Asid Aristolochic pwovoke fibwoz ren ak senesans nan sourit
Mar 23, 2022
Résumé:Ren se youn nan ògàn ki pi sansib pou andikap ki gen rapò ak laj. Anjeneral, aje ren akonpaye pa fifibroz ren, ki se dènye chemen komen nan kwonik.maladi ren. Asid Aristolochic (AA), yon ajan nefrotoksik, lakòz nefropati AA (AAN), ki karakterize pa fibwoz ren pwogresif ak n bès fonksyonèl. Malgre ke fifibroz ren ki asosye ak aje ren, si wi ou non AA pwovoke aje ren rete klè. Objektif etid sa a se mennen ankèt sou itilizasyon potansyèl AAN kòm yon modèl aje ren. Isit la, nou egzamine faktè ki gen rapò ak senesans nan modèl AAN pa kwonik administre AA sourit C57BL/6. Konpare ak kontwòl, gwoup AA a te demontre ajerenfenotip, tankou atrofi ren, n bès fonksyonèl ren, ak fibroz tubulointerstitial. Anplis de sa, AA ankouraje senesans selilè espesyalman nan larenak ogmante ekspresyon mRNA p16 ren ak aktivite galactosidase ki asosye ak senesans. Anplis de sa, sourit AA-trete ekspoze proximal anomali mitokondriyo tubulaires, osi byen ke akimilasyon espès oksijèn reyaktif. Klotho, yon jèn antiaging, te tou siyifikativman diminye nan larennan sourit AA-trete. Kolektivman, rezilta etid prezan an endike ke AA chanje faktè ki gen rapò ak senesans, e ke fifibroz ren gen rapò ak aje ren.
Mo kle:maladi ren kwonik; fibwoz ren; asid aristolochik; aje; senesans selilè
CISTANCHE AP AMELYORE MALADI REN/REN
EntwodiksyonAvèk lavi moun ki kontinye ap ogmante, plis moun ap soufri ak andikap ki gen rapò ak laj.renyo anjeneral afekte pa domaj tisi ki gen rapò ak laj, ak ensidans la nan kwonikmaladi renogmante ak laj [1]. Aje ren akselere aje an jeneral, ki lakòz yon lavi ki pi kout. Se poutèt sa, rechèch sou aje ren nesesè, byenke modèl bèt apwopriye pa te konplètman devlope. Aje ren akonpaye pa divès kalite chanjman patolojik, ki gen ladan atrofi ren, glomerulosclerosis, ak fibroz tubulointerstitial [2]. Fifibroz tubulointerstitial ren se dènye chemen komen nan pifò fòm maladi ren pwogresif, ki sijere ke fifibroz ren asosye sere ak moun ki gen laj.ren. Nan rechèch sou aje, sourit yo se yon zouti serye akòz pwoksimite jenetik yo ak moun, kapasite nan jenetikman manipile genòm yo, ak lefèt ke yo prezante fenotip ki gen rapò ak aje ki sanble ak moun pandan lavi yo [3]. Obsèvasyon Longitudinal lè l sèvi avèk sourit enbred yo ideyal kòm yon modèl aje, byenke li pran tan pou swiv sourit yo pou tout lavi yo. Anplis de sa, gen plizyè modèl sourit jenetikman modifye nan aje. Klotho-deficient sourit la se yon modèl aje twò bonè ke yo itilize nan rechèch aje. Sepandan, nan modèl sa a, fonksyon ren yo pa afekte, ak plizyè ògàn ki pa ren yo gen pwoblèm [4]. Kidonk, modèl sourit sa a ka pa apwopriye pou rechèch sou aje ren.Administrasyon asid Aristolochic (AA) lakòz yon kalite espesifik nan aksidan ren ke yo rekonèt kòm nefropati AA (AAN), ki karakterize pa fibwoz entèrstisyal vaste [5,6]. AA se toksik nan epithelium nan tubulaires ren paske li ankouraje fòmasyon nan adduct ADN nan tisi ren [7]. AA pa gen anpil chans pou afekte ògàn lòt pase sistèm pipi a epi li ka itil pou evalyasyon anren- chanjman espesifik. Se poutèt sa, AA yo souvan itilize pou etabli modèl fifibroz ren nan sourit [8,9]. Sepandan, li rete klè si wi ou non chanjman AA-induit yo gen rapò ak aje nan laren. Nan etid sa a, nou egzamine fenotip ki gen rapò ak laj ak faktè molekilè nan AAN nan sourit
Rezilta yo 2.1. Administrasyon AA pwovoke pèt pwa enpòtan, atrofi ren, ak yon bès nan fonksyon ren.Pwa kò debaz (BW) ak tansyon sistolik (BP) te idantik ant gwoup kontwòl machin yo ak gwoup AA yo. BW nan gwoup kontwòl veyikil la ogmante toujou sou 8 semèn. Sepandan, pran pwa te anpeche pa administrasyon AA, ak gwoup AA te gen BW siyifikativman pi ba nan 4 ak 8 semèn apre inisyasyon administrasyon AA (Figi 1A). Pa te gen okenn diferans enpòtan nan BP sistolik oswa batman kè ant gwoup kontwòl machin yo ak gwoup AA (Figi 1B, C). Rapò pwa kè/BW pa te montre okenn diferans ant gwoup yo nan 8 semèn apre inisyasyon administrasyon AA (Figi 1D), tandiskerenrapò pwa / BW te siyifikativman pi ba nan gwoup AA a nan 8 semèn apre inisyasyon administrasyon AA (Figi 1E). Apre sa, nou te egzamine fonksyon ren nan gwoup kontwòl machin yo ak gwoup AA yo. Konsantrasyon plasman kreyatinin ak nitwojèn ure (UN) te siyifikativman pi wo nan gwoup AA pase gwoup kontwòl machin nan 8 semèn apre inisyasyon administrasyon AA. Anplis de sa, tretman AA redwi siyifikativman clearance kreyatinin konpare ak gwoup kontwòl machin nan 8 semèn apre inisyasyon administrasyon AA (Figi 1F-H).
2.2. Administrasyon AA te pwovoke fibwoz tubulointerstitial aklè ak regilasyon enpòtan nan ekspresyon jèn ki gen rapò ak fibroz nan ren yo.Egzamen histolojik lè l sèvi avèk tach peryodik asid-Schiff (PAS) revele ke zòn glomerulè a te siyifikativman redwi nan gwoup AA a konpare ak gwoup kontwòl machin (Figi 2A). Fibwoz tubulointerstitial anpil, evalye avèk tach trikrom Masson a (MT), te obsève nan gwoup AA a (Figi 2B), osi byen ke ak regilasyon nan nivo mRNA nan jèn ki gen rapò ak fibroz ren, kolagen I ak III, ak transfòmasyon faktè kwasans ( TGF)- (Figi 2C–E).
2.3.AA Administrasyon akselere senesans selilè, malfonksyònman mitokondriyo, ak akimilasyon espès reyaksyon oksi/gen (ROS) nan ren yoPou evalye senesans selilè, nou te egzamine ekspresyon mRNA ren p53, p21, p16, ak glutaminase (GLS), gwoup AA a te demontre nivo mRNA siyifikativman pi wo nan jèn ki gen rapò ak senesans sa yo.ren(Figi 3A-D). Anplis de sa, entansite tach -galactosidase (SA- -gal) ki asosye ak senesans nanrente ogmante nan gwoup la AA ak prèske absan nan gwoup la kontwòl machin (Figi 3E).Nan gwoup la AA, mikwoskòp elèktron revele disparisyon nan mitokondriyo kristae, fwagmantasyon mitokondriyo, vakuolization sitoplasmik, ak otolysosomes nan selil yo proximal tubulaires, ansanm ak la. downregulation nan BCL2/adenovirus E1B 19-kDa kominike pwoteyin 3 (Bnip3), yon jèn ki gen rapò ak mitokondri (Figi 3FG). Ekspresyon mRNA nan ren Nox2. yon eleman nan nikotinamid adenine dinucleotide fosfat (NADPH) oksidaz, te siyifikativman ogmante nan gwoup la AA konpare ak gwoup la kontwòl machin (Figi 3H). Anplis de sa, analiz Western blot te revele ke nivo ren 4-idwoksi-2-nominal (4-HNE) te siyifikativman ogmante nan gwoup AA a (Figi 3I). Rezilta sa yo endike ke administrasyon AA pwovoke senesans selilè, malfonksyònman mitokondriyo, ak akimilasyon ROS nanren.
2.4. AA redwi ekspresyon Pwoteyin Klotho RenNou egzamine ekspresyon ren pwoteyin anti-aje nan gwoup kontwòl machin ak AA. Ekspresyon Klotho te siyifikativman redwi nan gwoup AA a konpare ak gwoup kontwòl machin (Figi 4A), tandiske ekspresyon ren nikotinamid fosforibosiltransferaz (NAMPT) ak sirtuin1 (SIRT1) te menm jan an ant gwoup yo (Figi 4B, C).
3. DiskisyonDapre nou konnen, etid prezan an se premye moun ki konsantre sou evalyasyon chanjman ren ki asosye ak aje nan AAN lè l sèvi avèk makè senesans, tankou p16 ak aktivite SA- -gal. Tretman AA ankouraje atrofi ren, fibwoz tubulointerstitial, ak n bès fonksyonèl ren, ki te akonpaye pa regilasyon nan ren p16 mRNA ak SA - -gal-pozitif tach. Anplis de sa, gwoup AA a te demontre karakteristik nan mekanis ki gen rapò ak aje ren tankou anomali mitokondriyo, ogmante estrès oksidatif, ak downregulation nan jèn nan antiaje, Klotho. Ansanm, obsèvasyon nou yo sijere ke administrasyon AA kwonik imite pasyèlman aje ren.
Senesans selilè se arestasyon pèmanan nan pwopagasyon selil an repons a divès kalite estrès, tankou domaj ADN, epi li kontribye nan aje ak maladi ki gen rapò ak aje. Ekspresyon p16, yon inibitè kinaz ki depann de siklin, gen rapò ak aje nan divès ògàn, tankou ren yo. Restriksyon kalorik ogmante lavi pa anpeche ekspresyon pl6 [10]. Anplis de sa, eliminasyon p16-eksprime selil senesan nan sourit INK-ATTAC atravè enjeksyon AP20187, yon dimerizer pwoteyin FK{506-obligatwa [11], lakòz atenuasyon fenotip aje ren, tankou glomerular sclerosis ak ren. n bès fonksyonèl. Se poutèt sa, p16 se youn nan faktè ki pi enpòtan ki gen rapò ak aje. Selil senesan yo ka detekte lè l sèvi avèk tach SA- -gal, ki montre aktivite -galactosidase ogmante nan pH 6.0 [12], epi li se yon biomarker lajman itilize nan selil senesan ak ki aje. Ekspresyon mRNA ren nan pl16 ogmante nan rat ki gen lajrenepi li akonpaye pa ogmante aktivite SA- -gal nan epithelium ren [13I. Nan etid sa a, nou demontre ogmante ekspresyon mRNA p16 ren ak tach SA- -gal, ki endike ke AA pwovoke senesans ren. Dènyèman, GLS te esansyèl pou siviv selil senesan atravè glutaminoliz ranfòse ak netralizasyon pH intraselilè [14]. Anpèchman nan glutaminolysis GLS-depandan nan sourit ki gen laj yo te montre elimine selil senesan ak amelyore malfonksyònman ògàn ki gen rapò ak laj. Nan etid la prezan, regilasyon nan ren GLS mRNA endike akimilasyon ren nan selil senesan nan gwoup la. Kidonk, administrasyon AA kwonik te lakòz senesans selilè nan ren yo.
CISTANCHE AP AMELIORE FONKSYON REN/REN
Anplis de senesans selilè, malfonksyònman mitokondriyo se yon mekanis esansyèl ki kache domaj tisi ki gen rapò ak laj epi li akonpaye pa akimilasyon ROS [15,16. Malfonksyònman mitokondriyo kondwi epi kenbe senesans selilè [17] tandiske senesans selilè kontribye dirèkteman nan malfonksyònman mitokondriyo [18]. Bnip3, ki sitiye prensipalman nan manbràn mitokondriyo ekstèn lan, ka jwe yon wòl nan règleman mitofaji nan kiltive selil ren proximal tubulaires an repons a estrès oksidatif ak ipoksi. Nan sourit ki gen laj, restriksyon kalorik ogmante otofaji nan selil tubulèr yo, atravè regilasyon Bnip3, ak amelyore koripsyon fonksyon ren ki lakòz laj [19]. Nan etid la prezan, mikwoskospi elektwonik revele karakteristik anomali mitokondriyo ki ka afekte pa ekspresyon Bnip3 ren redwi oswa senesans selilè. Mitokondri yo se sous prensipal entraselilè ROS. Pou evalye efè anomali mitokondriyo yo sou ROS ren, nou te egzamine akimilasyon ren 4-HINE epi nou te demontre akimilasyon ROS ki te pwovoke AA nanren.NADPH oksidaz yo se yon gwo sous ROS. Pandan faz egi nan AAN nan sourit, ekspresyon mRNA ren Nox2 te ogmante, epi disponiblite oksid nitrique te redwi, ki te mennen nan ipoksi ak iskemi soutni [20. Nan rat ki gen lajren, akimilasyon ROS akonpaye pa ogmante ekspresyon de Nox2 [21]. Konklizyon sa yo sijere ke AA ka pwovoke feno-kalite ki gen rapò ak laj atravè akimilasyon ROS ki te koze pa malfonksyònman mitokondriyo ak regilasyon nan NADPH oksidaz.
Ekspresyon jèn Klotho nan ren yo te diminye nan gwoup AA a, tandiske ekspresyon NAMPT ak SIRTl te menm jan an ant gwoup yo. Klotho se yon jèn anti-aje ki kode yon pwoteyin transmembrane yon sèl-pas ki aji kòm yon sipresyon aje. Pwosesis aje nan sourit ki pa gen anpil Klotho te sanble ak sa nan imen, ki gen ladan yon lavi ki pi kout, lakòz, ateroskleroz, atrofi po, osteyopowoz, ak anfizèm [22]. Sourit ipomòfik Klotho mutan tou te montre yon fenotip aje akselere, ki te retabli pa p16 ablation [23]. Depi Klotho se yon faktè enpòtan nan aje, sourit Klotho modifye jèn yo te lajman itilize nan rechèch sou aje. Sepandan, sourit ki modifye jèn Klotho yo ka pa apwopriye pou rechèch sou aje ren akòz defisyans sistemik ki asosye ak aje sourit sa yo ak lefèt ke fonksyon ren yo pa ateste (sa vle di, nivo kreyatinin). Kontrèman, modèl sourit AAN ka itilize kòm yon modèl dwòg pwovoke nan aje ren pou rezon rechèch, paske li gen plizyè avantaj, tankou fasilite relatif aplikasyon an ak kapasite nan estime efè entèvansyon sou n bès fonksyonèl ren. .
Etid la te gen kèk limit. Nou evalye aje ren, konsantre sitou sou senesans selilè, mòfoloji mitokondriyo, ak ekspresyon jèn ki gen rapò ak aje. Sepandan, mekanis yo nan aje yo konplèks epi yo rete mal konprann. Anplis de sa, byenke ekspresyon jèn Klotho te diminye an repons a AA, nou pa t 'kapab demontre yon relasyon kozatif ak chanjman patolojik nan AAN. Plis etid yo oblije detèmine wòl divès molekil ki enplike nan devlopman AAN. Men, etid prezan an bay nouvo apèsi sou itilizasyon Avan kòm yon modèl pou aje ren. Li enpòtan sonje ke fenotip chanjman nan larenyo fòtman asosye ak lavi. Malgre kerense fasil afekte pa aje-asosye chanjman, anpèchman nan aje ren ka pwolonje lavi a an jeneral. Se poutèt sa, plis rechèch sou aje ren lè l sèvi avèk modèl AAN ka mennen nan ogmante lonjevite nan lavni.
4. Materyèl ak Metòd4.1. BètEtid sa a te fèt an akò ak direktiv Enstiti Nasyonal Sante pou itilize bèt eksperimantal yo. Tout eksperyans bèt yo te apwouve pa Komite Etid Animal nan Yokohama City University (Nimewo apwobasyon: FA20-027) epi yo te fèt an konfòmite ak direktiv ARRIVE. Yo te fè efò pou minimize kantite bèt yo itilize ak soufrans yo. Sourit yo te loje nan yon anviwònman kontwole anba yon sik 12-h limyè/12-h fè nwa nan yon tanperati 25 degre C. Sourit yo te gen aksè gratis nan manje ak dlo.
CISTANCHE AP AMELIORE RENFEKSYON REN/REN
Yo te achte sourit gason C57BL/6 ki gen uit semèn nan Charles River Laboratories (Wilmington, MA, USA) epi yo te plase nan gwoup kontwòl machin oswa AA apre 1 semèn nan aklimatasyon, sourit yo te administre intraperitoneally ak machin oswa AA (Sigma). -Aldrich, St.Louis, MO, USA), ki te fonn nan yon ti kantite dimethyl sulfoxide. Anvan etid sa a, nou te fè yon etid preliminè lè l sèvi avèk plizyè pwotokòl. Premye pwotokòl la enkli administrasyon AA (3 mg/kg) nan sourit C57BL/6 intraperitoneally de fwa pa semèn pou 4 semèn san yo pa tan renovasyon; nan pwotokòl sa a, AA te lakòz blesi ren egi aklè, tankou tib proximal dilate ak pèt fwontyè bwòs (Figi Siplemantè S1). Nan dezyèm pwotokòl la, yo te administre sourit C57BL/6 ak AA (2.5 mg/kg) yon fwa pa semèn pou 4 semèn, epi yo te administre yon tan pou 4 semèn; Plasma kreyatinin nan sourit sa yo te 0.19 ± {{20}}.{080 mg/dL kont 0.18 ± 0.010 mg/dL (kontwòl machin kont AA, respektivman; mwayèn ± erè estanda nan mwayèn (SEM), p=0.86, tès t Elèv ki pa pè, n=4 pou chak gwoup) ak plasma UN te 31.3 ± 5.95 mg/dL kont. 30.4 ± 3.87 mg/dL (kontwòl machin kont AA, respektivman; vle di ± SEM, p=0.90, tès t Elèv ki pa pè, n=4 pou chak gwoup). Se poutèt sa, nou detèmine ke pwotokòl sa a pa te apwopriye pou yon modèl aksidan ren paske AA pa t 'pwovoke siyifikatif n bès fonksyonèl ren. Nan twazyèm pwotokòl la, sourit C57BL / 6 yo te administre ak AA (3 mg / kg) intraperitoneally de fwa nan yon semèn pou 10 semèn san yo pa tan renovasyon; nan sourit sa yo, pousantaj mòtalite nan gwoup AA a te 83 pousan (n=6), tandiske pa youn nan sourit yo nan gwoup kontwòl machin yo te mouri (n=4). Nan pwotokòl sa a, nou pa t 'kapab estatistik evalye fenotip nan ren pwovoke pa AA akòz mòtalite a wo. Nan katriyèm pwotokòl la, sourit C57BL/6 yo te administre ak AA (3 mg/kg) intraperitoneally de fwa pa semèn pou 4 semèn ki te swiv pa tan renovasyon pou 4 semèn; blesi ren kwonik, tankou fifibroz tubulointerstitial, ak n bès fonksyonèl ren yo te obsève nan sourit sa yo [9]. Se poutèt sa, baze sou rezilta yo nan envestigasyon preliminè sa yo, nou te adopte katriyèm pwotokòl la pote soti nan eksperyans yo nan etid la prezan.
4.2.BP MeziYo te mezire BP sistolik ak batman kè lè l sèvi avèk metòd ke-manchèt ki dekri deja (BP-Monitor MK-2000; Muromachi Kikai Co., Tokyo, Japon)[24,25]. Tout mezi yo te fèt ant 9:00 ak 14:00. Yo te fè omwen 10 mezi nan chak sourit, epi yo te itilize valè mwayèn pou analiz.
4.3. An tan reyèl Quantitatiose ranvèse-transcription PCR analiz RNA total yo te ekstrè nan tisi ren yo lè l sèvi avèk ISOGEN (Nippon Gene, Tokyo, Japon), ak ADN konplemantè (cDNA) te sentèz lè l sèvi avèk SuperScript IⅢFirst-Strand System (Invitrogen, Waltham, MA, USA). An tan reyèl, analiz PCR ranvèse ranvèse te fè lè l sèvi avèk CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA), ak pwodwi transkripsyon ranvèse yo te enkube ak TaqMan PCR Master Mix ak yon TaqMan koutim. sonde (Applied Biosystems, Waltham, MA, USA), jan yo dekri deja [26]. Yo te itilize sond TaqMan kont jèn ki swiv yo: kolagen I (Mm00801666_g1), kolagen II (Mm01254476_m1), TGF- (Mm01178819 m1), p53 (Mm00441964 g1), p21( Mm04205640 g1).p16(Mm00494449 m1)GLS (Mm01257297_m1), Bnip3 (Mm01275600_g1), ak Nox2 (Mm{00627011_m1).Nivo mRNA yo te nòmalize nan nivo sa yo. 18S RNA ribozomal.
4.4. Analiz Western Blot Ekspresyon pwoteyin yo te analize pa analiz Western blot nan omojene tisi yo lè l sèvi avèk yon metòd ki dekri deja [27,28]. Ekstrè pwoteyin total yo te prepare nan tisi yo lè l sèvi avèk tanpon echantiyon sodyòm dodecyl sulfat ki gen ladan. Yo te mezire konsantrasyon pwoteyin chak echantiyon lè l sèvi avèk Twous Test Pwoteyin Detèjan ak konpatib (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA) ak NanoDrop One (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), ak albumin serom bovin kòm la. estanda. Kantite egal ekstrè pwoteyin ki soti nan echantiyon tisi yo te fraksyon sou 5-20 pousan jèl poliakrilamid (ATTO Corp., Tokyo, Japon). Lè sa a, pwoteyin separe yo te transfere nan manbràn polyvinylidene difluoride lè l sèvi avèk Sistèm Transfè Semi-Sèk (ATTO Corp., Tokyo, Japon). Manbràn yo te bloke pou 1 èdtan nan tanperati chanm ak fosfat-tanpon saline ki gen 5 pousan ekreme-lèt poud. Manbràn yo te enkube ak antikò prensipal kont Klotho (ab181373 1:1000; Abcam, Cambridge, UK), NAMPT (sc-67020 1:5000; Abcam), SIRT1 ({07-131 1:1000, MilliporeSigma). , Burlington, MA, USA), 4-HINE(MHN-100P 1:1000; JaICA, Fukuroi, Japon), ak glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) (2118, 1:2000; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA). Manbràn yo te lave ak enkube ak antikò segondè pou 60 minit nan tanperati chanm. Sit yo pou reyaksyon antikò-antijèn yo te vizyalize lè l sèvi avèk substra kimiluminesans amelyore (Merck, Kenilworth, NJ, USA). GAPDH te itilize kòm kontwòl chaj la. Imaj yo te analize quantitatively lè l sèvi avèk ChemiDoc Touch (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA).
4.5. Analiz histolojik te fèt jan sa te dekri anvan [29]. Tisi ren soti nan sourit yo te fiks ak 4 pousan paraformaldehyde epi imedyatman entegre nan parafine. Seksyon (4 um epè) yo te tache ak tach PAS ak MT. Pou evalye zòn glomerulè a, yo te mezire 50 glomeruli pou chak sourit ak mwayèn. Tout imaj yo te akeri avèk mikwoskòp BZ-9000 (Keyence Corp., Osaka, Japon).
CISTANCHE AP AMELIORE DYALIZ REN/REN
4.6. Tach SA- -al Tisi ren ki soti nan sourit yo te rapidman jele epi monte nan yon konpoze tanperati Optimal Koupe (Sakura FinetekJapan, Co., Ltd., Tokyo, Japon). Thermo Fisher Scientific) ak monte sou glisad an vè. Aktivite SA- -gal yo te mezire lè l sèvi avèk yon twous deteksyon senesans (Bio Vision Inc., Milpitas, CA, USA) dapre pwotokòl manifakti a. Yo te wè echantiyon yo anba yon jaden klere ak agrandisman ×100 lè l sèvi avèk mikwoskòp BZ-9000(Keyence Corp.. 4.7.Electron MicroscopyYo te fè analiz mikwoskopi elektwonik jan yo te dekri anvan [30]. Sourit yo te anestezi ak isoflurane ak perfused nan vout aòtik dwat ak heparinized (5 U / mL) fizyolojik saline ak 2.5 pousan glutaraldehyde nan 0.1 mol / L tanpon fosfat nan pH 7.4. Espesimèn pou mikwoskospi elektwonik transmisyon yo te benyen nan 1 pousan tetoksid osmyòm pou 2 èdtan, seri dezidrate nan etanòl, epi entegre nan yon melanj Epon. Seksyon UlItrathin yo te tache ak acetate uranil ak sitrat plon epi yo te egzamine avèk mikwoskòp elèktron transmisyon Hitachi H-7500 ki te opere nan 80 kV (Hitachi, Ltd., Tokyo, Japon). Seksyon yo te obsève nan agrandisman × 5000 ak foto lè l sèvi avèk yon kamera aparèy chaj makonnen.
4.8.Analiz byochimikEchantiyon san yo te kolekte pa ponksyon kadyak nan eta a manje. Echantiyon san antye yo te santrifuje a 3000 rpm (MR-150; Tomy Seiko Co., Ltd., Tokyo, Japon) pou 10 min at4 degre pou separe plasma a. Yo te estoke echantiyon plasma yo nan -80 degre. Yo te mezire nivo kreyatinin nan plasma, Nasyonzini ak pipi lè l sèvi avèk otoanalyzer Hitachi 7180 (Hitachi, Ltd., Tokyo, Japon).
4.9. Analiz estatistik Analiz estatistik yo te fèt lè l sèvi avèk lojisyèl GraphPad Prism (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Done yo prezante kòm mwayen ± SEM. Yo te itilize tès f Elèv ki pa pè a pou konpare diferans ki genyen ant gwoup kontwòl machin ak gwoup AA yo.p<0.05 was="" considered="" statistically="">
5. KonklizyonAA administrasyon kòzrensenesans, ansanm ak fibwoz tubulointerstitial ak atrofi ren. Rezilta yo sijere ke fibwoz ren gen rapò ak aje ren ak ke AAN ka itil kòm yonren-espesifik aje modèl.
