi po ki gen ladan melasma, freckles, melanoz solè, ak tach laj (6). Se poutèt sa,tirozinazinibitè yo te atire anpil enterè nan manje ak endistri kosmetik. Nan anpil òganis vivan, oksidasyon esansyèl pou pwodiksyon enèji pou alimante pwosesis byolojik yo.

Sepandan, oksijene idwojèn (H2O2) ak lòt espès oksijèn reyaktif (ROS) lakòz lanmò selil ak domaj tisi nan anpil fenomèn fizyolojik ak patolojik ki gen ladan ogmantasyon ROS apre iradyasyon UV pandan pwosesis melanogenesis. Epitou, li se byen li te ye ke UV-pwovoke pwodiksyon de ROS ki enplike nan patojèn nan plizyè kondisyon po ki gen ladan aje, ondilasyon, fotosansibilite, ak maliyans (7). Kidonk, jwenn sous natirèl nanantioksidanak yon anti-tirozinazaktivite ede modifye domaj po ki gen rapò ak depasemelanogenesis (4).

Genus Pistacia a se yon manm nan fanmi an Anacardiaceae ki gen apeprè 9 espès epi li se sitou distribye nan rejyon Mediterane a, Ewòp, ak kèk pati nan pwovens Lazi (8,9). Pistacia atlantica (P. atlantica)Desf. gen 3 sousespès sètadi: P. atlanticasubsp. kurdica (Zohary) Rech. f., P. atlanticasubsp. mutica (Fischer & CA Meyer) Rech. f. ak P. atlantica subsp. cabulica (Stocks) Rech. f. Twa sou-espès mansyone P. atlantica, P. khinjuk Stocks, ak P. vera L. yo grandi nan Iran (10). Fwi yo nan P. atlanticasubsp. mutica sètadi Baneh se wonn ak oval ak 0.5-0.7 cm an dyamèt. Aktivite antioksidan ak antikansè nan kòk P. atlantica a te gen rapò ak kontni an fenolik total segondè nan plant la. P. atlantica te itilize tradisyonèlman pou soulaje malèz nan vant anwo ak doulè, dispèpsi, ak ilsè gastric (11-13). Sepandan, pa gen okenn etid sou melanogenesis aktivite inhibition nan P. atlantica subsp. mutica. Se konsa, nan pwojè sa a, nou chwazi selil B16F10 melanom pou etidye pwopriyete antioksidan ak anti-melanogenic P. atlantica subsp. ekstrè mutica. Objektif etid sa a se te mennen ankèt sou efè inhibitor metanol (MeOH), n-hexane, dichloromethane (CH2Cl2), n-butanol (BuOH), acetate etil (EtOAc), ekstrè dlo (H2O) ak lwil esansyèl nan P. atlanticasubsp. mutica fwi soumelanogenesisepi evalye potansyèl laantioksidankapasite plant la sou selil melanom B16F10.

MATERYÈL AK METÒD

Pwodwi chimik yo

Chanpiyontirozinazsoti nan Agaricus bisporus, asid kojik, resazurin, L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA), dichloro dihydro-fluorescein diacetate (DCFH-DA), asid egtazik (EGTA), dimethyl sulfoxide (DMSO). ), phenylmethylsulfonyl fliyò, glycerophosphate, -mercaptoethanol, fosfat-tanpon saline (PBS), orthovanadate sodyòm, tris-tampon saline tween 20 (TBST) te achte nan men Sigma (USA). Serum fetal bovine (FBS), penisilin, streptomycin, ak tripsin-EDTA te jwenn nan GibcoBRL (Grand Island, USA). Melanoma selil liy (B16F10, Cat. No C540) te achte nan men Enstiti Pasteur nan Iran (Tehran, IR Iran). Tout lòt pwodwi chimik yo ak solvants te soti nan Merck (Almay).

Preparasyon nan ekstrè

P. atlantica subsp. mutica te ranmase nan mwa me 2014 nan mòn Bardaskan, pwovens Khorasan Razavi, nòdès Iran e madan M. Souzani te idantifye. Yo te depoze yon echantiyon bon (No:13069) nan èrbyòm nan Lekòl Famasi, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, IR Iran. Fwi san mi nan P. atlantica subsp. mutica (200 g) yo te chita pa yon blenndè (Toos chekan Co, IR Iran) ak Lè sa a, percolated ak MeOH nan tanperati chanm pou 24 èdtan dapre pwotokòl la deja rapòte (14). Apre ekstraksyon, sòlvan an te evapore lè l sèvi avèk evaporateur rotary ak Lè sa a, friz-seche. Ekstrè nan metanol (94 g) te plis fraksyon nan sòlvan-sòlvan patisyon bay senk fraksyon diferan ki gen ladan MeOH, n-hexane, CH2Cl2, BuOH, EtOAc, ak H2O.

Izolasyon lwil esansyèl la

Fwi ki pa mi nan P. atlantica subsp.mutica (15 0 g) te sibi idwodistilasyon lè l sèvi avèk yon aparèy Clevenger-type pou 3 èdtan. Lwil san koulè a ​​te jwenn ak yon sede de 0.8 pousan (v/w). Yo te jwenn lwil esansyèl la cheche sou silfat sodyòm anidrid epi estoke nan 4 degre nan fè nwa jiskaske plis tès.

Gaz-kromatografi ak gaz-kromatografi-spèktrometri mas

Analiz gaz chromatography (GC) te fèt lè l sèvi avèk yon Varian CP{{0}} ekipe ak yon detektè FID, koòdone ak yon kolòn silica fusion (CP-Sil 8CB, 5{0 m × 0.25). mm, epesè fim 0.12 µm) nan kondisyon sa a: tanperati fou 50-250 degre ak pousantaj 3 degre /min; tanperati enjektè 260 degre, rapò fann 1: 5, ak gaz konpayi asirans, N2 pousantaj koule 2 mL / min; tanperati detektè 280 degre.

Analiz gaz-kromatografi-mas (GC-MS) yo te fèt lè l sèvi avèk yon aparèy Agilent 5975 ekipe ak yon kolòn HP-5 MS (30 m × 0.25 mm id, {{ 14}}.25 µm epesè fim) koòdone ak yon detektè mas kat fwa ak yon òdinatè ekipe ak bibliyotèk Wiley 7n.L. Tanperati dife pou chofe fou 50-250 degre ak pousantaj 3 degre /min, tanperati enjektè 250 degre, volim piki: 0.1 µL, fann piki ak rapò fann nan 1:50, ak vitès la koule gaz konpayi asirans (elyòm) 1 mL/ min, sous ion: 70 eV, aktyèl ionizasyon: 150 µA, ak ranje eskanè: 35-465. Idantifikasyon konpozan lwil esansyèl yo te baze sou retansyon gaz chromatografi yo te jwenn ak referans a seri n-alkan (C6-C20) sou kolòn HP{-5MS, konparezon spectre mas yo ak modèl fwagmantasyon yo te rapòte. nan literati a, ak òdinatè matche ak bibliyotèk Wiley 7n.L (15). Kantifikasyon kantite relatif eleman endividyèl fwi ki pa mi yo te fèt dapre metòd pousantaj zòn nan san yo pa konsidere faktè kalibrasyon.

Kilti selilè

Liy selil melanom, B16F10, kenbe nan 37 degre nan yon atmosfè imidite (90 pousan) ki gen 5 pousan CO2. Selil yo te kiltive nan RPMI-1640 (Bioidea, Iran) ak 10 pousan (v/v) FBS, 100 IU/mL penisilin, ak 100 µg/mL streptomycin. Solisyon stock P. atlantica subsp. mutica te prepare nan 50 µg/mL nan DMSO epi kenbe nan -40 degre. Kojik asid (2 ak 4 mM) te itilize kòm kontwòl pozitif nan tout eksperyans. Selil yo te kiltive nan 96-plak byen nan yon dansite 105 selil/mL. Yo te kalkile aktivite ekstrè a nan chak eksperyans ak ekwasyon sa a:

�pousan aktivite =Absorbans echantiyon an/Absòbsyon kontwòl la * 100

Tès viabilite selilè

Resazurin se yon endikatè sante selil ki sèvi ak pouvwa rediksyon selil vivan epi konvèti nan resorufin. Resazurin se yon konpoze ble, ki pa toksik, ki pa fliyoresan ak selil ki pèmeyab ki konvèti nan koulè wouj ak resorufin trè fliyoresan nan selil vivan (16). Apeprè 104 selil melanom B16F10 yo te simen nan chak pi nan 96-plak microwell epi yo te trete ak plizyè konsantrasyon ekstrè ak lwil esansyèl nan P. atlantica subsp. mutica (0.2-200 µg/mL). Apre 4 h enkubasyon, yo te mezire absorpsyon resazurin ak resorufin nan 570 nm ak 600 nm lè l sèvi avèk H4 Hybrid Multi-Mode microplate reader (BioTek, Winooski, USA). Chak eksperyans te fè an triple. Yo te kalkile konsantrasyon an demi-maksimòm inhibitor (IC50) lè l sèvi avèk lojisyèl GraphPad ki soti nan koub konsantrasyon-efè: log konsantrasyon vs repons.

Egzamen aktivite tirozinaz djondjon

Aktivite nan djondjontirozinazan oksidasyon nan L-DOPA te mezire spectrophotometrically jan sa dekri deja (17), ak kèk modifikasyon. Yon ti tan, 160 µL nan 5 mM L-DOPA (nan 100 mM tanpon sodyòm fosfat pH 6.8) ak 20 µL nan menm tanpon ak ak san P. atlanticasubsp. Ekstrè mutica ak lwil esansyèl (10-1000 µg/mL) yo te melanje ak 20 µL nan tirozinaz djondjon (200 inite/mL) ak Lè sa a, enkube nan 37 degre pou 30 min. Absòbsyon an te mezire nan 475 nm ak Synergy H4 Hybrid Multi-Mode microplate reader (BioTek, Winooski, USA).

Detèminasyon kontni melanin nan selil melanom

Selil melanòm yo, B16F10, yo te simen nan yon dansite 105 selil pou chak pi nan 96-plak kilti byen epi yo te enkube pou 24 èdtan. Lè sa a, yo te enkube ak diferan konsantrasyon (0.2-200 µg/mL) nan P. atlantica subsp. ekstrè mutica ak lwil esansyèl pou 24 èdtan. Kontni melanin la te mezire jan sa dekri deja (18). Apre tretman an, selil yo te kolekte lè l sèvi avèk tripsin. Yo lave ak PBS. Granules selil yo te solubilize nan 50 µL solisyon idroksid sodyòm (2 M) pou 60 min nan 60 degre. Kontni melanin la te mezire lè w mezire absorpsyon nan 405 nm ak lektè Microplate Synergy H4 Hybrid Multi-Mode (BioTek, Winooski, USA).

Selilè tès aktivite tirozinaz

Te oksidasyon DOPA DOPA chrome analize pa espektrofotometri kòm endikatè atirozinazaktivite (18). 106 selil B16F10 melanom yo te plake nan chak pi nan 96-plak byen lannwit lan. Apre tretman selil ak diferan konsantrasyon (0.2-200 µg/mL) nan P. atlantica subsp. Ekstrè mutica ak lwil esansyèl pou 24 èdtan, Selil yo te detache lè l sèvi avèk tripsin; lave ak PBS, epi liz ak 50 µL tanpon fosfat sodyòm (pH 6.8, 100 mM) ki gen 1 pousan triton X-100 ak 0.1 mM fliyò fenilmetilsulfonil. Lysates yo te santrifuje a 10,000 rpm pou 20 min nan 4 degre. 100 µL nan chak lysate (yo chak ki gen 100 mg pwoteyin) te melanje ak 30 µL nan 5 mM DOPA nan plak 96 byen ak enkubasyon nan 37 degre pou 2 èdtan, yo te mezire absorpsyon an nan 475 nm ak lektè Synergy H4 Hybrid Multi-Mode microplate. (BioTek, Winooski, USA).

Detèminasyon nivo espès oksijèn reyaktif selilè

Yo te mezire nivo espès oksijèn reyaktif jan sa dekri deja ak modifikasyon minè (19). Selil melanom, B16F10, (2 × 104) yo te simen nan 96-plak byen lannwit lan epi yo te trete ak konsantrasyon diferan (0.2-200 µg/mL) nan P. atlantica subsp. . ekstrè mutica ak lwil esansyèl pou 24 èdtan. Lè sa a, selil yo enkube ak 50 µL H2O2 (24 mM) nan 37 degre pou 30 min. Lè sa a, yo te ajoute 50 µL DCFH-DA nan selil yo epi yo te mezire entansite fluoresans DCF nan 504 nm emisyon ak 524 nm eksitasyon lè l sèvi avèk yon lektè microplate Synergy H4 (BioTek, USA).

Western blotting analiz

Selil melanom, B16F10, yo te kiltive nan flakon 75 cm3 ak ak san ekstrè metanol (0.{5-100 µg/mL) pou 24 èdtan. Lè sa a, selil yo te lysed nan yon tanpon (50 mM tris-HCl, pH 7.4, 2 mM EGTA, 1 mM phenylmethylsulfonyl fliyò, 10 mM glicerofosfat, 10 mM -mercaptoethanol, 1 mM orthovanadate sodyòm, deoxycholic asid. sèl sodyòm). Yo te chaje yon kantite egal pwoteyin (50 µg) sou 12 pousan sodyòm dodecyl sulfat (SDS)-polyacrylamid gel electrophoresis epi transfere nan manbràn polyvinylidene difluoride. Manbràn yo te bloke pou 2 èdtan nan 10 pousan lèt ekreme nan TBST (20 mM tris-HCl pH 7.4, 100 mM NaCl, ak 0.1 pousan tween 20) tanpon nan tanperati chanm. Apre yo fin lave ak tanpon TBST, yo te enkube manbràn nan lannwit lan ak yon antikò prensipal: 1:300 (lapen anti-tirozinazantikò (Santa Cruz Biotechnology, CA)). Apre rense 3 fwa ak tanpon TBST, manbràn yo te enkube pou 2 èdtan ak IgG anti-lapen (1:2000) kòm antikò segondè (siyal selil). Rense 3 fwa ak tanpon TBST te repete ak bann pwoteyin yo te detekte lè l sèvi avèk améliorée chemiluminescent (ECL) premye sistèm deteksyon Western blotting (BioRaD, USA) (20). Antikò anti- -aktin te itilize kòm kontwòl chajman an.

Analiz estatistik

Rezilta relatif eksperyans yo te prezante kòm mwayen ± SD nan twa mezi endepandan yo. Yo te fè analiz divèjans ak kalkil IC50 ak GraphPad Prism 6.0 lè l sèvi avèk yon tès ANOVA yon sèl-fason epi yo te konpare mwayen yo pa tès Dunnett. P <0.05 la="" vle="" di="" yon="" diferans="" estatistik="" enpòtan="" ant="" selil="" ekstrè-trete="" ak="" kontwòl.="" yo="" te="" itilize="" yon="" tès="" anova="" de-fason="" ak="" bonferroni="" konparezon="" apre="" tès="" pou="" konpare="" efè="" ekstrè="" diferan="" nan="" chak="">

REZILTA

Konpozisyon lwil esansyèl

Gaz-kromatografi te itilize pou quantification ak Gc-Mass pou idantifikasyon konpoze yo. Rezilta tou de analiz GC ak GC-MS yo prezante nan tablo idantifikasyon quantitative ak kalitatif konpoze yo. Nan ka P. atlanticasubsp. mutica, 68 elektè yo te idantifye nan lwil esansyèl la ak matirite pou 99.8 pousan nan konpozisyon lwil total la (Tablo 1). Konpoze gwoupe lwil esansyèl yo te detèmine kòm idrokarbur monoterpèn 86.5 pousan, monoterpèn oksijene 3.7 pousan, idrokarbur sesquiterpene 8.7 pousan, sesquiterpene oksijene 0.1 pousan, ak divès 0 .8 pousan . Konpozan prensipal yo nan lwil esansyèl la te -E-ocimene 29.7 pousan, myrcene 17.1 pousan, -Z-ocimene 17.0 pousan, -pinene 10.2 pousan, ak E-caryophyllene 7.1 pousan.

Efè ekstrè sou siviv selil yo

Yo te kontwole viabilite selil yo ak resazurin. Selil melanòm yo, B16F10, yo te simen nan yon plak 96-pou. Apre 24 èdtan, selil yo te trete ak diferan konsantrasyon (0.{2-200 µg/mL) nan P. atlantica subsp. mutica ekstrè, rezilta yo te montre ke ekstrè yo pa te gen okenn efè siytotoksik enpòtan sou selil B16F10 nan konsantrasyon yo itilize nan etid sa a (Fig. 1). Doxorubicin kòm kontwòl pozitif siyifikativman pwovoke lanmò selil (P <>

Efè ekstrè sou aktivite tirozinaz djondjon

Yo te evalye efè P. atlantica sou anpèchman tirosinaz djondjon nan oksidasyon L-DOPA. Rezilta yo endike ke djondjontirozinazaktivite te anpeche pa tout ekstrè diferan, men konsantrasyon nan 1000 µg/mL nan ekstrè n-hexane pa te gen okenn efè enpòtan nan tès sa a. Kojik asid (2 ak 4 mM) te itilize kòm yon kontwòl pozitif (P <0.05) (fig.="">

Efè ekstrè ak lwil esansyèl sou sentèz melanin

Pou etidye efè a nan ekstrè diferan ak lwil esansyèl nan P. atlantica subsp. mutica sou sentèz melanin, kontni melanin nan selil melanom B16F10 trete ekstrè yo te evalye. Kojik asid (2 ak 4 mM) te itilize kòm yon kontwòl pozitif.

Rezilta yo te montre ekstrè MeOH, CH2Cl2, ak EtOAc (0.{2-200 µg/mL), n-hexane ({2-200 µg/mL), ak H2O ekstrè (2{{9}). }} ak 200 µg/mL) te gen efè inhibition sou sentèz melanin (P <0.05) (fig.="" 3).="" sepandan,="" tout="" konsantrasyon="" lwil="" esansyèl="" ak="" ekstrè="" buoh="" pa="" te="" gen="" okenn="" efè="" inhibition="" enpòtan="" sou="" sentèz="" melanin.="" rezilta="" lwil="" esansyèl="" yo="" pa="" montre="" nan="" figi="">

Efè ekstrè sou aktivite tirozinaz selilè

Pou evalye mekanis efè inhibition P. atlantica subsp. mutica ekstrè soumelanogenesisan patikilye, nou evalye entraselilè atirozinazaktivite nan selil melanom B16F10. Rezilta yo te endike ekstrè MeOH, EtOAc, ak BuOH (0.{2-200 µg/mL), n-hexane (0.2 µg/mL), ak CH2Cl2 (20 ak 200). µg/mL) ekstrè P. atlantica subsp. mutica te kapab siyifikativman anpeche aktivite selilè tirozinaz (P <0.05) (fig.="" 4)="" men="" ekstrè="" dlo="" pa="" te="" gen="" okenn="" efè="" inhibition="" sou="" aktivite="" tirozinaz="">

Efè ekstrè sou nivo espès oksijèn reyaktif selilè

Nivo entracellulaire ROS kòm indicative de laantioksidankapasite nan P. atlantica subsp.mutica te mezire nan selil trete ak 24 mM H2O2 pou kont li oswa ak ekstrè diferan nan B16F10 selil melanom. Rezilta yo endike ke tout ekstrè konsantrasyon nan P. atlanticasubsp. mutica eksepte 0.2 µg/mL ekstrè CH2Cl2 te kapab siyifikativman siprime estrès oksidatif H2O2 (P <0.05) (fig.="">

Efè ekstrè sou nivo pwoteyin tirozinaz selilè

Efè entraselilè P. atlanticasubsp. mutica sou pwoteyin melanogenic ki gen rapò tankou tirozinaz kòm yon endikatè nanmelanogenesiste evalye pa Western blot. Jan yo montre nan Fig. 6,tirozinaznivo pwoteyin yo te siyifikativman diminye pa P. atlantica subsp. tretman ekstrè mutica nan konsantrasyon {{0}}.5 ak 10 µg/mL (P <0.05). -actin="" te="" itilize="" kòm="" kontwòl="">

Efè lwil esansyèl sou diferan paramèt

Lwil esansyèl nan 0.2-200 µg/mL pa devwale okenn efè enpòtan sou tout paramèt mansyone anwo yo, eksepte nan konsantrasyon 200 µg/mL, ki montre efè cytotoxik sou selil melanom yo. Pakonsekan, rezilta yo nan lwil esansyèl yo pa enkli nan seksyon an rezilta kòm pa gen okenn efè inhibition yo te obsève.

DISKISYON

Pwodwi kosmetik ki baze sou natirèl yo lajman pibliye pa ajans komèsyal yo pou sekirite yo ak aktivite multifonksyonèl. Jwenn nouvo ajan anti-mélanogenic akantioksidanaktivite ki soti nan sous natirèl se youn nan enterè yo nan fòmilasyon pwodwi yo itilize pou maladi hyperpigmentation. Nan pwodwi medsin ak kosmetik yo itilize kòm ajan blanchiman po, anpèchman fòmasyon melanin, elimine radikal gratis ak anpèchman nan.tirozinazaktivite ki enpòtan pou trete maladi po ki gen rapò (21).

Nan etid sa a aktivite antioksidan nan ekstrè diferan nan P. atlantica subsp. mutica te evalye ak efè yo sou aktivite tirozinaz la ak sentèz melanin yo te analize. Ekstrè MeOH ak EtOAc nan P. atlantika subsp. mutica te montre siyifikatifantioksidanaktivite nan 2, 20 µg/mL ak 20, 200 µg/mL ki ka atribiye a polifenol yo ak flavonoid lajman jwenn nan plant la. Rezilta yo te montre tout ekstrè yo espesyalman MeOH, EtOAc, ak H2O ekstrè te kapab siyifikativman anpeche djondjon la.tirozinazaktivite. Epitou, Ekstrè MeOH, EtOAc, ak BuOH yo te kapab diminye aktivite tyrosianse selilè ki an akò ak rediksyon nan pwodiksyon melanin nan selil yo. Nan etid sa a, tout konsantrasyon lwil esansyèl pa te gen okenn efè siyifikatif inhibitor kont tyrosianse selilè, sentèz melanin, akantioksidanaktivite. Akòz aktivite a plis nan ekstrè MeOH nan eksperyans diferan an konparezon ak ekstrè lòt nou te chwazi ekstrè a mansyone pou analiz Western blot. Pou rezime, efè anti-melanogenic ekstrè sa a te konfime nan tout tès nan selil B16F10, yo te konparab ak asid kojik kontwòl pozitif (Tablo 2).

Ekstrè MeOH, CH2Cl2, ak EtOAc yo te diminye selilètirozinazaktivite, kontni melanin, ak ROS. Semipolè nati fraksyon ka ekstrè fitochimik ki responsab pou aktivite antimelanogenic tankou polifenol ak flavonoid. Fraksyon n-hexane a ak lwil esansyèl yo te mwens aktif ki endike ke fitochimik plant ak nati nonpolè ak temèt pa gen yon efè enpòtan sou la.melanogenesispwosesis (22,23).

Polifenol ak flavonoid aji kòm inibitè nan pwodiksyon ROS epi yo ta ka responsab pou pwopriyete yo anti-melanogenic nan ekstrè plant (24-27). Konpoze yo pi gwo nan ekstrè nan P. atlantica subsp. mutica se quercetin, luteolin, isoquercetin, rutin, luteolin 7-laktat, ak konpoze fenolik tankou asid p-koumarik, asid kafeyik, ak asid galik ki responsab pouantioksidanaktivite (28). Yo te rapòte rutin anpéché aktivite tirozinaz e li se yon ajan anti-pigman ki pisan akòz prezans gwoup idroksil (29). Enteresan kercetin, luteolin, ak isoquercetin tou gen anpil gwoup idroksil nan estrikti yo ki fè yo apwopriye pou entèraksyon ak tirozinaz ki lakòz aktivite anti-tirosinaz la (21,30). Dènyèman, li te montre ke efè flavonoid tankou luteolin ak quercetin yo sitou medyatè atravè modulasyon faktè transcriptional la nanmelanogenesis-asosye faktè transcription (MITF) ak/oswa anzim yo melanogenesistirozinaz, DCT oswa pwoteyin 1 ki gen rapò ak tirozinaz (TYRP-1) (31). P-koumarik asid ak asid kafeyik inibit aktivite tirozinaz djondjon yo epi yo te 10- ak 3-pliye pi pisan pase asid kojik (32).

Asid galik montre aktivite inhibitor tirozinaz ak diminye dopaquinone tounen nan L-DOPA atravè monte bisiklèt redox, menm jan ak asid ascorbic (33). Menm jan an tou, nan etid prezan P. atlantica subsp. mutica diminye nivo pwoteyin tirozinaz nan selil ki gen anpil rapò ak prezans quercetin, luteolin, isoquercetin, rutin, ak lòt polifenol nan plant la.

Gen anpil rapò sou plant ki gen yon aktivite anti-melanogenic ak antioksidan ki diminye estrès oksidatif, ki ka gen yon gwo potansyèl pou tretman maladi po. Pou egzanp, ekstrè yo diferan nan pati ayeryen nan P. atlantica redwi estrès oksidatif, ki ka atribiye a polifenol yo, flavonoid, ak anthocyanin lajman yo te jwenn nan plant la (34). Nan yon lòt etid, ekstrè MeOH nan P. vera diminye sekresyon melanin ki te atribiye nan kèkantioksidankonpoze nan plant sa a. Etid sa a te endike ke asid kojik, kòm yon kontwòl pozitif, te montre yon valè IC50 de 0.05 mg/mL ak pi wo konsantrasyon nan P. vera ka itilize kòm yon ajan efikas pou tretman maladi po tankou kansè melanom (35). ). Gourine, et al. te montre pati ayeryen yo nan P. atlantica gen pwopriyete antioksidan pwisan (36). Epitou, MeOH ak CH2Cl2 fraksyon nan Nepeta satureioides endike efè potansyèl kont pwodiksyon melanin nan selil melanom B16F10 epi yo ka kontribye nan fòmilasyon kosmetik nan pwodwi swen pou po (37). Dérivés de sid kojic te gen aktivite inhibition soutirozinaz. Li sanble ke prezans nan gwoup idroksil gratis ak ranplasan methyl nan konpoze sa a konfime aktivite inhibition. Nan etid sa a asid kojik (kontwòl pozitif) endike yon IC5 0valè 0.28 mM (38). Glikozid fenilpropanoid ak flavonoid izole nan Teucrium polium L. var. gnaphalodes te montre aktivite antioksidan ak tirozinaz. Otè yo te montre jaranol te montre aktivite inhibition tirozinaz ki pi wo a (IC 50 0.041 mM) ak poliumosid te pi bon antioksidan nan mitan konpoze yo teste. Kojik asid te montre yon valè IC50 de 0.02 mM (39).

Diminye nan nivo pwoteyin nantirozinazpa P. atlantica subsp. mutica akantioksidanpwopriyete ak redwi ROS te konfime itilizasyon ajan sa a kòm yon ajan anti-melanogenesis. Etid sa a pou premye fwa te detèmine efè inhibition P. atlanticasubsp. mutica soumelanogenesisnan selil melanom B16F10. Yo nan lòd yo anpeche akimilasyon a ak twòp pwodiksyon nan melanin nan po a, anpèchman nantirozinazgen yon wòl enpòtan. Pakonsekan, ki gen rapò ak efè anti-oksidan rapòte nan P. atlantica subsp.mutica, flavonoid ak konpoze fenolik yo se eleman enpòtan nan plant la ki responsab pou anti-melanogenesis ak aktivite antityrosinase nan P. atlantica subsp. mutica. Tou de aktivite antioksidan ak anti-melanogenic nan P. atlantica subsp. mutica ka ofri yon ajan apwopriye pou fòmilasyon po blanchi epi yo ka enkli nan pwodui kosmetik pou fòmilasyon swen pou po.

KONKLIZYON

An konklizyon, etid sa a pou premye fwa te montre ke MeOH ak EtOAc ekstrè nan P. atlantica subsp. mutica gen fòtirozinazaktivite inhibition ki an akò ak rediksyon melanin. Anplis, P. atlanticasubsp. mutica te demontre tou gwo aktivite scavenging akantioksidanpwopriyete, ki ta ka atribiye sitou nan nivo segondè li yo nan flavonoid ak polifenol total. Rezilta yo sijere ke kapasite nan P. atlanticasubsp. mutica pou redwi pwodiksyon melanin ka gen rapò ak rediksyon ROS selilè ak aksyon inhibition li yo sou wout siyal ki reglemante.tirozinazaktivite. Depi ekstrè semipolè a te gen siyifikatif anti-tirozinaz ak anti-melanogenicefè, Se poutèt sa, nou konkli konpoze ki responsab pou efè sa yo akimile nan ekstrè a, pa nan lwil esansyèl.