Potansyèl kosmetik ekstrè ki sòti nan rès endistri lapèch yo: dechè sadin ak ankadreman morui Pati 1

Résumé: Endistri lapèch la jenere yon gwo kantite fatra (20–75 pousan (w/w) nan pwa total pwason an). Rekiperasyon an nan konpoze byoaktif soti nan résidus ak enkòporasyon yo nan pwodui kosmetik reprezante yon opòtinite mache pwomèt epi li ka kontribye nan yon valorizasyon dirab nan sektè a. Nan travay sa a, yo te karakterize ekstrè ki gen anpil pwoteyin ak gwo presyon teknoloji (CO2 superkritik ak dlo subkritik) nan fatra sadin (Sardina pilchardus) ak ankadreman morui (Gadus morhua) yo te karakterize konsènan potansyèl kosmeceutik yo. Aktivite antioksidan, anti-enflamatwa ak anti-bakteri yo te evalye atravè pwodui chimik (essai ORAC), anzimatik (anpèchman elastaz ak tirozinaz), sansiblite antimikwòb (Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, ak Cutibacterium acnes) ak selil ki baze sou (nan keratinocytes-HaCaT). . Ekstrè sadin yo te prezante aktivite anti-bakteri ki pi wo a, epi seksyon an te jwenn lè l sèvi avèk tanperati ekstraksyon ki pi wo (25 0 ◦C) epi san etap degrasaj la te demontre pi ba valè konsantrasyon minimòm inhibitor (MIC) (1.17; 4.6; {{24}). }.59 mg/mL pou K. pneumoniae, S. aureus, ak C. acnes, respektivman). Echantiyon moruy ki te retire nan tanperati ki pi ba (90 ◦C) se te ajan anti-enflamatwa ki pi efikas (yon konsantrasyon 0.75 mg/mL redwi nivo IL-8 ak IL-6 pa 58 pousan ak 47 pousan, respektivman. , relatif nan kontwòl pozitif la). Threonine, valine, leucine, arginine, ak total de protéines contenu nan extraits yo te make pou korelasyon trè ak bioaktivite rapòte yo (R2 pi gran pase ou egal a 0.7). Rezilta sa yo sipòte aplikasyon potansyèl ekstrè ki soti nan dechè endistri lapèch nan pwodui kosmetik ak aktivite byoaktif.

Glycoside nan cistanche ka ogmante tou aktivite SOD nan kè ak tisi fwa, ak siyifikativman redwi kontni an nan lipofuscin ak MDA nan chak tisi, efektivman scavenging divès kalite radikal oksijèn reyaktif (OH-, H₂O₂, elatriye) ak pwoteje kont domaj ADN ki te koze. pa OH-radikal. Cistanche phenylethanoid glikozid gen yon gwo kapasite scavenging nan radikal gratis, yon pi wo kapasite diminye pase vitamin C, amelyore aktivite a nan SOD nan sispansyon espèm, redwi kontni an nan MDA, epi yo gen yon sèten efè pwoteksyon sou fonksyon manbràn espèm. Cistanche polisakarid ka amelyore aktivite SOD ak GSH-Px nan eritrosit ak tisi nan poumon sourit eksperimantal senesan ki te koze pa D-galaktoz, osi byen ke diminye kontni an nan MDA ak kolagen an nan poumon ak plasma, ak ogmante kontni an nan elastin, gen yon bon efè scavenging sou DPPH, pwolonje tan an nan ipoksi nan sourit senesan, amelyore aktivite a nan SOD nan serom, ak retade koripsyon fizyolojik nan poumon nan sourit senesan eksperimantal Avèk koripsyon selilè mòfolojik, eksperyans yo te montre ke Cistanche gen bon kapasite antioksidan. epi li gen potansyèl pou yo dwe yon dwòg pou anpeche ak trete maladi po aje. An menm tan an, echinacoside nan Cistanche gen yon kapasite enpòtan pou elimine radikal gratis DPPH epi li gen kapasite pou elimine espès oksijèn reyaktif epi anpeche degradasyon kolagen an radikal gratis, epi tou li gen yon efè reparasyon bon sou domaj anyon radikal gratis timin.

Klike sou Cistanche Tubulosa Supplement

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Mo kle: valorizasyon rivyè dechè pwason; aktivite antioksidan; aktivite anti-enflamatwa; aktivite antimikwòb; anti-aje; anti-ipèrpigmantasyon; pwodui kosmetik

1. Entwodiksyon

Avèk rechèch konstan pou inovasyon, espesyalman pou engredyan aktif, endistri kosmetik la ap grandi e li te demontre entansyon pou ranplase eleman ki sòti nan petwòl avanse pou pi devan nan konpoze natirèl [1]. Pwopriyete antioksidan engredyan natirèl aktif yo ka ede nan prevansyon plizyè pwoblèm po ki te koze pa estrès oksidatif ak aje [2,3]. Aje po ka pwovoke pa tou de faktè intrinsèques (tankou enflamasyon oswa telomère mantèg) ak ekstrèm (anviwònman) faktè [4]. Aje po a mennen nan pèt kolagen an matirite ak chanjman nan matris ekstraselilè (ECM) ki konpwomèt fonksyon baryè a, sa ki lakòz yon aparans sèk ak sansiblite nan agresè ekstèn, ogmante risk pou maladi po [5]. Pwosesis sa a ka akselere pa plizyè anzim, tankou elastase, matrix metaloproteinases (MMPs), ak hyaluronidases ki ka pwovoke degradasyon ECM [6], oswa menm pa akimilasyon nan espès oksijèn reyaktif sisif (ROS) ki ka konpwomèt fonksyon selil nòmal la. [7]. Faktè anviwònman yo, tankou ekspoze a radyasyon UV, mennen nan jenerasyon gwo kantite ROS ki pwovoke menm repons molekilè ak selilè kòm aje intrinsèques, men ak efè anplifye. Sa ki enpòtan, ROS ka entansifye aktivite a nan anzim ki gen rapò ak aje po oswa pwosesis pigmantasyon po [8,9], e konsa prezans nan antioksidan n jwe yon wòl enpòtan nan jaden an kosmetik.

Nan 2018, FAO te estime konsomasyon pwason nan lemonn nan 20.5 kg pou chak pita [10], ki mennen nan gwo kantite sous-pwodwi, sitou po, ak zo. Résidus pwodwi yo koresponn ak 20-75 pousan (w/w) nan pwa total pwason an, ki kapab lakòz pwoblèm anviwònman an [11,12]. Sepandan, rezidi sa yo toujou genyen yon kantite siyifikatif nan lipid, pwoteyin, ak mineral epi yo ta dwe byen valorize. Nan dènye ane yo, ekstrè ki soti nan fatra ki te pwodwi pa endistri pwason yo te montre pwopriyete aktif tankou antihypertensive, antioksidatif, antimikwòb, neropwotektif, antihyperglycemic, anti-aje, ak anti-enflamatwa [13-19]. Pwason atlantik (Gadus rhea) ak sadin (Sardina pilchardus) se yo ki pami pwason ki pi konsome nan Pòtigal ak trak ki sòti nan résidus li yo te montre pwomèt potansyèl nutraceutical, tankou aktivite antioksidan, antiproliferatif oswa anti-enflamatwa [11,20-22]. Sepandan, depi ploitation ak valorizasyon dechè endistri pwason yo toujou nan yon etap bonè, gen anpil plas pou eksplore opòtinite pou endistri a konvèti fatra sa a nan bioproducts mache ki gen anpil valè, ki gen ladan engredyan kosmetik.

Nan travay anvan yo, nou te eksplore itilizasyon teknoloji segondè presyon (CO2 superkritik ak dlo subkritik), pou izole fraksyon byoaktif nan fatra sadin ak ankadreman morui ak benefis sante pwomèt [11,22]. Pou dechè sadin, nou te demontre ke lè nou aplike yon premye etap ak kabòn sipèkritik (ScCO2) (pou retire fraksyon lipid) ki te swiv pa yon pwosesis ekstraksyon ak dlo subkritik (SW) li te posib jwenn idrolysat pwoteyin ki gen gwo potansyèl antioksidan ak efè antiproliferatif nan selil kansè kolorektal [22]. Ekstraksyon/idroliz dlo subkritik nou te aplike tou pou jwenn ekstrè pwoteyin-, peptides- ak asid amine ki rich nan ankadreman morui epi nou te montre ke pi ba tanperati pwosesis (90 ◦C) favorize ekstraksyon nan konpoze ki gen potansyèl anti-enflamatwa nan yon selil epitelyal entesten imen. modèl [11]. Pifò nan pwoteyin ki prezan nan ekstrè ankadreman mori yo se kolagen an ak fragman kolagen an. Lòt konpoze gen ladan kantite minè nan lipid, sann, ak kèk sik. Ekstrè sadin yo te rich nan peptides ak asid amine, ak lipid, sann, ak sik yo te prezan tou. Piske pwoteyin ki sòti nan pwason ak peptides ka vin yon resous enpòtan pou endistri kosmetik, etid sa a gen pou objaktif pou evalye plis potansyèl aktif ekstrè sa yo ki sòti nan dechè pwosesis pwason ak pwodui ki te koze pa evalyasyon potansyèl kosmetik yo [23] . Pou rezon sa a, yo te aplike yon seri tès chimik, anzimatik ak selil ki baze sou pou eksplore efè antioksidan, antiaje, anti-ipèpigmantasyon, anti-enflamatwa, ak antimikwòb nan echantiyon extrait yo. Etid korelasyon yo te fèt tou pou idantifye prensipal elektè byoaktif ak potansyèl kosmeceutik.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Reyaktif

3, 4-dihydroxy-l-phenylalanine (L-DOPA), djondjon tirozinaz, kochon pankreyas elastase (PPE) tip III, N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (AAAPVN), Tris ({ {11}}amino- 2-hydroxymethyl-propane-1,3-diol), 2,20 -azobis ({2-methylpropionamidine)dihydrochloride (AAPH), ak 20 ,70 -Dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) yo te achte nan men Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Bouyon Mueller Hinton (CAMHB) te achte nan men BD (Sparks, MD, USA). Perfusion sèvo-kè (BHI) te achte nan men Avantor (Radnor, PA, USA). AnaeroGen™ Compact sache yo te achte nan men Oxoid (Hampshire, UK). PrestoBlue™, Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), serom Fetal Bovine ki inaktive chalè (FBS), ak Penicillin-Streptomycin te jwenn nan Invitrogen (San Diego, CA, USA). Liy selilè keratinosit imòtalize moun ki pa tumorigenik HaCaT te jwenn nan Sèvis Liy Selilè (Eppelheim, Almay). Moun IL-8 ak IL-6 Mini TMB ELISA Development Kits yo te jwenn nan Peprotech (London, UK). Tout lòt reyaktif ak solvang yo te itilize nan etid la prezan yo te nan klas analyse epi yo te achte nan men founisè ki disponib.

2.2. Echantiyon yo

Ekstrè yo itilize nan travay sa a se yo menm ki te devlope nan etid anvan nou yo konsantre sou optimize pwosesis [11,22]. Yon ti tan, Pascoal ak Filhos SA (Gafanha da Nazaré, Pòtigal) te founi ankadreman morui e yo te konpoze de zo rèl pwason ak misk ki te kole. Conservas A Poveira SA (Póvoa de Varzim, Pòtigal) te founi fatra sadin, ki fèt ak tèt, epin, ak viscère. Konpozisyon apwoksimatif matyè premyè yo itilize yo te prezante nan travay anvan nou yo [11,22]. Pwoteyin (47 wt pousan) ak sann (39 wt pousan) se te pi gwo eleman nan ankadreman morui, ak ti kantite lipid ak idrat kabòn (2 pousan pwa ak 0.3 pousan pwa, respektivman). Kolagen yo jwenn pi gwo pwoteyin nan ankadreman morui, ak nan ka sa a, li konte pou ca. 65 pousan nan kontni total pwoteyin nan fatra orijinal yo. Kontrèman, sadin se yon pwason lwil, kidonk fatra li yo pi rich nan lipid pase ankadreman morui. Fatra sadin yo te montre yon kontni lipid nan 26 pousan pwa ak yon kontni pwoteyin nan 52 pousan pwa, rès la se sann (17 pousan wt) ak idrat kabòn (3 pousan wt).

Ekstrè nan ankadreman morui (Cf1, Cf2, Cf3, ak Cf4) ak dechè sadin (S1, S2, ak S3) yo te chwazi pou travay sa a te jwenn pa teknoloji segondè presyon nan yon aparèy echèl laboratwa jan yo dekri anvan [11,22]. ,24] lè l sèvi avèk kondisyon yo rezime nan Tablo 1. Yon ti tan, 60 g nan ankadreman morui tè oswa fatra sadin (degras oswa ki pa degras) yo te chaje nan yon reyaktè segondè presyon ki te mete andedan yon fou. Ponp dlo a te chanje sou vitès koule vle (ca. 10 mL / min) ak presyon an te mete nan 100 bar. Le pli vit ke presyon an te rive nan valè sa a, fou elektrik la te chanje sou, ak eksperyans la te kòmanse. Ekstrè diferan yo te kolekte pou 30 min nan diferan tanperati (90-250 ◦C). Ekstrè S1 ak S3 yo te jwenn apre yon pwosesis degrasaj nan fatra sadin pa ScCO2 anvan ekstraksyon SW. Eksperyans ekstraksyon dlo subkritik yo te kopi. Pou chak echantiyon ekstrè, yo te pran 25 mL an triple, lyofilize, epi yo peze pou kalkile pwodiksyon ekstraksyon ki koresponn lan. Done analitik - kontni pwoteyin - yo eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda (SD) nan triplike. Enfòmasyon konsènan karakterizasyon ekstrè sa yo an tèm de kontni pwoteyin, pwofil asid amine, pi gwo konpoze mineral, oswa metal toksik ak lou yo dekri nan travay anvan nou yo [11,22].

Solisyon stock nan Cf1, Cf2, Cf3, Cf4, ak S2 yo te prepare nan Milli-Q H2O nan yon konsantrasyon nan 100 mg / mL. Lòt echantiyon yo, sètadi S1 ​​ak S3, yo te fonn nan DMSO (300 ak 550 mg / mL, respektivman) akòz solubility pi ba yo nan dlo. Yo te jele echantiyon yo epi yo te kenbe yo nan -20 ◦C jiskaske yo itilize plis. Pou tès selilè, echantiyon yo te deja esterilize pa chalè (121 ◦C, 15 min) nan yon otoklav (Tuttnauer 3870 el, Breda, Netherlands).

2.3. Esè Kapasite Radikal Absòbsyon Oksijèn (ORAC).

Yo te fè tès ORAC pou evalye kapasite antioksidan echantiyon yo nan direksyon radikal peroxyl (ROO•), apre metòd devlope pa Huang et al. [25], ak kèk ajisteman jan yo te rapòte deja [26]. Yon ti tan, nan yon 96-mikroplat nwa byen, 150 µL fluorescein disodyòm (0.3 µM) te ajoute nan 25 µL nan dilusyon echantiyon ak enkube pou 10 min nan 37 ◦C. Apre sa, reyaksyon an te inisye pa adisyon 25 µL 2, 20 - Azobis (2-amidinopropane) dihydrochloride (AAPH, 153 mM), ak fluoresans (Ex/Em 485 ± 20/528 ± 20). nm) te mezire pou 40 min nan 37 ◦C nan yon lektè mikwoplak FLx800 fluoresans (FL800 Bio-Tek Instruments, Winooski, VT, USA). Yo te prepare yon koub estanda lè l sèvi avèk 5, 10, 20, 30, ak 40 µM nan (6-idwoksi-2, 5,7,8-tetramethylchroman-2- asid karboksilik (Trolox). )). Tout solisyon yo te prepare nan saline fosfat-tanpon (PBS), 75 mM, pH 7.4. Rezilta yo eksprime kòm mikromol nan kapasite antioksidan ekivalan Trolox pou chak gram ekstrè (µ mol TEAC/g ekstrè).

2.4. Esay anzimatik

2.4.1. Elastase anpèchman tès

Egzamen sa a te baze sou travay Wittenauer et al. [27] ak kèk modifikasyon jan sa dekri deja [6]. Aktivite inhibitor elastaz detèmine pa yon metòd espektrofotometrik lè l sèvi avèk elastaz pankreyas pòsin (PPE) ak N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (AAAPVN) kòm anzim-substra, pa kontwole liberasyon an nan p-nitroaniline nan 41 { {19}} nm. PPE te fonn nan 100 mM Tris (2-amino-2-hydroxymethyl-propane-1,3-diol)-HCl tanpon (pH=8.0) nan yon konsantrasyon 1 mg/mL epi estoke nan 20 ◦C nan aliquot. Jou tès la, yo te pran yon alikòt epi dilye nan tanpon an nan yon konsantrasyon 0.03 U/mL, 10 µL te chaje nan pwi plak mikrotiter yo ansanm ak 100 µL nan tanpon Tris-HCl, ak 30 µL. nan chak echantiyon. Apre 20 min nan pre-enkubasyon nan 25 ◦C, reyaksyon an te inisye pa adisyon a nan 40 µL nan AAAPVN nan substra (0.55 mM). Yo te mezire absorpsyon pou 20 minit apre adisyon AAAPVN nan yon lektè microplate espektrofotomèt BioTek Instruments EPOCH 2. Kalkil yo te fè jan sa dekri nan Ekwasyon (1), kote A kontwòl ak Asample reprezante absòbe a nan 410 nm nan absans oswa prezans echantiyon an, respektivman. Depi yo te itilize DMSO pou fonn echantiyon S1 ak S3, yo te teste sòlvan sa a epi yo te itilize kòm yon kontwòl pou echantiyon sa yo. Yo te evalye potansyèl ekstrè yo pou anpeche elastaz ak ogmante konsantrasyon, pou detèmine relasyon ki depann de dòz epi etabli valè demi-maksimòm konsantrasyon inhibitory (IC50), ki endike kapasite chak echantiyon nan anpèchman aktivite anzimatik nan yon limit 50 pousan.

Tout rezilta yo eksprime kòm valè mwayen IC50 ak limit pi ba ak anwo nan yon entèval konfyans 95 pousan, yo jwenn nan omwen twa eksperyans endepandan.

2.4.2. Egzamen anpèchman tirozinaz

Yo te evalye potansyèl inhibitor tirozinaz ekstrè yo spectrophotometrically lè l sèvi avèk tirozinaz djondjon ak L-DOPA kòm substra a [28]. Tyrosinase konvèti L-DOPA nan dopaquinone, ki pral sikile sekans pou fòme dopachrome. Fòmasyon dopachrome a ka obsève pa mezi absorbans la nan 475 nm. Substra a te ajoute nan anzim nan prezans dilusyon echantiyon yo, nan yon konsantrasyon final 3 0 U/mL tirozinaz ak 2.5 mM L-DOPA. Depi yo te itilize DMSO pou fonn echantiyon S1 ak S3, yo te teste sòlvan sa a epi yo te itilize kòm yon kontwòl pou echantiyon sa yo. Apre enkubasyon nan 37 ◦C pou 30 min, yo te mezire absorbans nan 475 nm sou yon espektrofotomèt mikwoplak BioTek Instruments EPOCH 2. Tout reyaktif yo te prepare nan tanpon sodyòm fosfat (SPB; 0.1 M, pH 6.8), prepare pa melanje sodyòm fosfat dibazik diidrat ak sodyòm fosfat monobazik monoidrat, ak kalkil yo te fè jan sa dekri nan Ekwasyon (1). Tout rezilta yo eksprime kòm valè mwayen IC50 ak limit pi ba ak anwo nan yon entèval konfyans 95 pousan, yo jwenn nan omwen twa eksperyans endepandan.

2.5. Tès sansiblite antimikwòb

Mikwo-òganis sib yo te chwazi pou tès aktivite anti-bakteri yo te bakteri gram-negatif Klebsiella pneumoniae CECT 8453 ak bakteri gram-pozitif Staphylococcus aureus ATCC 6538 ak Cutibacterium acnes ATCC 6919T. Pou K. pneumoniae CECT 8453 ak S. aureus ATCC 6538, yo te fè tès dapre metòd microdilution bouyon direktiv CLSI M07-A10 jan Rodrigues et al te dekri deja. [29]. Nan ti bout tan, yo te distribye solisyon stock ekstrè yo nan yon plak mikwotiter 96-byen wonn ak 2-pliye seri dilye nan bouyon Mueller Hinton ki ajiste nan kalsyòm (CAMHB; BD, Sparks, MD, USA) pou jwenn yon seri konsantrasyon solisyon yo. Yo te prepare inokil la lè l sèvi avèk metòd kwasans lan pou reyalize yon sispansyon omojèn nan yon solisyon saline. Inoculum ajiste a te dilye anplis nan CAMHB pou garanti ke, apre inokulasyon an, chak byen genyen anviwon 5 × 104 CFU. Plak yo te enkube nan kondisyon aerobic nan 37 ◦C pou 16 a 20 èdtan. Pou C. acnes, tès yo te fèt jan sa te dekri deja ak itilizasyon perfusion sèvo-kè (BHI) (Avantor, Radnor, PA, USA) bouyon olye pou yo CAMHB ak pa enkubasyon plak mikrotiter yo pou 70-74 èdtan nan 37 ◦ C nan krich anaerobik ki gen sistèm jenerasyon atmosfè AnaeroGen™ Compact (Oxoid, Hampshire, UK).

Pou chak solisyon stock yo analize, yon kontwòl pozitif (CAMHB oswa BHI ak inoculum dilye), yon kontwòl esterilite mwayen (CAMHB oswa BHI san inokule), ak yon kontwòl esterilite ekstrè (solisyon estrat ki pa inokule 2-pliye nan CAMHB oswa BHI) yo te fèt kòmsadwa. Valè minimòm konsantrasyon inhibitory (MIC) yo te konsantrasyon ki pi ba nan yon echantiyon ki vizib anpeche kwasans mikwòb apre enkubasyon. Lè sa nesesè, yo te konfime valè MIC yo lè l sèvi avèk reyaktif viabilite selil PrestoBlue™ (Invitrogen, San Diego, CA USA) swiv direktiv manifakti a. Yon lòt valè MIC, ki deziyen MIC*, te etabli tou epi defini kòm konsantrasyon ki pi ba nan yon echantiyon kote kwasans bakteri yo te afekte vizyèlman ak diferansye an konparezon ak kontwòl pozitif la. Valè minimòm konsantrasyon bakterisid (MBC) yo te rapòte kòm konsantrasyon ki pi ba nan yon echantiyon ki mennen nan omwen yon rediksyon 99.9 pousan nan konte bakteri solid an konparezon ak inoculum inisyal la ak pou tan enkubasyon egal. Rezilta yo te eksprime kòm yon medyàn nan valè yo jwenn apre twa replike byolojik. Depi yo te itilize DMSO pou fonn echantiyon S1 ak S3, yo te teste sòlvan sa a tou pou asire ke konsantrasyon final la te itilize pa entèfere ak mikwo-òganis sib la, kidonk tès la.

2.6. Esay ki baze sou selil yo

2.6.1. Kilti Selil

Liy selil keratinosit imen HaCaT (CLS, Almay) te kiltive nan yon estanda Dulbecco a modifye Eagle Medium (DMEM) complétée ak 10 pousan (v/v) fetal serom bovine (FBS) ak 1 pousan (v/v) penisilin-streptomycin. Selil yo te regilyèman konsève kòm monokouch nan flakon kilti 75 cm2 epi yo te enkubate nan 37 ◦C ak 5 pousan CO2 nan yon atmosfè imidite.

2.6.2. Sitotoksisite in vitro

Yo te fè tès sitotoksisite dapre travay anvan yo [6]. Yon ti tan, selil HaCaT yo te simen nan yon dansite 1.4 × 105 selil/cm2 nan 96 plak byen. Apre 3 jou, selil yo te enkube ak diferan konsantrasyon chak echantiyon (Cf1; Cf2; Cf3; Cf4; S2—50, 25, 12.5, 6.25, 3.13, 1.56, {{30} }.78, 0.39; S1—3, 1.5, 0.75, 0.38, {{40}}.19, {{51 }}.09, 0.{05, 0.{02; S3—5.5, 2.75, 1.38, 0.69, 0.34, 0.17, 0.09, 0.04 mg/mL) dilye nan mwayen kilti (DMEM mwayen ki gen 0.5 pousan FBS). Puits ki gen selil enkubasyon sèlman ak mwayen kilti complétée ak 0.5 pousan (v / v) nan FBS yo te itilize kòm kontwòl. Kontwòl sòlvan ak 50 pousan dlo oswa 1 pousan DMSO nan yon mwayen kilti yo te fèt tou pou eskli toksisite sòlvan. Apre 24 èdtan nan enkubasyon, yo te evalye viabilite selil la lè l sèvi avèk PrestoBlue® (5 pousan v/v nan mwayen kilti) pou 2 èdtan nan 37 ◦C, 5 pousan CO2, dapre enstriksyon manifakti a. Apre sa, yo te mezire fliyoresans chak pi (Egz./Em. 560 ± 20/590 ± 20 nm) nan yon lektè microplate FLx800 (BioTek Instruments, Winooski, VT, USA). Viabilite selil yo te eksprime kòm pousantaj nan selil solid ki gen rapò ak kontwòl la. Twa eksperyans endepandan yo te fèt an triple.

2.6.3. Aktivite antioksidan selilè

Aktivite antioksidan selilè yo te evalye swivan metòd yo te dekri deja [6,30], ak kèk modifikasyon. Yon ti tan, selil HaCaT yo te simen nan yon dansite 1.4 × 105 selil/cm2 nan 96 plak byen epi yo te kontwole fòmasyon ROS entraselilè lè l sèvi avèk 20,70 -dichlorofluorescein diacetate ( DCFH-DA) kòm yon pwofonde fliyoresan. 72 èdtan apre simen, selil yo te lave ak PBS ak enkubasyon ak konsantrasyon ki pa toksik nan echantiyon yo (0.1875 mg/mL; 0.375 mg/mL; 0.75 mg/mL) plis 25 µM DCFH-DA nan PBS pou 1 èdtan. Imedyatman, selil yo te lave ankò ak PBS ak enkubasyon ak induktè a estrès (600 µM AAPH nan PBS) pou 1 èdtan. Apre sa, fluoresans te mezire nan yon FL800 microplate lektè fluoresans (Bio-Tek Instruments, Winooski, VT, USA) (Ex/Em 485 ± 20/528 ± 20 nm). Rezilta yo eksprime kòm pousantaj ROS parapò ak kontwòl ki pa trete (selil trete ak DCFH-DA ak AAPH). Twa eksperyans endepandan yo te fèt an triple.

2.6.4. Evalyasyon sekresyon IL-6 ak IL-8

Eksperyans yo te fèt jan sa te dekri anvan [31], ak plizyè modifikasyon. Yon ti tan, selil HaCaT yo te simen nan yon dansite 1 × 105 selil/cm2 nan 12 plak byen. Apre 3 jou, selil yo te ankouraje ak 15 µg/mL lipopolisakarid (LPS) ki soti nan Escherichia coli ak ko-enkube ak twa konsantrasyon diferan nan chak ekstrè ({{10}}.1875 mg/mL; {{ 14}}.375 mg/mL; 0.75 mg/mL) dilye nan mwayen kilti (DMEM mwayen ki gen 0.5 pousan FBS). Selil enkubate sèlman ak LPS ak selil enkubate ak sèlman medya kilti yo te itilize kòm kontwòl pozitif ak negatif, respektivman. Apre 24 èdtan, supernatant yo te kolekte, santrifuje pou 10 min nan 2000 g, epi estoke nan -80 ◦C jiskaske plis analiz. Nivo IL-6 ak IL{-8 yo te evalye pa tès imunosorban ki lye ak anzim (ELISA), lè l sèvi avèk twous ki disponib nan komès (PeproTech; London, UK), dapre enstriksyon manifakti a, ak absorpsyon mezire nan 450 nm. ak koreksyon longèdonn mete nan 620 nm nan yon espektrofotomèt mikroplak (EPOCH 2, BioTek Instruments, Winooski, VT, USA). Rezilta yo eksprime kòm IL-6 oswa IL-8 pousantaj parapò ak kontwòl pozitif la (selil ankouraje ak LPS). Twa eksperyans endepandan yo te fèt an triple.

2.7. Analiz estatistik

ORAC ak rezilta tès ki baze sou selil yo eksprime kòm valè an mwayèn ± SD, yo jwenn nan omwen twa eksperyans endepandan. Pou tès anzimatik ak sitototoksisite yo, yo te detèmine valè IC50 apati koub dòz-repons atravè sima log10 lè l sèvi avèk GraphPad Prism 8.4.3. lojisyèl (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA). Rezilta yo prezante kòm IC50 ak yon entèval konfyans 95 pousan. Analiz estatistik rezilta yo te fèt lè l sèvi avèk ansyen lojisyèl an. Lè yo te verifye divèjans omojèn ak distribisyon nòmal done yo, rezilta yo te analize pa yon sèl-fason analiz divèjans (ANOVA), ki te swiv pa tès Tukey pou konparezon miltip. Nan ka divèjans etewojèn oswa si done yo pa te distribye nòmalman, yo te fè yon tès t Student ki apwopriye ki pa pè pou detèmine si mwayen yo te diferan anpil. Yon p-valè mwens pase oswa egal a 0.05 te aksepte kòm estatistik enpòtan nan tout ka yo. Rezilta tès sansiblite antimikwòb yo eksprime kòm valè medyàn, yo jwenn nan omwen twa eksperyans endepandan.

3. Rezilta ak Diskisyon

This study aims to investigate the cosmeceutical potential of protein-rich extracts that were produced by high-pressure technologies from fishery industry wastes, namely sardine wastes and codfish frames [11,22]. The selection of extracts was based on previous results regarding their characterization and process conditions. For codfish, all extracts were selected aiming at evaluating the impact of the extraction temperature on the recovery of compounds with promising bioactive effects on the skin. For sardine extracts, only three extracts derived from both defatted and non-defatted raw materials, processed at higher temperatures (190  and 250 ◦C) and with the highest extraction yield (>45.7 g / 100 g) yo te chwazi. Rezilta yo konsènan kontni total pwoteyin chak ekstrè yo prezante nan Tablo 1.

3.1. Aktivite antioksidan, anti-aje, ak anti-ipèpigmantasyon

Efè kosmetik potansyèl ekstrè yo te okòmansman tès depistaj lè l sèvi avèk tès chimik ak anzimatik pou evalye efè antioksidan, anti-aje, ak anti-ipèrpigmantasyon yo. Pou kapasite antioksidan, yo te chwazi tès ORAC la paske li mezire kapasite echantiyon yo pou yo retire ROS biyolojik ki enpòtan, sètadi radikal peroxyl, ki konsidere kòm youn nan pwodiktè prensipal yo nan aje po [2,32]. Yo te evalye efè anti-aje tou atravè anpèchman elastaz depi anzim sa a rapòte ke yo responsab pou degradasyon elastin ak lòt pwoteyin ECM [6]. Pou efè anti-ipèpigmantasyon an, yo te itilize tès tirosinaz la, pou evalye kapasite echantiyon yo genyen pou anpeche pwodiksyon melanin. Tablo 2 rezime valè ORAC ak IC50 tout ekstrè yo.

Rezilta nou yo montre ke ekstrè sadin ak morui prezante aktivite antioksidan ak efè anpèchman sou aktivite elastase ak anzim tirozinaz yo. Pami echantiyon sadin yo, S1 te montre valè ORAC ki pi wo a (1.94 ± 0.08 µmol TEAC/mg ekstrè) ki te swiv pa S3 ak S2. Rezilta sa yo se pa yon evalyasyon antioksidan anvan atravè yon metòd altènatif (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl-DPPH tès) kote ekstrè S1 a te prezante pi ba valè IC50 yo [22]. Kapasite nan pi wo scavenging nan direksyon pou radikal peroxyl nan echantiyon an S1 ta ka sòti nan peptides ak diferan sekans asid amine ki prezan nan ekstrè yo paske entèraksyon nan mitan yo ka enfliyanse kapasite nan scavenging radikal [33]. Anplis de sa, konpoze ki pwodui nan Maillard oswa lòt reyaksyon tèrmo-oksidasyon ta ka enfliyanse aktivite antioksidan echantiyon yo [34]. Malgre valè ORAC ki pi ba a, echantiyon S2 ak S3 yo se yo ki gen pi gwo kapasite nan anpeche aktivite tirozinaz ak elastase, respektivman.

Pami ekstrè morui, yo te montre Cf4 gen pi wo aktivite antioksidan ak antihyperpigmentation. Analiz SEC-GPC nan ekstrè yo te montre ke peptides nan diminye pwa molekilè yo te jwenn lè yo ogmante tanperati ekstraksyon an jiska 250 ◦C [11]. Kapasite anpèchman elastase echantiyon sa a se nan seri valè yo jwenn pou lòt ekstrè Cf, sètadi Cf1 ak Cf3. Sepandan, pou konsantrasyon yo teste, de ekstrè sa yo pa montre okenn aktivite anpèchman nan direksyon pou tirozinaz.

Nan literati a, kèk rapò ki montre ke ekstrè soti nan sous-pwodwi maren prezante aktivite antioksidan ki enpòtan ak anpèchman nan tirozinaz. Pou egzanp, ekstrè ki sòti nan sous-pwodwi maren (Scophthalmus maximus) pa idroliz alkalin, yo te demontre aktivite antioksidan aksede pa diferan tès chimik: 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH) kapasite radikal-scavenging ( 36.12 pousan sou kontwòl), metòd ABTS (2,20 -azinobis-({3-etil-benzotiazolin{-6-sulfonik asid) (12.81 µg BHT/mL) ak tès klowòks crocin (8.{ {28}}3 µg Trolox/mL) [35] Nan yon lòt etid, ekstraksyon anzimatik nan fosilize yo sale ak alun (Lobonema smithii) te montre yo pwodui idrolizat ak gwo aktivite antioksidan (IC{20}}. 9 mg/mL pou tès ABTS e DPPH) ak potansyèl inhibitor tirozinaz, ak valè IC50 ki varye ant 14.1 ak 24.5 mg/mL [36], ki nan menm lòd grandè ak sa yo jwenn nan travay sa a. Anplis de sa, ekstrè ki gen valè antioksidan menm jan an (valè ORAC - 0.4 a 3.5 µmol TEAC/mg ekstrè) yo te jwenn nan yon lòt kalite résidus endistri manje, sètadi kouran dechè diven [6]. Sepandan, ekstrè résidus diven sa yo prezante pi wo tirozinaz (IC50 soti nan 4.0 a 0.14 mg ekstrè / mL) ak elastase (IC50 soti nan 3.4 a 0.1 mg ekstrè / mL) kapasite inhibition pase sa yo jwenn nan travay sa a, pwobableman akòz prezans nan konpoze fenolik. ke yo rekonèt yo gen plizyè byoaktivite. Li enpòtan pou mansyone ke nan etid nou an nou te itilize tirozinaz djondjon pou ekran efè anti-ipèpigmantasyon ekstrè, paske anzim sa a te lajman itilize nan tès debi segondè [37]. Men, piske gen kèk konfli konsènan resanblans ak omoloji anzim sa a ak tirozinaz mamifè/imen [38-40], yo ta dwe konsidere etid alavni ki enplike liy selil mamifè yo pou evalye efè potansyèl anti-ipèpigmantasyon ekstrè sadin ak morui.

Pou idantifye ki konpoze ki ta ka responsab repons bioaktif ekstrè yo, yo te fè etid korelasyon ant done bioaktivite ak konpozisyon asid amine ekstrè yo te rapòte anvan [11,22] (Tablo S1). Pou aktivite antioksidan, yo te jwenn pi gwo korelasyon yo (R2 Greater pase oswa egal a 0.7) ant valè ORAC ak total threonine, valin gratis, osi byen ke leucine gratis ak total pou tout ekstrè. Nan ka echantiyon sadin yo, yo te jwenn yon gwo korelasyon (R2 pi gran pase oswa egal a 0.94) tou pou kontni triptofan gratis ak total. An konsekans, tout asid amine sa yo te deja rapòte yo gen pwopriyete antioksidan nan plizyè sistèm modèl [41-43]. Pou aktivite anpèchman elastaz ak tirozinaz, yo te jwenn koyefisyan korelasyon ki pi wo yo (R2 pi gwo pase oswa egal a 0.8) pou kontni total pwoteyin ak arjinin gratis, respektivman, ki sijere ke konpoze sa yo ta ka gen yon wòl enpòtan nan potansyèl la. anti-aje ak anti-hyperpigmentation efè nan endistri pwason dechè ravin ekstrè.

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】