Beta Vulgaris Rubra L. (Beetroot) Peel Methanol Extrait Diminye Estrès Oksidatif ak Stimule Pwoliferasyon Selil Via Ogmante Ekspresyon VEGF nan H2O2 Enduit Oksidatif Estrès Imèn Venn Lonbrit Selil Endothelial

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou konnen plis

Laila Naif Al-Harbi 1,*, Subash-Babu Pandurangan 1, Alhanouf Mohammed Al-Dossari 1, Ghalia Shamlan 1, Ahmad Mohammad Salamatullah 1, Ali A Alshatwi 1 ak Amna Abdullah Alotiby 2

Résumé:Kapasite nan antioksidan nan polifenol akflavonoidprezan nan ajan dyetetik ede nan arete devlopman nan espès oksijèn reyaktif (ROS) ak pwoteje endothelial selil misk lis soti nan estrès oksidatif / necrosis pwovoke. Bètrav (Beta vulgaris var. Rubra L.; BVr) se yon legim souvan konsome ki reprezante yon sous rich nanantioksidan. Konpoze byoaktif po bètrav ak wòl yo nan selil andotelyal venn lonbrit imen (HUVECs) yo toujou anba rechèch. Nan etid la prezan, yo te prepare ekstrè methanol kale bètrav (BPME), ak efè li sou efikasite biyo, entegrite nikleyè, potansyèl manbràn mitokondriyo, kwasans selil vaskilè, ak nivo ekspresyon jèn ki gen rapò ak imunoregulasyon nan HUVEC ak pwovoke.oksidatifestrès te analize. Rezilta chromatografi gaz-spèktroskopi mas (GC-MS) konfime ke BPME gen 5-hydroxymethylfurfural (32.6 pousan), methyl pyruvate (15.13 pousan), furfural (9.98 pousan), ak 2,3-dihydro{{11} },5-dihydroxy-6-metil-4H-Pyran-4-yon sèl (12.4 pousan). Ekstrè BPM efektivman amelyore pwopagasyon selil e li te konfime pa tès MTT; te konfime entegrite nikleyè a pa tès tach yodidyòm (PI); potansyèl manbràn mitokondriyo a (∆ψm) te konfime pa JC -1saking tach. Esè Annexin V konfime ke HUVECs BPME-trete te montre 99 pousan selil solid, men sèlman 39.8 pousan viabilite te montre nan HUVECs trete ak H2O2 pou kont li. Anplis de sa, tretman BPME nan HUVECs pou 48 h redwi ekspresyon mRNA nan oksijene lipid (LPO) ak ogmante NOS-3, Nrf-2, GSK-3 , GPX, endothelial nitrique sintaz oksid (eNOS). ), ak faktè kwasans selil vaskilè (VEGF) nivo ekspresyon mRNA. Nou te jwenn ke tretman BPME diminye pro-enflamatwa (faktè nikleyè-κ (F-κ), faktè necrosis tisi- (TNF-), reseptè toll-like -4 (TLR{-4), interleukin{{37} } (IL-1 ))ak vaskilèenflamasyon(Molekil Adhesion Entraselilè (ICAM), Molekil Adhesion selil vaskilè (VCAM), EDN1, IL-1) ki gen rapò ak ekspresyon mRNA. An konklizyon, tretman kale bètrav efektivman ogmante faktè kwasans selil vaskilè lis ak devlopman mikrotubule, tandiske li diminye regilatè vaskilè enflamatwa. BPM ka benefisye pou rejenerasyon selil vaskilè lis, reparasyon tisi, ak potansyèl anti-aje.

Mo kle:bètrav; estrès oksidatif; mitokondri; anjojenèz; enflamasyon

Tanpri klike isit la pou aprann plis

1. Entwodiksyon

Angiogenesis se pwosesis fizyolojik vaskulogenèz ki soti nan vaskilè ki egziste deja kò a [1]. Li esansyèl non sèlman pou devlopman anbriyon ak repwodiksyon, men tou pou sik selilè ak reparasyon tisi [2,3]. Sepandan, li asosye ak patojèn divès maladi, tankou kwasans timè, atrit rimatoyid, ak divès maladi ischemik ak enflamatwa [3-5]. Endothelium vaskilè a jwe yon wòl enpòtan nan kenbe emostaz vaskilè pa reglemante ton veso sangen ak reyaksyon iminitè ak enflamatwa [6,7]. Selil endothelial (EC) yo se kouch mens monoselilè ki kouvri tout sifas enteryè veso sangen yo epi ki pwodui yon varyete molekil ki aji lokalman oswa nan sit byen lwen [7]. Endothelium a se fondamantal pou omeyostazi kò, ak nenpòt chanjman nan repons selil andothelium mennen nan evènman prensipal yo nan pwosesis maladi enflamatwa ak vaskilè, tankou ateroskleroz ak tansyon wo [6,8,9]. Maladi sa yo lakòz estrès oksidatif, ki chanje estrikti EC a ak entegrite fonksyon ak mennen nan malfonksyònman andotelyal [9]. EC venn lonbrit imen (HUVECs) yo te lajman itilize kòm yon modèl pou etid ki gen rapò ak andotelyòm vaskilè imen. Anplis, yo reprezante yon modèl itil pou etidye prensipal wout byolojik ki enplike nan fonksyon andotelyo [10]. Konpoze byoaktif ak fitochimik yo jwenn anpil nan fwi, legim, remèd fèy vèt, ak anpil plant, ki montre anpil benefis sante, tankou anti-enflamatwa, antioksidan, antikanserojèn, ak pwopriyete anjyojenik [11-13]. Nan sans sa a, bètrav wouj (Beta vulgaris var. Rubra L.; BVr) fè pati fanmi Amaranthaceae ak klase kòm youn nan pi bon sous nivo segondè nan antioksidan [14,15]. Espesyalman, li gen plizyè phytochemicals ki byolojik aktif, ki gen ladanbetalains, flavonoid,polifenol, anzim terapetik, asid ascorbic, asid dehydroascorbic (DHAA), ak nitrat inòganik (NO3) [16-18]. Anplis, li bay eleman nitritif esansyèl ki gen anpil valè, tankou potasyòm, kalsyòm, mayezyòm, sodyòm, fè, zenk, fosfò, kwiv, ak Manganèz [19]. Plizyè etid yo rapòte ke ekstrè bètrav wouj (rasin) gen anpil efè benefik akòz ipoglisemi li yo, bese lipid, anti-enflamatwa, antiipèrtansif, ak pwopriyete antiproliferatif [20-22]. Pwopriyete benefik sa yo tout ka lye ak kapasite yo gratis radikal-scavenging nan konpoze yo byoaktif. Se konsa, konsomasyon nan bètrav wouj te lye ak anpil benefis nitrisyonèl ak sante. Akòz valè nitrisyonèl li yo, li ka itilize kòm yon sous manje fonksyonèl kont estrès oksidatif ki pwovoke maladi metabolik kwonik, tankou dyabèt tip 2 ak maladi kadyovaskilè [23]. Dapre revizyon literati a, Beta vulgaris posede pwopriyete antioksidan ki pisan, imunoregulatwa ak anjyojenik. Apigenin yo te jwenn nan fèy bètrav; li gen efè antiproliferatif nan fwa ak selil entesten, epi li ka amelyore komorbidite obezite ki gen anpil grès nan rejim alimantè a atravè aktivasyon AMPK [24,25]. De Silva et al., (2020) [26] idantifye ke Beta vulgaris pwoteje ECs vaskilè soti nan estrès oksidatif ekstèn pwovoke, ki ka akòz efè a konbine nan plizyè konpoze bioaktif ki prezan nan plant sa a. Jiska kounye a, aksyon mekanistik pou pwopagasyon EC ak efè anjyogenesis kale rasin Beta vulgaris te anba rechèch. Pakonsekan, nou vize fè etid prezan an egzaminen pwopagasyon selil vaskilè, devlopman mikrotubule, estrès oksidatif, ak kapasite anjojenèz ki gen rapò ak kale rasin Beta vulgaris lè l sèvi avèk mòfoloji selilè ak analiz ekspresyon jèn nan HUVECs. Yo eksplore efè anjyojenik ekstrè methanol wouj kale bètrav ki asosye ak entegrite nikleyè, devlopman mikrotubul, efikasite mitokondriyo, ak eksitasyon sik selilè nan EC vaskilè imen.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Preparasyon nan bètrav(Beta vulgaris rubra L.) Methanol ExtractSamples nan bètrav fre (Beta vulgaris var. Rubra L.; BVr.) Yo te okòmansman jwenn nan magazen legim, Riyad, Peyi Wa ki nan Arabi Saoudit (KSA). Bètrav fre yo te lave ak dlo distile pou elimine tij yo ak kontaminan yo. Po a deyò te kale yo dwe retire epi koupe an ti moso. Echantiyon yo te seche nan yon fou lè cho nan 4 0 ◦ Epi yo ka an poud lè l sèvi avèk yon blenndè elektwonik. Lè sa a, yo te retire 5{{10}}{0 g poud lan nan yon boutèy esteril ki gen 1 L metanol (Sigma, St. Louis, MO, USA) pou 24 èdtan nan tanperati chanm nan. yon shaker epi repete twa fwa. Apre sa, yo te itilize yon Whatmanfifilter (Whatman, Clifton, NJ, USA) pou filtre ekstrè a. Finalman, lè w diminye presyon an, sòlvan an te separe de ekstrè a, epi ekstrè a te kolekte kòm yon sibstans solid sèk apre evaporasyon metanol. Yo te estoke echantiyon an ekstrè nan yon frijidè nan 4 ◦C jiskaske plis itilize. 2.2. Gaz Chromatography & Mass Spectroscopy Analysis Yo te enjekte ekstrè methanol kale bètrav (BPME) nan yon kolòn kapilè silica (30 m × {{60}}.25 mm ID × 0 .25 µm epesè fim) nan enstriman GC-MS (Agilent 6890N/5973I, California, CA, USA) ak yon detektè mas selektif pou detekte konpozisyon chimik yo. Tanperati enstriman an te fikse kòm premye 7{{90}} ◦C, kenbe 2 min, a 305 ◦C nan 20 ◦C/min, ki te swiv pa kenbe pou 1 min. Tan total GC kouri te fikse a 45 min ak gaz elyòm (99.999 pousan) kòm yon gaz transpòtè (yon pousantaj konstan parèy 1.2 mL/min), 250 ◦C kòm tanperati injektè a, ak 230 ◦C kòm yon sous ion. tanperati. Dapre spectre GC-MS la, yo te kalkile pousantaj relatif eleman ki koresponn lan, epi yo te idantifye spectre mas nan eleman enkoni an konparezon ak 62,000 modèl yo konnen ki disponib nan Enstiti Nasyonal estanda ak teknoloji. bibliyotèk òdinatè (NIST08). 2.3. Materyèl kilti selil ak pwodui chimik HUVEC yo te achte nan Koleksyon Kilti Kalite Ameriken (ATCC, Manassas, VA, USA). Materyèl kilti selilè tankou Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), EDTA, trypsin, ak lòt yo te jwenn nan Gibco (Paisley, UK). Penicilin-streptomycin (PS) ak serom fetal bovine (FBS) te achte nan Hyclone Laboratories, USA. Pwodwi chimik yo itilize nan eksperyans byoloji molekilè a te jwenn nan Sigma-Aldrich, espesyalman, MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromur], PI, ak JC-1 tach. SYBR Green PCR Master Mix la ak twous sentèz cDNA yo te jwenn nan Qiagen (Hilden, Almay). 2.4. HUVECs HUVEC yo te kiltive nan DMEM epi yo te konplete ak 1 pousan PS ak 10 pousan konplèks FBS. Selil yo te enkubate nan yon atmosfè imidite a 37 ◦C, 5 pousan CO2, epi yo te kiltive yo apeprè chak 3 jou. 2.5. Vitabilite selil ak pwoliferasyon selil pa MTT Assay HUVECs (1 × 104 selil/pi) yo te kiltive ak yon mwayen antretyen epi yo te pèmèt yo respekte lannwit lan nan yon plak kilti 96-byen. Lè sa a, yo te ranplase mwayen an ak yon nouvo mwayen kilti ki gen konsantrasyon ogmante nan BPME (0, 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.6, ak 3.2 µg/mL) dapre kat jeyografik plak tès MTT la ak enkubasyon pou 24 ak 48. h; selil ki pa trete yo te itilize kòm kontwòl. Apre peryòd enkubasyon an, selil eksperimantal yo te trete ak 20 µL/puit 5 mg/mL MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2, 5-diphenyltetrazolium bromur ki te fonn nan dimethyl sulfoxide (DMSO)) epi anplis enkubasyon pou 4 èdtan nan 37 ◦C. Lè sa a, yo te jete mwayen an, epi yo te pwodui formazan koulè wouj violèt la fonn nan 100 µL 100 pousan DMSO. Yo te mezire absorbans solisyon an lè l sèvi avèk yon lektè microplate (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) nan 570 nm longèdonn. Pousantaj (pousan) nan pwopagasyon selil yo te kalkile pa ekwasyon sa a: (absorbans echantiyon an / absorpsyon mwayen kontwòl la) × 100. 2.6. Konsepsyon eksperimantal Dapre tès pwopagasyon selil aktyèl la, tès pi ba konsantrasyon BPME (0.1 ak 0.2 µg/mL) te montre pwopagasyon HUVEC ak mòfoloji mikrotubule san toksisite. Komèsan 0.1 ak 0.2 µg/mL dòz BPME yo te chwazi epi trete ak HUVEC nòmal ak 10 mM H2O2-pwovoke HUVEC oksidatif-estrès pou 48 èdtan pou detèmine pwopagasyon selil, anti-enflamatwa, anjyojenik ak potansyèl apoptotik. (Figi 1). Kontwòl machin yo te kenbe tou pou 48 èdtan nan tou de gwoup yo. Quercetin (10 µM) te itilize kòm yon kontwòl referans nan tou de gwoup eksperimantal. Apre enkubasyon, yo te analize selil ki pa trete ak eksperimantal yo pou mòfoloji selilè ak nikleyè ak potansyèl manbràn mitokondriyo lè l sèvi avèk yon Twous BDTM MitoScreen (JC-1); apoptoz te detèmine pa metòd klasman selil ki baze sou Annexin V / apoptoz nan sitometri parèy yo. Yo te envestige estrès oksidatif, proinflammatory, ak nivo ekspresyon jèn ki gen rapò ak anjojenèz.

2.7. Essay tach iòd Propidium pou domaj nikleyè Mòfoloji selilè pou domaj nikleyè karakteristik, piknosis oswa chanjman mòfolojik apoptotik apre tretman ak 0.1 ak 0.2 µg/mL BPME (avèk oswa san H2O2) nan HUVECs. te detèmine lè l sèvi avèk analiz tach PI anba mikwoskospi fliyoresan Envèse, jan sa dekri pa Leite et al. [27].

2.8. Egzamen potansyèl manbràn mitokondriyo (∆ψm) pa JC-1 Dye Staining Potansyèl manbràn mitokondriyo a (∆ψm) te detèmine pa tès JC-1 pou evalye efikasite mitokondriyo nan kontwòl machin ak {{4} }.1 ak 0.2 µg/mL HUVEC trete BPME (avèk ak san H2O2). Yon ti tan, yo te melanje solisyon tach JC-1 ak yon volim menm jan an nan mwayen kilti epi answit ajoute nan HUVEC eksperimantal yo epi enkube nan fè nwa a pou 20 minit nan 37 ◦C. Apre sa, yo te lave koloran JC-1 ki pa lie a dousman de fwa lè l sèvi avèk 200 µL tanpon lave tach JC-1 a 4 ◦C. Apre sa, yo te obsève akimilasyon j-agrégasyon kont tach JC-1 anba mikwoskòp fluoresans lè l sèvi avèk yon mikwoskòp fliyoresan, epi yo te kaptire imaj. Anplis de sa, yo te mezire potansyèl manbràn mitokondriyo a nan sitometri koule lè l sèvi avèk Twous BDTM MitoScreen (JC-1).

2.9. Analiz Annexin V/apoptoz lè l sèvi avèk Flow Cytometry Metòd deteksyon Annexin V/PI (Sigma Chemicals, USA) ki baze sou sitometri parèy yo te itilize pou quantifier selil solid, proapoptotik, apoptotik bonè ak nekrotik. HUVECs estrès oksidatif pwovoke (1 × 105/pi) yo te plake nan plak 24-byen epi yo te enkube ak BPME (0.1 ak 0.2 µg/mL) oswa kontwòl machin pou 48h. Apre enkubasyon, selil yo te enkube nan 400 µL 5 µL Annexin V-fluorescein isothiocyanate (FITC) ak 5 µL PI ki gen tanpon obligatwa; apre sa, selil yo te kenbe pou 15 min nan tanperati chanm (RT) nan fè nwa a. Selil yo te analize pa cytometry parèy (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) pou idantifye selil apoptotik (PI negatif ak Annexin V pozitif) ak apoptotik an reta (PI-pozitif ak Annexin V pozitif) [28].

2.10. Kantite analiz PCR an tan reyèl Fastlane® selil nan twous cDNA (Qiagen, Hilden, Almay) te itilize pou ekstrè total RNA ak sentèz cDNA nan kontwòl machin, HUVECs trete BPME (avèk ak san H2O2) lè l sèvi avèk yon PCR quantitative (qPCR) semi-otomatize. enstriman (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Ekspresyon nivo estrès oksidatif ki gen ladan (oksijene lipid, NOS-3), antioksidan (Nrf-2, GSK{-3, ak GPx), pro-enflamatwa (faktè nikleyè-κ (NF-κ), Faktè necrosis timè- (TNF-), interleukin-1 (IL{-1 ), faktè kwasans selil vaskilè (VEGF), reseptè toll-like -4 (TLR{-4)) , ak enflamasyon vaskilè (molekil adezyon intraselilè (ICAM), molekil adezyon selil vaskilè (VCAM), EDN1 ak endothelial nitrik oksid synthase (eNOS)) ki gen rapò ak jèn ki gen rapò ak jèn referans la, -aktin, yo te analize nan HUVECs ak quantifier pa metòd la. nan Yuan et al. [29]. Valè anplifikasyon (∆Ct) yo te kalkile pa diferans ki genyen ant Ct (trete) ak Ct (kontwòl). Ekspresyon jèn yo te trase lè l sèvi avèk ekspresyon valè 2−∆∆Ct.

2.11. Analiz estatistik Tout eksperyans yo te triplike, ak done ki kapab lakòz yo te eksprime kòm valè vle di ± devyasyon estanda (SD). Analiz estatistik diferans nan mitan gwoup yo te fèt pa yon sèl-fason analiz de divèjans (ANOVA) lè l sèvi avèk lojisyèl SPSS (Vèsyon 28.5, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Lè sa a, tès konparezon miltip Tukey a te fèt si diferans enpòtan yo te jwenn. Tout rezilta yo te prezante kòm mwayen ± SD pou sis replikasyon nan chak gwoup. Yon p-valè < 0.05="" te="" konsidere="" kòm="" siyifikatif="">

Cistanche pou amelyore iminite

3. Rezilta yo

3.1. Molekil byoaktif nan BPME Konstitiyan chimik BPME yo te konfime lè l sèvi avèk GC-MS (Turbomass, PerkinElmer). Konpozisyon chimik ekstrè kale bètrav te detèmine lè w konpare spectre mas ki disponib ak baz done espektak Enstiti Nasyonal estanda ak Teknoloji (NIST). Rezilta GC-MS yo te konfime ke BPME a te genyen hydroxyacetone (8.18 pousan), 5-hydroxymethylfurfural (32.6 pousan), methyl pyruvate (15.13 pousan), beta-d-allopyranose (1.48 pousan), furfural (9.98 pousan), 2-hydroxy-gamma-butyrolactone (1.32 pousan), ak 2,3-dihydro-3,{5-dihydroxy- 6-methyl-4H-Pyran -4-yon sèl (12.4 pousan ; Figi 2a, Tablo 1). 3.2. Pwoliferasyon selilè Potansyèl pwopagasyon selil in vitro BPME kont HUVEC yo prezante nan Figi 2b. Pa gen okenn anpèchman kwasans selil enpòtan yo te obsève nan gwoup eksperimantal yo konpare ak kontwòl machin nan. Etid la te konfime ke ogmante konsantrasyon BPME trete ak HUVEC te lakòz ogmante pwopagasyon selilè ak rantabilite apre 48 èdtan (112 pousan) lè yo konpare ak 24 èdtan (103 pousan) nan tretman an. Anplis de sa, imaj limyè mikwoskopik nan HUVECs trete BPME apre 48 èdtan konfime selil nòmal yo ak fòm inifòm nan mòfoloji selil aderan, ogmante kantite selil proliferasyon (replikasyon) san okenn domaj te aparan (Figi 2c). 3.3. Analiz de mòfoloji selilè ak nikleyè, fòmasyon mikrotubul ak JC-1 tach nan HUVECs Figi 3 montre mòfoloji devlopman mikrotubul nan imaj mikwoskopik FL fluoresans. H2O2-pwovoke HUVECs oksidatif-estrès te montre pòv pwopagasyon ak mòfoloji iregilye nan selil aderan yo konpare ak HUVECs kontwòl. HUVEC nòmal yo te trete ak 0.2 µg/mL BPME te montre selil pwopagasyon atravè replikasyon oswa neojenèz ak mòfoloji mikrotubule. Pandan se tan, 0.1 µg/mL dòz selil trete BPME te montre 100 pousan selil aderan ak premye etap mikrotubul yo. HUVEC ki gen estrès oksidatif ki te trete ak 0.2 µg/mL BPME te idantifye nouvo selil k ap grandi ak mòfoloji mikrotubule ak diminye domaj oksidatif selilè. Anplis de sa, 0.1 µg/mL nan BPME tou ogmante mòfoloji nòmal selil vaskilè ak selil proliferasyon.

Figi 4a montre mòfoloji nòmal estrikti nikleyè a, ak yon fòm esferik, nan HUVEC yo trete ak BPME (0.1 oswa 0.2 µg/mL). Figi 4b montre imaj yo pou tach PI nan nòmal ak HUVECs ak estrès oksidatif pwovoke pa H2O2. H2O{{10}}HUVEC trete yo montre nwayo ki gen fòm iregilye, ki montre kondansasyon ak piknosis apre 30 min. Sepandan, 0.2 µg/mL tretman BPME pou HUVEC anba estrès oksidatif te montre nwayo sikilè ak mòfoloji nòmal. Konpare ak 0.2 µg/mL ekstrè BPME, 0.1 µg/mL BPME te gen yon efè pwoteksyon mwens kont H2O2- estrès oksidatif pwovoke nan HUVEC yo.

Figi 2. Rezilta pou GC-MS chromatogram nan ekstrè methanol kale bètrav (a), pwopagasyon selil in vitro (b), ak imaj mikwoskospi limyè pou mòfoloji selil (c) nan HUVECs, trete ak ogmante konsantrasyon ekstrè methanol kale bètrav (BPME). ) (fòm inifòm nan selil aderan ak proliferasyon mansyone pa flèch wouj). Tout valè yo vle di ± SD (n=6). * p Mwens pase oswa egal a 0.05 an konparezon ak kontwòl machin.

Figi 3. Analiz fòmasyon mikwotib ki baze sou mikwoskopi fliyoresan nan kontwòl machin, 0.1 ak 0.2 µg/mL dòz bètrav kale methanol ekstrè (BPME) trete nòmal ak H2O{{6} }pwovoke HUVEC ki gen estrès oksidatif apre 48 èdtan. Apre 48 èdtan, H2O2-pwovoke HUVEC ki gen estrès oksidatif te montre yon mòfoloji chanje lè yo konpare ak kontwòl machin yo. Komèsan 0.1 ak 0.2 µg/mL Bètrav kale methanol ekstrè (BPME)-trete HUVECs te montre mòfoloji nòmal ak mikrotubul vaskilè ak selil proliferasyon ki sanble ak mòfoloji komen nan konpòtman selil misk lis.

Figi 4. Yodid Propidium (PI) analiz tach pou mòfoloji nikleyè nan kontwòl machin, 0.1 ak 0.2 µg/mL nan ekstrè methanol kale bètrav (BPME)-trete nòmal (3a) ak H2O2-pwovoke HUVECs oksidatif-estrès (3b) apre 48 èdtan. Nan PIstaining, kontwòl veyikil la te montre nwayo a te parèt nòmal san okenn siy nwayo ratresi, pyknosis oswa apoptotik. Nan H2O2 sèlman, selil trete yo te montre yon manbràn nikleyè polarize apre 48 èdtan. Tretman ak 0.2 µg/mL BPME nòmalize H2O2-polarizasyon manbràn nikleyè pwovoke lè yo konpare ak 0.1 µg/mL BPME oswa Quercetin 10 µM.

Figi 5a montre rezilta tach JC-1 pou HUVEC yo, ki gen ladan selil kontwòl ak BPME trete; figi a montre selil ki an sante ak mitokondri aktif, jan sa konfime pa absòpsyon mitokondriyo ki chaje negatif nan ekstramitokondriyo lipofil cationik JC-1 (koulè vèt) ak J-agregate konvèti ak koulè wouj intramitochon-drially. Figi 5b montre rezilta tach JC-1 pou 0.2 µg/mL BPME yo administre HUVEC ak estrès oksidatif H2O2 pwovoke; rezilta yo konfime prèske 94 pousan nan mitokondri chaje negatif konvèti lipofil cationic JC-1 (koulè vèt) nan koulè wouj J-agregate lè yo konpare ak 0.1 µg/mL nan tretman BPME (61.4 pousan ) oswa H2O{{20}}pwovoke estrès oksidatif nan HUVECs (2 pousan). Yo te obsève potansyèl manbràn mitokondriyo (MMP) yo pi wo nan selil trete BPME konpare ak quercetin dwòg referans. 3.4. FACS-Assisted Mitokondrial Manbràn Potansyèl (∆ψm; BD MitoScan) ak Annexin V/apoptoz analiz nan HUVECs Figi 6 montre kapasite nan manbràn mitokondriyo potansyèl nan analiz BD MitoScan apre 0.2 µg/mL nan tretman BPME nan HUVECs nòmal. ak HUVECs ak estrès oksidatif pwovoke pa H2O2. Nou te jwenn ke 0.2 µg/mL nan tretman BPME ogmante MMP a (∆ψm) a 92.7 pousan ± 3.7 pousan lè yo konpare ak HUVECs trete ak H2O2 pou kont li (27.9 pousan ± 7.2 pousan). Kontrèman, selil quercetin-trete yo te montre yon pousantaj 41.4 ± 1.6 pousan nan ogmante MMP (∆ψm) lè yo konpare ak HUVECs trete ak BPME ak H2O2 oswa H2O2 pou kont li.

Figi 5. Analiz potansyèl manbràn mitokondriyo lè l sèvi avèk tach JC-1 pou kontwòl machin, 0.1 ak 0.2 µg/mL ekstrè methanol kale bètrav (BPME) trete nòmal (yon ) ak H2O2-pwovoke oksidatif-estrès (b) HUVECs apre 48 èdtan. JC{{10}}imaj fliyoresans ki montre imaj fizyone siyal wouj ak vèt lank la, ki koresponn ak JC-1 nan J-agregate kont fòm monomerik. Nou te jwenn mwens J-agregate H2O2 pou kont li trete HUVECs. Nan 0.2 µg/mL BPME-trete HUVECsshowing segondè j-agregate dirèkteman reprezante (segondè MMP, ∆ψm) segondè potansyèl manbràn mitokondriyo konpare ak 0.1 µg/mL nan BPME oswa 10 µM nan Quercetin.

4. Diskisyon

Sou estrès ekstraselilè oswa entraselilè, byodisponibilite espès oksijèn reyaktif (ROS) depase defans antioksidan, ak estrès oksidatif deranje siyal redox ak kontwòl [31]. Se devlopman nan estrès oksidatif ki asosye ak patojèn yo nan maladi kwonik, tankou maladi neurodegenerative, dyabèt, ak ateroskleroz. Tankou, estrès oksidatif inisye malfonksyònman andotelyal ak ankouraje enflamasyon sistemik ak rekritman nan macrophages [32]. Selil iminitè aktive yo imigre nan vaskilè a epi yo lage sitokin ak chemokin ki asosye ak vazokonstriksyon ak renovasyon veso sangen selil misk lis ak enflamasyon ki afekte selil misk vaskilè lis ak miray vaskilè a [33]. Ogmantasyon estrès oksidatif vaskilè fini ak domaj vaskilè, rèd selil nan misk lis, ak anomali elastin estriktirèl. Anplis de sa, estrès oksidatif vaskilè yo te ankouraje nan lòt kondisyon patolojik, tankou obezite visceral oswa ateroskleroz, akòz ogmante aktivite NADPH oksidaz (NOX-2) nan tisi adipoz perivaskilè [34]. Estrès oksidatif vaskilè lakòz chanjman epijenetik prensipal ki fèt pandan aje, epi li fini ak yon pwosesis aje bonè [35]. Devlopman pwodiksyon ROS ak estrès oksidatif nan sistèm byolojik la depann lajman de malfonksyònman mitokondriyo, anplis NOX -2, endothelial xanthine oxidase, eNOS dekonekte, ak lipoxygenase [36]. Pwopriyete antioksidan ajan dyetetik yo ka netralize jenerasyon ROS atravè kapasite antioksidan ogmante [26]. Ekstrè Ginkgo Biloba pwoteje kont devlopman ateroskleroz pa diminye jenerasyon ROS ak aktivite lipoxygenase nan malfonksyònman andotelyal OxiLDL-induit [37]. Anplis de sa, divès kalite konpoze fenolik akflavonoid soti nanplant ak grenn manjab yo gen pwopriyete pou elimine ROS ak peroksidasyon lipid [38]. Ekstrè metanolik kale bètrav (Beta vulgaris) gen potansyèl antioksidan akòz disponiblite a nan fib segondè, anthocyanins, ak flavonoid tankou vitexin ak betanin [39]. Nan etid la prezan, BPME te chwazi pou idantifye apwòch mekanik depandan mitokondriyo a pou dekouvri efè li sou potansyèl manbràn mitokondriyo, trempe LPO, ak anpèchman nivo ekspresyon mRNA ki gen rapò ak enflamasyon vaskilè yo. Esè MTT te konfime ke BPME ogmante siyifikativman pwopagasyon selil la, jan sa konfime pa ogmante entegrite nikleyè a nan tach PI ak dòz efikas nan 0.2 µg/mL BPME kont teste 0.1 µg/mL. nan BPME. Idantifikasyon dòz efikas ak konsantrasyon ki ba ak aktivite ki pi wo yo ka konsidere fizyolojik san danje. Nou jwenn FL fluoresans mikwoskopik tach JC -1, epi yo te retabli potansyèl manbràn mitokondriyo a tou de nan nòmal ak H2O{{10}} pwovoke ekstèn HUVECs oksidatif-estrès apre 0.2 µg/mL nan BPME. tretman. Malfonksyònman mitokondriyo chanje fosforilasyon oksidatif, ki pa transfòme radikal oksijèn (O2·-) nan H2O2 ak H2O pa glutatyon peroksidaz. Akòz dezentoksikasyon ROS ensifizan oswa pwodiksyon ROS san kontwòl, ogmante estrès oksidatif mitokondriyo lye ak ateroskleroz [40]. Ekstrè kale bètrav efektivman retabli potansyèl manbràn mitokondriyo a, ki te ogmante siksè dezentoksikasyon ROS ak jenerasyon H2O2. Annexin V/PI analiz tach konfime ke tretman BPME kenbe pousantaj selil solid la ak amelyore etap nan pwopagasyon selil tou de nan HUVECs nòmal ak HUVECs ak estrès oksidatif pwovoke pa H2O2. Nan kontèks sa a, Choo et al. [41] konfime ke apre jenerasyon twòp ROS oswa H2O2 ekzojèn nan sit iskemik la, transplantasyon selil tij mesenchymal (MSCs) ka afekte pwoliferasyon pwòp tèt ou ak kapasite milti-liyay. Nan medikaman rejeneratif, selil misk lis vaskilè yo se pi gwo regilatè nan atè ton kontraktil yo atravè kenbe rezistans atè periferik, regilatè san presyon, san parèy, ak reparasyon nan atè [42]. Anplis de sa, modulation fenotip laj-induit nan ECs ki asosye ak diminye kontraktilite selilè ak ogmante senesans selil. Sou estrès kontinyèl oswa akòz mekanosansibilite redwi, diminye adaptasyon siyal mikwo-anviwònman yo idantifye nan selil misk ki gen laj lis [43]. Rezilta prezan yo konfime ke tretman an BPME kenbe popilasyon selil solid la, jan sa evidan pa kapasite anjyogenesis la. Kapasite pwopagasyon idantifye nan BPME sou HUVEC yo te sipòte pa rediksyon nan ekspresyon LPO ak ogmante ekspresyon jèn antioksidan. ROS ak LPO yo okòmansman pwodui nan konplèks mitokondriyo (I ak III) ak NOX-4 pandan pwopagasyon selil oswa diferansyasyon [44]. Twòp ROS reyaji ak domaje biomolekil yo, espesyalman chanje entegrite ADN jenomik, ki se kritik pou pwopagasyon selilè ak fonksyon [45]. Sepandan, li te konfime ke konsomasyon dyetetik nan polifenol antioksidan, tankou epigallocatechin ak tokoferol, pwoteje selil yo kont estrès oksidatif ak ogmante kapasite pwopagasyon [46]. Nan etid nou an, nivo ekspresyon mRNA LPO yo te diminye, epi yo te jwenn NOS-3, Nrf-2, ak eNOS yo ogmante de fwa nan HUVECs ak estrès oksidatif pwovoke pa H2O2. eNOS se izofòm dominant nan NOS, ki responsab pi fò nan NO·pwodwi yo nan selil misk lis ak tisi vaskilè yo. NO· dilate tout kalite veso vaskilè ak pwoteje agregasyon plakèt ak adezyon leukocyte nan ECs [47]. Jiskaprezan, te gen anpil rapò konfli sou faktè risk kadyovaskilè, ak malfonksyònman endothelial te asosye ak diminye oswa ogmante ekspresyon eNOS [48]. Ekspresyon ki wo nan eNOS obsève sou maladi vaskilè, ki gen anpil chans yo dwe yon konsekans pwodiksyon an depase H2O2. O2·−, yon pwodwi dismutasyon, ka ogmante ekspresyon eNOS atravè mekanis transcriptional ak post-transcriptional [49]. Patojèn nan maladi vaskilè a akonpaye pa yon degradasyon akselere nan NO· apre reyaksyon ak O2·−, epi finalman, fòm ONOO−, ki mennen nan dekouplage eNOS ak malfonksyònman anzim NOX [50]. Estrès oksidatif te siprime pa anzim antioksidan, ak nivo mRNA nan GSK-3 ak GPX yo te ogmante apre tretman BPME. BPME gen plizyè fitochimik ki aktif biyolojik, tankou betalain, flavonoid, polifenol, anzim ki ka geri, asid ascorbic, asid dehydroascorbic (DHAA), ak nitrat inòganik (NO3), e sa yo ka patisipe nan regilasyon kapasite antioksidan nan HUVECs. Nan kontèks sa a, Cha et al. (2014) [51] rapòte ke asid klorojenik efektivman pwoteje kont domaj ADN oksidatif estrès pwovoke nan keratinosit imen. Endothelin-1 (Edn{-1), yon vazokonstriktè endothelium ki sòti, fè migrasyon selil misk lis epi li aji kòm yon faktè antiapoptotik nan selil ki gen estrès oksid nitrique pwovoke [52,53]. Pwosesis renovasyon vaskilè, migrasyon, pwopagasyon ak akimilasyon matris ekstraselilè yo te ankouraje pa Edn-1 ak NO [54,55]. Nou te obsève ekspresyon Edn-1 ogmante apre tretman BPME nan HUVEC ak estrès oksidatif. Sou estrès oksidatif oswa akimilasyon LPO, etap bonè nan enflamasyon vaskilè se adezyon leukosit nan selil misk lis andotelyo, li enpòtan pou evènman yo kritik nan iskemi ak ateroskleroz [56]. Li se medyatè pa ekspresyon VCAM ak ICAM; li te ankouraje pa anpil nan chemokin yo ak ajan chemotaxis, tankou ekspresyon NF-κB, IL-1, ak TNF- [57]. Anpèchman deklanchman IL-1 ki te swiv pa ekspresyon molekil adezyon te reyalize pa asid ellagik konpoze fenolik dyetetik [58]. Tretman ak BPME pou ekstèn HUVECs ak estrès oksidatif siyifikativman diminye faktè proinflammatory espesifik selil vaskilè yo, tankou VCAM, ICAM, NF-κB, IL-1, ak nivo ekspresyon TNF-. Nan kontèks sa a, Crespo et al. [59] rapòte ke kaempferol ak quercetin inibit jèn pro-enflamatwa, tankou ekspresyon VCAM, ICAM, NF-κB, ak IL-1, respektivman. An jeneral, anpèchman estrès oksidatif ak potansyèl ekspresyon jèn ki gen rapò ak enflamasyon vaskilè nan BPME te favorize ekspresyon faktè kwasans selil vaskilè ak potansyèlman ede pwopagasyon selil vaskilè ak kwasans.

5. Konklizyon

Konklizyon prezan yo konfime ke ekspresyon an ogmante nan jèn antioksidan te asosye ak asouvisman nan estrès oksidatif, ede simonte andikap pwopagasyon HUVEC ak anjojenèz. Lay nwa ki gen hydroxymethylfurfural supprime efè enflamatwa TNF-induit adezyon selil monosit nan HUVEC yo ak plis siprime jenerasyon ROS, ekspresyon VCAM-1, ak aktivasyon NF-κB [60]. Anplis de sa, He et al. [61] konfime ke hydroxymethylfurfural gen potansyèl pou pwoteje EC yo kont ipoksi. Yo idantifye po bètrav tou pou genyen flavonoid, furan, ak eleman antioksidan, tankou 5-hydroxymethylfurfural, methyl pyruvate, furfural, ak 2,3-dihydro-3,5- dihydroxy-6-metil-4H-Pyran-4-yon sèl; konpozan sa yo responsab pou amelyore kapasite antioksidan ak repwesyon nan molekil adezyon selil misk lis vaskilè proenflamatwa. Yo te itilize kale bètrav kòm yon estimilan pou pisin antioksidan pou pasè estimilis ekstèn oswa estimilis patolojik entèn nan estrès selilè peroksidatif. Konklizyon nou yo te pwouve ke eleman yo nan bètrav ede nan diminye estrès metabolik ak enflamasyon nan HUVECs, ki ka benefisye pou pwopagasyon selil vaskilè ak anjyogenesis.

Kontribisyon otè:

Konsepyalizasyon, LNA-H. ak S.-BP; metodoloji, LNA-H. ak S.-BP; lojisyèl, GS; validation, LNA-H. ak S.-BP; analiz fòmèl, S.-BP, AMA-D., AAA (Ali A Alshatwi) ak GS; ankèt, LNA-H., S.-BP ak AMA-D.; resous, LNA-H.; gerizon done, S.-BP ak LNA-H.; ekri — preparasyon bouyon orijinal, LNA-H. ak S.-BP; ekri-revizyon ak koreksyon, LNA-H., AMS, GS ak AAA (Amna Abdullah Alotiby); vizyalizasyon, S.-BPand AAA (Ali A Alshatwi); sipèvizyon, LNA-H., ak S.-BP; administrasyon pwojè, LNA-H.; akizisyon finansman, LNA-H. Tout otè yo te li epi yo te dakò ak vèsyon ki te pibliye maniskri a. Finansman: Otè yo pwolonje apresyasyon yo bay Deanship Rechèch Syantifik nan King Saud University pou finansman travay sa a atravè gwoup rechèch pa gen okenn RG-1442-432.Deklarasyon Komisyon Konsèy Revizyon Enstitisyonèl: Pa aplikab. Deklarasyon Konsantman Enfòme: Pa aplikab. : Done yo prezante nan etid sa a disponib sou demann nan men otè ki koresponn lan.Konfli enterè: Pa gen okenn konfli enterè pou etid sa a.

Referans

1. Abdolmaleki, Z.; Arab, H.-A.; Amanpour, S.; Muhammadnejad, S. Efè anti-angiogenic nan ekstrè etanolik nan Artemisia sieberi konpare ak sibstans aktif li yo, artemisinin. Rev Bras. Farmacogn. 2016, 26, 326–333. [CrossRef]
2. Yoo, SY; Kwon, SM Angiogenesis ak opòtinite terapetik li yo. Medyatè. Inflamm. 2013, 2013, 127170. [CrossRef] [PubMed]
3. Folkman, J. Angiogenesis nan kansè, vaskilè, rimatoyid ak lòt maladi. Nat. Med. 1995, 1, 27–31. [CrossRef]
4. Hoeben, A.; Landuyt, B.; Highley, MS; Wildiers, H.; Van Oosterom, AT; De Bruijn, EA Faktè kwasans andotelyal vaskilè ak anjojenèz. Pharmacol. Rev. 2004, 56, 549–580. [CrossRef]
5. Ferrara, N.; Alitalo, K. Aplikasyon klinik nan faktè kwasans anjyojenik ak inibitè yo. Nat. Med. 1999, 5, 1359–1364. [CrossRef]
6. Galley, HF; Webster, NR Fizyoloji andotelyòm. Br. J. Anaesth. 2004, 93, 105–113. [CrossRef]
7. Onat, D.; Brilon, D.; Colombo, PC; Schmidt, AM Selil endothelial vaskilè imen: Yon sistèm modèl pou etidye enflamasyon vaskilè nan dyabèt ak ateroskleroz. Curr. Rep. Dyabèt 2011, 11, 193–202. [CrossRef] [PubMed]
8. Packard, RR; Libby, P. Enflamasyon nan ateroskleroz: Soti nan byoloji vaskilè nan dekouvèt byomarkè ak prediksyon risk. Clin. Chem. 2008, 54, 24–38. [CrossRef]
9. Esper, RJ; Nordby, RA; Vilariño, JO; Paragano, A.; Cacharrón, JL; Machado, RA Endothelial malfonksyònman: Yon evalyasyon konplè. Cardiovasc. Dyabèt. 2006, 5, 4. [CrossRef]
10. Baudin, B.; Bruneel, A.; Bosselut, N.; Vaubourdolle, M. Yon pwotokòl pou izòlman ak kilti selil endothelial venn lonbrit imen. Nat. Pwotok. 2007, 2, 481–485. [CrossRef] [PubMed]
11. Cao, Y.; Cao, R. Angiogenesis inibit pa bwè te. Nature 1999, 398, 381. [CrossRef] [PubMed]
12. Yen, G.-C.; Duh, P.-D.; Tsai, H.-L. Pwopriyete antioksidan ak pro-oksidan nan asid ascorbic ak asid galik. Manje Chem. 2002, 79, 307–313. [CrossRef]
13. Dhalaria, R.; Verma, R.; Kumar, D.; Puri, S.; Tapwal, A.; Kumar, V.; Nepovimova, E.; Kuca, K. Konpoze byoaktif nan fwi manjab ak pwopriyete anti-aje yo: Yon revizyon konplè pou prolonje lavi moun. Antioksidan 2020, 9, 1123. [CrossRef] [PubMed]
14. Baião, DdS; da Silva, D.; Del Aguila, EM; Paschoalin, VMF Nitrisyonèl, byoaktif ak fizikochimik karakteristik diferan fòmilasyon bètrav. Adikte Manje. 2017, 6. [CrossRef]
15. Lalonde, R.; Roitberg, B. Sou evolisyon konpòtman kwazman nan pye bwa: Predasyon oswa move tan? Am. Nat. 1992, 139, 6. [CrossRef]
16. Silva, D.; Baiao, DDS; Ferreira, VF; Paschoalin, VMF Betanin kòm estrès oksidatif multipath ak modulateur enflamasyon: Yon pigman bètrav ak efè pwoteksyon sou patojèn maladi kadyovaskilè. Crit. Rev Manje Sci. Noutr. 2020, 1–16. [CrossRef]
17. Baiao, DDS; Silva, D.; Paschoalin, VMF Remakab legim: Nitrat li yo ak kontni fitochimik yo ka ajiste nan fòmilasyon nouvo pou benefisye sante ak sipòte terapi maladi kadyovaskilè. Antioksidan 2020, 9, 960. [CrossRef] 18. Abd El-Ghaffar, EA; Hegazi, NM; Saad, HH; Soliman, MM; El-Raey, MA; Shehata, SM; Barakat, A.; Yasir, A.; Sobeh, M. HPLC-ESI- MS/MS analiz de fèy bètrav (Beta vulgaris) ak pwopriyete benefisye li yo nan rat dyabetik tip 1. Biomed. Pharmacother. 2019, 120, 109541. [CrossRef]
19. Singh, B.; Nathan, BS Konpozisyon chimik, pwopriyete fonksyonèl, ak pwosesis bètrav-yon revizyon. Ent. J. Sci. Eng. Res. 2014, 5, 679.
20. Ninfali, P.; Angelino, D. Potansyèl nitrisyonèl ak fonksyonèl nan Beta vulgaris cicla ak rubra. Fitoterapia 2013, 89, 188–199. [CrossRef]