Chapit 5 Chanjman nan aktivite anzim pandan fèmantasyon anzim

Chapit 5 Chanjman nan aktivite anzim pandan fèmantasyon anzim

 

Proteaz, lipaz akSuperoksid dismutaz (SOD)yo se prensipal anzim yo fonksyonèl nanmanje anzim mikwòb. Pami yo,proteazjwe yon wòl nanPwomosyon idroliz pwoteyin nan manjenan kò imen an. Anplis de sa, li kapab tou dekonpoze kèk selil mouri, retire pousyè tè sou sifas la po ak porositë, ak jwe yon wòl nan èksfolyasyon, kidonk li se lajman ki itilize nan pwodwi beny. Lipaz aji sou kosyon an estè ant asid gra ak gliserin, ak substrate a idroliz se jeneralman lwil natirèl. Se poutèt sa, li wè nan anpil manje pèdi pwa ak pwodwi sante. Anpil fanm yo trè konsène sou sijè sa a nan pèdi pwa, ki se poukisa anzim yo te byen vit vin popilè nan tout mond lan.Anzim yo rich nan lipaz, ki vle di ke yo gen gwo valè rechèch ak kandida aplikasyon an.Kabinèse yon anzim metal espesyal ki catalyses reyaksyon an dezagreman nanRadikal anyon superoksid, kidonkRetire radikal anyon superoksidnan kò a. Li se yon baryè pwoteksyon pou òganis, kidonk li se lajman ki itilize nan jaden medikal la.
Chapit sa a pran Apple anzim kòm yon egzanp. Kòmanse nan etap inisyal la nan fèmantasyon, laAktivite nan superoksid dismutaz, amilaz, lipaz, proteaz ak cellulase nan gwoup eksperimantal la ak gwoup kontwòl la te mezire chak 15 jou a complète ak sistematik reflete tandans nan chanje nan aktivite anzim pandan tout pwosesis la fèmantasyon.

Nouvo remèd fèy Cistanche

Klike sou yo ka resevwa plis detay

 

Sèvis ki bay sipò nan Wecistanche-pi gwo ekspòtatè nan Cistanche nan Lachin nan:
Imèl: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950

 

 

 

 

 

 

5.1 Materyèl ak Metòd

5.1.1 Materyèl

(1) Materyèl eksperimantal

Lave pòm fre ak dlo esteril anba kondisyon esteril, seche yo natirèlman sou yon tab opere esteril, kale yo, ak tranch yo pou itilize pita. Add sik blan ak pòm nan yon bokal vè esterilize nan yon rapò mas nan 1: 1. Aktive bakteri ki nesesè pou eksperyans lan ak inokule yo nan anzim la dapre konplo a pi bon (se etap operasyon sa a omisyon pou gwoup la kontwòl), sele li epi mete li nan yon kote ki fre epi sèk. Apre 3 mwa nan fèmantasyon tanperati chanm, pran yon echantiyon yo jwenn tout likid la anzim ki gen kaka a ak filtre li. Pran supernatant la kòm echantiyon eksperimantal la. Apre yo fin echantiyon an santrifuje nan 10, 000 rpm pou 15 minit nan yon santrifijeur gwo vitès, li se itilize yo mezire done ki enpòtan. Li se vo anyen ki nan pwosesis la nan fè anzim, yo nan lòd pou fè pou evite kontaminasyon nesesè, tout operasyon nou yo te te pote soti nan kondisyon esteril.

(2) Enstriman prensipal yo
Enstriman ki nesesè pou eksperyans lan se menm jan ak 3.1.1 (2).

 

5.1.2 Metòd

(1) Detèminasyon aktivite superoksid dismutaz (SOD) [66]
Solisyon an pirogallol te prechofe nan yon 25 degre konstan tanperati beny dlo pou yon peryòd de tan. Dapre Tab 5.1, yon kantite lajan ki apwopriye nan zòn de defans, dlo distile ak menm volim nan asid idroklorik oswa solisyon pirogallol yo te ajoute nan tib la tès la. Te beny lan dlo konstan mete nan 25 degre pou 2 0 min. Apre yo te likid la melanje byen vit souke, li te imedyatman sou fòm piki nan kivèt la. Valè a absorption A0 nan echantiyon an te mezire chak 30 segonn nan yon longèdonn nan 325nm lè l sèvi avèk yon spektrofotomètr.

Tab.5.1 Ajoute kantite lajan an nan benzèn nan adjasan twa reyaktif fenol pou detèminasyon nan to autoxidation

 

Metòd pou detèmine aktivite SOD se fondamantalman menm jan ak operasyon ki anwo a. Sèl diferans ki genyen se ke anvan ou ajoute pyrogallol, {{0}}. 5 ml solisyon echantiyon anzim nan diferan konsantrasyon bezwen yo dwe ajoute an premye. An menm tan an, se menm volim nan dlo distile te ajoute. Absorbans la mezire se asod. Pousantaj nan anpèchman ak aktivite anzim SOD yo kalkile dapre fòmil 5.1 ak fòmil 5.2: pousantaj anpèchman (%)=(△ A 0- △ asod)/△ A 0 × 100 (5.1) anzim aktivite (u/ml) {} V1/V2 × N (5.2) kote: V1 se volim total solisyon an, ML; V2 se volim nan solisyon an echantiyon anzim, ML; △ A0 se to auto-oksidasyon nan pirogallol; △ ASOD se pousantaj chanjman nan valè absorption echantiyon an; n se dilution miltip (2) detèminasyon aktivite amilaz etid sa a te itilize metòd kolorimetrik yòd-lanmidon pou detèmine aktivite amilaz. Etap operasyon espesifik yo refere a "pwosedi nasyonal operasyon laboratwa klinik" [67]. Li se sitou divize nan de pwen sa yo:

 

① Preparasyon solisyon
Solisyon lanmidon tampon ({{0}}. nan dlo distile, ak chalè jouk solisyon an klou; Peze avèk presizyon 0.4g nan lanmidon soluble, fonn li nan 10ml nan dlo distile, melanje respire, epi ajiste nan yon keratin; Enjekte solisyon an lanmidon ajiste nan yon keratin nan solisyon an pi wo a bouyi, epi lave vaz a bèk la repete jiskaske lanmidon an konplètman transfere nan solisyon an dlo bouyi. Apre brase respire ak yon baton vè, fre nan tanperati chanm, ajoute 5ml nan yon 37% cheve fòmaldeyid solisyon, ak delye a 1L ak dlo distile. Valè a pH nan solisyon an se 7.0 ± 0.1, epi li se mete yo nan frijidè a pou itilize.
Solisyon stock yòd (0. 1 mol/L): Peze avèk presizyon 1.7835g potasyòm yodat ak 22.5g yodid potasyòm nan yon 500ml pwòp
Bèk, tou dousman e respire ajoute 4.5ml asid idroklorik konsantre, brase kontinyèlman pandan pwosesis la adisyon, delye nan echèl la ak dlo distile, ak brase respire. Mete li nan frijidè a pou itilize ak magazen li nan yon boutèy reyaktif mawon.
Solisyon aplikasyon yòd ({{0}}.

② Etap operasyon eksperimantal yo
Pran solisyon an anzim ak delye li 10 fwa ak salin fizyolojik, ak opere dapre Tab 5.2. Melanje byen, longèdonn nan spektrofotomètr a se 660nm, ak chemen an limyè nan gode a colorimetric se 10mm. Zewo ak dlo distile epi li absorption nan chak tib. Kalkile aktivite amilaz ki baze sou fòmil kalkil debaz 5.3.

 

Tab.5.2 Etap Operasyon Detèminasyon Amilaz

 

(3) Detèminasyon aktivite lipaz

Metòd detèminasyon an te fèt dapre QB/T {{0}} [68]. Yon solisyon tès anzim 2% te prepare ak 0. Aktivite lipaz la te kalkile ki baze sou volim nan idwoksid sodyòm boule nan eksperyans lan. Règ la se: nan yon pH nan 7.5 ak yon tanperati anbyen nan 40 degre, 1 mL nan likid solisyon anzim idrolize lipaz pou 1 min yo pwodwi 1 μmol nan asid gra, ki se yon inite aktivite lipaz, ki eksprime kòm U/mL. Then, the lipase activity was calculated according to formula 5.4: enzyme activity (U/mL)=(BA) × c/0.05 × 50 × 1/15 × n=200/3 × (BA) × c × n (5.4) Where: B is the volume of sodium hydroxide standard solution consumed, mL; Yon se volim nan solisyon sodyòm idroksid estanda boule nan gwoup la kontwòl vid, ML; C se konsantrasyon solisyon estanda idwoksid sodyòm, mol/L; 0.05 se faktè a konvèsyon nan konsantrasyon an nan solisyon estanda sodyòm idroksid; 50 se kontni an asid gra nan solisyon idwoksid sodyòm; 15 min se tan reyaksyon an; n se miltip dilution.

(4) Detèminasyon aktivite protease

Gade nan GB/T 23527-2009 [69] ak modifikasyon ti tay.
① Preparasyon koub estanda
Pran 1ml nan solisyon estanda tirozin ak konsantrasyon mas diferan, ki se 0, 1 0, 20, 30, 40, ak 50mg/L, epi ajoute 5ml nan 0.4mol/L solisyon carbonate sodyòm ak 1ml nan solisyon folin reyaktif a li. Reyaji pou 20 minit nan yon tanperati ki nan 40 degre. Apre reyaksyon an konplè, retire solisyon an reyaksyon ak mezire valè a absorption nan solisyon an nan yon longèdonn nan 680Nm lè l sèvi avèk yon spektrofotomètr. Trase yon koub estanda tirozin ak konsantrasyon tirozin kòm aks orizontal la ak valè absorption kòm aks vètikal la.

Nouvo remèd fèy Cistanche ak pouvwa antioksidan fò

② Detèminasyon aktivite protease
Gwoup eksperimantal: Pran 1mL nan solisyon kazein ak yon konsantrasyon nan 10 g/L ak melanje li respire ak 1ml nan solisyon an echantiyon yo dwe teste, ak reyaji pou 10min nan yon tanperati anbyen nan 40 degre; Filtre ak jwenn filtraj la apre kanpe, pran 1ml nan filtraj la, 5ml nan solisyon carbonate sodyòm ak 1ml nan folin reyaktif, melanje respire, ak reyaji pou 20min nan yon tanperati anbyen nan 40 degre; Sèvi ak yon spektrofotomèt ki mezire valè absorption nan solisyon an nan yon longèdonn nan 680nm.
Gwoup kontwòl vid: Pran 1ml nan solisyon an echantiyon yo dwe teste, ajoute asid trichloroacetic, reyaji konplètman inaktif proteaz la, ak lòt metòd operasyon yo se menm jan ak gwoup la eksperimantal.

Kalkile aktivite proteaz la selon fòmil 5.5:
Aktivite proteaz (u/ml)=AK × 4/10 (5.5) kote: a se absorption nan solisyon an anzim nan gwoup eksperimantal la; K se kantite tirozin lè absorption la egal a 1; 4 se volim total solisyon reyaksyon an, ML; 10 se tan reyaksyon an, min.

(5) Detèminasyon nan aktivite cellulase [70]

Se aktivite a nan cellulase nan anzim jeneralman eksprime pa kantite lajan an nan glikoz pibliye pa yon sèten kantite solisyon anzim pou chak tan inite. Prensip la nan lè l sèvi avèk metòd la papye filtre ki mezire aktivite cellulase se ke cellulase ka dekonpoze karboksimetil nan papye a filtre yo pwodwi metabolites segondè tankou glikoz, ak glikoz ka reyaji ak 3, 5- asid dinitrososalicylic yo fòme yon konplèks jòn. Koulè sa a reyaksyon se relativman klere, ki ka byen detèmine kantite lajan an nan glikoz ak lòt sik diminye pwodwi.

 

①3, 5- Dinitrosalicylic asid colorimetric ajan
Accurately weigh 10g of 3,5-Dinitrosalicylic acid with a melting point of 168-169 degree , dissolve it with distilled water, add 20g of sodium hydroxide and 200g of potassium sodium tartrate, continue heating until the solid is completely dissolved, dilute to 500mL with distilled water, add 2g of Redistilled fenol ak 0.5g nan sulfit sodyòm anidrid, brase kontinyèlman pandan pwosesis la adisyon jiskaske li se konplètman fonn, sispann chofaj apre melanje respire, fre nan tanperati chanm, transfere tout nan yon boutèy 1000ml volim, jwenn mak la ak dlo distile, kote nan tanperati chanm nan.②enzimatik idroliz
Avèk presizyon pipèt {{0}}, 0. Apre 5 minit nan konstan tanperati dlo beny nan 40 degre, ajoute 6 moso nan papye filtre kromatografi ak yon zòn nan 1 × 1cm2 respektivman, epi imedyatman kòmanse distribisyon fè tan an reyaksyon egzat a 60 minit. Imedyatman transfere nan beny dlo bouyi pou reyaksyon pou 10 minit, ak cellulase a pèdi aktivite li yo.

 

 

③ Reyaksyon koulè
Pran solisyon an echantiyon anzim, ajoute 3ml nan 3, 5- Dinitrosalicylic asid ajan colorimetric prepare nan ①, chalè nan beny dlo bouyi pou 15 minit, pran soti, fre nan tanperati chanm, ajoute 10ml nan dlo distile, melanje respire, sèvi ak spectrophotometer nan yon wavelance nan 550nm, ajisteman nan mezi, epi yo pa gen okenn efè yo, epi yo ka itilize yo, epi yo ka itilize yo, epi yo ka itilize yo, yo ka itilize yo, yo ka itilize yo.
④ Desen nan koub glikoz estanda
Prepare yon solisyon estanda glikoz ak yon konsantrasyon nan 1mg/ml avèk presizyon, epi sèvi ak dlo distile fè solisyon an glikoz estanda ak yon volim nan 0, 0. 2, 0. 4, 0. nan 3, 5- Dinitrosalicylic asid ajan colorimetric prepare nan ① fè reyaksyon devlopman koulè. Trase koub la estanda ak konsantrasyon glikoz kòm aks orizontal la ak absorption kòm aks vètikal la.
⑤calculation
Sèvi ak valè a absorption yon apre devlopman koulè ak solisyon anzim, ak Lè sa a, kalkile kantite lajan an lage glikoz M selon koub la estanda glikoz, ak kalkile dapre fòmil 5.6:
Aktivite cellulase (u/ ml)=m/ (t · m) (5.6) kote: m se kantite lajan lage glikoz, UG; t se tan idroliz anzimatik, min; M se kontni anzim nan reyaksyon an, ug/ml.