MiRNAs sikile nan Pasyan dyabetik tip 2 ak ak san albuminuria nan Malezi

RésuméEntwodiksyon: Maladi ren dyabetik(DKD) rete kòz prensipal maladi ren kwonik. Yo te rapòte disregulation nan sikile miRNAs, sijere wòl patolojik yo nan DKD. Etid sa a te vize pou mennen ankèt sou miRNA ki eksprime diferan nan seri pasyan dyabèt tip 2 (T2DM) ki gen ak san albuminuria nan yon popilasyon Malaysyen.Metòd:Karant-yon pasyan T2DM sou swivi nan yon klinik kominotè yo te divize an gwoup nòmal-(NA), mikwo-(MIC), ak macroalbuminuria (MAC). Nivo diferan nan miRNAs nan 12 echantiyon yo te detèmine lè l sèvi avèk chemen ki konsantre sou (fibwoz imen) miScript miRNA qPCR etalaj la epi yo te valide nan echantiyon 33, lè l sèvi avèk etalaj la qPCR koutim miScript (CMIHS02742) (Qiagen GmbH, Hilden, Almay).Rezilta:Tandans regilasyon 3 miRNA nan serik la, sètadi, miR-874-3p, miR-101-3p, ak miR-145-5p nan pasyan T2DM ki gen MAC konpare ak moun ki gen NA. Regilasyon estatistik enpòtan nan miR- 874-3p (p= 0.04) ak miR-101-3p (p= 0.01) te wè nan kòwòt validasyon an. Siyifikatif korelasyon negatif ant pousantaj filtraj glomerulè estime (eGFR) ak miR-874-3p (p= 0.05), miR-101-3p (p= 0.03), ak miR-145-5p (p= 0.05) osi byen ke korelasyon pozitif ant miR-874-3p ak laj (p= 0.03) te montre nan analiz koyefisyan korelasyon Pearson a.Konklizyon:Nan etid sa a, yo te jwenn regilasyon miRNA ki te deja konnen, sètadi, miR-145-5p, epi pètèt nouvo, sètadi, miR-874-3p ak miR-101-3p nan serom pasyan T2DM. . Te gen yon korelasyon enpòtan ant eGFR ak miRNA sa yo. Konklizyon etid sa a te bay prèv ankourajan pou plis envestige wòl potatif miRNA sa yo ki eksprime diferan nanDKD.

Klike sou cistanche herba pou maladi ren

Entwodiksyon

Maladi ren dyabetik (DKD) kont pou 39% nan fen etap maladi ren ensidan nan USA a [1]. Menm jan an tou, DKD kontinye ap kòz prensipal maladi ren kwonik (CKD) nan Malezi, kontribye nan 69% nan nouvo pasyan dyaliz nan 2018 [2]. Patoloji DKD yo panse sitou pa ipèglisemi, sa ki lakòz deklanchman chemen siyal entraselilè epi finalman fibwoz ren [3]. Malgre pwogrè nan jesyon, biomarqueurs aktyèl yo ak terapi yo echwe pou anpeche pwogresyon li nan fen etap maladi ren [3]. Pakonsekan, yon pi bon konpreyansyon sou medyatè yo ak mekanis DKD nesesè ijan.

Asid mikroribonukleik (miRNA) se yon fanmi ti RNA ki pa kode ki parèt kòm regilatè enpòtan apre transkripsyon ekspresyon jèn [4]. Yo te obsève ekspresyon aber rant nan miRNA yo ak patisipasyon yo nan mekanis selilè DKD [3]. Etid sa a te vize idantifye modèl ekspresyon miRNA yo chwazi nan seri pasyan dyabèt tip 2 (T2DM) ki gen ak san albuminuria. Atravè lemond, etid ki sanble yo te fè nan divès popilasyon, jan yo te revize deja [5-7]. Nou vize pou mennen ankèt sou modèl ekspresyon diferans nan yon seleksyon miRNA ki asosye ak chemen fibrotik nan pasyan T2DM, kèk nan yo te deja etidye nan DKD. Etid anvan yo te sijere diferans ki gen rapò ak etnik nan ekspresyon miRNA [8, 9]. Se poutèt sa, anplis ke yo te kapab konfime rezilta anvan yo, etid sa a ka potansyèlman revele nouvo miRNAs, petèt inikman eksprime nan popilasyon an Malaysyen.

Materyèl ak Metòd

Etid Popilasyon

Etid transvèsal sa a te enplike 41 pasyan T2DM ki deja egziste sou swivi nan yon klinik kominotè, depi janvye rive avril 2019. Etid sa a te enplike yon pwosedi etap 2-: (1) miRNA nan sera 12 pasyan (kowòt tès depistaj). ) yo te pwofite epi (2) miRNAs ki pi enpòtan yo te valide ak sera ki soti nan 33 pasyan yo (ki refere yo kòm kòwòt validasyon an). Sa a te enkli 4 pasyan ki soti nan kòwòt tès depistaj la. Yo te jwenn konsantman alekri nan men pasyan endividyèl yo. Yo te jwenn apwobasyon etik pou etid sa a nan men Rechèch Medikal ak Komite Etik (MREC), Ministè Sante Malezi. Kritè enklizyon yo te pasyan T2DM ak enfòmasyon klinik ak laboratwa ki disponib. Pasyan ki gen tip 1 DM; ki pa DKD; komorbidite tankou kansè, maladi fyèv egi, oswa enfeksyon ki sot pase; gwosès; ak apre akouchman yo te eskli.

Enfòmasyon sou sa ki annapre yo te jwenn nan dosye medikal pasyan an: (1) done demografik ki gen ladan laj ak sèks; (2) done klinik tankou tansyon, pwa, dire T2DM, tretman, ak lòt konplikasyon dyabetik; (3) done laboratwa ki gen ladan glikoz plasma nan jèn, emoglobin glycated A1c (HbA1c), rapò albumin-kreyatinin, ak kreyatinin serik. Pasyan yo te divize an 3 gwoup selon nivo albuminuria yo, normoalbuminuria (NA), mikroalbuminuria (MIC), ak macroalbuminuria (MAC).

Definisyon

Nan etid sa a,

NA, MIC, ak MAC yo te defini kòm yon rapò albumin-a-kreyatinin nan<30, between 30 and 300 and >300 mg / g kreyatinin, respektivman, nan omwen 2 nan 3 koleksyon pipi tach [10]. Yo te kalkile to filtraj glomerulè (eGFR) ki baze sou ekwasyon kreatinin kwonik maladi ren epidemyoloji.

Preparasyon serom

Vacutainer Echantiyon san konplè yo te ranmase nan jèn (mwens pase oswa egal a 8 h) nan tib BD ®SSTTM 10-mL (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA) yo te kite nan tanperati chanm pou 30- min. kayo anvan 10- min santrifujasyon nan 1,900 g. Faz anwo a te rekòlte, filtre ak 0.22-μm Minisart®PES filtre (Sartorius, Gottingen, Almay), ak aliquot nan tib mikrosantrifij pou estoke nan -80 degre jiskaske analiz.

Total miRNA

Izolasyon Total miRNA te izole lè l sèvi avèk miRNeasy Serum/Plasma Twous (Qiagen GmbH) dapre pwotokòl manifakti a. An brèf, yo te ajoute Qiazol Lysis Reagent nan yon aliquot 200 μL serom pou denaturasyon ki te swiv pa miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control C. elegans miR -39 miRNA miR (Qiagen GmbH) pou kontwole rekiperasyon RNA ak ranvèse. efikasite transcription. Chloroform te ajoute pou separasyon faz ki te swiv pa 100% etanòl adisyon nan faz akeuz anwo a. Etap rense yo te reyalize pa Buffer RWT, Buffer RPE, ak 80% etanòl. RNA te eliye lè w ajoute 14 μL dlo RNase-gratis nan manbràn kolòn spin RNeasy MinElute la. Kantite ak bon jan kalite RNA yo te detèmine pa yon espektrofotomèt NanoDrop 1000 (Thermo Fisher Scientific, Inc., Wilmington, DE, USA), anvan depo nan -80 degre jiskaske yo itilize. Transkripsyon ranvèse (RT) nan miRNA nan cDNA ak preanplifikasyon yo te fèt ak twous miScript RTII (Qiagen GmbH) ak miScript PreAMP PCR Kit (Qiagen GmbH), respektivman, dapre pwotokòl manifakti a, lè l sèvi avèk 6 μL modèl RNA ak 5 μL nan dilye. cDNA, respektivman

Kantitatif an tan reyèl Polymerase chèn reyaksyon analiz

MiRNAs k ap sikile nan serik kowòt tès depistaj la te idantifye pa etalaj miScript miRNA qPCR ki konsantre sou chemen (fibwoz imen) (Qiagen GmbH), epi miRNA yo te chwazi yo te pita valide nan kòwòt validasyon an ak yon etalaj miScript miRNA qPCR koutim (CMIHS02742) ( Qiagen GmbH) dapre enstriksyon manifakti a. Chak reyaksyon te gen ladann yon modèl cDNA, 2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix, 10x miScript Universal Primer, 10x miScript Primer Assay, ak RNase-gratis dlo, ak dilye modèl cDNA pou fè yon volim total de 25 μL. Yo te fè PCR an tan reyèl quantitative sou Eppendorf Mastercycler ep realplex 4, ki te pwograme jan sa a: 15 min nan 95 degre, 15 s nan 94 degre, 30 s nan 55 degre, ak 30 s nan 70 degre ak 40 sik.

Kantifikasyon relatif miRNA

Yo te fè analiz done PCR an tan reyèl lè l sèvi avèk lojisyèl Qiagen Gene Globe Data Analysis Center (https://geneglobe.qiagen.com/analyze/). Ekspresyon relatif (RE) te sòti pa metòd 2−∆Ct, kote ekspresyon chak miRNA te nòmalize ak jèn SNORD95 oswa Global Ct Mean. Chanjman pliye yo te kalkile apati ekspresyon miRNA nòmalize nan chak gwoup (MIC oswa MAC) divize pa ekspresyon miRNA nòmalize nan gwoup kontwòl la (NA). Valè p yo te kalkile baze sou yon tès t-tès echantiyon ki depann de valè RE (2−∆Ct) replike pou chak jèn nan gwoup kontwòl ak gwoup tès yo. Plis verifikasyon analiz done qPCR yo te fè manyèlman lè l sèvi avèk Microsoft Excel ak IBM SPSS (Statistical Package for the Social Science; IBM Corp, Ar monk, NY, USA) version 25 pou Microsoft Windows lojisyèl.

Seleksyon miRNA nan kowòt tès depistaj pou Validasyon

Initially, the relative quantification of miRNAs in the screening cohort was based on the global Ct mean normalization method, and Ct >30 te konsidere kòm ekspresyon negatif, jan yo rekòmande pa Qiagen GeneGlobe Data Analysis Center (https://geneglobe.qiagen. com/analyze/). Tablo 1 siplemantè sou Entènèt (pou tout materyèl siplemantè sou entènèt, gade www.karger.com/doi/10.1159/000518866) montre yon RE 84 miRNA nan kowòt tès depistaj nòmalize ak mwayèn Ct mondyal la. Yo te chwazi MiRNA ki gen chanjman siyifikatif ±2.0-pliye ak bon kalite pou validasyon, jan lojisyèl an defini. Anplis de sa, lòt miRNA yo te chwazi ki baze sou klasman valè p yo ak patisipasyon yo nan etid anvan yo nan DKD ak chemen ki gen rapò ak DKD, kote yo te chwazi miRNA ki gen pi gwo kantite objektif RNA mesaje yo. Tablo 2 siplemantè sou entènèt montre kritè adisyonèl yo itilize pou seleksyon miRNA pou validation. Nan analiz validation, ekspresyon miRNA te nòmalize nan SNORD95 kòm metòd mondyal Ct vle di pa t 'apwopriye ak Ct> 35 te konsidere kòm yon ekspresyon negatif. Pou estandadize, nou re-analize RE nan miRNA yo chwazi nan kòwòt tès depistaj la ki baze sou nòmalizasyon SNORD95, epi yo te itilize sa a pou analiz ki vin apre an konparezon ak kòwòt validasyon an.

Analiz estatistik

Normality check of continuous variables was done using both statistical tests (Shapiro-Wilk, Kolmogrov-Smimov, skewness, and kurtosis) and visual inspection of plots (histogram, normal Q-Q, and detrended normal Q-Q). Continuous data were presented as either mean ± standard deviation or median (interquartile range). A comparison of 2 independent groups was done using an independent samples t-test (Tables 2–4). Comparison of >Yo te fè 2 gwoup endepandan lè l sèvi avèk echantiyon endepandan tès Kruskal-Wallis (Tablo 1). Konparezon varyab kategorik yo te fè lè l sèvi avèk swa tès χ2 nan enprevi oswa tès egzak Fisher a (Tablo 1). Te korelasyon ant seleksyone miRNA RE ak varyab kontinyèl (done demografik ak klinik) lè l sèvi avèk koyefisyan korelasyon Pearson a. Yo te itilize tès Regression miltip pou analize relasyon lineyè ant miRNA RE chwazi yo ak prediktè enpòtan li yo. Kalkil estatistik yo te fè lè l sèvi avèk IBM SPSS (Statistical Package for the Social Science; IBM Corp) version 25 pou Microsoft Windows ak pake pwogram lojisyèl estatistik Prism 8 (GraphPad, San Diego, CA, USA). Siyifikasyon estatistik la te defini kòm p < 0.05.

Sèvis sipò Wecistanche-Pi gwo ekspòtatè cistanche nan Lachin nan:

Imèl:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Achte pou plis detay espesifikasyon:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

JWENN NATIRÈL ÒGANIC ÈKSÈ CISTANCHE AK 25% ECHINACOSIDE AK 9% ACTEOSIDE POU ENFEKSYON REN