Ascorbic Asid kontwole iminite a, anti-oksidasyon ak apoptoz nan abalone Haliotis Discus Hannai Ino Pati 1

Résumé: Etid la prezan te fèt pou mennen ankèt sou wòl asid ascorbic (AA) nan repons iminitè, anti-oksidasyon, ak apoptoz nan abalone (Haliotis discus hannai Ino). Sèt alimantasyon semi-pirifye ak nivo gradye nan AA (0, 50, 100, 200, 500, 1000, ak 5000 mg/kg) yo te bay abalone (inisyalman). pwa: 12.01 ± 0.001 g, inisyal longè koki: 48.44 ± 0.069 mm) pou 100 jou. Siviv, pousantaj pran pwa, ak ogmantasyon chak jou nan longè koki yo pa te afekte pa AA dyetetik. Kontni AA nan glann branch, misk, ak glann dijestif abalone te ogmante siyifikativman pa AA dyetetik. An tèm de iminite, AA dyetetik siyifikativman amelyore konte total emosit, pete respiratwa, ak aktivite fagositik nan emolinf, ak aktivite lizozim nan emolinf san selil (CFH). Nan glann dijestif la, chemen siyal TLR-MyD88-depandan ak TLR-MyD88-endepandan yo te siprime pa sipleman AA dyetetik. Nivo mRNA nan -defensin ak arginase-I nan glann dijestif la te siyifikativman ogmante pa dyetetik AA. Nan branch lan, sèlman chemen siyal TLR-MyD88-depandan an te deprime pa AA dyetetik pou diminye enflamasyon nan abalone la. Nivo mit 6 nan branch lan te siyifikativman regilasyon pa dyetetik AA. Apre enfeksyon Vibrio parahaemolyticus, chemen siyal TLR nan glann dijestif la te siprime pa AA dyetetik, ki te redwi enflamasyon nan abalone la. An tèm de anti-oksidasyon, superoksid dismutase, glutatyon peroksidaz, ak aktivite katalaz, osi byen ke total kapasite anti-oksidatif ak redwi kontni glutatyon nan CFH, yo tout te siyifikativman upregulated. Kontni an malondialdehyde te siyifikativman downregulated pa dyetetik AA. Kapasite anti-oksidatif la te amelyore lè yo deklanche chemen Keap1-Nrf2 nan abalone. An tèm de apoptoz, AA dyetetik ka amelyore kapasite anti-apoptoz atravè kaskad siyal JNK-Bcl-2/Bax nan abalone. Pou konkli, AA dyetetik te enplike nan reglemante iminite, anti-oksidasyon, ak apoptoz nan abalone.

Glycoside nan cistanche ka ogmante tou aktivite SOD nan kè ak tisi fwa, ak siyifikativman redwi kontni an nan lipofuscin ak MDA nan chak tisi, efektivman scavenging divès kalite radikal oksijèn reyaktif (OH-, H₂O₂, elatriye) ak pwoteje kont domaj ADN ki te koze. pa OH-radikal. Cistanche phenylethanoid glikozid gen yon gwo kapasite scavenging nan radikal gratis, yon pi wo kapasite diminye pase vitamin C, amelyore aktivite a nan SOD nan sispansyon espèm, redwi kontni an nan MDA, epi yo gen yon sèten efè pwoteksyon sou fonksyon manbràn espèm. Cistanche polisakarid ka amelyore aktivite SOD ak GSH-Px nan eritrosit ak tisi nan poumon sourit eksperimantal senesan ki te koze pa D-galaktoz, osi byen ke diminye kontni an nan MDA ak kolagen an nan poumon ak plasma, ak ogmante kontni an nan elastin, gen yon bon efè scavenging sou DPPH, pwolonje tan an nan ipoksi nan sourit senesan, amelyore aktivite a nan SOD nan serom, ak retade koripsyon fizyolojik nan poumon nan sourit senesan eksperimantal Avèk koripsyon selilè mòfolojik, eksperyans yo te montre ke Cistanche gen bon kapasite antioksidan. epi li gen potansyèl pou yo dwe yon dwòg pou anpeche ak trete maladi po aje. An menm tan an, echinacoside nan Cistanche gen yon kapasite enpòtan pou elimine radikal gratis DPPH epi li gen kapasite pou elimine espès oksijèn reyaktif epi anpeche degradasyon kolagen an radikal gratis, epi tou li gen yon efè reparasyon bon sou domaj anyon radikal gratis timin.

Klike sou Cistanche Tubulosa

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Mo kle: abalone; asid ascorbic; iminitè; anti-oksidasyon; apoptoz

1. Entwodiksyon

Asid ascorbic (AA), ke yo rele tou vitamin C, se yon mikwonitriman esansyèl ki sèvi kòm yon kofaktè ki asosye ak amelyore aktivite a nan plizyè anzim imen ak kontribye nan repons iminitè ak devlopman nan sistèm nève a nan imen [1,2]. ]. Akòz kapasite limite AA pou konsève nan òganis lan, yon konsomasyon regilye ak bon jan nesesè pou anpeche defisi AA. AA obligatwa nan kantite tras ki soti nan sous ekzojèn pou kwasans mwayèn, aktivite fizyolojik, repwodiksyon, ak sante nan pifò mamifè [3–5]. Konsènan fonksyon iminitè, AA kontribye nan kenbe entegrite baryè iminitè ak geri blesi [1]. Li ka ranfòse fonksyon fagosit yo, tankou amelyore mobilite yo, chemotaxis, fagositoz, ak touye mikwòb [6-9]. Etid anvan yo te rapòte divès efè iminitè AA sou selil B, selil T, ak selil NK nan mamifè [10-12]. Pandan se tan, AA tou asosye ak apoptoz. Li anpeche apoptoz myokad pa anpeche Bax (BCL-2 ki asosye X pwoteyin) epi li ogmante kapasite Bcl-2 (regilatè apoptoz bcl-2) pou anpeche lage cytochrome-C soti nan mitokondri nan sitoplasm la. epi answit diminye kapasaz -3, ki inisye apoptoz [13]. Kòm yon antioksidan natirèl, AA diminye espès oksijèn reyaktif (ROS) ak espès nitwojèn reyaktif (RNS) nan dote yo ak elektwon ak anpeche oksidasyon nan lòt konpoze [14-17]. AA kapab tou pèmèt lòt molekil anti-oksidatif, tankou glutatyon (GSH), -karotèn, urat, ak -tokoferol, rejenere soti nan radikal lib respektif yo [18,19].

Kontrèman ak bèt terès, relativman kèk rapò egziste sou repons iminitè ak apoptoz nan bèt akwatik. Kantite AA ki apwopriye pou rejim alimantè yo ka optimize kwasans, sante, ak rezistans estrès nan bèt akwatik [20]. Pifò etid sou AA nan bèt akwatik konsantre sou estime kondisyon minimòm AA pou kwasans maksimòm ak fòmile yon rejim alimantè ki koute pi piti. Kondisyon AA yo varye ant espès, gwosè, rejim alimantè, ak kondisyon agrikilti. Kantite AA ki rekòmande dyetetik yo varye ant 10 ak 10,000 mg/kg [21]. Egzijans minimòm AA dyetetik pou sipòte to kwasans maksimòm (WG) se te 53-186 mg/kg nan tilapia Nil (Oreochromis niloticus), 1200 mg/kg nan ton ble pasifik (Thunnus orientalis) ak 5000-1000 mg/kg nan. kribich kuruma (Marsupenaeus japonicas) [22-24]. Sepandan, WG oswa to kwasans espesifik (SGR) pa t 'siyifikativman afekte pa dyetetik AA nan kèk espès pwason, tankou Siberian Sturgeon (Acipenser baerii), dorad wouj (Pagrus major) ak zangi Japonè (Anguilla japonica) [25-27] ].

Sipleman AA dyetetik yo te montre amelyore fonksyon iminitè, tankou fagositoz ak aktivite lizozim nan anpil espès pwason [28-30]. Ogmantasyon siviv nan ekspoze patojèn (egzanp, bakteri ak parazit) te rapòte nan tilapia Nil, pwason chat Azyatik (Clarias batrachus), ak kribich blan Pasifik (Litopenaeus vannamei) apre konsomasyon dyetetik AA [31-34]. Defisi AA diminye aktivite lizozim (LZM), konpleman eleman 3 (C3), ak kontni C4 nan karp zèb (Ctenopharyngodon idella) [35]. Li kapab tou redwi nivo peptides antimikwòb yo, tankou -defensin ak hepcidin, ak anti-enflamatwa sitokin ki gen ladan interleukin (IL) 4/13A, IL-10, ak transfòmasyon faktè kwasans (TGF) 1/2; pandan y ap ogmante cytokin pro-enflamatwa, ki gen ladan IL-1 ak faktè nikleyè κB (NF-κB) nan karp zèb [35]. Anplis de sa, defisi AA te kontwole faktè deklanchman apoptotik proteaz -1, kaspas-3, ak kaspas-7-9 pou agrave apoptoz selil nan karp zèb [35,36].

Abalone se youn nan espès komèsyal ki pi enpòtan nan lòd molusk Archaeogastropoda. Li se yon bèt modèl enpòtan pou etidye biyoloji ekolojik ak devlopman gasteropod (Mollusca) [37,38]. Pami espès yo kiltive abalone, abalone Pasifik la (H. discus hannai Ino) se espès ki pi pito kiltive nan Lachin. Mai te rapòte ke sipleman dyetetik AA soti nan 0 a 8000 mg / kg pa t 'siyifikativman afekte SGR a oswa to siviv (SR) nan abalone jivenil [39]. Wu et al. rapòte ke AA dyetetik enfliyanse ekspresyon jèn ki gen rapò ak repons anti-oksidatif nan glann dijestif abalone pou amelyore rezistans estrès li [40]. Anplis de sa, epidemi maladi a ka lakòz gwo pèt ekonomik nan endistri a abalone [41,42]. Molisk yo manke iminite adaptasyon epi yo konte sou iminite natirèl [43]. Pakonsekan, etid prezan an vize envestige wòl AA nan règleman iminite, anti-oksidasyon, ak apoptoz nan abalone H. discus hannai epi yo pral bay enstriksyon syantifik pou règleman an sante nan fòmilasyon dyetetik nan abalone.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Deklarasyon Etik

Tout swen bèt ak pwosedi manyen ki fèt nan etid la prezan te apwouve pa Komite Swen Animal nan Oseyan University of Lachin (Apwobasyon No SPXY2020012).

2.2. Rejim eksperimantal

Rejim debaz la (AA{{{{10}}}}) te fòme ak engredyan pirifye pou genyen apeprè 30 pousan pwoteyin dyetetik ak 3.5 pousan lipid dyetetik (Tablo 1). Kazein (san vitamin) ak jelatin yo te itilize kòm sous pwoteyin, epi lwil oliv soya ak lwil pwason menhaden (1:1) yo te itilize kòm sous lipid, ki ta ka ase pou kenbe kwasans optimal pou H. discus hannai [44-46]. ]. Nivo gradye nan AA (0, 50, 100, 200, 500, 1000, ak 5000 mg/kg) yo te ajoute nan rejim fondamantal la pou fòme sèt rejim eksperimantal yo. Yo te ajoute AA a nan rejim yo nan fòm L-ascorbyl-2-monofosfat. Rejim sa yo te deziyen kòm AA0, AA50, AA100, AA200, AA500, AA1000 ak AA5000, respektivman. Sa ki analize AA nan rejim alimantè a te 0.00, 47.31, 78.25, 189.05, 451.73, 919.99, ak 4821.17 mg / kg, respektivman. Metòd segondè-pèfòmans chromatografi likid te itilize pou analize kontni AA dyetetik [40]. Pwoteyin brit dyetetik, lipid brit, ak sann yo te mezire dapre metòd estanda Asosyasyon Chimi Analytik yo [47].

2.3. Tès lesivaj

Lesivaj la nan AA dyetetik te prezante kòm efikasite nan retansyon (RE). Rejim eksperimantal yo ak twa kopi yo te benyen nan dlo lanmè a nan 23.0 ± 0.5 ◦C. Alimantasyon yo plonje yo te pran soti nan yon tan ki bay (1, 3, 6, ak 12 èdtan, respektivman) epi yo te lyofilize pou analiz la nan kontni AA.

RE (pousan)=(AA kenbe nan rejim alimantè apre imèsyon)/(AA ki genyen nan rejim alimantè anvan imèsyon) × 100.

2.4. Jijman Manje

Jivenil abalone yo te jwenn nan yon konpayi lapèch nan Fuzhou (Fujian, Lachin) epi yo te aklimate nan kondisyon laboratwa pou de semèn, ak rejim alimantè debaz la, nan yon sistèm dlo resikilasyon ak tank (10{{1{{21 }}}} × 50 × 40 cm). Apre sa, menm gwosè ak abalones (inisyal pwa: 12.01 ± 0.001 g, inisyal longè kokiy: 48.44 ± 0.069 mm) yo te owaza asiyen nan 21 tank (45 abalones pou chak tank). Chak twa tank yo te konsidere kòm yon sèl tretman. Tout tank yo te kenbe nan limyè fèb ak rido plastik nwa. Abalon yo te bay men yo yon fwa chak jou a 17:00. Poupou yo ak rejim ki pa manje yo te retire a 8:00 chak maten. Pandan esè pou manje 100-jou, tanperati dlo a te 23.0 ± 0.5 ◦C, salinite te 30-33‰, pH te 7.4-7.9 ak oksijèn ki fonn te pi gran pase oswa egal a 7.0 mg/L.

2.5. Tès defi Vibrio Parahaemolyticus

Apre esè manje a, yo te itilize kenz abalon nan chak tank pou tès defi a ak patojèn V. parahaemolyticus. Abalon yo te defye ak 100 µL V. parahaemolyticus (1.2 × 106 cfu/mL) pa piki nan misk nan vivo. Glann dijestif la te kolekte nan 0, 6, 12, 24, 48, ak 72 èdtan, respektivman, epi estoke nan -80 ◦C pou analiz qPCR.

2.6. Koleksyon echantiyon

Nan fen jijman manje a, abalon yo te jene pandan twa jou anvan yo te konte ak peze. Tout abalon yo te anestezi ak 5 pousan alkòl etilik anvan pran echantiyon. Yo te kolekte emolinf nan kat abalon nan chak tank pou analize kantite total emosit (THC), pete respiratwa (RB), ak aktivite fagositik (PA). Pou analize aktivite anzim nan emolinf san selil (CFH), yo te kolekte emolinf la nan yon lòt dis abalon nan chak tank epi yo te santrifuje (3000 × g nan 4 ◦C) pou 10 min; CFH a te estoke nan -80 ◦C jiskaske yo itilize. Yo te pran echantiyon glann dijestif la, branch lan, misk, ak manto nan dis abalon emolinf yo pran pou chak tank epi estoke nan -80 ◦C jiskaske yo itilize.

2.7. Kontni Ascorbic Asid

Kontni AA nan CFH, misk, manto, branch, ak glann dijestif yo te detekte lè l sèvi avèk yon twous tès ascorbate ki diminye ferrik (BioVision, Milpitas, CA, USA). CFH a ka itilize dirèkteman pou mezire kontni AA selon enstriksyon manifakti a. Echantiyon 0.1 g nan misk, manto, branch, ak glann dijestif yo te omojeneize nan 1 mL dlo distile pre-refwadi. Kontni AA a te mezire pa absòbe nan 593 nm.

2.8. Paramèt iminitè nan emolinf

Emolinfa a byen melanje lè l sèvi avèk yon volim egal nan anticoagulant pre-refwadi (100 mmol/L EDTA Na2, 450 mmol/L NaCl, 10 mmol/L KCl, 10 mmol/L HEPES, pH 7.3, 850 mOs mol/kg) pou dilye emolinf la.

THC te konte lè l sèvi avèk yon emositomèt anba mikwoskòp la (CX31, OLYMPUS, Tokyo, Japon).

Yo te mezire rediksyon nitroblue tetrazolyum (NBT) nan emosit, ki ka reprezante pa aktivite RB, dapre metòd Anderson et al., ak kèk modifikasyon [48]. Yon ti tan, yo te ajiste emolinf la a 5 × 106 selil/mL lè l sèvi avèk anticoagulant epi yo te santrifuje nan 3000 × g nan 4 ◦C pou 10 min. Te presipite selil la tache ak 100 µL nan 1 µg/mL PMA (phorbol myristate acetate, Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, USA) fonn pa DMSO (dimethyl sulfoxide, Solarbio, Beijing, Lachin) ak enkubasyon nan 37 ◦C pou 30 min. Apre enkubasyon, yo te ajoute 100 µL nan 0.3 pousan NBT ki fonn pa Solisyon Sèl Balanse Hank (Solarbio, Beijing, Lachin) nan selil yo epi yo te enkube a 37 ◦C pou 30 minit anvan santrifujasyon (560 × g nan 4 ◦C pou 10 min) . Yo te retire supernatant la dousman, epi yo te sispann reyaksyon an lè l sèvi avèk 200 µL metanol pou 10 min. Apre sa, selil la te lave twa fwa ak 70 pousan (v/v) metanol anvan yo te cheche lè. Te formazan ble kristal la fonn lè l sèvi avèk 120 µL nan 2 M KOH ak 140 µL nan DMSO. Dansite optik (OD) te li nan yon espektrofotomètr nan 630 nm kont yon vid KOH / DMSO.

Yo te detèmine PA emolinfa apre metòd Xue et al. [49]. Yon ti tan, yo te mete 50 µL emolinf dilye sou yon glise vè epi yo te enkube a 25 ◦C pou 20 minit pou ankouraje adezyon. Lè sa a, 50 µL ledven (Saccharomyces cerevisiae) ak 1 × 106 selil/mL te ajoute nan monokouch emosit la anvan enkubasyon (25 ◦C pou 30 min). Te glise a dousman lave de fwa ak saline esterilize tanpon fosfat (PBS) epi yo te fiks ak metanol pou 5 min. Apre sa, glise a tache ak solisyon Giemsa pou 20 minit. Selil yo te konte anba yon lantiy imèsyon lwil oliv. Pousantaj fagositik la endike aktivite fagositik.

2.9. Paramèt byochimik nan CFH

Aktivite anzim antioksidatif yo (tankou SOD, katalaz (CAT), ak glutatyon peroksidaz (GPX)), total kapasite anti-oksidatif (T-AOC), ak kontni malondialdehyde (MDA) ak GSH nan CFH yo te detèmine lè l sèvi avèk la. twous tès komèsyal (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Katalòg: T-AOC, A015-2-1; SOD, A001-3-2; CAT, A007- 1-1; GSH, A006-2-1; GPX , A005-1-2; MDA, A003-1-2). T-AOC a te baze sou jenerasyon vèt ABTS (2, 20 -azino-bis ({3-ethylbenzothiazoline{-6-sulfonic acid)) radikal lè ABTS la te soksid. SOD, GSH, ak GPX yo te mezire pa absorbans nan 450 nm, 405 nm, ak 421 nm, respektivman, lè l sèvi avèk yon espektrofotomèt iltravyolèt (Ultrospec 2100 pro, Biochrom, Holliston, MA, USA). CAT ak MDA yo te detèmine lè l sèvi avèk metòd amonyòm molybdate ak TBA (asid thiobarbituric) [50,51].

Aktivite LZM ak kontni C3 ak C4 nan CFH a te mezire lè l sèvi avèk twous esè komèsyal (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Lachin. Katalòg: LZM, A050-1-1; C3, E032-1-1; C4 , E033-1-1). LZM a te mezire pa transmissions nan 530 nm. C3 ak C4 yo te detèmine nan 340 nm.

2.10. Ekstraksyon RNA total ak PCR an tan reyèl

RNA total ki soti nan glann dijestif la ak branch yo te ekstrè lè l sèvi avèk yon twous izolasyon RNA total tisi (Vazyme, Nanjing, Lachin) ak reyaktif TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) swiv enstriksyon manifakti a. Yo te detèmine konsantrasyon ak pite RNA total ekstrè lè l sèvi avèk yon Nanodrop 2000 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). ADN konplemantè (cDNA) te sentèz lè l sèvi avèk yon twous transkripsyon ranvèse (PrimeScript® RT reagent Twous ak gDNA Eraser, Takara, Japon).

Tout primè yo te fèt lè l sèvi avèk Primer Premier 6.0 (Tablo Siplemantè S1) ak sentèz pa Sangon Biotech (Shanghai, Lachin). Reyaksyon anplifikasyon an te fèt nan yon volim total de 25 µL, ki gen 0.5 µL primè pou pi devan ak ranvèse, 12.5 µL nan 2 × SYBR Green Realtime Master Mix (Vazyme), 1 µL nan cDNA ak 10.5 µL. nan ddH2O esterilize. Kondisyon thermocycling sa yo te itilize pou detèmine pwofil ekspresyon pou chak jèn: 95 ◦C pou 30 s; 40 sik 95 ◦C pou 10 s ak 60 ◦C pou 30 s; ak enkubasyon ki vin apre a 95 ◦C pou 15 s, 60 ◦C pou 1 min ak 95 ◦C pou 1 s pou detekte fliyoresans. Nivo ekspresyon jèn sib yo te nòmalize nan konbinezon de jèn referans ki pi estab (-actin ak gapdh), ki te valide lè l sèvi avèk geNorm ak NormFinder [52,53]. Ekspresyon jèn relatif yo te kalkile lè l sèvi avèk metòd 2−∆∆CT [54].

2.11. Western Blot

Pwoteyin total glann dijestif la ak branch yo te ekstrè lè l sèvi avèk metòd RIPA (Solarbio) [55] ak cocktèl inhibitor proteaz ak fosfataz (Roche, Basel, Swis). Dapre manyèl la, yo te ekstrè pwoteyin nikleyè glann dijestif la ak branch yo lè l sèvi avèk yon Twous Ekstraksyon Pwoteyin Nikleyè ak Sitoplasmik (Beyotime, Shanghai, Lachin). Konsantrasyon pwoteyin yo te mezire lè l sèvi avèk BCA Pwoteyin Quantification Twous (Vazyme, Nanjing, Lachin), ak tout echantiyon pwoteyin yo te dilye nan yon konsantrasyon ekivalan a 1.5 µg/µL lè l sèvi avèk yon reyaktif RIPA. Echantiyon pwoteyin ki soti nan glann dijestif la ak branch yo te separe lè l sèvi avèk SDS-PAGE epi answit transfere nan yon manbràn PVDF 0.45 µm. PVDF a te bloke lè l sèvi avèk 5 pousan lèt an poud san grès (Beyotime, Shanghai, Lachin) nan preparasyon pou TBST nan tanperati chanm pou 1 èdtan. Manbràn la te lave twa fwa ak TBST anvan enkubasyon lè l sèvi avèk antikò prensipal lannwit lan nan 4 ◦C nan 60 rpm. Apre sa, yo te lave manbràn nan enkubasyon twa fwa ak TBST epi yo te enkubate lè l sèvi avèk antikò segondè kabrit anti-lapen refor peroksidaz-konjige (Beyotime, Shanghai, Lachin) pou 1 èdtan nan tanperati chanm. Manbràn PVDF la te vizyalize lè l sèvi avèk yon twous chemiluminescence ECL (Vazyme, Nanjing, Lachin). GAPDH (1:500, AB-P-R001, Goodhere Biotechnology, Hangzhou, Lachin) ak Lamin B (1:500, WL01775, Wanleibio, Shenyang, Lachin) yo te itilize kòm pwoteyin referans. Antikò sib prensipal yo te myeloid diferansyasyon prensipal repons 88 (MyD88, 1:500, WL02494, Wanleibio, Shenyang, Lachin), c-Jun N-tèminal kinaz (JNK, 1:500, WL01295, Wanleibio, Shenyang, Lachin), ki gen matirite. -IL-1 (1:500, WL00891, Wanleibio, Shenyang, Lachin), NF-κB p65 (1:500, WL01980, Wanleibio, Shenyang, Lachin), kelch-like ECH asosye pwoteyin 1 (Keap1, 1 :1000, WL03285, Wanleibio, Shenyang, Lachin) ak cleaved-caspase3 (1:500, WL02117, Wanleibio, Shenyang, Lachin). Kantifikasyon Western blot te kalkile lè l sèvi avèk ImageJ (Vèsyon 1.53, Wayne Rasband ak kontribitè, Enstiti Nasyonal Sante, Bethesda, MD, USA).

2.12. Kalkil ak analiz estatistik

Yo te itilize lojisyèl SPSS 24 (IBM, Armonk, NY, USA) pou analiz estatistik. Yo te aplike ANOVA yon sèl-fason ak tès miltip Tukey a pou detekte diferans estatistik ant gwoup sa yo nan nivo siyifikasyon 0.05. Tout done yo te eksprime kòm mwayen an ± SE (estanda erè).

SR, WGR (pousantaj pran pwa), ak DISL (enkreman chak jou nan longè kokiy) yo te kalkile jan sa a:

SR (pousan)=(kantite abalone siviv/kantite abalone inisyal) × 100;

WGR (pousan)=[(pwa final (g) - pwa inisyal (g))/pwa inisyal (g)] × 100;

DISL (µm/jou)=[longè koki final (mm) − longè inisyal kokiy (mm)]/jou × 1000.

3. Rezilta yo

3.1. Efikasite retansyon asid ascorbic nan rejim alimantè a

RE nan AA dyetetik nan diferan entèval benyen nan dlo lanmè yo montre nan Figi Siplemantè S1. An jeneral, RE nan AA nan rejim alimantè a te diminye ak dire imèsyon an nan dlo lanmè. Pandan eksperyans manje a, rejim alimantè a rete nan dlo lanmè a pou apeprè 12 èdtan. Se poutèt sa, esè lesivaj la te dire pou 12 èdtan nan dlo lanmè nan menm kondisyon yo manje. Apre yon imèsyon 3 èdtan, RE nan AA nan rejim yo te varye ant 95.25 pousan ak 97.43 pousan. RE nan AA te kenbe nan plis pase 95 pousan nan imèsyon an 6 h. Apre plonje pandan 12 èdtan, RE nan AA nan AA50, AA100, AA200, AA500, AA1000, ak AA5000 te 89.78 pousan, 90.88 pousan, 89.38 pousan, 91.03 pousan, 87.4 pousan, 87.4, 87.4 pousan, 87.4, 87.4, 87.4, 87.4

3.2. Pèfòmans kwasans ak distribisyon asid ascorbic nan tisi

The SR and growth performance of abalone-fed gradient levels of AA supplementation are shown in Table 2. The SR (%), WGR (%), and DISL (µm/day) were not significantly affected by dietary AA levels (p>0.05). SR a varye ant 80.74 pousan ak 88.15 pousan, epi WGR ak DISL te varye ant 29.32 pousan ak 31.52 pousan ak 17.92 a 20.01 µm/jou, respektivman.

The AA distribution in tissues, including CFH, muscle, mantle, gill, and digestive gland, is shown in Figure 1. No significant differences in AA content in CFH and mantle of abalone after dietary AA were observed (p>0.05). Kontni AA nan CFH ak manto te varye ant 2.89 µg/mL pou 4.52 µg/mL ak 81.63 µg/g pou 103.08 µg/g, respektivman. Kontni AA nan misk, branch, ak glann dijestif yo te ogmante anpil (p<0.05) and reached their peak at the AA5000 group. The AA content in the muscle, gill, and digestive gland was 64.88–128.20 µg/g, 308.98–382.19 µg/g, and 130.08–206.09 µg/g, respectively.

3.3. Paramèt iminitè emolinf yo

THC, RB ak PA nan emolinf yo prezante nan Tablo 3. THC a siyifikativman ogmante ak ogmantasyon nan AA dyetetik, sòti nan 1.07 × 107-1.65 × 107 selil / mL, ak rive nan pik li nan gwoup la AA1000.

RB nan emosit abalone te ogmante anpil e li te rive nan pi wo nivo li nan gwoup AA10{{10}}{{20}} (0 .35 OD630/107 selil·mL−1). Kòm sipleman an nan AA dyetetik ogmante soti nan 189.05 mg / kg a 919.99 mg / kg, RB a te ogmante siyifikativman soti nan 0.20 OD630 / 107 selil · mL-1 a 0.35 OD630 / 107 selil · mL-1 (p <0.05). AA dyetetik ka afekte PA nan emosit nan abalone (p <0.05). PA nan abalone nan gwoup la AA1000 ak AA5000 te siyifikativman pi wo pase sa nan AA0, AA50, ak gwoup AA100 ak reyalize maksimòm li yo (48.92 pousan) nan gwoup la AA5000.

Paramèt ki gen rapò ak iminitè nan CFH nan abalone, ki gen ladan LZM, C3, ak C4 kontni, yo prezante nan Tablo 4. Aktivite LZM a te siyifikativman elve (p <0.{{1{0}) }5) ak atenn nivo ki pi wo nan gwoup AA1000, kote aktivite li te 56.25 U/mL. Done yo pa t 'revele okenn efè enpòtan pou kontni C3 nan mitan tout tretman (p> 0.05); sepandan, kontni an C3 te rete ogmante ak sipleman an nan AA dyetetik. Kontni C4 la pa te afekte anpil pa AA dyetetik (p> 0.05).

3.4. Paramèt anti-oksidatif nan CFH

Aktivite anzim antioksidatif nan CFH abalone ki gen SOD, CAT, ak GPX, ansanm ak kapasite T-AOC ak kontni MDA ak GSH yo montre nan Tablo 5. AA dyetetik te enfliyanse anpil aktivite SOD, CAT, ak GPX, ak T-AOC ak sa ki nan GSH ak MDA. Aktivite SOD, CAT, ak GPX, ak kontni T-AOC ak GSH yo te siyifikativman regilasyon (p <0.05), pandan y ap kontni MDA yo te siyifikativman downregulated nan abalone (p <0.05). ). Pa gen okenn diferans enpòtan nan paramèt anti-oksidatif sa yo nan CFH nan abalone yo te obsève ant gwoup yo AA1000 ak AA5000.

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】