Règleman kowòdone nan metabolis sistemik ak triptofan nan ren pa transpòtè dwòg yo OAT1 ak OAT3

Jeffry C. Granados¹, Anne Richelle², Jahir M. Gutierrez¹, Patrick Zhang³, Xinlian Zhang⁴, Vibha Bhatnagar⁵, Natan E. Lewis^1,2,6, ak Sanjay K. Nigam^2,7,*

^{Kontakte:joanna.jia@wecistanche.com}

eksperyans cistanche

Ki jan ògàn yo santi metabolit sikile yo se yon kesyon kle. Isit la, nou montre ke transpòtè aniyon òganik milti espesifik nan dwòg, OAT1 (SLC22A6 oswa NKT) ak OAT3 (SLC22A8), jwe yon wòl nan sans ògàn. Analiz metabolomik nan serom nan sourit knockout Oat1 ak Oat3 revele chanjman nan dérivés triptofan ki enplike nan metabolis ak siyal. Plizyè nan metabolit sa yo sòti nan mikrobiom nan zantray epi yo enplike kòm toksin uremik nankwonikrenmaladi. Entèraksyon dirèk ak transpòtè yo te sipòte ak tès transpò ki baze sou selil yo. Pou evalye enpak pèt fonksyon OAT1 oswa OAT3 sou ren an, yon ògàn kote transpòtè sa yo trè eksprime, done transcriptomic knockout yo te trase sou yon modèl enfòmatik ki baze sou "tach metabolik" ki evalye plis pase 150 fonksyon selilè. Malgre chanjman ki fèt nan metabolit triptofan nan tou de knockouts, sèlman nan knockout Oat1 yo te ogmante plizyè fonksyon selilè ki gen rapò ak triptofan. Kidonk, prive de kapasite pou pran kynurenine, kynurenate, anthranilate, ak N-pou-mylanthranilate atravè OAT1, ren an reponn pa aktive pwòp chemen biosentetik ki gen rapò ak triptofan. Rezilta yo sipòte teyori teledeteksyon ak siyal, ki dekri kijan transpòtè "dwòg" ede optimize nivo metabolit yo ak molekil siyal yo lè yo fasilite diskisyon ògàn yo. Depi OAT1 ak OAT3 inibe pa anpil dwòg, done yo implique potansyèl pou entèraksyon dwòg-metabolit. Vreman vre, tretman nan imen ak probenecid, yon OAT-inibitè yo itilize nan trete gout, elve sikile metabolit triptofan. Anplis de sa, bay ajans regilasyon yo rekòmande dwòg yo teste pou OAT1 ak OAT3 obligatwa oswa transpò, li swiv ke metabolit sa yo ka itilize kòm byomarkè andojèn pou detèmine si kandida dwòg kominike avèk OAT1 ak / oswa OAT3.

Transpòtè anyon òganik OAT1 (SLC22A6, orijinèlman NKT (1)) ak OAT3 (SLC22A8, orijinèlman ROCT (2)) yo jwenn nan tibil proximal la.renak choroid plexus nan sèvo a ak kontwole distribisyon an fizyolojik ak eliminasyon nan anpil dwòg ak toksin nan anviwònman an kòm byen ke metabolit andojèn tankou -ketoglutarate, prostaglandin, ak urat (3, 4). Anplis de sa, OAT ede kontwole nivo pwodwi natirèl enjere ak konpoze mikwòb ki sòti nan zantray (egzanp, epicatechin, 3-indoxyl sulfat, p-cresol sulfat) (5, 6).

OAT1 ak OAT3, manm fanmi SLC22, se pami transpòtè dwòg ki pi byen koni. Gwoup transpòtè dwòg sa a gen ladan lòt manm SLC (solute carrier) ak superfamilies ABC (ATP-binding cassette) (7, 8). Gen anpil literati sou wòl pharmaceutique ak toksikolojik transpòtè sa yo, men fonksyon andojèn pwoteyin sa yo evolisyonèman konsève, osi byen ke rezo regilasyon kote yo patisipe, yo sèlman kòmanse karakterize (9). Transpòtè milti-espesifik sa yo enfliyanse anpil aspè nan fizyoloji ak fizyoloji, gen anpil chans lè yo fonksyone nan konbinezon ak transpòtè mono-oswa oligo-espesifik. Twa egzanp fizyolojik byen karakterize yo se wòl OAT1, OAT3, URAT1, ak ABCG2 nan gout (10), wòl OAT1 ak OAT3 nan akimilasyon toksin uremik ki asosye ak kwonik.renmaladi (CKD) (11, 12), ak fanmi an SLC22 nan egirenblesi (13).

Akòz etalaj la vas nan ti konpoze anyon òganik transpòte pa OAT1 ak OAT3, yon pakèt ksenobiotik ak molekil andojèn ka li posib fè konpetisyon pou aksè ak clearance ren pa transpòtè OAT sa yo (14, 15). Sa a gen enplikasyon enpòtan paske anpil nan metabolit yo, ki gen ladan sa ki soti nan mikrobyom nan zantray ak transpòte pa OAT1 ak OAT3, kontwole fizyoloji andojèn epi yo te lye nan devlopman nan maladi klinik, tankou CKD, sendwòm metabolik, ak dyabèt (14, 16, 17). Pa egzanp, kantite CMPF (3-carboxy-4-methyl-5-propyl-2- furan propanoic acid), yon substra OAT3, nan sikilasyon an te gen rapò ak dyabèt. CMPF se yon metabolit asid gra furan ki jwenn nan lwil pwason, lwil legim, bè, ak lòt manje ak perturbe fonksyon selil pankreyas, ki mennen nan entolerans glikoz (18, 19). Konsekans potansyèl konpetisyon nan nivo transpòtè ant yon dwòg ak metabolit andojèn transpòte a gen ladan (a) konsantrasyon metabolit yo chanje nan entraselilè paske yon dwòg transpòte bloke antre metabolit nan selil la; (b) chanje konsantrasyon serom nan dwòg la, metabolit la, oswa toude, ki mennen nan ogmantasyon demi lavi ak / oswa nivo metabolit; epi (c) metabolis sistemik ki chanje ki soti nan efè kaskad distal sou plizyè chemen metabolik ki depann de OAT1 oswa OAT3 oswa toude.

Nou te aplike yon apwòch byoloji sistèm ki te itilize metabolomik ak done transcriptomic ki soti nan sourit Oat1 ak Oat3knockout (KO) pou analize pi gwo fonksyon metabolik ki enfliyanse pa OAT1 ak OAT3. Done metabolomik serik ki soti nan sourit Oat1 ak Oat3 KO te reprezante enpak transpòtè sa yo genyen sou metabolis sistemik andojèn. Nou itilize done transcriptomic ki soti nanren, ki se sit ekspresyon jèn transpòtè kodaj yo, pou evalye aktivite dè santèn de fonksyon metabolik lè l sèvi avèk analiz metabolik travay. Lè nou fè sa, nou te kapab konplete yon konpreyansyon sou chanjman metabolit ekstraselilè akòz pèt transpò OAT1 oswa OAT3 ak yon analiz de chemen metabolik entraselilè ki afekte yo.

Ansanm, apwòch milti-omik ak analiz byoloji sistèm yo itilize isit la bay yon pòtrè metabolik lokal ak sistemik ak chemen siyal yo module separeman ak ansanm pa OAT1 ak OAT3. Nou montre ke OAT1 pa sèlman kontwole metabolis triptofan sistemikman, men tou jwe yon wòl kle nan chemen metabolik triptofan andedan tisi kote li jwenn. Kidonk, rezilta nou yo endike ke etid nouvo antite dwòg pa ta dwe sèlman konsidere efè entèraksyon dwòg-metabolit (DMI) nan serik la, men tou evalye chanjman potansyèl nan metabolis selilè akòz pèt metabolit foul nan konpetisyon nan nivo transpò a. Nan sipò nan enpòtans imen an nan travay nou an, nou montre ke anpil nan chanjman nan nivo serik metabolit triptofan yo wè nan sourit yo knockout yo obsève tou nan imen apre administrasyon nan probenecid, yon dwòg yo itilize nan trete gout ki inibit OAT1 ak OAT3.

\

benefis gason cistanche

Rezilta yo

Rezime apwòch la an jeneral

Fanmi jèn SLC22 (OATs, OCTs, OCTNs) kode pou transpòtè ki patisipe nan absorption anpil konpoze inik atravè plizyè tisi, menm si anpil nan rechèch la te konsantre sou yon ti ponyen manm (SLC22A1, SLC22A2, SLC22A6, SLC22A8) ki okipe. anpil dwòg komen (20, 21). Sepandan, jèn sa yo trè konsève, ak ortholog nan mouch, vè k'ap manje kadav, pwason, ak oursin lanmè (22); sa a vle di yo gen wòl fizyolojik enpòtan pi lwen pase manyen dwòg. Pou detèmine wòl andojèn OAT1 ak OAT3 nan kontwole metabolis nivo tisi ak òganisman endepandan de wòl yo byen koni kòm transpòtè dwòg ak toksin, nou analize done transcriptomic espesifik tisi yo ak done metabolomik serom (figi 1). Nou konpare done ki soti nan sourit jenetikman ensufizant nan swa Oat1 oswa Oat3 ak kontwòl kalite sovaj yo. Ansanm done sa yo te deja egzamine nan yon pèspektiv chimyoinformatik (23) ak bay yon apèsi laj sou chemen ki afekte yo (24), men isit la nou mete yon anfaz sou wòl espesifik yo nan dispozisyon metabolit triptofan. Paske sa yo de transpòtè yo jwenn nan laren, nou analizerendone transcriptomic lè l sèvi avèk Metabolic Task Analysis, yon metòd byoloji sistèm ki gwoupe jèn dapre wòl kowòdone yo nan byosentèz yon seri limite nan entèmedyè metabolit kle ki soti nan divès entrée metabolit (gade seksyon Metòd pou plis detay). Nou sipòte etid sa yo nan tès transpò vitro; nou sipòte tou enpòtans klinik rezilta nou yo ak done metabolomik imen.

Karakteristik li te ye nan sourit Oat1 KO ak Oat3 KO Prèske tout karakteristik sourit ki manke nan Oat1 oswa Oat3 sanble ak sourit sovaj (25-27) (Tablo 1). Sourit knockout yo solid ak siviv ki konparab ak sourit sovaj yo. Anplis, yo pa montre okenn anomali devlopman oswa kwasans aparan, ak egzamen istolojik ak fizyolojik nan knockouts sa yo divès kalite (ki gen laj ~ 2-8 mwa) revele diferans ti kras oswa pa gen okenn nan kalite sovaj, lòt pase sourit yo Oat3 KO ki gen yon ti kras pi ba san presyon ( 28). Gen yon tandans nan direksyon depozisyon lipid epatik nan Oat1 KO a tou te note men sèlman pou sourit ki gen anpil laj (29).

Sourit knockout transpòtè sa yo te karakterize tou nan yon pwendvi famasi ak toksikolojik (Tablo 2). OAT1 ak OAT3 jwe wòl enpòtan nan manyen divès kalite dwòg ak toksin, tou de anviwònman ak andojèn pwodwi (30-38). Tou de sourit knockout yo te chanje repons a dyurèz bouk ak thiazide akòz enkapasite medikaman sa yo pou jwenn aksè nan lumèn nefwon an—yon pwosesis ki depann de absòpsyon OAT{1-oswa OAT{3-medyatè nan selil tubul proximal la. . Oat1 KO bèt yo pwoteje kont mèki-induit nephrotoxicity akòz yon mank derenabsòpsyon nan konjige mèki. Tou de sourit akimile toksin uremik nan serik la ak ekspoze diminye sekresyon asid urik. Analiz ex vivo nan tisi soti nan swa sourit Oat1 KO oswa Oat3 KO montre redwi absorption nan plizyè antiviral.

Nou te rapòte ke bèt avwàn1-ki gen defisi ka gen redui ekspresyon OAT3 (39). Sepandan, yon kantite etid yo te endike ke enpak fonksyonèl sa a se modès nan pi bon nan eta a fondamantal. Pou egzanp, Oat1 knockout larengen anpil redwi transpò PAH, men pa gen okenn pèt aparan nan transpò nan substra OAT3, estrone silfat (26). Analiz chimyoinformatik idantifye seri pwopriyete molekilè ki fè distenksyon ant metabolit ki chanje nan Oat1 konpare ak sourit Oat3 ensufizant yo (23). Anplis de sa, anbriyonrenkilti ògàn ki soti nan tou de liy sourit transpòte diferan seri antiviral (36-38). Genyen tou diferans ki genyen nan kalite toksin uremik yo jwenn nan Oat1 kont Oat3 KO (34).

Se metabolis triptofan chanje sistemikman nan sourit Oat1 ak Oat3 KO

Pibliye analiz metabolomik nan sourit Oat1 KO ak Oat3 KO sijere chanjman fizyolojik enpòtan nan manyen metabolit andojèn ak pwodwi mikrobiom zantray, ki gen ladan kèk toksin uremik (34, 35). Isit la, nou analize 731 metabolit nan idantite li te ye nan serik la kolekte nan kontwòl ak sourit Oat1 KO. Menm jan an tou, 611metabolites nan idantite li te ye yo te detekte nan serom la soti nan kontwòl ak sourit Oat3 KO.

Pou sourit Oat1 KO, nou te jwenn ke 63 metabolit nan Superpathway asid amine (Tablo Siplemantè S1) te ogmante siyifikativman (p mwens pase oswa egal a 0.05, 54 metabolit, pami yo 12 metabolit). te gen chanjman pli ki pi wo pase 3) oswa tandans nan direksyon siyifikativman ogmante (0.05 Mwens pase oswa egal a p Mwens pase oswa egal a 0.10, nèf metabolit), sijere ke yo se swa substrat OAT1 oswa ke konsantrasyon serom yo depann de sou OAT1. Pou sourit Oat3 KO, nou te jwenn ke dis metabolit nan Superpathway asid amine yo te siyifikativman ogmante, pandan y ap 11 yo te tandans siyifikativman ogmante (Tablo Siplemantè S2). Kòm yon konpleman nan p-valè yo, nou tou kalkile d Cohen a, ki te montre gwosè efè gwo (sòti soti nan 1.76 a 4.17) pou metabolit triptofan. Konfòm ak lòt done famasi ak fizyolojik yo jwenn nan sourit knockout OAT1 ak OAT3 oswa tisi yo ki endike diferans fonksyonèl enpòtan (23, 36, 38), konparezon chanjman nan metabolit serom nan fason Superpath Amino Asid ant Oat1 KO (63 metabolit) ak Oat3 KO (21 metabolit) sourit revele sèlman dis metabolit sipèpoze nan sous-ansanm sa yo (Tablo Siplemantè S3).

Chak metabolit te klase lè l sèvi avèk lojisyèl Metabolon nan youn nan uit Superpathways (Asid amine, idrat kabòn, kofaktè, ak vitamin, enèji, lipid, nukleotid, peptide, ksenobiotik) ak youn nan 90 Subpathways. Nan 17 metabolit ki te akimile anpil nan serik tou de bèt Oat1 KO ak Oat3 KO, kat te fè pati Subpathway Tryptophan Metabolism, sa ki endike ke de transpòtè sa yo gen yon wòl enpòtan pataje nan règleman metabolis sistemik triptofan (figi 2). . Poukont li, Tryptophan Metabolism te pami chemen Sub ki pi rich pou tou de modèl knockout (figi 3). Sèz Figi 3. Metabolis triptofan se youn nan chemen ki pi chanje nan tou de sourit knockout yo. Yon trase vòlkan pou Oat1 KO (n=5) ​​montre metabolit triptofan yo kont tout lòt metabolit yo mezire. B, metabolis triptofan se dezyèm chemen ki pi rich pou metabolit ki wo anpil. C, trase vòlkan pou Oat3 KO (n=3) ki montre metabolit triptofan yo kont tout lòt metabolit yo mezire. D, metabolis triptofan se chemen ki pi anrichi pou metabolit siyifikativman elve ki baze sou analiz subpathway metabolon. Wòl OAT1 ak OAT3 nan metabolis triptofan 4 J. Biol. Chem. (2021) 296 100575Metabolit triptofan yo te mezire nan serom tou de sourit yo, epi 12 yo te chanje anpil nan omwen yon gwoup. Sourit Oat1 KO yo te gen 11 metabolit elve, ki gen ladan youn (N-formylant hranilate) ki pa te mezire nan serom Oat3 KO (Tablo 3). Analiz de Oat3 KO a revele ke sis nan 16 metabolit yo te siyifikativman oswa tandans nan direksyon siyifikativman chanje. Gen kèk nan metabolit sa yo, ki gen ladan sa yo ki rive nan bakteri nan mikwo-flor nan zantray, yo konnen yo gen efè distal sou plizyè lòt ògàn. Pa egzanp, 3-indoxyl silfat asosye ak pwogresyon nanrenmaladi ak sendwòm uremik (12, 40). Done yo endike ke OAT1 ak OAT3 travay ansanm pou kontwole metabolis triptofan sistemik, e poutan yo gen fonksyon espesifik tou nan metabolis triptofan lè yo jere seri distenk metabolit ki afekte diferan reyaksyon byochimik.

Evalyasyon entèraksyon dwòg-metabolit nan imen ki enplike yon dwòg ki anpeche OAT ak metabolit triptofan.

Probenecid, yon dwòg ki itilize pou trete gout, te administre pou moun pou detèmine kout tèm enpak yon wo afinite OAT-obligatwa dwòg sou nivo sikile metabolites. Probenecid gen twa sib byen etabli: SLC22A12 (URAT1, Rst), OAT1, ak OAT3, yo tout se jèn ki gen rapò sere nan gwoup transpòtè anyon òganik nan fanmi SLC22 nan transpòtè solute. URAT1 se yon transpòtè asid urik ki sitiye sou manbràn apical (bò pipi ki fè fas a) nan tib proximal la, kidonk OAT1 ak OAT3, ki se milti-espesifik epi ki eksprime sou bò ki fè fas a san nan tib proximal la, yo espere fè egzèsis yon efè pi pwofon sou metabolom nan serom. Konparezon mezi metabolik sou san an anvan ak 5 èdtan apre dòz la montre gwo chanjman nan Subpathway Metabolis Triptofan (Tablo 4). Akòz platfòm diferan, te gen 22 metabolit nan Sub-chemen sa a, 16 ladan yo te chanje anpil. Katòz metabolit yo te mezire atravè tout twa platfòm ak revele plizyè komen ant sourit yo knockout ak pwobenecid-trete moun (figi 4). Pou egzanp, ogmantasyon nan 3-indoxyl sulfat, kynurenine, N-acetylkynurenine, ak endol laktat yo te obsève nan tou de gwoup sourit knockout ak moun. Sepandan, te gen plis sipèpoze ant sourit Oat1 KO a ak moun ki te trete ak probenecid. Tout uit metabolit ki te siyifikativman elve nan Oat1 KO a te siyifikativman elve tou nan moun yo trete dwòg. Se sèlman serotonin, ki te elve nan sourit Oat3 KO, pa te chanje nan imen.

Sourit yo trete ak yon dwòg ki anpeche OAT montre chanjman nan metabolis triptofan

Kòm yon entèmedyè ant modèl sourit knockout nou yo ak moun, nou trete sourit sovaj ak probenecid, yon dwòg ki byen etabli OAT ki anpeche. Tretman dwòg sa a te mennen nan elevasyon an nan sis metabolit triptofan, ki gen ladan kynurenine, kynurenate, ak endolelaktat (figi 5). Sa yo metabolit yo te elve nan youn oswa toude eksperyans knockout ak pwobenecid-trete moun yo.

Kidonk, rezilta yo an jeneral nan moun ak sourit trete pwobenesid, osi byen ke sourit knockout yo, sipòte wòl OAT1 ak OAT3 nan reglemante nivo sikile metabolit triptofan.

Metabolit triptofan kominike avèk tès transpò in vitro OAT1 ak OAT3 imen Pou konfime rezilta nou yo, nou te fè tès transpò an vitro lè l sèvi avèk selil ki overexpressing imen OAT1 ak OAT3. Anpil metabolit nan Subpathway sa a te teste kont transpòtè sa yo (Tablo 3), men lòt metabolit yo rete enkonu. Analiz transpò pou asid indoleacetic (ILA) revele ke ILA reyaji avèk OAT1 ak OAT3 (IC 50=229.1 ± 74.56 μM, 74.49 ± 23.29 μM respektivman) (Fig. 6). Anplis de sa, serotonin, ki te inikman elve nan Oat3 KO a, kominike avèk sèlman OAT3 nan vitro (IC50=288.2 ± 167.0 μM) (done yo pa montre). Lè sa a, valè IC50 yo te entegre ak valè Km li te ye pou kalkile konstan inhibiteur. Konstan inhibiteur (Ki) pou ILA ak OAT1 te 119.3 μM.

Analiz travay metabolomik knockout ren endike yon wòl esansyèl pou OAT1 nan deteksyon tibil proximal metabolit triptofan.

Nou itilize done microarray ki soti nanrenOat1 KO, Oat3 KO, ak kontwòl kalite sovaj yo pou idantifye kijan chanjman transpò yo enfliyanserenfonksyon metabolik yo. Pou sa ka fèt, nou te itilize yon metòd byoloji sistèm (analiz travay metabolik (41) ki soti nan zouti CellFie) ki predi kijan chanjman nan ekspresyon jèn gen enpak sou yon lis predefini 175 travay metabolik (Tablo Siplemantè S4), ki kouvri sistèm metabolik jeneral yo nan yon. selil (enèji, nukleotid, idrat kabòn, asid amine, lipid, vitamin ak kofaktè, ak metabolis glikan). Jan sa dekri nan Metòd, kalkil yon "sò metabolik travay" pran done transcriptomic ak atribi yon nòt aktivite jèn pou chak jèn. Yo itilize yon modèl metabolis echèl jenomik pou konpile yon lis reyaksyon ki nesesè pou akonpli chak nan 175 travay metabolik yo. Kidonk, analiz transcriptomic ka dirèkteman itilize pou konpare quantitativement aktivite relatif chak fonksyon metabolik nan divès kondisyon yo (egzanp, sovaj-tip kont Oat1 KO, sovaj-tip kont Oat3 KO).

Nou te jwenn ke travay metabolik ki gen rapò ak triptofan yo te komen nan mitan moun ki gen yon gwo diferans ant Oat KO ak sourit sovaj. Ki sa ki te inatandi, sepandan, te ke larenTravay metabolik ki gen rapò ak triptofan te depann de OAT1 men se pa OAT3. Nan sourit Oat1 KO yo, sentèz kynurenine, kynurenate, anthranilate, ak N-pou-mylanthranilate soti nan triptofan te ogmante nòt travay metabolik, pandan ke chak nan travay sa yo te gen yon diminye nòt travay metabolik nan Oat3 KO. Sa a konsistan avèk analiz metabolomik serom yo, ki montre ogmantasyon enpòtan nan nivo kynurenine, kynurenate, anthranilate, ak N-pou-mylanthranilate nan Oat1 KO.

Diskisyon

Yo rekonèt OAT1 ak OAT3 pou wòl yo nan eliminasyon plizyè santèn dwòg (42). Sepandan, etid in vivo ak in vitro nan OAT1 ak OAT3 te montre ke pwoteyin sa yo patisipe nan transpò a nan anpil andojèn ak entesten mikwòb ki sòti metabolit, toksin uremik, molekil siyal, eleman nitritif enjere, toksin endistriyèl, ak pwodwi natirèl (9, 24, 26, 34, 35, 43). Sa a tou parèt yo dwe ka a pou lòt transpòtè dwòg miltispesifik, sijere ke kontribisyon yo nan metabolis andojèn se larjeman underappreciated (44).

Sa yo transpòtè dwòg milti-espesifik yo trè eksprime nan prèske tout tisi epi yo jwe yon wòl patikilyèman kritik nan Figi 4. Metabolit triptofan yo te elve nan sourit knockout Oat ak pwobenecid-trete moun. Yon dyagram Venn nan metabolit triptofan siyifikativman chanje nan sourit knockout ak moun trete ak probenecid. Nan 14 metabolit ki komen nan tout twa platfòm, 12 te siyifikativman elve nan omwen youn nan eksperyans yo. Kat metabolit yo te siyifikativman elve nan chak eksperyans. B, estrikti chimik metabolit yo ogmante nan chak eksperyans: 3-indoxyl sulfat, indolelactate, kynurenine, ak N-acetylkynurenine. C, tablo bwat pou chak metabolit nan moun ki trete pwobenesid yo (n=20), sourit Oat1 KO (n=5), ak sourit Oat3 KO (n=3). Liy nan bwat kare yo endike medyàn lan. Wòl OAT1 ak OAT3 nan metabolis triptofan. Biol. Chem. (2021) 296 100575 7baryè epitelyal ak andotelyal ant san ak lòt likid/lòj kò (pa egzanp, baryè san-sèvo, baryè san-retin, baryè san-CSF, baryè nen-sèvo, baryè san-pipi). Kòm regilatè metabolis sistemik, osi byen ke metabolis lokal nan tisi ekspresyon yo, ki kalite etid ak analiz nou te dekri isit la si yo fè pou tout transpòtè "dwòg", ka radikalman chanje opinyon fizyolojik nou yo sou pwoteyin evolisyonèman konsève sa yo.

Enpòtans pharmaceutique nan klinik transpòtè sa yo se imans, ak ajans regilasyon yo te rekòmande tès depistaj nouvo antite dwòg kont omwen sèt transpòtè dwòg milti-espesifik (OAT1, OAT3, OATP1B1, OATP1B3, OCT2, P-GP, BCRP) pou limite posiblite pou dwòg-. dwòg entèraksyon (DDI)—ka kote de oswa plis dwòg konpetisyon pou aksè a menm transpòtè a. DDIs transpòtè-medyatè ka chanje konsantrasyon nan dwòg yo nan san an, potansyèlman mennen nan efè klinik negatif (45). Lè ou konsidere kantite substrats pou OAT1 ak OAT3, yon fenomèn menm jan an ka rive ant dwòg ak metabolit nan sikilasyon. DMI sa yo gen tou potansyèl pou afekte fonksyon tisi yo, paske metabolit ak molekil siyal yo ka pa kapab antre nan selil la epi egzèse efè yo sou fizyoloji nòmal selilè. Etid la kounye a sipòte posiblite sa a.

Nan analiz metabolomik nou yo nan serom Oat1 ak Oat3 sourit knockout, te gen chanjman ki make nan metabolit ki gen rapò ak triptofan. Ogmantasyon nan nivo sistemik metabolites, akòz absans transpòtè sa yo nan koòdone san an ak laren, leve soti vivan posiblite pou diminye konsantrasyon intracellular nanrenselil tubul proximal yo. Ki jan selil sa yo ka reponn? Nou itilize analiz travay metabolik ki baze sou transcriptomic pou adrese kesyon sa a. Nou idantifye plizyè travay metabolik lokal (ren) ki gen rapò ak triptofan ki afekte pa absans transpòtè yo. Chanjman sa yo nan nòt travay metabolik yo te koze pa ogmantasyon konpansatwa nan ekspresyon jèn metabolik ki asosye ak travay nan yon kontèks deficiency OAT1. Pandan ke anpil wout metabolik yo te sondaj pa tou de metabolomics ak transcriptomics ki baze sou analiz metabolik travay, itilizasyon tou de apwòch yo te bay nou ak Sur inik sou fason sèten transpòtè dwòg patisipe nan kominikasyon ki genyen ant tisi a ak anviwònman an ekstraselilè. Kidonk, alòske tou de transpòtè yo te reglemante metabolit triptofan nan nivo sistemik, travay metabolik ki gen rapò ak triptofan nan ren an te depann sitou sou OAT1.

Rezilta yo endike ke tubul proximal nanren, kote OAT yo jwenn, se pa tou senpleman yon kanal pou eliminasyon ren metabolit triptofan; li santi metabolit triptofan epi li reponn a chanjman nan abondans entraselilè yo. Ansanm, done yo sipòte opinyon ke OAT1 jwe yon wòl kle pa sèlman nan netwaye metabolit ki gen rapò ak triptofan nan sikilasyon an nan ankouraje absòpsyon yo parenmen tou, transpòtè sa a kontwole metabolis intraselilè, sitou metabolis triptofan.

Sa a sipòte pwennvi ke OAT1-medyatè transpò kinurenin, kinurenat, antranilat, ak N-pou-milantranilat enpòtan pourenfonksyon (figi 8). Kat metabolit sa yo fè pati kynurenine subpathway nan degradasyon triptofan, epi yo anpeche kynurenate, yo patisipe nan pwodiksyon enèji selilè atravè sentèz NAD plis (46). Kidonk, li posib ke mank de OAT1 mennen nan metabolis selilè ki gen pwoblèm ki ka, omwen an pati, refè nan pwodiksyon an nan metabolit sa yo.

Prèske tout triptofan enjere yo metabolize nan twa sous-chemin prensipal: kynurenine, serotonin, ak endol (47, 48). Anplis de sa nan wòl li nan pwodwi NAD plis, subpathway kynurenine pwodui metabolit ki gen yon varyete fonksyon nan tou de eta sante ak malad (46, 49). Chemen serotonin la pwodui nerotransmetè a, serotonin, ki gen yon wòl nan anpil pwosesis fizyolojik, sitou kòm yon regilatè fonksyon CNS (50). Subpathway endol la, ki medyatè pa mikrobyom nan zantray, pwodui molekil siyal ki patisipe nan kominikasyon lame-mikwòb (51). Sistemikman, OAT1 ak OAT3 modile byodisponibilite metabolit triptofan nan chak nan twa subpathways yo, menm si pi fò nan metabolit yo soti nan subpathway kynurenine ak endol.

Lè nou konsidere anpil wòl siyal metabolit yo genyen, gen potansyèl pou OAT1 ak OAT3 enfliyanse anpil aspè nan fizyoloji. Pou egzanp, kynurenate aktive GPR35, yon sib dwòg, ak yon GPCR ki enplike nan repons enflamatwa ak maladi kadyovaskilè (52). Anpil nan metabolit triptofan siyifikativman chanje yo tou etabli oswa ligand putatif nan reseptè a idrokarbone aryl (AhR) (Tablo 3), yon regilatè transcription ki eksprime nan prèske tout tisi ki reponn a ksenobiotik (53).

Etid metabolomik de sourit knockout yo te montre ke yon fonksyon andojèn kle nan OAT1 ak OAT3 se kontwole nivo sistemik metabolit triptofan. Kidonk, yon dwòg ki vize OAT1 ak OAT3 ta dwe gen yon enpak menm jan an sou metabolom la. Jan yo te prevwa, potansyèl translasyonèl sourit knockout nou yo kòm modèl DMI yo te fòtman sipòte pa rezilta moun yo trete ak probenecid, yon dwòg ki anpeche OAT ki itilize atravè lemond pou trete gout. Plizyè nan metabolit triptofan yo te elve nan tou de serom nan imen ak sourit yo knockout.

Kidonk, gen potansyèl pou konpoze ki elve nan etid moun ak wonjè yo dwe itilize kòm byomarkè pou antite nouvo dwòg ki ka anpeche OAT1 ak OAT3. Pandan ke modèl sourit knockout yo (ki gen esperans lavi nòmal) ak moun ki trete pwobenesid yo te an sante, kèk nan metabolit ki wo yo se toksin uremik li te ye ki ogmante nan serom moun ki soufri ensifizans renal kwonik epi ki asosye ak rezilta negatif (54). , 55). Sipèpoze metabolit ki enplike nan aspè nan CKD ak etid nou yo sijere ke OAT yo ka jwe yon wòl kle nan manifestasyon CKD oswa pwogresyon li yo, menm si li posib tou pou konsantrasyon metabolit yo ka ogmante akòz pèt sekresyon kòm yon rezilta nan tisi. domaj (56, 57). CKD kapab tou mennen nan echèk miltiògàn, an pati akòz akimilasyon nan toksin uremik, e sa ka an pati akòz absorption nan lòt tisi atravè transpòtè dwòg SLC ak ABC (12, 58).

Chemen metabolis triptofan an mande fonksyon kowòdone plizyè ògàn yo. Triptofan absòbe triptofan, modifye pa fwa a oswa lòt ògàn yo, epi metabolit yo finalman transpòte pa la.ren, an pati nan fonksyon OAT1 ak OAT3. Konvansyonèl, yo konsidere sa tou senpleman kòm yon chemen eliminasyon. Rezilta nou yo, ki endike ke selil nanrenreponn a absans metabolit sa yo ak siyal molekil pa angrenaj pou pwodui yo, sijere otreman. Malgre ke wòl espesifik yo nan larentibil proximal yo mal defini, li klè ke anpil nan entèmedyè ki pwodui yo se nerotransmeteur epi yo gen yon wòl enpòtan nan fonksyon CNS (46, 49, 59, 60). Anplis kominikasyon entè-òganis, metabolis triptofan tou reflete kominikasyon entè-òganis ant lame a ak mikrobiom nan zantray. Vreman vre, serik sourit san jèm yo diminye nivo 3-indoxyl sulfat, indolepropionate, ak serotonin (61). Anplis de sa, etid anvan yo te montre ke nan ren OAT1-selil pozitif, 3-indoxyl sulfat fonksyon nan siyal selil yo nan aktive AhR ak reglemante pwòp sekresyon yo atravè OAT1 (62). Konklizyon nou yo ke metabolit ki sòti nan zantray yo te ogmante nan serom tou de sourit Oat1 KO ak Oat3 KO-ansanm ak demonstrasyon nou ke kèk yo se ligand in vitro, bay plis sipò pou enpòtans transpòtè sa yo nan reglemante kominikasyon ant lame a ak kòmansal. òganis yo. Ansanm, rezilta nou yo aliman ak Teyori Remote Sensing ak Siyal, ki pwopoze ke transpòtè dwòg ak anzim metabolize dwòg patisipe nan kominikasyon entèròganis ak entè-òganis atravè transpò ak modifikasyon ti molekil pou kenbe omeyostazi (63, 64). Kidonk, li enpòtan pou w konprann gam fonksyon fizyolojik andojèn transpòtè dwòg yo nan sistèm nan ak lokalman.

Avèk amelyore done metabolomik, nou idantifye metabolit ki afekte pa absans OAT1 ak OAT3 nan modèl wonjè ak metabolit ki afekte nan anpèchman OAT1 ak OAT3 nan moun ki trete ak dwòg OAT-anpèchman. Gwoup nou an te deja itilize rezo rekonstriksyon metabolik pou predi fonksyon metabolik epi rapòte plizyè chemen pataje ak inik ki reglemante pa OAT1 ak OAT3 (43, 65). Sepandan, etid sa yo te limite pa vèsyon byen bonè nan zouti rekonstriksyon ak anpil ti done metabolomik. Isit la, lè l sèvi avèk yon apwòch diferan, Metabolic Task Analysis mete yon pi gwo anfaz sou wòl OAT1 nan metabolis triptofan intraselilè a.ren. Apwòch nou an ka aplike pou mennen ankèt sou fonksyon andojèn lòt manm fanmi SLC ak ABC epi konstwi rezo separe men ki sipèpoze pou tout transpòtè dwòg sa yo, ki pa sèlman nan sourit yo, men tou nan plen ak vè (20, 66). Reprezantasyon sa yo pral fasilite tou konprann tout mezi DMI yo pou dwòg ki kominike avèk OAT1, OAT3, oswa toude, ki gen anpil chans ale pi lwen pase senp konpetisyon nan nivo transpòtè a.

Pwosedi eksperimantal

Bèt

Tout pwotokòl eksperimantal ki enplike itilizasyon bèt yo te apwouve pa Komite Enstitisyonèl Swen ak Sèvi ak Animal UCSD (IACUC). Tout bèt yo te okipe an akò ak Gid Enstitisyonèl yo sou Itilizasyon Bèt vivan pou rechèch. Granmoun WT, Oat1 KO, ak Oat3 KO yo te loje separeman anba yon sik limyè-fènwa 12-h epi yo te bay aksè ad libitum pou manje ak dlo. Bèt sa yo te dekri nan piblikasyon anvan yo (26, 27). Sourit trete pwobenecid yo te administre yon piki entraperitoneal chak jou nan 200 mg / kg probenecid oswa PBS pou 3 jou anvan sakrifis. Yo te bay piki final la 2 èdtan anvan sakrifis. Ansanm done yo itilize pou analiz sa a tou te dekri pasyèlman (23, 24). Yo te etidye an pati seri done Oat1 KO nan yon pèspektiv chimyoinformatik, men yo pa t fè analiz detaye sou chemen an (23). Yo te analize seri done Oat3 KO a epi sèlman de gwoup yo te konpare (24).

Etid imen ak probenecid

Tout pwotokòl eksperimantal yo te revize ak apwouve pa Konsèy Revizyon Enstitisyonèl la epi respekte Deklarasyon Prensip Etik Helsinki yo. Yo te kolekte echantiyon san antye nan 20 moun (14 fi, sis gason). Laj an mwayèn te 30.85 ± 10.98, ak BMI an mwayèn te 24.18 ± 3.52. Patisipan yo ki pa t ap pran okenn medikaman epi ki te sou rejim vejetaryen pou dire etid la. Yo te administre yon dòz oral nan 1 gram nan probenecid, epi apre 5 èdtan, san antye yo te kolekte ankò. Chak echantiyon te kenbe nan frizè nan -80 degre jiskaske analiz metabolomik.

Metabolomics Echantiyon serom imen yo te imedyatman estoke nan -80 degre epi yo te anbake sou glas sèk bay Metabolon Inc. Echantiyon serom sourit yo te kolekte epi analize, jan sa dekri deja (23, 24). Pou yon ti tan rezime, pou chak echantiyon, Metabolon Inc te fè pwofil metabolomik vize a. Yo te itilize sistèm MicroLab STAR ki soti nan Hamilton Company pou prepare chak echantiyon, epi yo te ajoute plizyè estanda rekiperasyon pou kontwòl kalite. Serom la te presipite ak metanol epi brase ak Glen Mills GenoGrinder 2000 pou retire pwoteyin nan serom la epi lage molekil ki mare nan pwoteyin sa yo. Solisyon ki kapab lakòz yo te separe an kat echantiyon ki pi piti. De yo te analize pa ranvèse-faz (RP) ultraperformance likid chromatografi (UPLC) mas spectrométrie (MS) ak pozitif ion mòd electrospray ionizasyon (ESI). Yon echantiyon te analize pa RP/UPLC-MS/MS ak mòd ion negatif ESI. Yon echantiyon te analize pa HILIC/UPLC-MS/MS. Yo te retire sòlvan òganik la lè w mete chak echantiyon sou yon TurboVap (Zymark).

Estatistik

Pou toude echantiyon imen ak echantiyon sourit, valè kri yo te nòmalize nan volim, log-transfòme, ak valè ki manke yo te ranplase ak valè ki pi ba a obsève pou chak konpoze. Nan echantiyon serom imen yo, yo te detèmine siyifikasyon estatistik lè l sèvi avèk kontras ANCOVA ki enkòpore BMI ak laj. Pou echantiyon serom sourit yo, yo te detèmine siyifikasyon lè l sèvi avèk de-echantiyon t-tès Welch a ak metabolit ki te reyalize siyifikasyon estatistik (p mwens pase oswa egal a 0.05), osi byen ke sa yo ki apwoche siyifikasyon ( 0.05 Mwens pase oswa egal a p Mwens pase oswa egal a 0.10) enkli nan analiz ki vin apre yo. Anrichisman te detèmine lè l sèvi avèk Ekwasyon 1, kote k se kantite metabolit siyifikativman chanje nan yon Subpathway, m se kantite metabolit nan yon Subpathway, n se kantite metabolit siyifikativman chanje nan seri done total la, ak N se kantite metabolit yo. mezire metabolit nan seri done total la.

Analiz travay metabolik

Nou te itilize analiz metabolik travay la, jan yo te aplike nan modil CellFie nan GenePattern, pou quantifier lanan renfonksyon metabolik ak enfliyans nan chanjman transpòtè OAT soti nan done ekspresyon jèn (41) (sa vle di, done mikwo-array ki soti nan ren yo nan Oat1 KO, Oat3 KO, ak kontwòl sovaj yo). Analiz sa a predi aktivite yon koleksyon òganize plizyè santèn travay ki kouvri sèt gwo aktivite metabolik nan yon selil (jenerasyon enèji, nukleotid, idrat kabòn, asid amine, lipid, vitamin ak kofaktè, ak metabolis glikan) dirèkteman nan done transcriptomik lè l sèvi avèk genomic-. modèl echèl nan metabolis imen. Plis espesifikman, kalkil aktivite relatif yon travay metabolik (sa vle di, nòt travay metabolik) depann dabò sou preprocessing nan done transcriptomic ki disponib yo ak atribisyon nan yon nòt aktivite jèn pou chak jèn (67). Modèl echèl jenomik metabolis imen an itilize plis pou idantifye lis reyaksyon ki nesesè pou akonpli chak travay metabolik epi, fè sa, pou idantifye lis jèn ki ka kontribye nan akizisyon yon fonksyon metabolik ki baze sou règ GPR (sa vle di. , Règ reyaksyon Gene Pwoteyin). Se poutèt sa, nòt travay metabolik la kalkile kòm nòt aktivite mwayèn nan tout jèn yo kontribye nan yon fonksyon metabolik. Lè w fè sa, done transcriptomic yo ka dirèkteman itilize pou quantifier aktivite relatif chak fonksyon metabolik nan yon kondisyon espesifik.

Esay transpò in vitro

Anbriyon imenren(HEK)-293 selil ki estab OAT1 ak OAT3 imen (Solvo Biotechnology) grandi pou yo rive nan konfluyans nan Dulbecco's Modified Eagle'sMedium (Invitrogen) ki te konplete ak 10 pousan serom fetis bovin ak 1 pousan penisilin/streptomycin epi konsève nan 5. pousan CO2 a 37 C. Selil ki eksprime OAT1-yo te chwazi nan prezans blasticidin, epi selil ki eksprime OAT3-yo te chwazi nan prezans puromicin. Tou de liy selil yo te teste negatif pou kontaminasyon Mycoplasma. Anvan tès fonksyonèl yo, selil yo te plake sou 96-plak byen, yo te enkube pou 24 èdtan, epi yo te konplete ak medya yo. Eksperyans absorption konpetitif yo te pote soti nan enkubasyon selil yo nan solisyon tanpon ak yon konsantrasyon fiks nan 10 μM6-carboxyfluorescein ak yon konsantrasyon seri dilye nan substra yo pwopoze a kòmanse nan 2 mM. Yo te retire tanpon apre yon 10-enkubasyon nan tanperati chanm, epi selil yo te rense ak DPBS twa fwa. Lè sa a, te evalye fliyoresans FL lè l sèvi avèk yon lektè plak fliyoresan FL. Valè IC50 yo te detèmine lè l sèvi avèk GraphPad Prism 8.

Valè entansite fliyoresan yo te nòmalize pou valè ki pi ba a te fikse a 0 pousan epi valè ki pi wo a te fikse a 100 pousan. Apre nòmalizasyon, done yo te anfòm nan yon modèl ki pa lineyè, epi yo te detèmine IC50 a lè l sèvi avèk Ekwasyon 2.

Lè sa a, Ki te kalkile pou chak metabolit lè l sèvi avèk ekwasyon an Cheng-Prusoff (Ekwasyon 3), ak Km pou selil hOAT1 HEK293 ki sòti nan eksperyans anvan yo (68).

Done disponiblite

Tout done metabolomik ki enpòtan yo genyen nan atik la ak materyèl siplemantè. Done transcriptomic yo disponib sou demann nan men snigam@health.ucsd.edu. ipotèz, sipèvize pwojè a, konsepsyon eksperyans yo, epi ekri ak edite atik la.

Finansman ak enfòmasyon adisyonèl—Travay sa a te sipòte pa yon sibvansyon nan Enstiti Nasyonal Sante (NIH) bay SKN nan Enstiti Nasyonal Syans Medikal Jeneral (NIGMS) (R01GM132938). Sipò pou JCG soti nan sibvansyon fòmasyon nan Enstiti Nasyonal pou Imaging byomedikal ak byojeni (NIBIB) (T32EB009380) ak yon sipleman toR01GM132938. Travay sa a te finanse an pati pa finansman jenere soti nan NIGMS NEL (R35GM119850), Enstiti Nasyonal pou Alèji ak Maladi Enfektye (NIAID) nan NEL (UH2AI153029), yon di Bondye mèsi LIFA pou AR, ak yon di Bondye mèsi pou JMG nan men gouvènman Meksik la ( CONACYT) ak University of California Institute pou Meksik ak Etazini (UC-MEXUS). Kontni an se responsablite sèlman otè yo epi li pa nesesèman reprezante opinyon ofisyèl NIH. Gen kèk figi ki te pwodwi lè l sèvi avèk Biorender. Atik sa a dedye a memwa Vibha Bhatnagar, MD, MPH.

Konfli enterè yo—Otè yo deklare ke yo pa gen okenn konfli enterè ak sa ki nan atik sa a.

Abreviyasyon yo—Abreviyasyon yo itilize yo se: AhR, aryl hydrocarbon receptor; CKD, kwonikrenmaladi; DMI, entèraksyon dwòg-metabolit; ESI, ionizasyon electrospray; HEK, anbriyon imenren; ILA, endol asid acetic; KO, knockout; RP/UPLC/MS, ranvèse-faz ultraperformance likid chromatography-mas-spectrometri.

Cistanche tubulosa anpeche maladi ren, klike la a pou jwenn echantiyon an

Soti nan 1Depatman Bioengineering, 2Depatman Pedyatri, 3Depatman Biyoloji, 4Divizyon Biostatistik ak byoenfòmatik, Depatman Medsin Fanmi ak Sante Piblik, 5Depatman Medsin Fanmi ak Prevantif, 6NovoNordisk Fondasyon Sant pou Biosustainability nan UC San Diego, ak 7Depatman Medsin. University of California SanDiego, La Jolla, Kalifòni, USAEdited

pa Mike Shipston

Referans

1. LopezNieto, CE, Ou, GF, Bush, KT, Barros, EJG, Beier, DR, ak Nigam, SK (1997) Klonaj molekilè ak karakterizasyon NKT, yon pwodwi jèn ki gen rapò ak fanmi transpòtè cation òganik ki prèske sèlman. eksprime nanren. J. Biol. Chem. 272, 6471–6478

2. Brady, KP, Dushkin, H., Fornzler, D., Koike, T., Magner, F., Her, H., Gullans, S., Segre, GV, Green, RM, ak Beier, DR (1999). ) Yon nouvo transporè putatif kat jeyografik nan osteoskleroz (oc) mitasyon epi li pa eksprime nan sourit la mutan OC. Genomics 56, 254–261

3. Riedmaier, AE, Nies, AT, Schaeffeler, E., ak Schwab, M. (2012) òganik transpòtè aniyon ak enplikasyon yo nan pharmacotherapy.Pharmacol. Rev. 64, 421–449

4. Ahn, SY, ak Bhatnagar, V. (2008) Mizajou sou fizyoloji molekilè transpòtè anyon òganik yo. Curr. Opinyon. Nefròl. Hypertens. 17, 499–505

5. Nigam, SK (2018) Fanmi transpò SLC22: Yon paradigm pou enpak transpòtè dwòg sou chemen metabolik, siyal, ak maladi. Ann. Rev. Pharmacol. 58, 663–687

6. Lowenstein, J., ak Grantham, JJ (2016) Renesans enterè nan fonksyon tubulaires ren. Am. J. Physiol. Ren 310, F1351–F1355

7. Govindarajan, R., ak Sparreboom, A. (2016) Transpò dwòg: Avans ak opòtinite. Clin. Pharmacol. La. 100, 398–403

8. Ou, GF, ak Morris, ME (2014) Prefas. Nan Dwòg Transporteurs Molekilè Karakterizasyon ak Wòl nan Dispozisyon Dwòg, 2yèm edisyon. Wiley Ser Drug Disc, Hoboken, NJ. Xix

9. Nigam, SK, Wu, W., Bush, KT, Hoenig, MP, Blantz, RC, ak Bhatnagar, V. (2015) Handling of drugs, metabolites, and uremic toxins parentranspòtè dwòg tubul proximal. Clin. J. Am. Soc. Nefròl. 10, 2039–2049

10. Bhatnagar, V., Richard, EL, Wu, W., Nievergelt, CM, Lipkowitz, MS, Jeff, J., Maihofer, AX, ak Nigam, SK (2016) Analiz ABCG2 ak lòt transpòtè urat nan asid urik omeyostazi nan kwonikrenmaladi: Wòl potansyèl de teledeteksyon ak siyal. Clin.renJ. 9, 444–453 Wòl OAT1 ak OAT3 nan metabolis triptofan

12 J. Biol. Chem. (2021) 296 100575

11. Nigam, SK, and Bhatnagar, V. (2018) Biyoloji sistèm transpòtè asid urik: wòl deteksyon aleka ak siyal. Curr. Opinyon. Nefròl. Hypertens. 27, 305–313

12. Nigam, SK, ak Bush, KT (2019) Sendwòm Uremic nan kwonikrenmaladi: Chanje teledeteksyon ak siyal. Nat. Rev Nephrol. 15, 301–316

13. Saito, H. (2010) Pahophysiological regilasyon nan ren SLC22A òganizasyon transpòtè nan egirenblesi: Enplikasyon farmakolojik ak toksikolojik. Pharmacol. Terapèt. 125, 79–91

14. Lepist, EI, and Ray, AS (2017) Beyond dwòg-dwòg entèraksyon: Efè anpèchman transpòtè sou antibyotik, eleman nitritif, ak toksin. Opinyon ekspè. Dwòg Metab. Toksik. 13, 1075–1087

15. Duan, P., Li, SS, Ai, N., Hu, LQ, Welsh, WJ, and You, GF (2012) Inibitè pwisan nan transpòtè anyon òganik imen 1 ak 3 soti nan bibliyotèk dwòg klinik: Dekouvèt ak karakterizasyon molekilè . Mol. Famasyet. 9, 3340–3346

16. Evers, R., Piquette-Miller, M., Polli, JW, Russel, FGM, Sprowl, JA, Tohyama, K., Ware, JA, de Wildt, SN, Xie, W., Brouwer, KLR, ak Consortium, IT (2018) Chanjman ki asosye ak maladi nan transpòtè dwòg yo ka gen enpak sou farmakokinetik ak/oswa toksisite dwòg yo: Yon papye blan ki soti nan International Transporter Consortium. Clin. Pharmacol. Ther.104, 900–915

17. Masereeuw, R., Mutsaers, HA, Toyohara, T., Abe, T., Jhawar, S., Sweet, DH, ak Lowenstein, J. (2014) Therenak retire toksin uremik: Glomerulus oswa tubul? Semin. Nefròl. 34, 191–208

18. Liu, Y., Prentice, KJ, Eversley, JA, Hu, C., Batchuluun, B., Leavey, K., Hansen, JB, Wei, DW, Cox, B., Dai, FHF, Jia, WP , ak Wheeler, MB (2016) Rapid elevasyon nan CMPF ka aji kòm yon pwen baskil nan devlopman dyabèt. Rep. Selilè 14, 2889–2900

19. Prentice, KJ, Luu, L., Allister, EM, Liu, Y., Jun, LS, Sloop, KW, Hardy, AB, Wei, L., Jia, WP, Fantus, IG, Sweet, DH, Sweeney , G., Retnakaran, R., Dai, FF, and Wheeler, MB (2014) Metabolit asid gra furan CMPF ogmante nan dyabèt ak pwovoke malfonksyònman beta-selil. Selil Metab. 19, 653–666

20. Engelhart, DC, Granados, JC, Shi, D., Saier, MH, Jr., Baker, ME, Jr., Abagyan, R., ak Nigam, SK (2020) Analiz sistèm byoloji revele uit sougwoup transpòtè SLC22, ki gen ladan OAT, OCT, ak OCTNs.Int. J. Mol. Sci. 21, 1791