Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides pwovoke apoptoz nan selil Eca-109 atravè chemen ki depann de mitokondri yo.
Mar 06, 2022
Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com
CHANGSHUANG FU , JINYU LI , ADILA AIPIRE , LIJIE XIA , YI YANG , QIUYAN CHEN , JIE LV , XINHUI WANG ak JINYAO LI
Résumé
Cistanche tubulosagen plizyè fonksyon byolojik. Nan etid la prezan, yo te envestige efè antitumor nan glikozid fenylethanoid dlo-idrosolubl nan C. tubulosa (CTPG-W) sou kansè nan èzofaj. Selil Eca-109 yo te trete ak CTPG-W epi yo te mezire viabilite selil la pa tès MTT. Apoptoz, sik selilè, potansyèl manbràn mitokondriyo (Δψm), ak espès oksijèn reyaktif yo te analize pa sikometri koule. Nivo pwoteyin nan chemen apoptotik yo te detekte pa analiz Western blot. Li te detèmine ke CTPG-W siyifikativman redwi viabilite nan selil Eca-109 atravè endiksyon nan apoptoz ak arè sik selil yo. Apre tretman CTPG-W, Δψm nan Eca-109 te miyò diminye, ki asosye ak nivo lenfom B-selil -2 (Bcl-2) ki asosye ak X ak downregulated. nan Bcl-2. An konsekans, nivo cytochrome c ak c-Jun NH2-tèminal kinaz yo te ogmante, ki te ogmante nivo cleaved-poly (ADP-ribose) polymerase ak cleaved-caspase-3, {{18} } ak -9, men se pa kaspase-8. An korespondans, nivo espès oksijèn reyaktif nan selil Eca-109 te demontre chanjman remakab. Rezilta sa yo endike ke CTPG-W pwovoke apoptoz nan selil Eca-109 atravè yon chemen ki depann de mitokondriyo.
Entwodiksyon
Kansè nan èzofaj se youn nan kalite kansè ki pi komen ak 11yèm to morbidite ki pi wo a ak 6yèm to mòtalite ki pi wo nan mond lan e ki te lakòz ~439,000 mòtalite nan 2015 (1). Ensidans kansè nan èzofaj yo varye anpil nan mitan diferan rejyon yo, ak lès Azi ak lès ak Sid Afrik montre pi gwo pousantaj nan ensidans ak Afrik lwès montre pousantaj ki pi ba nan 2012 (1,2). Nan peyi Lachin, yo estime ka kansè nan èzofaj yo ak mòtalite yo te 477,000 ak 375,000, respektivman, nan 2015 (3). Malgre ke pousantaj morbidite kansè nan èzofaj diminye nan mitan ak mitan-wo mitan peyi endèks sosyodemografik ant 2005 ak 2015, to mòtalite a rete wo akòz pronostik la pòv (1,4). Yo te itilize konbinezon reseksyon chirijikal ak chimyoterapi oswa radyoterapi pou trete kansè nan èzofaj, sepandan, yo te rapòte ke ant 2003 ak 2014 5-pousantaj siviv ane a te rete.<20% in="" china,="" the="" usa,="" and="" europe="" (4,5).="" for="" these="" reasons,="" it="" is="" urgent="" to="" develop="" novel="" therapeutic="" agents="" to="" treat="" esophageal="">
Tradisyonèl Chinwa èrbal medikaman (CHM) yo te itilize pou trete divès kalite kansè, ki gen ladan kansè nan poumon ki pa ti selil (6), kansè kolorektal (7), kansè epatoselilè (8). Dènyèman, esè klinik yo rapòte ke konbinezon an nan CHM ak chimyoterapi oswa radyoterapi pa sèlman demontre yon kantite benefis sou kalite lavi a ak soulaje efè segondè pwovoke pa chimyoterapi oswa radyoterapi (9,10), men tou, amelyore pousantaj siviv pasyan yo. ak kansè nan poumon ki pa ti selil, fwa, gastric, kolorektal, nasopharyngeal oswa nan matris (9). Sepandan, gen prèv konfli konsènan efikasite nan tretman CHM sou kansè nan èzofaj (10,11). Anpil etid te detèmine ke yon kantite remèd fèy oswa konpozan ta ka anpeche kwasans selil kansè nan èzofaj nan vitro ak nan vivo, tankou Andrographis paniculata (12,13), Daikenchuto (14), icariin (15), Rosa Roxburghii Tratt, ak Fagopyrum. Cymosum (16), Jaridonin (17), Marsdenia tenacissima (18), OP16 (yon roman ent-kaurene diterpenoid) (19), Qigesan (20) ak Tonglian dekoksyon (21). Cistanche se yon kalite CHM epi li egzèse divès fonksyon byolojik, tankou anti-oksidasyon, anti-enflamasyon, ak neropwoteksyon (22,23). Etid anvan nou an te demontre saCistanche tubulosa phenylethanoid glikozid(CTPG) ta ka siprime kwasans selil melanom B16-F10 nan vitro ak nan vivo (24). Sepandan, solubility dlo pòv CTPG te itilize deja limite devlopman dwòg (24). Se poutèt sa, yo te itilize dlo-idrosolubl CTPG (CTPG-W) epi yo te envestige efè antitumoral sou selil kansè nan èzofaj yo (Eca-109). Yo te detèmine ke CTPG-W te kapab depandan dòz anpéché viabilité Eca-109 selil yo atravè endiksyon apoptoz atravè yon chemen ki depann de mitokondriyo.
Materyèl ak metòd Bèt.
Sourit fi C57BL/6 (6-8 semèn, ~ 25 g) yo te achte nan Beijing Laboratory Animal Research Center (Beijing, Lachin) epi yo te loje nan tanperati kontwole (25˚C), limyè-siklèt (12/). 12) Etablisman Animal nan Xinjiang University (Urumqi, Lachin). Tout bèt yo te resevwa dlo ak manje san patojèn.
Liy selilè ak kilti. Liy selilè nan kansè nan èzofaj imen (Eca-109) te konsève pa Xinjiang kle laboratwa nan resous byolojik ak Jeni Jenetik (Kolèj Syans lavi ak Teknoloji, Xinjiang University, Urumqi, Lachin) ak kiltive nan RPMI{{1} } mwayen (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA) complétée ak 10 pousan chalè-inaktive fetis serom bovine (FBS; MRC, EN MOASAI Byolojik Teknoloji Co, Ltd, Jiangsu, Lachin), 1 pousan L -glutamin (100 mM), 100 U/ml penisilin ak 100 µg/ml streptomycin nan 37˚C nan yon atmosfè imidite ki gen 5 pousan CO2.
Kwomatografi likid segondè-pèfòmans (HPLC). CTPG-W (cat. No. SGJG20170410) te achte nan men Shanghai Upbio Tech Co., Ltd. (Shanghai, Lachin). Konpoze prensipal yo nan CTPG yo te kalifye ak quantifier pa HPLC dapre etid anvan nou an (24). Yon ti tan, HPLC te fèt sou yon kolòn ZORBAX SB-C18 (250x4.6 mm; 5 µm) nan 30˚C epi elite ak 0.2 pousan solisyon asid fòmik ak yon gradyan nan metanol kòmanse nan 23 pousan, kòm 1 ml yo te ajoute chak minit. pou 45 min jiskaske yo rive nan 31 pousan. Yon total de 10 µl echantiyon yo te enjekte ak detekte nan 330 nm. Yo te achte estanda echinacoside nan Shanghai Baoban Biotech Co, Ltd (Shanghai, Lachin), epi yo te achte estanda acteoside nan Sigma-Aldrich (Merck KGaA, Darmstadt, Almay). Yo te itilize estanda yo pou analize eleman CTPG-W yo.
MTT tès. Pwopagasyon selil yo te mezire ak yon tès MTT. Selil Eca{{{0}} yo te vaksinen nan 96-plak byen nan yon dansite 5x103 selil nan 100 µl RPMI{{5 }} mwayen/byen ak kiltive nan 37˚C pou 24 èdtan, Lè sa a, trete pa diferan konsantrasyon (0, 200, 400, 600, ak 800 µg/ml) nan CTPG-W oswa 0.4 pousan dimethyl sulfoxide (DMSO) pou 24, 48 ak 72 h. DMSO te itilize kòm kontwòl sòlvan (800 µg/ml CTPG-W ki gen 0.4 pousan DMSO). Cisplatin (20 µg/ml) te itilize kòm kontwòl pozitif. Answit, sipènatant la te jete apre santrifujasyon nan 225 xg pou 5 min nan tanperati chanm, epi yo te ajoute 100 µl solisyon MTT (0.5 mg/ml nan mwayen RPMI-1640 san FBS) nan chak pi epi enkubate nan 37˚C. pou 3h. Kristal formazan ki te fòme yo te fonn nan 200 µl DMSO. Valè dansite optik (OD) yo te mezire nan yon longèdonn 490 nm pa yon lektè microplate 96-byen (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA). Vitabilite relatif selil la te kalkile dapre fòmil la: Viabilite selil (pousan)=(ODtreated/ODuntreated)x100 pousan. Mòfoloji selil Eca-109 yo te obsève ak yon mikwoskòp fliyoresan Envèse (agrandisman, x200) (Nikon Eclipse Ti-E; Nikon Corporation, Tokyo, Japon).
Pou pwopagasyon nan splenosit, sourit C57BL / 6 yo te euthanized pa dislokasyon nan matris, ak larat yo te izole. Yo te fè sispansyon yon sèl selil la epi yo te simen splenosit nan 96-plak byen nan yon dansite 1x105 selil/pou nan 100 µl RPMI-1640 mwayen, epi yo trete yo ak konsantrasyon diferan. (0, 200, 400, 600, ak 800 µg/ml) CTPG-W pou 24, 48 ak 72 èdtan nan 37˚C ak 5 pousan CO2. Pwopagasyon splenosit yo te mezire pa tès MTT, dapre pwotokòl ki endike anwo a. Endèks eksitasyon=ODtrete/Opa trete.
Mezi apoptoz ak sik selilè. Selil Eca{{{0}} yo te kiltive nan asyèt 6{0 mm nan yon dansite 2.5x1{05 selil/asyèt pou 24 èdtan epi yo te trete ak diferan konsantrasyon ({{31} }, 200, 400, 600, ak 800 µg/ml) CTPG-W oswa 0.4 pousan DMSO pou 24 èdtan nan 37˚C ak 5 pousan CO2. Selil yo te ranmase ak tache ak yon Annexin V-fluorescein isothiocyanate (FITC)/Propidium iodide (PI) Apoptosis Deteksyon twous (Shanghai Shengsheng Biotechnology Co, Ltd, Shanghai, Lachin), dapre pwotokòl manifakti a. Echantiyon yo te kolekte pa flow cytometry (BD FACSCalibur; BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) ak analize pa FlowJo 7.6 (Tree Star, Inc., Ashland, OSWA, USA). Pou analize efè CTPG-W sou sik selil la, yo te simen 2.5x105 Eca-109 selil yo nan plat kilti 60 mm epi yo te trete ak CTPG-W (0, 100, 200, ak 400 µg/ml) oswa 0.4. pousan DMSO pou 24 h a 37˚C ak 5 pousan CO2. Tout selil yo te rekòlte epi lave de fwa ak glas PBS (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.), Lè sa a, fiks nan 70 pousan etanòl glas frèt nan 4˚C pou 30 min. Apre lave de fwa ak glas PBS frèt, selil yo te resuspende nan 300 µl PI/RNase tanpon tach (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) pou 10 minit nan tanperati chanm. Yo te analize distribisyon sik selil la ak lojisyèl ModFit LT 3.0 pa flow cytometry (BD FACSCalibur).
Analiz de potansyèl manbràn mitokondriyo (Δψm) ak espès oksijèn reyaktif (ROS). Pou analize Δψm yo, yo te trete selil Eca{{{0}} ak CTPG-W (0, 400, 600 ak 800 µg/ml) oswa 0.4 pousan DMSO pou 24 h nan 37˚C ak 5 pousan CO2, ak tache ak twous tès potansyèl manbràn mitokondriyo ak JC-1 (Beyotime Institute of Biotechnology, Shanghai, Lachin), dapre pwotokòl manifakti a, pou 20 min nan 37˚C. . Apre lave de fwa ak tanpon lave JC-1 (Beyotime Institute of Biotechnology), echantiyon yo te resuspende ak 300 µl tanpon lave JC-1 epi analize pa sikometri koule (BD FACSCalibur). Yo te obsève fluoresans lank JC-1 nan selil Eca-109 tou ak yon mikwoskòp fliyoresan Envèse (agrandisman, x200; Nikon Eclipse Ti-E). Pou analiz ROS, selil Eca-109 yo te trete ak CTPG-W (0, 400, 600, ak 800 µg/ml) pou 2, 4, 6, 12, ak 24 èdtan, epi yo tache ak espès oksijèn reyaktif. Twous Test (Beyotime Institute of Biotechnology), dapre pwotokòl manifakti a, pou 20 minit nan 37˚C. Apre lave twa fwa ak PBS frèt, echantiyon yo te kolekte pa flow cytometry (BD FACSCalibur) epi analize pa lojisyèl FlowJo 7.6.
Aktivite radikal 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). Aktivite radikal gratis CTPG-W te detèmine ak yon tès radikal gratis DPPH dapre pwotokòl la pibliye ak yon modifikasyon minè, kòm metanol te ranplase ak etanòl pou fonn DPPH (25,26). Pou mezi nan eta estab, yo te melanje 150 µl DPPH (100 mmol/l) nan etanòl ak diferan konsantrasyon CTPG-W (25, 50, 75, 100, 250, 300, 400, 500, ak 600 µg/ml) nan 50 µl PBS, epi enkube nan fè nwa a pou 30 min nan tanperati chanm. Absorbans nan 517 nm te detekte nan prezans ak absans CTPG-W. Yo te itilize yon total de 50 µl Vitamin C kòm kontwòl pozitif. Yo te kalkile aktivite radikal DPPH la ak fòmil la: Scavenging (pousan)=[1-(Yon echantiyon-Ablank)/A0] x100, kote Ablank se absòbe kontwòl la (san DPPH), Yon echantiyon se absorpsyon echantiyon an epi A0 se absorpsyon PBS ak DPPH.
Analiz Western blot. Selil Eca{{{0}} yo te trete ak CTPG-W ({0, 200, 600 µg/ml) oswa 0.4 pousan DMSO pou 24 èdtan nan 37˚C ak 5 pousan CO2. Sa ki annapre yo lave de fwa ak PBS, selil yo te lysed nan Radioimmunoprecipitation Assay Lysis tanpon (Beijing ComWin Biotech Co, Ltd, Beijing, Lachin) pou 20 min sou glas. Apre santrifugasyon nan 10,000 xg pou 10 min nan 4˚C, yo te kolekte supernatant yo, epi konsantrasyon pwoteyin yo te detekte ak yon twous asid bicinchoninic (Thermo Fisher Scientific, Inc.) dapre pwotokòl manifakti a. Western blot analiz te fèt dapre deskripsyon anvan nou an (24). Antikò yo kont kaspas-7 (cat. No. D120077), kaspas-8 (kat. No. D155240), kaspas-9 (kat. No. D220078), B-selil lenfom{ {24}} (Bcl-2)-asosye X (Bax) (cat. No. D220073) ak Bcl-2 (kat. No. D260117), ak anti-sorit IgG-refor peroksidaz (HRP). ) (cat. No. D111050) ak anti-lapen IgG-HRP (cat. No. D110058) te achte nan men BBI Life Sciences (Shanghai, Lachin). Antikò yo kont kaspas-3 (cat. No. E-AB-10050) ak kaspas aktif{-3 (kat. No. E-AB{-22115) te achte nan men Elabscience ( Wuhan, Lachin). Lòt antikò kont caspase-7 (cat. No. 9492), poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) (kat. No. 9542), cytochrome c (cat. No. AC909), c-Jun NH{ {48}}terminal kinase (JNK) (cat. No. 9252S), ak -aktin (cat. No. 58169) yo te jwenn nan Cell Signaling Technology, Inc. (Danvers, MA, USA). Tout antikò prensipal ak segondè yo te dilye nan 1:1, 000. Antikò prensipal yo te enkubate nan 4˚C lannwit lan epi antikò segondè yo te enkubate nan 37˚C pou 1 èdtan.
Pwoteyin sib yo te detekte lè l sèvi avèk yon twous tès kimiluminesans amelyore (Beyotime Institute of Biotechnology), dapre pwotokòl manifakti a.
Analiz estatistik. Siyifikasyon estatistik te kalkile pa yon sèl-fason analiz de divèjans ak tès post hoc Tukey a ak rezilta yo te analize lè l sèvi avèk GraphPad Prism 5. 0 lojisyèl (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) nan mitan gwoup tretman ak kontwòl. Tout done yo te prezante kòm mwayèn ± devyasyon estanda. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
Cistanche tubulosa phenylethanoid glikozid(CTPG)
Rezilta yo
CTPG-W siprime kwasans selil Eca-109 yo. Konpozan yo nan CTPG-W yo te kalifye ak quantifier pa HPLC (Fig. 1), ki te konpare ak estanda yo nan echinacoside ak acteoside. Dapre tan retansyon pik yo ak zòn pik yo, CTPG-W te genyen 39.16 pousan nan echinacoside ak 2.44 pousan nan acteoside. Premyèman, yo te detèmine efè CTPG-W sou viabilite selil Eca-109 ak yon tès MTT. CTPG-W te fonn nan DMSO nan 200 mg/ml epi dilye ak mwayen RPMI-1640 ki gen 10 pousan FBS chalè-inaktive nan konsantrasyon endike yo. Selil Eca-109 yo te trete ak CTPG-W epi yo te analize viabilite selil yo ak yon tès MTT nan pwen tan ki endike yo. Tretman CTPG-W redwi siyifikativman viabilite selil Eca-109 nan yon fason ki depann de dòz ak tan (P<0.001; fig.="" 2a).="" the="" morphology="" of="" eca-109="" cells="" was="" observed="" with="" an="" inverted="" fluorescence="" microscope="" (magnification,="" x200)="" following="" ctpg‑w="" treatment="" for="" 24="" h,="" which="" changed="" notably="" in="" a="" dose-dependent="" manner,="" with="" the="" cells="" shrinking="" and="" becoming="" round="" following="" ctpg-w="" treatment="" (fig.="" 2b).="" these="" results="" indicate="" that="" ctpg-w="" suppresses="" the="" growth="" of="" eca-109="" cells.="" the="" effect="" of="" ctpg-w="" on="" the="" proliferation="" of="" splenocytes="" was="" also="" detected="" with="" an="" mtt="" assay.="" ctpg-w="" significantly="" promoted="" the="" proliferation="" of="" splenocytes="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" (fig.="" 2c),="" indicating="" that="" it="" has="" no="" cytotoxic="" effect="" on="">
CTPG-W pwovoke apoptoz nan selil Eca-109 yo. Pou envestige si CTPG-W te siprime kwasans selil Eca-109 atravè endiksyon apoptoz oswa nekwoz, selil yo te trete ak diferan konsantrasyon CTPG-W. Apre 24 èdtan, yo te detekte apoptoz ak nekwoz selil Eca-109 ak tach Annexin V/PI. Jan yo montre nan Fig. 3A, selil Annexin V-/PI plis yo te fèmen kòm selil nekrotik, ak selil Annexin V plis / PI plis ak Annexin V plis / PI- yo te gated kòm selil apoptotik. CTPG-W prensipalman pwovoke apoptoz selil Eca-109 nan yon fason ki depann de dòz la, byenke selil Eca-109 nekrotik yo te ogmante tou siyifikativman anba tretman 600 ak 800 µg/ml CTPG-W (P).<0.001 at="" 600="" µg/ml="" and=""><0.05 at="" 800="" µg/ml).="" consistently,="" the="" levels="" of="" pro-apoptotic="" bax="" and="" anti-apoptotic="" bcl-2="" in="" eca-109="" cells="" were="" upregulated="" and="" downregulated,="" respectively,="" upon="" ctpg-w="" treatment="" (fig.="" 3b).="" the="" results="" indicated="" that="" ctpg-w="" primarily="" inhibited="" the="" growth="" of="" eca-109="" cells="" through="" the="" induction="" of="">
CTPG-W pwovoke arè sik selilè nan faz S nan selil Eca-109 yo. Twoub nan sik selil kansè a pral siprime kwasans selil ak ankouraje apoptoz (27). Yo te detekte distribisyon sik selil la nan selil Eca-109 ak tach PI apre tretman CTPG-W pou 24 èdtan. Yo te obsève ke selil ki nan faz S la te ogmante epi selil ki nan faz G0/G1 yo te endike yon diminisyon siyifikatif an jeneral sou tretman CTPG-W (P).<0.05; fig.="" 4),="" indicating="" that="" ctpg-w="" arrests="" the="" eca-109="" cell="" cycle="" at="" the="" s="">
CTPG-W diminye Δψm ak pwovoke liberasyon cytochrome c. Apoptoz ka pwovoke pa yon chemen depandan mitokondriyo (28,29). Manm pro-ak anti-apoptotik nan fanmi pwoteyin BCL-2 sèvi wòl enpòtan nan règleman an nan entegrite manbràn mitokondriyo (30,31). Apre tretman CTPG-W pou 24 èdtan, Δψm la te evalye lè l sèvi avèk tach JC-1. JC-1 total (fluoresans wouj detekte nan FL-2) pral dezentegre nan monomè (fluoresans vèt detekte nan FL-1) lè Δψm ap diminye (32). Jan yo montre nan Fig. 5A, frekans FL-1 plis FL-2-/plis selil yo ogmante anpil nan yon fason ki depann de dòz la, sa ki endike ke Δψm selil Eca-109 yo diminye. Chanjman fliyoresans nan selil Eca-109 yo te obsève tou ak yon mikwoskòp fliyoresan Envèse (figi 5B). Avèk ogmantasyon konsantrasyon CTPG-W, fliyoresans wouj la diminye ak fliyoresans vèt la ogmante, ki konsistan avèk done ki soti nan sitometri koule. Li te tou obsève ke nivo a cytochrome c nan cytosol la te miyò ogmante (figi 5C), ki se yon rezilta nan yon rediksyon nan Δψm. Sa a ranfòse konklizyon ki soti nan konte ogmante FL-1 plis FL-2-/plis selil ki Δψm diminye kòm rezilta tretman CTPG-W. Yo te rapòte ke JNK ka kontwole aktivasyon fanmi pwoteyin BCL-2 ki lakòz liberasyon cytochrome c (33-35). Li te detèmine tou ke nivo JNK te miyò regilasyon apre tretman CTPG-W (Fig. 5C). Rezilta yo endike ke CTPG-W ka pwovoke apoptoz selil Eca-109 atravè yon chemen ki depann de mitokondriyo.
Efè CTPG-W sou jenerasyon ROS intraselilè. ROS te kapab redwi Δψm pou pwovoke apoptoz (36). Pou envestige si CTPG-W ka ogmante pwodiksyon ROS, yo te trete selil Eca-109 ak diferan konsantrasyon CTPG-W. Selil yo te kolekte nan pwen tan ki endike yo epi yo tache ak DCFH-DA. Pwodiksyon ROS intraselilè nan selil Eca-109 yo te detèmine pa sikometri koule. Jan sa montre nan Fig. 6A, 800 µg/ml CTPG-W ogmante siyifikativman pwodiksyon ROS soti nan 2-6 h ak diminye soti nan 12-24 h. Anplis de sa, 400 µg/ml CTPG-W ogmante siyifikativman pwodiksyon ROS soti nan 12-24 h. Anplis de sa, 200 µg/ml CTPG-W pa t 'miyò chanje pwodiksyon ROS. Chanjman dinamik pwodiksyon ROS yo ka asosye ak apoptoz selil Eca-109. Li te detèmine tou ke CTPG-W te gen aktivite gratis radikal (figi 6B), ki ka asosye ak pwodiksyon ROS diminye nan selil Eca-109 trete ak 800 µg/ml CTPG-W apre 12 èdtan.
CTPG-W kontwole aktivite caspase-3, caspase-7, caspase-9 ak PARP. Liberasyon cytochrome c akòz rediksyon Δψm ka aktive proteaz caspase yo pou pwovoke apoptoz (29,30,37). Apre tretman CTPG-W pou 24 èdtan, aktivasyon caspase -3, 7, 8, 9, ak PARP te detekte pa analiz Western blot. Konpare ak kontwòl la, nivo cleaved-caspase-9, cleaved-caspase-7, cleaved-caspase-3, ak cleaved-PARP, men se pa nivo cleaved-caspase{{ 20}}, yo te upregulated pa tretman CTPG nan yon fason ki depann de dòz (figi 7). Rezilta sa yo te endike ke CTPG-W redwi Δψm ak ankouraje lage cytochrome c pou aktive caspases ki pwovoke apoptoz selil Eca-109 yo.
Cistanche tubulosa ekstrè
Diskisyon
CHM tradisyonèl yo ta ka pwovoke apoptoz nan selil kansè nan èzofaj atravè diferan chemen, ki gen ladan reseptè lanmò extrinsèques, intrinsèques mitokondriyo ak endoplasmik retikul estrès chemen (29). Etid anvan nou an te demontre ke CTPG, kòm pi gwo eleman nan C. tubulosa, anpeche kwasans selil melanom B16-F1{0 atravè endiksyon apoptoz atravè yon chemen ki depann de mitokondriyo (24). Nan etid sa a, yo te envestige efè antitumoral CTPG-W sou selil Eca-109 epi yo te detèmine ke CTPG-W te siprime kwasans selil Eca-109, pwovoke apoptoz, ak arete sik selilè, redwi Δψm, ogmante liberasyon cytochrome c ak aktive caspases. CTPG ak CTPG-W ta ka pwovoke apoptoz ak arè sik selil nan selil kansè yo. Sepandan, mekanis egzat yo diferan akòz diferan konpozan CTPG (26.64 pousan echinacoside, 10.19 pousan acteoside, ak 1.71 pousan isoacteoside) ak CTPG-W (39.16 pousan echinacoside ak 2.44 pousan acteoside). CTPG te arete selil B16-F10 nan faz G0/G1, men CTPG-W te arete selil Eca-109 nan faz S (24). Pwodiksyon ROS te ogmante depann de dòz la pa CTPG, men li te endike yon chanjman nan yon fason ki depann de tan pa yon gwo dòz CTPG-W, ki te ogmante anpil nan kòmansman tretman CTPG-W (2-6 h) ak diminye anpil apre 12 èdtan, konpare ak kontwòl la. Yon rezon posib se ke eleman nan pi gwo nan CTPG-W se echinacoside. Yon kantite etid rapòte ke echinacoside ta ka anpeche pwodiksyon ROS ak apoptoz ROS-induit pou egzèse efè neuroprotective ak anti-aje li yo (38-40). Menm jan an tou, yo te obsève aktivite radikal gratis nan etid la. Se poutèt sa, yo te espekile ke kèk eleman, ki gen ladan verbascoside, iso-verbascoside, ak salidroside nan yon gwo dòz CTPG-W ta ka imedyatman pwovoke jenerasyon ROS lakòz apoptoz nan selil Eca-109 (41,42), ak Lè sa a ROS te scavenged pa echinacoside. Yon lòt rezon posib pou diferans ki genyen nan pwodiksyon ROS pa CTPG ak CTPG-W se ke liy selil diferan yo te itilize nan etid sa a ak yon etid anvan (24). Dong et al (43) te rapòte ke echinacoside ta ka pwovoke apoptoz nan selil kansè kolorektal imen SW480 atravè jenerasyon domaj ADN oksidatif san yo pa ogmante nivo ROS.
Tretman CTPG-W redwi Δψm ak lakòz liberasyon cytochrome c, ki ankouraje klivaj caspase -9 (28). Toujou, nivo cleaved-caspase-9 yo te ogmante pa tretman CTPG-W. Ansuit, kaspas aktif -9 ka aktive kaspas -3 pou pwovoke apoptoz (44). Nivo cleaved-caspase-3 yo te ogmante tou pa tretman CTPG-W. Sepandan, caspase -8 pa te aktive pa CTPG-W, ki endike ke chemen an reseptè lanmò extrinsèques pa te enplike nan apoptoz la pwovoke pa CTPG-W. Obsèvasyon sa yo endike ke CTPG-W pwovoke apoptoz nan selil Eca-109 atravè aktivasyon an nan yon chemen depandan mitokondriyo.
PARP sèvi wòl enpòtan nan estabilite jenomik epi yo ka koupe pa kaspas aktif yo, patikilyèman kaspas -3 ak -7 (45). Yo te detèmine ke tretman CTPG-W aktive caspase-3 ak -7, ki ka cleve PARP pou anpeche reparasyon ADN ak lakòz apoptoz.
CTPG-W tou depann de dòz ak tan-yo siprime kwasans selil epatoselilè BEL-7404 (done ki pa pibliye). Malgre ke CTPG-W anpeche kwasans selil Eca-109 ak BEL{-7404, li ankouraje pwopagasyon splenosit, ki ka akòz kontni an nan polisakarid (~50 pousan) nan CTPG-W (46). ). Menm jan an tou, yon kantite etid te rapòte ke polisakarid ka ankouraje pwopagasyon splenosit (46-49). Nan modèl sourit la, li te detèmine ke CTPG-W ogmante siyifikativman endèks larat la, konpare ak gwoup kontwòl la, men li pa afekte pwa kò a ak lòt endèks ògàn yo ki gen ladan kè, fwa, ren, ak poumon (done ki pa pibliye), ki endike ke CTPG-W pa gen okenn efè sitotoksik sou selil nòmal yo.
Ansanm, done yo endike ke CTPG-W anpeche kwasans selil Eca-109 pa endiksyon apoptoz atravè yon chemen ki depann de mitokondriyo.
benefis cistanche: anti-apoptoz
Rekonesans
Otè yo ta renmen remèsye Dr Jianhua Yang (Baylor College of Medicine) pou polisaj maniskri a.
Finansman
Etid sa a te sipòte pa 13yèm senk ane Plan pou kle disiplin Biyoloji òf pwojè (sibvansyon no. 17SDKD0202), Xinjiang Nòmal Inivèsite ak laboratwa kle nan aplikasyon espesyal anviwònman divèsite biyolojik ak règleman nan Xinjiang (sibvansyon non. XJTSWZ-2017-04) bay JL ak Sibvansyon Fondasyon Nasyonal Syans Natirèl Chinwa (sibvansyon nimewo 31760260) bay XW.
Disponibilite done ak materyèl
Done ak materyèl yo itilize ak analize pandan etid sa a yo disponib nan men otè ki koresponn lan sou demann rezonab.
Kontribisyon otè yo
CF, AA, YY, ak QC fè eksperyans yo. LX, JLv, ak XW analize done yo ak figi yo prepare. JinyuL ak JinyaoL te fèt pwojè a e li te ekri maniskri a.
Apwobasyon etik ak konsantman pou patisipe
Tout eksperyans bèt yo te apwouve pa Komite a sou Etik Eksperyans Animal nan Xinjiang kle laboratwa nan resous byolojik ak Jeni Jenetik (apwobasyon, pa gen okenn BRGE-AE001; Xinjiang University).
Konsantman pasyan an pou piblikasyon
Pa aplikab.
Enterè konpetisyon
Otè yo deklare ke yo pa gen okenn enterè konpetisyon.
Referans
Wu CR, Lin HC, ak Su MH: Ranvèse pa akeuzEkstrè Cistanche tubulosasoti nan defisi konpòtman nan maladi alzayme-tankou rat modèl: enpòtans pou depo amiloid ak fonksyon santral nerotransmeteur. BMC Complement Altern Med 14: 202, 2014.
Li J, Aspire A, Gao L, Huo S, Luo J ak Zhang F:Phenylethanoid glikozid soti nan Cistanche tubulosaanpeche kwasans selil B16-F10 ni an vitro ni an vivo pa endiksyon apoptoz atravè Pathway ki depann de mitokondri yo. J Kansè 7: 1877-1887, 2016.
Brand-Williams W, Culver ME, ak Berset C: Sèvi ak yon metòd radikal gratis pou evalye aktivite antioksidan. LWT-Food Sci Technol 28: 25-30, 1995.
