Efè benefisye nan total Phenylethanoid glikozid fraksyon izole nan Cistanche Deserticola sou mikrostruktur zo nan rat ovariectomized.

Lingling Yang, Shuqin Ding, Bo Zhang, Jingjing Liu, Yanhong Dong, Qiwen Tang, Pingping Yang, ak Xueqin Ma

1 Depatman analiz famasetik, lekòl famasi, Ningxia Medical University, 1160 Shenli Street, Yinchuan 750004, Lachin.

2 Lekòl Medsin klinik, Ningxia Medical University, 692 Shenli Street, Yinchuan 750004, Lachin

3 Kle laboratwa Hui Etnik Medsin modènizasyon, Ministè Edikasyon, Ningxia Medical University, 1160 Shenli Street, Yinchuan 750004, Lachin

Sa a se yon atik aksè ouvè ki distribye anba Lisans Creative Commons Attribution, ki pèmèt itilizasyon, distribisyon ak repwodiksyon san restriksyon sou nenpòt mwayen si travay orijinal la byen site.

Kontakte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Résumé

Etid prezan an te fèt pou estime aktivite antiosteyopowotik total fraksyon glikozid feniletanoid izole nanCistanchedeserticola(CDP) sou rat pwovoke pa ovariectomy (OVX) osi byen ke mekanis yo ki gen rapò. Apre 3 mwa nan administrasyon oral, diminye dansite mineral zo a, serom Ca, ak P nan rat OVX yo te refè ak mikrochitekti zo trabecular ki deteryore te an pati amelyore pa Cistanche deserticola (60, 120, ak 240 mg / kg) entèvansyon, aktivite yo. nan makè resorption zo yo te downregulated, ak byoaktif nan endèks la fòmasyon zo yo te upregulated; pandan se tan, kontni an nan MDA te refize, ak GSH te ogmante pa tretman CDP. Konpozisyon, 8 konpoze phenylethanoid glikozid yo te idantifye nanCistanchedeserticola(CDP), ak sa ki total de kantite kòm 50.3 pousan lè l sèvi avèk metòd HPLC. Mekanistikman,Cistanchedeserticola(CDP)dekline nivo TRAF6, RANKL, ak RANK, konsa siprime RANKL/RANK/TRAF6-pwovoke deklanchman nan chemen siyal NF-κB en ak PI3K/AKT epi finalman anpeche aktivite kle pwoteyin osteoklastojèn NFAT2 ak c. -Fos. Tout done ki anwo yo te implique ke CDP te montre efè benefik sou mikwostrikti zo nan rat ovariectomized, ak efè sa yo ka gen rapò ak chemen siyal NF-κB ak PI3K/AKT ki te deklanche pa obligatwa RANKL, RANK, ak TRAF6.

Cistanche tubulosagen anpil efè, klike isit la pou konnen plis

1. Entwodiksyon

Osteyopowoz la apre menopoz, kote 1 fanm sou 3 ki gen plis pase 50 ane ap soufri, ap vin pi gwo danje pou sante ki aflije plis pase 200 milyon fanm nan tout mond lan [1]. Nan menopoz, n bès sevè nan nivo estwojèn anjeneral mennen nan yon resorption zo depase ki te koze pa osteoclastogenesis ranfòse; Lè sa a, balans ant fòmasyon zo osteoblast pwovoke ak resorption zo osteoclast-induit te deranje, ak resorption zo akselere finalman lakòz osteyopowoz la e menm ka zo kase anch oswa kolòn vètebral [2]. Yo te kwè ke diferansyasyon an nan osteoclast la te deklanche lè aktivatè a reseptè nan faktè nikleyè kappa B (RANK) te mare nan RANKL, ligand nan RANK. Sepandan, konbinezon RANK ak RANKL pa ka aktive sof si pwoteyin timè necrosis faktè reseptè-asosye faktè 6 (TRAF6) te ansanm nan li [3], ki te swiv pa eksitasyon an nan chemen siyal en ki gen ladan PI3K / AKT ak NF-κB. Epi finalman, ekspresyon faktè nikleyè nan selil T aktive c2 (NFAT2) ak c-Fos yo te reglemante [4] pou modile diferansyasyon osteoclast la ak resorption zo. Kidonk, yo te kwè faktè ak regilatè ki gen rapò dirèkteman oswa endirèkteman ak deklanchman ak diferansyasyon osteoclast kòm objektif enpòtan pou anpeche pèt zo yo.

Gen kèk medikaman terapi ranplasman òmòn klinik ak sentetik tankou estradiol valerate ki efikas nan tretman osteyopowoz la apre menopoz. Malerezman, kèk nan sa yo ogmante risk pou kansè grav tankou kansè nan tete ak andomètr [5], ki limite aplikasyon klinik yo. Se poutèt sa, li nesesè yo chwazi lòt altènativ ak tou de efikasite ak efè segondè minim. Medikaman tradisyonèl Chinwa (TCM), osi byen ke konpoze bioaktif izole yo ak fraksyon [6-9], yo te pwouve efikas sou divès maladi ki gen ladan osteyopowoz apre menopoz. Pami konpozan ak fraksyon bioaktif sa yo, yo te kwè konpoze phenylethanoid glycoside (PhG) ki gen potansyèl efikasite kòm ajan pwomèt pou tretman osteyopowoz la [10-12]. Estrikti PhG yo konpoze de aglycone asid cinnamic, yon gwoup idwoksil fenil etil ki konbine avèk -glucopyranose, apiose, galaktoz, rhamnose, oswa xylose atravè yon kosyon glikozidik. Yo lajman egziste nan espès medsin nan genusCistanche[13]. CistanchedeserticolaYC Ma se yon TCM ofisyèl ki anrejistre nan famakope Chinwa, epi anplis ke yo te yon TCM enpòtan [14], C deserticola se tou yon zèb tonik anti-aje ak kèk efè segondè ki te devlope nan likè medsin ak likid nitrisyonèl apwouve pa Manje Eta a. ak Administrasyon Medikaman. Ki baze sou dosye famakope Chinwa a, C. deserticola te tradisyonèlman itilize pa natif natal pou jere pwoblèm defisyans esans ren tankou feblès nan misk ak feblès lonbèr, ak konpoze glikozid phenylethanoid ki gen ladan echinakozid ak acteoside se eleman prensipal yo bioaktif nan zèb sa a. Dapre teyori TCM nan "ren-gouvène-zo", sistèm zo a gouvène pa sans nan ren [15], ak pwoblèm ki gen rapò ak zo tankou maladi osteyopowoz la ta ka refè pa remèd fèy oswa konpoze posede aktivite a nan nouri sans nan ren. Se poutèt sa, nou te ipotèz ke fraksyon total phenylethanoid glikozid izole nan C. deserticola, omwen an pati, te benefisye nan tretman osteyopowoz la. Se poutèt sa, eksperyans aktyèl la te envante pou valide ipotèz nou an lè l sèvi avèk yon modèl rat ovariectomized (OVX); Anplis makè resorption zo ak fòmasyon yo dwe estime, endèks antioksidasyon an ansanm ak RANKL/RANK/TRAF6- pwovoke PI3K/AKT ak NF-κB siyal chemen yo te anplwaye tou pou mennen ankèt sou mekanis prensipal yo nan byoaktivite antiosteyopowotik la. .

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Materyèl Plant ak Preparasyon.

Yon total de 30 kg tij nanCistanchedeserticolaY.C. Yo te ranmase Ma nan Konte Yongning nan mwa septanm nan 2015 ak kowòdone 106.026597 ak 38.262816, pwovens Ningxia, Lachin. Doktè Lin Dong (Depatman Farmakognosy, Ningxia Medical University) te idantifye zèb la ak yon echantiyon ki koresponn lan (#201509{{40}}1) te konsève nan Depatman analiz famasetik. Premyerman, 30.0 kg an poud C. deserticola te ekstrè lè w itilize metòd rflu ak 70 pousan etanòl kòm yon sòlvan; rapò a nan materyèl ak sòlvan yo te mete kòm 1: 10, ak tan an rflu te 2 èdtan pou 3 fwa. Lè sa a, tout filtraj yo te konbine ak kondanse anba presyon redwi nan 60 degre C. Dezyèmman, AB-8 kolòn résine makroporous yo te itilize pou separasyon an preliminè, ak diferan rapò etanòl nan dlo (0 pousan, 20 pousan, 30 pousan , 40 pousan , 50 pousan , ak 60 pousan , chak 60 L) yo te anplwaye pou elisyon. Twazyèmman, 40 pousan ak 50 pousan eliyan yo te konbine epi pirifye plis lè yo itilize kolòn rezin macroporous AB-8 repete ak eluyan yo nan 0 pousan, 20 pousan, 30 pousan, 40 pousan, ak 50 pousan etanòl nan dlo, ak chak eluyan te 12 L. Finalman, yo te kolekte fraksyon 40 pousan ak kondanse anba presyon redwi pou jwenn 150 g sediman jòn pal phenylethanoid glycoside fraksyon nan C. deserticola (CDP, sede a te 0.5 pousan). Pou eksperyans nan vivo, 0.5 pousan CMC-Na sòlvan yo te anplwaye pou fonn CDP; administrasyon oral bay bèt yo te fikse kòm 1 mL / 100 g nan pwa kò; pou analiz in vitro Western blot, CDP te fonn ak DMSO ak Lè sa a, dilye ak DMEM jwenn konsantrasyon final yo nan 0.1 mg/mL, 0.01 mg/ml, ak 0.001 mg/mL.

2.2. Pwodwi chimik ak Solvang.

Estradiol valerate (EV) te soti nan Delpharm Lille SAS, Lafrans; alkalin fosfataz (ALP), zo gla-pwoteyin (BGP), tartrate ki reziste fosfataz asid (TRAP), ak deoxypyridinoline (DPD) twous ELISA crosslink soti nan Xinyu Biological Engineering Co Ltd, Shanghai, Lachin, 201605; malondialdehyde (MDA, 20181221), super oksid dismutase (SOD, 20121218), ak glutatyon (GSH, 20181221) twous reyaktif nan Enstiti Nanjing Jiancheng Byolojik Jeni, Nanjing, Lachin; lntact parathormone (l-PTH, NEWASHE7UZ), kalsitonin (2L9ISN7AIU), ak reseptè alfa ki gen rapò ak estwojèn (ERR , Y3AY8QEWB3) crosslink ELISA twous ki soti nan Elabscience Biotechnology Co Ltd, Wuhan, Lachin; kathepsin K ELISA reyaktif twous ki soti nan BioVision, Amerik, 1l300141; antikò prensipal RANKL (GR3193842-5), RANK (AA02113656), TRAF6 (2), c-Fos (AG12059411), NFAT2 (AO11015648), NF-κB p65 (AH04138226), PI3 alfa kinase (p86052) , AKT 1 (AF05173234), -aktin (17AV0411), ak segondè antikò nan refor peroksidaz-konjige kabrit anti lapen IgG soti nan ZSGB-BIO, Lachin, 136080; total BCA pro tein assay kit ak twous komèsyal la pou deteksyon fòmasyon oste oclast ak serom fetis bovin ak mwayen Dulbecco modifye Eagle's (DMEM) ki soti nan HyClone, Logan, UT, USA; fliyorid polyvinylidene (PVDF) manbràn ki soti nan Millipore Life Sciences, Billerica, MA, USA; penisilin ak streptomycin soti nan Gibco, Rockville, MD, USA. Tout lòt ajan chimik yo te itilize yo te nan klas AR.

2.3. HPLC Quantification Cistanche Deserticola P.

Yo te itilize yon enstriman HPLC Agilent 1220 pou idantifye ak quantifier konpozisyon CDP. Kondisyon kwomatografi yo te jan sa a: kolòn C18 (TSK-GEL, 4 6 I d × 250 mm, 5 μm); elisyon gradyan te genyen solvants A (asetonitrile) ak B (dlo ki gen 0.5 pousan asid acetic) (0-10 min: 17-20 pousan A; 10-30 min: 20-25 pousan A; ak 30-40 min: 25-30 pousan A); longèdonn deteksyon an te 333 nm; tanperati anbyen; koule pousantaj la te 1.0 mL / min; echantiyon piki volim te 5 μL. Yo te idantifye uit konpoze PhG, sètadi, cistanoside F, echinacoside, 6′-acetylatteoside, cistanoside C, cistanoside A, acteoside, 2′-acetylatteoside, ak isoacteoside; lè l sèvi avèk sibstans referans korespondan yo ak yon metòd estanda ekstèn, sa ki pi wo a 8 PhG yo te quantifier pa analiz HPLC (Figi 1).

2.4. Pwotokòl eksperimantal bèt.

Yon total de 6 0 rat Sprague-Dawley adilt ki gen laj 3 mwa te gen entansyon soti nan sant la nan tès bèt nan Ningxia Medical University, ak mwayèn premye pwa kò yo nan apeprè 234 ± 25 g. Rat yo te loje nan yon anviwonman estanda espesifik patojèn pou aklimate pou 1 semèn. Lè sa a, tout rat yo te anestezi (idrat chloral, 100 mg / kg, ip) sèlman oswa sham ovariectomized (SHAM), oswa de ovè yo te tou de retire ak Lè sa a, owaza divize an 5 sougwoup: oralman trete ak machin (0.5 pousan CMC-). Na) te etabli kòm gwoup modèl (OVX), estradiol valerate (1 mg/kg/jou) kòm gwoup pozitif (EV), ak 60, 120, ak 240 mg/kg/jou CDP ki ba (CDPL), gwoup dòz modere (CDPM), ak segondè (CDPH), respektivman. Tout rat yo te administre oralman chak jou epi yo te dire pou 3 mwa ak dòz la ajiste chak 2 semèn ki depann sou chanjman nan pwa yo tout kò. Nan dènye jou eksperyans bèt la, 24-èdtan pipi yo te jwenn lè w itilize kaj metabolik yo; yo te kolekte serom nan atè femoral rat anestezi; femora dwat yo, tibya yo, ak tout ògàn yo te diseke epi estoke nan -80 degre C pou plis analiz. Eksperyans bèt ke nou te fè yo te apwouve pa Komite Enstitisyonèl Swen ak Itilizasyon Animal nan Ningxia Medical University.

2.5. Detèminasyon dansite mineral zo ak analiz Micro-CT.

Premyèman, yo te itilize yon machin absorptiometry radyografi doub enèji (Linè, USA) pou estime dansite mineral zo total nan femoral dwat chak rat; Dezyèmman, yo te itilize menm femoral la pou estime imaj 3D nan mikrochitekti zo trabekilè pa anplwaye yon aparèy eskanè mikwo-CT (GE, Amerik). Yo te fikse rezolisyon izotwòp la kòm 14 μm pou jwenn yon imaj ideyal 3D; te chwazi rejyon an nan enterè (ROI) pa mete menm kowòdone yo nan plak kwasans lan nan femoral la nan chak echantiyon; ak paramèt mòfometri zo yo ki gen ladan separasyon trabecular (Tb. Sp), nimewo trabecular (Tb. N), epesè trabecular (Tb. Th), kontni mineral zo (BMC), dansite mineral tisi (TMD), ak kontni mineral tisi (TMC). ) yo te jwenn nan analize ROI la.

2.6. Serom ak pipi Biochimik essai.

Aktivite serik cathepsin K, TRAP, SOD, ak GSH, ansanm ak sa ki nan serik PTH, kalsitonin, ERR, MDA, BGP, ak pipi DPD, yo te detèmine pa anplwaye twous reyaktif korespondan yo dapre enstriksyon manifakti a, ak nan nivo fosfataz alkalin (ALP) ak sa ki nan serom ak pipi kalsyòm (Ca) ak fosfò (P) yo te estime pa anplwaye yon machin otomatik (Ciba-Corning 550 Diagnostics Corp., Oberlin, OH, USA).

2.7. Analiz Western Blot.

Osteoclasts yo te pwovoke lè l sèvi avèk selil RAW 264.7 te ajoute ak macrophage koloni-stimulan faktè (MCSF) ak RANKL. Yon ti tan, 1 × 107 selil RAW 264.7 yo te kiltive nan yon plak 6-byen an prezans 30 ng/mL MCSF ak 25 ng/mL RANKL. Apre 6 jou nan endiksyon, selil osteoclast ki gen matirite yo te idantifye lè yo itilize metòd TRAP-tache ak twous ki koresponn lan, epi yo te trete ak CDP (0.1, 0.01, ak 0.001 mg/mL). , respektivman) pou 24 h; Lè sa a, selil yo te lysed ak yon tanpon liz ki gen 0.5 mmol phenylmethylsulfonyl fliyò, proteaz, ak inhibiteur fosfataz. Lè sa a, lisat la separe lè l sèvi avèk 10 pousan SDS-PAGE epi yo transfere nan yon manbràn PVDF, ki te sonde ak AKT1, NF-κB-p65, RANKL, PI3K-p85, RANK, NFAT2, TRAF6, c-Fos, ak -actin. (1: 400) apre bloke ak 5 pousan lèt san grès pou 2 èdtan. Menm manbràn yo te retire ak sonde ankò ak pi wo a 9 antikò korespondan yo, respektivman, Lè sa a, yo te detekte pa lojisyèl an laboratwa Imaj nan fen an. Eksperyans yo te repete twa fwa.

2.8. Analiz estatistik.

Tout done yo te jwenn nan eksperyans in vivo ak in vitro, ki dekri kòm mwayen ± SD, yo te analize lè l sèvi avèk yon sèl-fason ANOVA ki te swiv pa tès Dunnett a (SPSS 22.0 lojisyèl, SPSS, USA); p < 0="" 05="" te="" siyifikatif="">

Rezilta yo

3.1. Konpozisyon chimik Cistanche Deserticola P.

Lè w itilize metòd HPLC, uitphenylethanoid glikozidkonpoze yo te jwenn nan fraksyon sa a, jan Figi 1 montre. Lè w itilize referans estanda ak yon metòd estanda ekstèn, yo te idantifye konpoze yo ak sa ki ladan yo kòm sa a: (1) acteoside F (3.6 pousan), (2) echinacoside (8.8 pousan), (3) cistanoside A (5.{ {9}} pousan ), (4) akteozid (13.3 pousan ), (5) izoakteozid (3.3 pousan ), (6) akteozid C (3.6 pousan ), (7) 2′-acetylatteoside (9.9 pousan ), ak (8) ) 6′-acetylatteoside (3.2 pousan). Kontni total uit eleman sa yo te mezire kòm 50.7 pousan.

3.2. Efè Cistanche Deserticola P sou dansite mineral zo ak mikrochitekti Trabecula.

Figi 2 montre dansite mineral zo total rat yo nan diferan gwoup yo. Yo te obsève yon tandans diminisyon nan kontni dansite mineral zo nan rat nan gwoup modèl OVX la, ki te diminye pa prèske 12.0 pousan apre. 12 semèn nan operasyon an konpare ak rat yo nan gwoup la SHAM (p <0 001).="" tout="" rat="" ki="" trete="" cdp="" yo="" te="" montre="" siyifikativman="" ogmante="" dansite="" mineral="" zo="" pa="" 11.2="" pousan,="" 12.0="" pousan,="" ak="" 10.7="" pousan="" (p=""><0 01),="" respektivman,="" an="" konparezon="" ak="" rat="" yo="" nan="" modèl="" ovx="" la.="" gwoup.="" anplis="" de="" sa,="" ki="" konsistan="" avèk="" done="" yo="" nan="" dansite="" mineral="" zo="" total,="" rekonstriksyon="" mikwo-ct="" kòm="" byen="" ke="" detèminasyon="" istomorfometrik="" nan="" femoral="" la="" te="" montre="" ke="" rat="" yo="" nan="" gwoup="" la="" ovx="" te="" montre="" deteryorasyon="" evidan="" nan="" achitekti="" trabecular="" evidans="" nimewo="" a="" miyò="" dekline="" ak="" zòn="" nan="" trabecula="" tou.="" kòm="" siyifikativman="" ogmante="" tb.="" sp="" lè="" yo="" konpare="" ak="" rat="" yo="" nan="" gwoup="" la="" sham.="" tretman="" ak="" cdp="" anpeche="" deteryorasyon="" ovx-induit="" nan="" achitekti="" trabecular;="" jan="" figi="" 3="" montre,="" bmc,="" tmc,="" ak="" tb.="" n="" valè="" yo="" te="" ogmante="" siyifikativman="" ak="" zòn="" nan="" tb.="" sp="" te="" miyò="" diminye,="" pandan="" y="" ap="" valè="" tmd="" ak="" tb.="" th="" te="" sanble="" pa="" siyifikativman="" afekte="" pa="" operasyon="" an="" ovx="" ak="" entèvansyon="" cdp="" nou="">

3.3. Efè Cistanche Deserticola P sou pipi ak serom paramèt byochimik.

Kòm Figi 4 montre, yo te detekte tandans diminisyon enpòtan nan nivo urin P ak kontni serik kalsitonin nan rat nan gwoup modèl OVX, ki te prèske 30 pousan ak 60 pousan mwens pase rat SHAM yo (p < 0="" 001="" ),="" respektivman,="" tandiske="" pa="" gen="" okenn="" tandans="" evidan="" ogmante="" oswa="" diminye="" nan="" nivo="" urin="" nan="" ca="" ak="" serik="" ca="" osi="" byen="" ke="" serom="" p="" ak="" serik="" pth="" te="" obsève="" ant="" ovx="" ak="" gwoup="" sham.="" tretman="" ak="" cdp="" te="" siyifikativman="" anpeche="" pèt="" nan="" serik="" p="" ak="" ca="" nan="" rat="" ovx,="" evidans="" nivo="" yo="" nan="" serom="" p="" ak="" ca="" miyò="" regilasyon="" (p=""><0 05)="" kòm="" konpare="" ak="" rat="" yo="" nan="" gwoup="" la="" modèl="" ovx.="" anplis="" de="" sa,="" yo="" te="" obsève="" tandans="" ogmante="" men="" ki="" pa="" estatistik="" enpòtan="" nan="" kalsitonin="" nan="" tou="" de="" gwoup="" dòz="" ki="" ba="" ak="" segondè="" nan="" cdp="" an="" konparezon="" ak="" gwoup="" la="" modèl="">

3.4. Efè Cistanche Deserticola P sou fòmasyon zo ak makè resorption zo.

Efè benefik CDP sou endèks fòmasyon zo a, osi byen ke enfliyans anpèchman sou makè resorption zo yo, yo te dekri nan Figi 5. Konsènan makè fòmasyon zo yo, nivo BGP serik yo te prèske pa enfliyanse pa operasyon ovariectomized evidans ki pa-. chanjman enpòtan yo obsève nan tout gwoup trete yo, tandiske amelyorasyon estatistik siyifikatif nan ALP serik yo te jwenn tou de nan dòz ki ba (60 mg/kg) ak modere (120 mg/kg) nan gwoup entèvansyon CDP lè konpare ak rat gwoup SHAM la (p < 0="" 01).="" konsènan="" endèks="" resorption="" zo="" a,="" nivo="" serik="" cathepsin="" k="" ak="" dpd,="" osi="" byen="" ke="" trap="" nan="" rat="" nan="" gwoup="" modèl="" ovx="" la,="" te="" ogmante="" siyifikativman="" pa="" apeprè="" 75.0="" pousan,="" 41.4="" pousan,="" ak="" 21.0="" pousan,="" respektivman,="" konpare="" ak="" rat="" sham="" yo.="" ,="" ak="" lè="" trete="" ak="" cdp,="" espesyalman="" dòz="" la="" ki="" ba="" nan="" 60="" mg="" kg,="" pwopriyete="" yo="" nan="" cathepsin="" k="" ak="" dpd="" kòm="" byen="" ke="" trap="" nan="" gwoup="" la="" modèl="" ovx="" yo="" te="" miyò="" inibit="" pa="" 67.3="" pousan="" ,="" 41.4="" pousan="" ,="" ak="" 25.9="" pousan="" ,="" respektivman,="" kòm="" konpare="" ak="" rat="" yo="" nan="" gwoup="" modèl="" ovx="">

3.5. Efè Cistanche Deserticola P sou vajen an ak matris kòm byen ke pwa kò antye.

Yo te obsève diferans ki pa enpòtan nan pwa inisyal tout kò rat yo anvan tretman an nan sis gwoup (Figi 6). Sepandan, operasyon ovariectomized la te mennen nan yon ogmantasyon siyifikatif nan pwa kò final rat nan gwoup modèl OVX la ki se prèske 36.0 pousan, tandiske pwa mouye nan matris la ak nan vajen yo te bese drastikman pa prèske 9{{4. }}.0 pousan ak 60.0 pousan, respektivman, konpare ak rat SHAM yo (p < 0="" 001).="" malgre="" ke="" kontni="" err="" pa="" montre="" okenn="" diferans="" enpòtan="" ant="" gwoup="" ovx="" ak="" gwoup="" sham,="" tout="" gwoup="" tretman="" ki="" gen="" ladan="" cdp="" ak="" ev="" ogmante="" nivo="" err="" siyifikativman.="" anplis="" de="" sa,="" lè="" yo="" te="" trete="" ak="" ev,="" pi="" wo="" a="" te="" pran="" pwa="" tout="" kò,="" osi="" byen="" ke="" pèt="" nan="" vajen="" ak="" pwa="" matris="" nan="" rat="" ovx,="" yo="" te="" an="" pati="" ranvèse="" (p=""><0 001)="" ​​men="" yo="" pa="" afekte="" pa="" entèvansyon="">

3.6. Efè Cistanche DeserticolaP sou nivo serom MDA, SOD, ak GSH.

Pa te gen okenn diferans estatistik enpòtan nan pwopriyete yo nan SOD serom ak GSH ant gwoup yo modèl SHAM ak OVX; jan Figi 7 dekri, yon tandans ogmante nan GSH ka obsève ant de gwoup ki anwo yo. Anplis de sa, nivo serik MDA te sevè upregulated pa prèske 50 pousan nan rat yo nan gwoup la modèl OVX lè yo konpare ak rat yo SHAM. Aktivite SOD la pa te enfliyanse pa tretman CDP, tandiske pwopriyete GSH te siyifikativman amelyore pa entèvansyon CDP, ak CDP miyò diminye nivo MDA pa 33.9 pousan ak 42.4 pousan nan dòz 60 ak 240 mg / kg, respektivman ( p < 0="">

3.7. Efè Cistanche deserticola P sou nivo ekspresyon pwoteyin.

Done nou yo, yo montre nan Figi 8, sijere ke tretman CDP siyifikativman diminye nivo pwoteyin TRAF6, RANK, ak RANKL konpare ak kontwòl la. Chemen siyal en ki gen ladan NF-κB te siprime, epi PI3K/AKT te ankouraje pa entèvansyon CDP, evidans ekspresyon de NF-κB-p65 downregulation, tandiske PI3K-p85 ak AKT1 te upregulated. Kontinwe, ekspresyon NFAT2 te siyifikativman diminye, epi c-Fos te ogmante apre tretman ak CDP nan yon konsantrasyon 0.001-0.1 mg/mL. Yon mekanis sijere yo dekri nan Figi 9, kote CDP desann nivo RANKL ak RANK, ki mennen nan rediksyon kantite obligatwa ligand sa a ak reseptè li yo, epi koneksyon RANKL ak RANK te diminye plis pa regilasyon TRAF6. ki te swiv pa repwesyon nan chemen yo en ki gen ladan chemen an NF-κB tandiske chemen an siyal PI3K / AKT te ankouraje, ki finalman mennen nan diminisyon nan ekspresyon NFAT2 ak ogmantasyon nan nivo a c-Fos.

4. Diskisyon

Glikozid phenylethanoid yo se eleman ki natirèlman idrosolubl ki egziste lajman nan wayòm plant medsin [11]. Jiskaprezan, konpoze phenylethanoid glikozid te atire pi plis ak plis chèchè akòz wòl evidan yo nan manyen divès maladi ak anomali imen [13]. Nimewo nan fraksyon byoaktif antiosteyopowotik ak konpoze, ki gen ladan polifenol ak glikozid phenylethanoid, yo te idantifye ak izole nan plizyè douzèn remèd fèy natirèl [5, 10, 12, 16, 17]. C. deserticola se byen li te ye kòm "ginseng nan dezè a" ki enplike pwofil sekirite sa a TCM manjab [18, 19]. Kòm yon zèb jeneral tonik ak manje sante natirèl ki depi lontan yo te itilize nan peyi Azyatik, C. deserticola te ekspoze fonksyon benefisye pou amelyorasyon nan fòs ren. Yo te jwenn ke TCM, tradisyonèlman itilize pou dinamize ak kenbe sans nan ren, yo te itilize anjeneral pou trete maladi osteyopowoz la, tou de nan vitro ak nan vivo done pibliye te pwouve aktivite a antiosteyopowotik nan C. deserticola [20-23], ak konstitiyan phenylethanoid glikozid ki gen ladan. echinacoside ak acteoside se eleman prensipal byoaktif ki egziste nan plant medsin manjab sa a; tout sa ki sijere ke pa sèlman echinacoside ak acteoside tèt yo, men tou lòt konpozan phenylethanoid glikozid ki genyen nan C. deserticola yo te konsidere kòm responsab pou pwopriyete a antiosteyopowotik nan zèb sa a. Nan etid nou an prezan, yo te itilize yon résine makwoporè sekirite favorab pou izole ak anrichi fraksyon glikozid phenylethanoid soti nan C. deserticola, ak lè l sèvi avèk metòd HPLC, uit eleman prensipal glikozid fenylethanoid, sètadi, acteoside F, echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside, acteoside C, 2′-acetylatteoside, ak 6′-acetylatteoside, yo te jwenn nan fraksyon izole phenylethanoid glikozid, ak sa ki te genyen 3.6 pousan, 8.8 pousan, 5.0 pousan, 13.3 pousan, 3.3 pousan, 3.9 pousan, 3.9 pousan. ak 3.2 pousan, respektivman. Echinacoside, youn nan konpoze aktivite prensipal yo anrejistre nan C. deserticola [14], yo te pwouve yo posede aktivite antiosteyopowotik; sepandan, dòz la nan 270 mg / kg te tèlman wo ki limite plis aplikasyon klinik li yo [24]. Nan eksperyans aktyèl yo, total phenylethanoid glycoside fraksyon ak yon pi ba dòz 60-240 mg/kg pwa kò/jou te itilize sou rat OVX, ak sa ki nan eleman idantifye yo te prèske 50 pousan pi nan fraksyon sa a lè yo itilize. metòd HPLC.

Li te byen li te ye ke OVX ka lakòz maladi osteyopowoz la, epi yo te kwè yon rat OVX kòm yon modèl klasik ak apwopriye pou simulation osteyopowoz moun apre menopoz. An menm tan an, yo te obsève yon diminisyon siyifikatif nan dansite mineral zo a, mikrochitekti zo trabekilè, pwa mouye nan matris ak vajen, ak nivo estwojèn, ak amelyorasyon evidan nan resorption zo ak pwa kò, yo te obsève apre operasyon ovariectomy, ki te nan pati akòz pèt estwojèn [25]. Done nou yo, jiskaprezan, klèman demontre ke OVX tout bon pwovoke osteyopowoz postmenopoz epi li toujou akonpaye pa gwo bès nan bon jan kalite zo, mikrochitekti zo, ak pwa mouye nan matris ak vajen. Kòm EV se yon ajan ranplasman òmòn jeneral ki te itilize nan pratik klinik la, li te itilize kòm yon kontwòl pozitif nan eksperyans in vivo nou an, ak pwa kò ak atrofi pwa matris la te genyen, osi byen ke dansite mineral zo deteryore ak mikrochitekti zo trabekilè. , yo te espere ranvèse pa sipleman EV. Diferan de kontwòl pozitif la, diminye pwa nan vajen ak nan matris la, ansanm ak pwa tout kò rat yo nan gwoup modèl OVX la, pa t afekte pa tretman CDP, ki vle di ke CDP te kapab amelyore fòmasyon zo san yo pa pwovoke efè segondè yo. sou kò a ak tisi òganik matris yo. Malgre ke nivo ERR yo te siyifikativman upregulated pa tretman CDP, li te jis tankou yon efè phytoestrogen ki pa gen okenn efè segondè sou tisi òganik matris ak vajen yo te obsève. Anplis de sa, tretman CDP siyifikativman ranfòse bon jan kalite a nan zo nan rat OVX ki te deteryore pa operasyon ovariectomy.

Anplis de sa, nivo P ak Ca nan urin ak serom rat OVX yo te itilize tou pou reflete efè antiosteyopowotik, ak konsantrasyon Ca ak inòganik P yo te anjeneral depann sou nivo kalsitonin ak PTH [26]. Nan etid la prezan, byenke pa gen okenn tandans siyifikatif dekline oswa ogmante nan nivo eskresyon urin nan Ca, serom P, serom Ca, ak PTH nan rat nan gwoup la modèl OVX yo te jwenn, nivo yo enpòtan urin nan P ak kalsitonin (p < {="" {1}})="" yo="" te="" obsève.="" konfòm="" ak="" done="" yo="" pibliye="" ke="" defisi="" estwojèn="" ki="" te="" koze="" pa="" operasyon="" ovariectomy="" toujou="" mennen="" nan="" yon="" nivo="" kalsitonin="" diminye="" nan="" san="" an,="" sa="" a="" diminye="" kalsitonin="" serom="" finalman="" mennen="" nan="" yon="" nivo="" ogmante="" pth,="" kote="" ca="" te="" kwè="" kòm="" regilatè="" a="" pi="" gwo="" nan="" sekresyon="" pth.="" paske="" konsantrasyon="" pth="" pa="" montre="" okenn="" diferans="" enpòtan="" ant="" gwoup="" ovx="" ak="" sham="" nan="" etid="" prezan="" an,="" nivo="" ca="" nan="" tou="" de="" serom="" ak="" pipi="" pa="" montre="" okenn="" chanjman="" evidan="" ant="" de="" gwoup="" ki="" anwo="" yo.="" sepandan,="" yon="" tandans="" siyifikativman="" refize="" sou="" nivo="" kalsitonin="" ant="" gwoup="" ovx="" ak="" sham="" yo="" te="" jwenn,="" e="" kidonk,="" kontni="" p="" nan="" pipi="" ovx="" te="" pisan="" diminye.="" nou="" te="" kwè="" ke="" done="" ki="" anwo="" yo="" ka="" eksplike="" fenomèn="" nan="" kontradiktwa="" poukisa="" eskresyon="" urin="" nan="" nivo="" ca="" nan="" rat="" ovx="" pa="" te="" montre="" okenn="" chanjman="" evidan="" an="" konparezon="" ak="" rat="" sham,="" ak="" fenomèn="" sa="" a="" ka="" gen="" rapò="" tou="" ak="" to="" a="" ogmante="" nan="" woulman="" zo="" [27]="" .="" apre="" tretman="" ak="" cdp,="" nivo="" p="" ak="" ca="" nan="" serom="" yo="" te="" miyò="" regilasyon,="" e="" kontni="" p="" nan="" pipi="" te="" downregulated="" nan="" rat="" ovx,="" ki="" te="" reflete="" ke="" cdp="" pa="" t="" kapab="" sèlman="" anpeche="" eskresyon="" eleman="" mineral="" zo="" yo,="" men="" tou="" amelyore="" kontni="" serik="" sa="" yo.="" eleman,="" kidonk="" endirèkteman="" siprime="" pèt="">

Anplis de sa, fòmasyon zo ak makè resorption, osi byen ke anzim antioksidan ki gen ladan SOD ak GSH, yo te tou anplwaye pou eksplike mekanis antiosteyopowotik ki kache nan CDP. Menm jan ak done yo pibliye, nivo ALP nan rat nan gwoup modèl OVX te montre yon tandans ogmantasyon ki pa estatistik siyifikatif ki endike yon vitès akselere woulman zo nan osteyopowoz postmenopoz [10]. Sepandan, apre tretman ak CDP a (60, 120, ak 240 mg / kg / jou), pwopriyete ALP te siyifikativman amelyore. Li te byen li te ye ke OVX te lakòz yon gwo bès nan nivo estwojèn ki anjeneral mennen nan yon resorption zo depase ak estrès oksidatif [28], evidans nivo yo nan TRAP, cathepsin K, ak DPD osi byen ke MDA miyò regilasyon nan rat yo. OVX modèl gwoup. Sepandan, deteryorasyon sa yo te an pati amelyore pa entèvansyon CDP. Anplis de sa, tretman OVX rat ak CDP (60 ak 240 mg / kg) te demontre yon ogmantasyon siyifikatif nan aktivite GSH (p <{8}}). rezilta="" ki="" anwo="" yo="" te="" enplike="" ke="" cdp="" te="" montre="" yon="" efè="" terapetik="" sou="" ovx-pwovoke="" osteyopowoz="" la="" ak="" efè="" sa="" yo="" te="" tou="" de="" pa="" amelyore="" fòmasyon="" zo="" ak="" siprime="" resorption="" zo="" kòm="" byen="" ke="" amelyore="" sistèm="" nan="" antioksidan="">

Aktivasyon RANK pa ligand RANKL li ankouraje ekspresyon NFAT2 ak c-Fos atravè siyal PI3K/AKT ak NF-κB [29]. NF-κB te pwouve esansyèl pou osteoclastogenesis kòm dezòd la nan NF-κB te kapab mennen nan yon diferansyasyon osteoclast andikape ak yon fenotip osteyoporotik, ak NF-κB upregulated c-Fos ak downregulated ekspresyon NFAT2 pandan RANKL / RANK / TRAF-induced osteoclastogenesis. Pou estime enfliyans benefisye CDP sou NFAT2 ak c-Fos-medyatè osteoclastogenesis, nivo ekspresyon RANKL ak RANK yo te analize. Espere, CDP siyifikativman inibit NFAT2 ak ankouraje nivo c-Fos pa downregulating ekspresyon yo nan RANKL ak RANK. Pandan se tan, RANK tèt li te manke pwopriyete kinaz intrinsèques sof si yo te rantre nan TRAF6 pou deklanche siyal en a [3]. CDP te tou downregulated ekspresyon nan TRAF6, ki te mennen nan kantite obligatwa RANKL ak RANK yo te siyifikativman redwi. Yon mekanis antiosteyopowotik ipotèz CDP sou rat OVX kouvri chemen siyal ki anwo yo, epi regilatè yo te dekri nan Figi 9. Brèf, CDP te refize nivo TRAF6, RANKL, ak RANK, kidonk siprime chemen siyal yo en ki gen ladan PI3K/AKT ak NF-κB ki yo deklanche pa RANKL/RANK, epi finalman redwi ekspresyon ak aktivite kle pwoteyin osteoklastojèn NFAT2 ak c-Fos. Se poutèt sa, plizyè endikasyon done enplike efè benefik CDP sou metabolis zo nan rat OVX sitou atravè RANKL/RANK/TRAF6-medyatè PI3K/AKT ak NF-κB chemen.

5. Konklizyon

An rezime, total phenylethanoid glikozid yo, izole nan C. deserticola, te montre siyifikatif efè benefik sou osteyopowoz postmenopoz rat OVX, ak potansyèl terapetik nan siprime pèt zo te sitou nan eksitan fòmasyon zo ak anpeche resorption zo kòm byen ke amelyore zo antioksidan. sistèm; mekanis yo ka gen rapò ak RANKL/RANK/TRAF6-induit NF-κB aktivasyon ak PI3K/AKT inaktivasyon kòm byen ke eksitasyon c-Fos ak repwesyon NFAT2, epi finalman, diferansyasyon an nan osteoclast te inibe.

Abreviyasyon yo

AKT: Pwoteyin kinaz B

ALP: Fosfataz alkalin

BGP: Pwoteyin GLA nan zo

BMC: Kontni mineral zo

CDP: Phenylethanoid glycoside fraksyon nan C. deserticola

CK: Cathepsin K

CT: Kalsitonin

DPD: Deoxypyridinoline

ERR: alfa reseptè ki gen rapò ak estwojèn

EV: Estradiol valerate

GSH: Glutathione l-PTH: parathormone entak

MCSF: Macrophage koloni-stimulan faktè

MDA: Malondialdehyde

NFAT2: Faktè nikleyè selil T aktive c2

NF-κB: Faktè nikleyè-kapa B

OPG: Osteoprotegerin

OVX: Ovariectomized

PhGs: Phenylethanoid glikozid

PI3K: Phosphoinositide 3-kinaz

RANK: Aktivatè reseptè faktè nikleyè kappa B

RANKL: Aktivatè reseptè nan faktè nikleyè-kapa

B ligand ROI: Rejyon enterè

SOD: Superoxide dismutase

Tb. N: nimewo trabekilè

Tb.Sp: Separasyon trabekilè

Tb.Th: epesè Trabecular

TCM: Tradisyonèl medikaman Chinwa

TMC: Kontni mineral tisi

TMD: Dansite mineral tisi

TNF: Faktè necrosis timè

TRAF6: Faktè necrosis timè ki asosye ak reseptè faktè 6

TRAP: Tartrate ki reziste fosfataz asid.

Done Disponibilite

Done yo itilize pou sipòte rezilta etid sa a disponib nan men otè ki koresponn lan sou demann.

Konfli enterè yo

Otè yo pa te gen okenn konfli enterè.

Kontribisyon otè yo

XM fèt ak sipèvize eksperyans yo; SD ak LY te fè pifò eksperyans yo epi yo te ekri maniskri a; BZ ak JL te fè analiz Western blot la epi yo te patisipe nan eksperyans bèt; YD analize done yo; QT ak PY revize maniskri a. Tout otè te revize maniskri a. Lingling Yang ak Shuqin Ding kontribye egalman nan maniskri a.

Rekonesans

Travay sa a te sipòte pa sibvansyon nan Fondasyon Teknoloji Syans nan Edikasyon siperyè nan Ningxia (NGY2017090), Fondasyon Nasyonal Syans Natirèl Lachin nan (No 81560684), Pwogram Rechèch ak Devlopman kle nan Ningxia (2018BHF2001), Ningxia Key Research ak Pwogram Envansyon nan Syans ak Teknoloji Koperasyon nan Lès la ak Lwès la (No. 2017BY084 ak 2017BY079), ak West Light Foundation nan Akademi Chinwa Syans-Jèn Syantis nan Lwès 2017.

Referans

[1] LJ Melton III, EA Chrischilles, C. Cooper, AW Lane, ak BL Riggs, "Perspective. Konbyen fanm ki gen osteyopowoz?," Journal of Bone and Mineral Research, vol. 7, non. 9, pp 1005–1010, 1992.

[2] S. Schnell, SM Friedman, DA Mendelson, KW Bingham, ak SL Kates, "1-Motalite nan ane pasyan yo trete nan yon pwogram ka zo kase anch pou granmoun aje," Geriatric Orthopaedic Surgery & Rehabilitation, vol. 1, non. 1, paj 6–14, 2010.

[3] EM Tan, L. Li, IR Indran, N. Chew, ak EL Yong, "TRAF6 medyatè repwesyon osteoclastogenesis ak prevansyon nan pèt zo òvèj-pwovoke pa yon prenylflavonoid roman," Journal of Bone and Mineral Research, vol. 32, non. 4, paj 846–860, 2017.

[4] JH Kim ak N. Kim, "Règleman NFATc1 nan diferansyasyon osteoclast," Journal of Bone Metabolism, vol. 21, non. 4, paj 233–241, 2014.

[5] K. Ye, XQ Ma, CL Hu et al., "Antiosteoporotic aktivite ak constituants de Podocarpium podocarpus," Phytomedicine, vol. 22, non. 1, pp 94–102, 2015.

[6] SA Jang, HS Song, JE Kwon, et al., "Protocatechuic sid attenuates trabecular bone loss in ovariectomized sourit," Oxidative Medicine and Cellular Longevity, vol. 2018, Atik ID 7280342, 11 paj, 2018.

[7] AB Abdel-Naim, AA Alghamdi, MM Algandaby, et al., "Rutin izole nan Chrozophora tinctoria amelyore pwopagasyon selil zo ak makè osifikasyon," Oxidative Medicine and Cellular Longevity, vol. 2018, Atik ID 5106469, 10 paj, 2018.

[8] J. Wattanathorn, C. Thipkaew, W. Thukham-mee, S. Muchimapura, P. Wannanon, ak T. Tong-un, "Morindacitrifolia L. ekstrè fèy pwoteje kont iskemi serebral ak maladi osteyopowoz la nan yon modèl eksperimantal in vivo. nan menopoz," Medikaman Oksidatif ak Lonjevite Selilè, vol. 2018, Atik ID 1039364, 13 paj, 2018.

[9] S. Sungkamanee, J. Wattanathorn, S. Muchimapura, ak W. Thukham-mee, "Efè antiosteyopowotik nan yon ekstrè konbine nan Morus alba ak Polygonum odoratum," Medsin oksidatif ak lonjevite selilè, vol. 2014, Atik ID 579305, 9 paj, 2014.

[10] J. Liu, Z. Zhang, Q. Guo, Y. Dong, Q. Zhao, ak X. Ma, "Syringin anpeche pèt zo nan sourit ovariectomized atravè TRAF6 medyatè anpèchman nan NF-κB ak eksitasyon nan PI3K / AKT. ," Phytomedicine, vol. 42, pp 43–50, 2018.

[11] CW Lu, SK Huang, TY Lin, ak SJ Wang, "Echinacoside, yon konstitiyan aktif nan Herba Cistanche, siprime aktivite epileptiform nan ipokanp CA3 newòn piramidal," Kore di Journal of Physiology & Pharmacology, vol. 22, non. 3, pp 249–255, 2018.

[12] X. Xu, Z. Zhang, W. Wang, H. Yao, ak X. Ma, "Efè terapetik nan cistanoside A sou metabolis zo nan sourit ovariectomized," Molecules, vol. 22, non. 2, p. 197, 2017.

[13] K. Alipieva, L. Korkina, IE Orhan, ak MI Georgiev, "Verbascoside–a review of its occurrence, (bio)senthesis and pharmacological signification," Biotechnology Advances, vol. 32, non. 6, pp 1065–1076, 2014.

[14] Komite Editorial Chinwa Pharmacopeia, Pharmacopeia Repiblik Pèp la Lachin, Lachin Medikal Syans ak Teknoloji Press, Beijing, Lachin, 10yèm ed edisyon, 2015.

[15] H. Zhang, WW Xing, YS Li et al., "Efè yon preparasyon tradisyonèl Chinwa èrbal sou osteoblasts ak osteoclasts," Maturitas, vol. 61, non. 4, pp 334–339, 2008.

[16] X. Ma, J. Liu, L. Yang, B. Zhang, Y. Dong, ak Q. Zhao, "Cynomorium songaricum anpeche resorption zo nan rat ovariectomized atravè RANKL/RANK/TRAF6 medyatè repwesyon nan PI3K/AKT ak NF-κB chemen," Life Sciences, vol. 209, pp 140–148, 2018.

[17] XQ Ma, T. Han, X. Zhang, et al., "Kaempferitrin anpeche pèt zo nan rat ovariectomized," Phytomedicine, vol. 22, non. 13, pp 1159–1162, 2015.

[18] PL Liao, CH Li, LS Tse, JJ Kang, ak YW Cheng, "Evalyasyon sekirite nan pwodwi manje sante Cistanche tubulosa Memoregain®: genotoksisite ak 28-jou repete tès toksisite dòz," Manje ak Toksikoloji Chimik. , vol. 118, pp 581– 588, 2018.

[19] CC Wong, HB Li, KW Cheng, ak F. Chen, "Yon sondaj sistematik sou aktivite antioksidan nan 30 plant medsin Chinwa lè l sèvi avèk tès pouvwa antioksidan rediksyon ferrik la," Food Chemistry, vol. 97, non. 4, pp 705–711, 2006.

[20] D. Song, Z. Cao, Z. Liu, et al., "Cistanche deserticola polysaccharide attenuates osteoclastogenesis and zo resorption via inhibiting RANKL signaling and reactive oksijèn espès pwodiksyon," Journal of Cellular Physiology, vol. 233, non. 12, pp 9674–9684, 2018.

[21] HD Liang, F. Yu, ZH Tong, HQ Zhang, ak W. Liang, "Cistanches Herba ekstrè akeuz ki afekte serom BGP ak TRAP ak mwèl zo Smad1 mRNA, Smad5 mRNA, TGF- 1 mRNA, ak TIEG1. Nivo ekspresyon mRNA nan maladi osteyopowoz la," Molecular Biology Reports, vol. 40, non. 2, pp 757–763, 2013.

[22] TM Li, HC Huang, CM Su et al., "Cistanche deserticola ekstrè ogmante fòmasyon zo nan osteoblasts," Journal of Pharmacy and Pharmacology, vol. 64, non. 6, pp 897–907, 2012.

[23] H. Liang, F. Yu, Z. Tong, ak Z. Huang, "Efè Cistanches Herba ekstrè akeuz sou pèt zo nan rat ovariectomized," Creole Journal of Molekilè Syans, vol. 12, non. 8, pp 5060–5069, 2011.

[24] F. Li, X. Yang, Y. Yang, et al., "Aksyon antiosteyopowotik nan echinakozid nan rat ovariectomized," Phytomedicine, vol. 20, non. 6, pp 549–557, 2013.

[25] H. Nian, MH Ma, SS Nian, ak LL Xu, "Antiosteyopowotik aktivite icariin nan rat ovariectomized," Phytomedicine, vol. 16, non. 4, pp 320–326, 2009.

[26] SR Fahmy, AM Soliman, AA Sayed, ak M. Marzouk, "Mekanis antiosteyopowotik posib nan ekstrè Cicer arietinum nan rat ovariectomized," Creole Journal of klinik ak eksperimantal Patoloji, vol. 8, non. 4, pp 3477–3490, 2015.

[27] R. Swaminathan, "Makè byochimik nan woulman zo," Clinica Chimica Acta, vol. 313, non. 1-2, paj 95–105, 2001.

[28] S. Muthusamy, I. Ramachandran, B. Muthusamy, et al., "Ovariectomy pwovoke estrès oksidatif ak afekte sistèm antioksidan zo nan rat granmoun," Clinica Chimica Acta, vol. 360, non. 1-2, paj 81–86, 2005.

[29] WJ Boyle, WS Simonet, ak DL Lacey, "Osteoclast diferansyasyon ak aktivasyon," Nature, vol. 423, non. 6937, pp 337– 342, 2003.