Cyanobacteria Segondè metabolit kòm engredyan byoteknolojik nan pwodui kosmetik natirèl anti-aje 2

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

2.3.Aktivite Byolojik

2.3.1.Aktivite Radical Scavenging

Radikal anion superoksid la se yon radikal gratis fizyolojik ki gen anpil enpòtans pou kò imen an. Lè gen yon twòp pwodiksyon ROS sa a pandan respirasyon aerobic, oswa lè mekanis dezentoksikasyon andojèn yo echwe oswa yo ensifizan, gen yon risk ogmante nan domaj oksidatif ak efè danjere grav. Nan sans sa a, jwenn mekanis pou anpeche efè danjere Oz* yo gen anpil enpòtans, pa sèlman nan domèn pwodui kosmetik, men tou nan konsidere amelyore ak prevansyon nan yon pakèt maladi. Konpòtman scavenging O2" nan ekstrè cyanobakteri yo parèt nan Figi 1, ak valè IC yo rezime nan Tablo 6.

Ekstrè akeuz yo te siyifikativman pi efikas nan Oz * - scavenging pase ekstrè yo asetòn (Tablo 6) epi prezante yon aktivite ki depann de dòz (Figi 1), ak tansyon yo dlo dous kanpe soti nan tansyon yo maren. Cephalothorax lacustris LEGE 15493 te souch ki pi efikas, ki te prezante valè ICso ki pi ba a (65.5 ug ekstrè sèk/mL, p<0.05), followed="" by="" leptolyngbya="" boryana="" lege="" 15486="" and="" nodosilinea="" nodulosa="" lege="" 06104.="" leptolyngbya="" cf.="" ectocarpi="" lege="" 11479="" was="" the="" only="" strain="" that="" did="" not="" reach="" the="" ic5o="" for="" the="" aqueous="" extract="" (table="" 6).="" on="" the="" other="" hand,="" the="" acetone="" extract="" of="" this="" strain="" was="" the="" most="" effective="" in="" o2*-="">

Tanpri klike isit la pou konnen plis

Yon konparezon nan kapasite antioksidan nan mitan diferan cyanobakteri se defi akòz diferan metòd yo aplike. Morone ak kòlèg travay yo te evalye kapasite radikal scavenging nan etanòl (70 pousan v/v) ekstrè nan diferan tansyon cyanobakteri [26], valè ICso ki pi ba a se 822.70 ug/mL pou Phormidium sp.LEGE 02 05292, pandan ke pa gen okenn. yo te detekte aktivite pou Nodosilinea nodulosa LEGE 06102. Lopes ak kòlèg travay yo te rapòte aktivite pou retire O2 pou Nodosilinea (Leptolynbbya) Antatik LEGE13457 ak Cuspidothrix issatschenkoi LEGE 03282 ekstrè asetòn, ak valè IC25 ak aktivite Leptolyn 28619 pou 28619 ak 28619 tankou sp.LEGE 13412 [27]. Otè yo te rapòte tou yon efikasite ki pi wo nan ekstrè asetòn yo lè yo konpare ak ekstrè etanòl. Yon lòt etid ki fèt pa Amaro ak kòlèg travay yo te revele valè IC50 nan 1394 ak 826 ug/mL pou Gloeothece sp. ak Scenedesmus obliquus (M2-1), respektivman [37]. Rezilta yo jwenn isit la pou ekstrè asetòn sanble mwens pwomèt pase sa yo te rapòte deja, menm si yo nan menm lòd la nan grandè. Nan lòt men an, ekstrè yo akeuz revele yon potansyèl menmen merite pou plis eksplwatasyon konsènan aplikasyon kosmetik nan jaden an nan aje po.

2.3.2.Anzim anpèchman

MMP yo se yon fanmi ekstraselilè zenk-depandan anzim, ki gen fonksyon prensipal se remodel ak degrade ECM a [38], yon materyèl ki sanble jèl esansyèl pou kenbe selil yo ansanm epi bay yon chemen pou eleman nitritif ak oksijèn [39]. Chanjman nan eleman ECM yo, tankou kolagen an ak elastin, pwovoke pa MMP yo se baz domaj po ak fòmasyon rid [40]. Ansanm ak anzim sa yo, ki lye ak estrikti po ak fòmasyon rid, yon lòt asime yon wòl enpòtan nan pwosesis la aje akòz aktivite li nan melanogenesis: tirozinaz. Pami lòt faktè, ekspoze UVR lakòz yon akimilasyon nan yon kantite nòmal melanin, akòz ogmante pwodiksyon ROS. Espès reyaktif sa yo afekte aktivite melanosit yo, ki ogmante konvèsyon tirozin nan melanin pa oksidasyon, ki mennen nan ipèpigmantasyon ak plak po iregilye [41].

Cistanche ka anti-aje

Nan rechèch la pou altènativ natirèl nan engredyan komèsyal anti-aje, konsantre sou anzim yo mansyone pi wo a, yo te eksplore aktivite a nan ekstrè cyanobacteria (Figi 2). Konsènan HAase, sèlman twa tansyon yo te kapab anpeche anzim sa a, aji nan yon fason ki depann de dòz: ekstrè akeuz Leptolyngbya cf. ectocarpiLEGE 11479 (IC50=863 ug/mL), ak ekstrè asetòn nan Cephalothrix lacustris LEGE 15493 ak Nodosilinea nodulosa LEGE 06104, de dènye yo sèlman rive nan IC25 (832 ak 995 ug/mL, respektivman). Menm si valè sa yo sanble wo, seri aktivite yo te sanble ak sa yo ki nan dwòg referans di-sodyòm cromoglicate (DSCG)（IC50=105 ug/mL). (1 mg/mL), Leptolyngbya cf. ectocarpi LEGE 11479 inibit anzim sa a nan 80 pousan (Figi 2), ki fè ekstrè sa a pwomèt kòm yon engredyan kosmetik.

Kèk etid yo te rapòte sou efè potansyèl composés cyanobacteria ak extraits sou aktivite hyaluronidase, ak nenpòt konparezon sou extraits potansyèl Byolojik ta dwe pran an kont ke cyanobakteri metabolis soufri siyifikatif varyasyon selon kondisyon kiltivasyon, enfliyanse konpozisyon chimik extraits. Morone ak kòlèg travay [26] evalye efè ekstrè etanòl Tychonema sp. LEGE 07196 ak Cyanobium sp. LEGE 07175 sou hyaluronidase, epi li te jwenn yon aktivite inhibition pi fò, ak valè ICso nan 182.74 ak 208.36 ug/mL, respektivman. Te aktivite a nan ekstrè etanòl tou te rapòte pou yon fraksyon ensolubl nan Spirulina platensis, ak yon IC5o nan 150 ug / mL [42]. Yon lòt etid, ki te fèt pa Yamaguchi ak Koketsu [19], te montre ke Nostochopsis lobatus MAC0804NAN te pwodwi yon gwo kantite polisakarid ak yon efè inhibition segondè (IC50=7.18 ug/mL).Li te rapòte tou ke yon Arthrospira- peptide ki sòti ka patisipe nan anpèchman hyaluronidase [4]. Ansanm, rezilta sa yo sipòte potansyèl konpoze cyanobakteri ak ekstrè kòm engredyan anti-aje pou aplikasyon kosmetik.

Lè ou konsidere elastase, sèlman ekstrè asetòn prezante bioaktivite enteresan. Leptolyng-bya cf. ectocarpi LEGE 11479 te ankò pi aktif la (Figi 2), yo te sèlman souch yo rive jwenn ICso a, ak yon valè de 391 ug/mL. Nodosilinea nodulosa LEGE 06104, Cephalothrix lacustris LEGE 15493, ak Leptolyngbya boryana LEGE 15486 sèlman rive nan IC25, ak valè 126,86, ak 99 ug/mL, respektivman. Kòm pou hyaluronidase, tansyon maren yo te montre yo dwe pi pwomèt la.

Dapre sa nou konnen, pa gen okenn rapò anvan sou aktivite inhibition elastase pou tansyon yo eksplore isit la. Konsènan lòt tansyon, yo te dekouvri ke Nostoc minutum pwodui peptides mikwoviridin ak nostopeptin, ak ICso =1.3 ak 11.0 ug/mL [44,45]. Microviridins B ak ki genyen nan Microcystis aeruginosa tou inibit elastase efektivman, ak valè ICso nan 0.044 ak 0.084 ug/mL [46].Pifò nan done ki disponib konsènan anpèchman elastase konsantre sou konpoze izole, Se konsa, konparezon ak ekstrè yo soti nan tansyon nou yo difisil fè.

Pigmantasyon po inegal, ki asosye ak tou de aje ak ekspoze UV, rete yon gwo enkyetid nan popilasyon aje ak endistri kosmetik. Majorite etid ki disponib yo se trifling epi sèvi ak djondjon tirosinaz kòm yon modèl anzimatik, sa ki fè li difisil pou tradwi rezilta yo nan anviwònman imen an, kanmenm, anzim sa a gen yon gwo resanblans ak omoloji ak tirosinaz imen [47]. Kidonk, yo te itilize menm modèl anzimatik la pou eksplore potansyèl ekstrè sianobakteri nan anpèchman tirozinaz. Kòm pou elastase, sèlman ekstrè asetòn yo te kapab anpeche tirozinaz. Nodosilinea nodulosa LEGE 06104 te pi efikas la (Figi 2), yo te sèlman souch la rive nan IC#N (989.26±4.3 ug/mL).Anba sa a te Leptolyngbya boryana LEGE 15486, ak IC25=784 78±4.33 ug/ mL, epi anfen Leptolyngbya cf.ectocarpi LEGE 11479, ak rezilta ki pi pwomèt yo te jwenn pou tansyon maren yo.

Morone ak kòlèg travay [26] te deja eksplore aktivite a nan ekstrè etanolik cyanobakteri nan menm modèl la, men yo pa jwenn okenn aktivite. Youn nan aspè enteresan nan sa a se ke youn nan tansyon yo etidye te Nodosilinea nodulosa LEGE 06102, ki te montre rezilta yo pi byen nan sa a, yon lòt fwa ankò mete aksan sou enpòtans ki genyen nan Solvang yo fè ekstraksyon nan jwenn ekstrè bioaktif vize. Kòm pou lòt anzim yo eksplore, sondaj ki konsantre sou cyanobakteri yo tou ra pou tirozinaz. Nan travay ki te fèt pa Yabuta ak ekip li a [48], yo te rapòte ke ekstrè nan dlo cho nan Nostochopsis spp. siyifikativman inibit aktivite a tirozinaz (IC50=250 ug/mL).Sa a se yon rezilta trè enteresan, konsidere ke li soti nan yon ekstrè akeuz, pou ki pa gen okenn aktivite yo te jwenn nan etid la prezan. Otè yo atribiye rezilta a nan konpoze ki ba pwa molekilè ki soti nan PBPs pa tretman chalè, sètadi yon moyete biline ki aji kòm yon pisan peroxyl radikal scavenger. Yon lòt etid te evalye aktivite inhibitor Arthrospira platensis etanòl (IC50=14, 000 ug/mL) ak dlo (IC50 =72, 000 ug/mL) ekstrè, kote yo valè yo te atribiye nan prezans nan konpoze fenolik tankou ferulic ak asid kafeik nan ekstrè a etanòl [49].

2.3.3.UV Pwoteksyon

Menm si yon nimewo k ap grandi nan konpayi kosmetik enkòpore blockers solèy nan pwodwi yo, li toujou difisil konvenk konsomatè yo sou benefis ki genyen nan itilizasyon chak jou yo ralanti twò bonè aje po. Si sou yon bò, aplikasyon an chak jou nan blockers solèy se yon ti kras anrasine abitid, nan lòt men an, gen yon sèten laperèz nan itilizasyon sibstans sentetik, akòz risk endezirab asosye yo [50]. Apre sa, rechèch sou fotopwoteksyon natirèl te ogmante konsiderableman nan dènye ane yo, konsidere potansyèl yo pou biodégradabilite ak pi ba toksisite, ki fè yo pi benefik pou moun ak anviwònman an. Yo nan lòd yo eksplore ekstrè sianobakteri nan jaden sa a, yo te evalye kapasite yo pou yo aji kòm krèm pwotèj kont solèy nan vitro pou UVR-B, paske li se radyasyon ki pi danjere. Rezilta yo te jwenn pou cyanobacteria akeuz ak asetòn ekstrè yo prezante nan Table7.

Konsènan ekstrè asetòn, valè ki pi pwomèt (19.2) yo te jwenn pou Leptolyngbya boryana LEGE 15486, ki te swiv pa Leptolyngbya cf.ectocarpiLEGE 1479 (10.7), tou de nan konsantrasyon ki pi ba a teste, 200 ug/mL. Nodosilinea nodulosa LEGE 06104 te pi piti pwomèt nan mitan ekstrè asetòn. Nan ekstrè akeuz, rezilta ki pi pwomèt yo te jwenn pou konsantrasyon ki pi wo a teste, ak Leptolyngbya boryana LEGE 15486 ak Cephalothrix lacustris LEGE 15493 kanpe deyò ak in vitro SPF valè 17.1 ak 14.9, respektivman (Table7).ekstansyon lavi cistanchePandan yo te diskite sou etid anvan yo nan domèn sa a, Hossain ak ekip li a [51] te rapòte ke valè SPF pou ekstrè Cephalothrix komarekiana te 2.37. Yon lòt gwoup te jwenn ke SPF nan yon ekstrè metanol nan Aphanizomenon flos-aquae te 4 [52]. Sepandan, enfòmasyon sou konsantrasyon nan ekstrè itilize pa otè yo pa t disponib, sa ki fè posib konparezon difisil.

Kantite tansyon cyanobakteri yo eksplore nan domèn pwodui kosmetik, espesyalman konsènan SPF, se trè ra, konsidere potansyèl yo nan resous sa yo. Rezilta yo prezante nan la a demontre ke espès yo anba etid yo ka bon opsyon kòm pwotèktè foto byolojik, epi pètèt aji kòm rapèl nan lòt krèm pwotèj kont solèy ki mache kounye a, sa ki pèmèt yon rediksyon nan konsantrasyon nan krèm pwotèj kont solèy sentetik nan fòmil yo. Se poutèt sa, li enpòtan pou ogmante rechèch sou òganis sa yo, espesyalman ekstrè byoaktif yo, ke, yo te nan siyifikativman pi ba ccost, pi wo sede, ak jwenn pi vit pase konpoze izole yo pi zanmitay anviwònman an ak ekonomikman pi atire.

2.4. Diskriminasyon nan ekstrè sianobakteri pa analiz PCA

Rechèch la pou konpoze bioaktif soti nan sous natirèl, ak potansyèl la pou itilize kòm engredyan nan jaden an nan pwodui kosmetik te grandi nan dènye ane yo. Anplis de sa yo te potansyèlman mwens toksik ak konplètman biodégradables, konpoze ki sòti nan sianobakteri yo disponib nan sous renouvlab epi yo ka jwenn a pri ki ba nan yon anviwònman kontwole.cistanche nzKlasifikasyon nan ekstrè byoaktif dapre konpozisyon chimik yo ak aktivite byolojik yo ka gen anpil valè pou lonje dwèt sou relasyon potansyèl yo. Nan sans sa a, yo te aplike analiz prensipal eleman (PCA), konsidere konpozisyon chimik nan ekstrè cyanobakteri ak byoaktivite nan konsantrasyon ki pi wo a teste nan chak tès (Figi 3). Kòm yo ka obsève, 72.99 pousan nan varyasyon an te kapab eksplike pa de premye dimansyon yo: PCl matirite pou 50.41 pousan nan divèjans la, pandan y ap PC2 te responsab pou 22.58 pousan. Twa gwoup yo te distenge (Figi 3A). ): Gl, ki enplike Leptolyngbya cf.exocarp LEGE 11479 dlo ekstrè; G2, ki enplike Cephalothrix lacustris LEGE 15493, Leptolyngbya boryama LEGE 15486 ak Nodosilinea nodulosa LEGE 06104 dlo ekstrè; ak G3, ki enplike tout ekstrè asetòn yo. Dapre Figi 3B, Gl se chimikman diferan de lòt echantiyon yo akòz kontni an PE; Ekstrè dlo Cephalothrix lacustris LEGE 15493, Leptolyngbya boryana LEGE 15486, ak Nodosilinea nodulosa LEGE 06104 yo gwoupe dapre kontni yo nan PC, APC, ak pwoteyin total (G2), alòske tout ekstrè asetòn yo jwenn nan menm gwoup (G3)due. nan kontni yo nan karotenoid, ak klowofil a ak dérivés li yo. Konpoze yo pi lwen pase aktivite anzimatik yo parèt, ak avyon yo fòme ak aks pozitif PCl (Figi 3B). Li ka obsève ke echantiyon ki gen pi wo sa ki nan klowofil a ak karotenoid yo se pre relasyon ak elastase ak anpèchman tirozinaz. Sa a se demontre nan gwo korelasyon pozitif ant karotenoid ak elastase (0.725,p).<0.01) and="" tyrosinase=""><0.01) inhibition,="" with="" similar="" observations="" between="" chlorophyll="" a="" and="" the="" same="" enzymes=""><0.01 and=""><0.05,respectively). on="" the="" other="" hand,="" hyaluronidase="" inhibition="" is="" more="" correlated="" vvith="" pe="" content="" (figure="" 3b),="" with="" a="" significant="" positive="" correlation="" between="" the="" values=""><0.01).the compounds="" responsible="" for="" the="" radical="" scavenging="" activity="" of="" the="" extracts="" are="" displayed,="" with="" the="" planes="" formed="" with="" the="" pcl="" negative="" axis.="" the="" closest="" correlation="" is="" observed="" for="" tpc=""><0.05); other="" compounds="" such="" as="" total="" proteins,="" pc,and="" apc="" also="" contribute="" to="" the="" activity,="" although="" to="" a="" lower="" extent="" (figure="" 3b).regarding="" the="" spf,="" there="" is="" a="" close="" correlation="" between="" the="" activity="" of="" the="" extracts="" and="" their="" pbp="" content,mainly="" apc=""><0.01)and pc="" (0.838,="" p="" <="" 0.01),="" which="" points="" to="" these="" compounds="" as="" predominantly="" responsible="" for="" blocking="" uv-b="" radiation.="" the="" total="" protein="" content="" also="" contributed="" to="" this="" biological="" activity="" (0.670,=""><0.01), with="" the="" lowest="" contribution="" being="" observed="" for="" pe="" (0.210,p="">0.05).An jeneral, PCA analiz la te pèmèt gwoupman extraits selon aktivite Byolojik ki parèt nan jaden po moun ki aje, ki mennen ale nan konklizyon ke acetone extraits yo pi efikas nan anpeche anzim ki responsab degradasyon an. nan matris la po ak pèt nan estrikti po, pandan y ap ekstrè akeuz yo pi efikas nan scavenging radikal gratis ak pwoteje po soti nan efè yo danjere nan radyasyon UV.

Osi lwen ke nou konnen, sa a se premye fwa ke yo te etabli yon relasyon ant konpozisyon chimik la ak aktivite byolojik nan ekstrè soti nan tansyon sa yo sianobakteri.

3.Materyèl ak Metòd

3.1. Pwodiksyon Byomass Cyanobakteri

Kat souch cyanobakteri filaman, Cephalothrix lacustris LEGE 15493 ak Lep-tolyngbya boryana LEGE 15486, ki soti nan ekosistèm dlo dous brezilyen yo, ak Leptolyngbya cf. ectocarpi LEGE 11479 ak Nodosilinea nodulosa LEGE 06104, ki soti nan ekosistèm maren Pòtigè, yo te itilize nan etid sa a. Tansyon yo te konsève nan Blue Biotechnology and Ecotoxicology Culture Collection (LEGE CC) nan Sant Entèdisiplinè pou Rechèch Marin ak Anviwònman (CIIMAR). Pou rezon pwodiksyon byomass, yo te etabli yon plan kilti echèl, kòmanse ak 40 mL anba laboratwa-. kondisyon kontwole yo, sekans monte jiska 4 L. Tansyon yo te grandi nan mwayen Z8 [53], konplete ak 10 ug/L vitamin B12 ak 25g/LNaCl pou tansyon maren. Kilti yo te kenbe nan 25 degre, ak yon entansite limyè nan 10 foton umol m-2 s{-4, ak yon fotoperyòd 14h limyè: 10h fè nwa. Byomass fre yo te kolekte apre 120 oswa 150 jou kwasans (selon souch la) atravè filtraj, epi jele, friz, epi estoke nan -20 degre jiskaske preparasyon ekstrè.

3.2.Ekstrè Preparasyon

De ekstrè diferan yo te sekans prepare nan chak souch: asetòn ak akeuz. Premyèman, yo te prepare ekstrè asetòn, lè l sèvi avèk 2g byomass sèk. Byomass la te sispann nan asetòn ak ekstrè pou 10 min nan yon beny ultrasons (Fisherbrand [FB15053, Loughborough, UK). Apre ekstraksyon asetòn la, yo te kite granules ki kapab lakòz yo sèk nan Hood lafimen, ak Lè sa a, ekstrè ak 70 mL dlo distile, swiv menm pwosedi a. Debri selil yo te retire nan santrifijasyon nan 10,00×× g Gs pou 5 min nan 4 degre, nan yon mikrosantrifujeur HERAEUS MegafugeTM 16R (Thermo ScientificTM, Waltham, MA, USA). presyon (BUCHIR-210 Rotary Evaporator) (ekstrè asetòn), oswa jele ak lyofilize (ekstrè akeuz). Ekstraksyon ak supernat ki koresponn lan te repete 3 fwa. Ekstrè sèk yo te kenbe nan -20 degre jiskaske plis analiz chimik ak byolojik.

3.3.Tès selil yo

3.3.1.Kilti Selil

Yo te itilize keratinosit imen HaCAT (ATCC), fibroblast sourit 3L1 (ATCC), ak selil endothelial imen hCMEC (ki bay pa Dr POCouraud (INSERM)) pou evalyasyon cytotox-icity. Liy selilè yo te kiltive nan Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM GlutaMAXTM, Gibco, Glasgow, UK), konplete ak 10 pousan (v) serom fetal bovine (Gibco), 1 pousan penisilin-streptomycin (Pen-Strep 100 IU). / mL ak 10 mg / mL, respektivman) (Gibco) ak 0.1 pousan Amphotericin B (Gibco). Antretyen selilè ak analiz yo te fèt nan 37 degre nan yon atmosfè imidite 5 pousan CO2, epi yo te renouvle mwayen kilti a chak de jou. Nan 80-90 pousan konfluans selilè, selil aderan yo te lave ak saline ki gen tanpon fosfat (PBS, Gibco), detache ak anzim eksprime TrypLEX (1×) (Gibco), yo te pase pou antretyen, epi yo te simen pou tès yo te planifye yo.

3.3.2.Cytotoxicity-MTT Assay

Vitabilite selilè yo te evalye pa rediksyon nan {{0}}(4,5-dimethylthiazole-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromur (MTI, Sigma-Aldrich, Almay), jan yo te rapòte deja [26]. Tout liy selil yo (selil andotelyal, fibroblast, ak keratinosit) yo te simen nan 96-plak byen, nan yon dansite 1.0 × 10 selil/mL, 3.3 × 104 selil/mL, ak 2.5 × 104 selil/mL, respektivman.gwosè penis cistancheApre 24 èdtan nan adezyon selil, yo te retire mwayen kilti a, epi selil yo te ekspoze pou 24 ak 48 èdtan nan medyòm fre ki gen ekstrè cyanobakteri diferan nan senk konsantrasyon seri, ki soti nan 12.5 a 200 ug / mL. Pou ekstrè asetòn yo, solisyon stock yo te prepare nan dimethyl sulfoxide (DMSO) (Gibco), epi dilye ak DMEM anvan ekspoze selil yo pou konsantrasyon maksimòm DMSO pa depase 1 pousan. Ekstrè akeuz yo te prepare nan PBS ak dilye ak DMEM anvan cells'expo-sure. Kontwòl negatif la te PBS, ak kontwòl pou lanmò selil la te DMSO 20 pousan. Apre enkubasyon, yo te fè tès sitotoksisite MIT la. Yon ti tan, yo te ajoute 20 μL nan solisyon MTT nan chak pi ak enkubasyon nan 37 degre pou 3 èdtan. Apre enkubasyon, yo te retire mwayen an ak anpil atansyon, epi sèl formazan ki gen koulè wouj violèt yo te fonn nan DMSO. Absorbans la te li nan 550 nm ak yon lektè microplate Synergy HT milti-deteksyon (Biorek, Bad Friedrichshall, Almay) ki opere pa lojisyèl GEN51M. Yo te fè tès la an kat kopi ak mwayèn. Pou repwodiksyon, chak tès te repete poukont yo omwen twa fwa. Cytotoxicity te eksprime pousantaj nan viabilite selil, konsidere 100 pousan viabilite nan kontwòl sòlvan an.

3.4. Chimik Profilage nan Ekstrè Cyanobacteria

3.4.1.Total kontni fenolik (TPC)

Pou detèmine TPC nan ekstrè yo, yo te itilize yon tès kolorimetrik, ki baze sou metodoloji Folin-Ciocalteu [54] ak modifikasyon ti tay. Ekstrè asetòn yo te solubilize nan DMSO, ak ekstrè akeuz yo nan dlo. Yon ti tan, 25 μL nan chak ekstrè （10mg/mL） te konplètman melanje ak 25 μL reyaktif Folin-Ciocalteu （Sigma-Aldrich）20{{20}} μL solisyon NagCO3, ak 500 μL dlo deyonize. Pou vid la, yo te ranplase reyaktif Folin-Ciocalteu pa dlo deyonize. Absorbans pwodwi ki gen koulè fòme a te mezire nan 725 nm, lè l sèvi avèk yon lektè microplate Synergy HT Multi-deteksyon (Biotek, Bad Friedrichshall, Almay) ki te opere atravè lojisyèl GEN51M. Koub estanda pou quantification TPC yo te jwenn lè l sèvi avèk sèt konsantrasyon asid galik (GA) (0.025 a 0.5 mg/mL), prepare nan menm sòlvan ak ekstrè yo dwe teste (y=2.097x＋0.01560 R²{{). 22}}.9989, pou asetòn, ak y=2.204x＋0.01401,R2=0.9982,pou dlo, kote "y" refere a absorbans la ak "x" refere a konsantrasyon an) . Twa detèminasyon endepandan yo te fèt an kopi. Te kontni total fenolik eksprime kòm ekivalan ug GA (GAE) pou chak mg ekstrè sèk.

3.4.2.Total Pwoteyin

Yo te detèmine konsantrasyon total nan pwoteyin lè l sèvi avèk twous tès pwoteyin BCA (#23227, Thermo-Scientific). Ekstrè akeuz yo te prepare nan dlo, pandan y ap ekstrè asetòn yo te prepare nan DMSO.Brèfman, nan yon plak 96-byen, 25 uL nan chak ekstrè (1 mg / mL) te melanje ak 200 μL nan reyaktif la k ap travay. Absorbans la te mezire nan 562 nm, lè l sèvi avèk yon lektè Microplate Synergy HT Multi-deteksyon (Biotek, Bad Friedrichshall, Alman) opere atravè lojisyèl GEN5IM. Yon koub estanda (y=-126.87x3＋547.73.353 -10.017; R2=0.999,ak y{=162.87x{3-248.51x²＋932.13x -11.715;R{2=0.99, kote "y" refere a absorbans ak "x" refere a konsantrasyon) yo te jwenn pou chak ekstrè, lè l sèvi avèk nèf konsantrasyon albumin (BSA) (25 a 2000 ug/mL) pou quantifier pwoteyin yo. Twa eksperyans endepandan yo te fèt an triple. Te kontni an total pwoteyin eksprime kòm ug nan ekivalan albumin serom bovine (BSA) pou chak mg ekstrè sèk.

3.4.3.Pigman

Pigman yo prezan nan tou de ekstrè akeuz ak asetòn yo te quantifye spesifikasyon-trophotometrically. Yo te quantifye klowofil a ak dérivés li yo lè l sèvi avèk yon koub kalibrasyon yo te jwenn ak estanda komèsyal (Sigma-Aldrich): y=8.0791x-0.0{{19} }22 (R2=0.996), kote "y" refere a absorbans la ak "x" refere a konsantrasyon an. Karotenoid total yo te mezire kòm -karotèn (Sigma-Aldrich), atravè koub kalibrasyon li yo （y=17.133x＋0.0099; R²=0.990, kote "y" refere a absorbans la ak "x" refere a konsantrasyon an). Konsantrasyon total karotenoid te eksprime kòm ug nan -karotèn pou chak mg ekstrè sèk. Koub kalibrasyon pou tou de estanda yo te jwenn lè l sèvi avèk senk konsantrasyon diferan (0.001 a 0.025 mg/mL). Detèminasyon espektrofotometrik yo te fè nan 96-plak byen, nan 450 nm pou -karotèn ak 663 nm pou klowofil a, lè l sèvi avèk yon lektè Microplate Synergy HT Multi-deteksyon (Biotek, Bad Friedrichshall, Almay) ki opere atravè lojisyèl GEN5TM.

Kontni PBP te detèmine spectrophotometrically pa mezire absorbances extraits akeeux yo nan diferan longèdonn (562,615, ak 645 nm), epi aplike fòmil korespondan yo, jan Pagels et al te dekri deja. [34]: Ekstrè akeuz yo te resuspend nan yon konsantrasyon final nan 0.5 mg/mL. Eksperyans lan te pote soti nan triple, ak rezilta yo te eksprime nan ug / mg nan ekstrè sèk. 3.5.Aktivite Byolojik

3.5.1.Superoksid Anion Radikal (O2 * -) Scavenging

Dapre Barbosa ak ko-travayè yo [55], yo te fè tès pou elimine radikal gratis Oz*- pou evalye potansyèl antioksidan ekstrè cyanobakteri yo. Ekstrè akeuz yo te prepare nan dlo, pandan y ap ekstrè asetòn yo te prepare nan DMSO. Yo te prepare senk dilusyon seri pou chak ekstrè epi yo teste yo nan lòd yo evalye konpòtman ekstrè yo ak valè IC. Tout reyaktif yo te fonn nan tanpon fosfat (19 uM, pH 7.4). Yon volim 50μL nan chak dilution te melanje ak 50 uL nan 166 uM -nicotinamide adenine dinucleotide redwi fòm (NADH) solisyon ak 150 uL nan 43 uM nitrotetrazolyom klori ble (NBT) nan yon plak 96-byen. Apre adisyon a nan 50 μL nan 2.7 μM phenazine metosulfat (PMS), yo te kontwole aktivite radikal scavenging echantiyon yo ak yon lektè Microplate Synergy HT Multi-deteksyon (Biotek, Bad Friedrichshall, Almay) opere atravè lojisyèl GEN51M, nan fonksyon sinetik, nan tanperati chanm pou 2 min nan 562 nm. Twa tès endepandan yo te fèt an triple. GA te itilize kòm yon kontwòl pozitif. Rezilta yo te eksprime kòm pousantaj nan scavenging radikal an konparezon ak kontwòl la ki pa trete. Rezilta yo pou valè IC kalkile yo te eksprime kòm mwayen ± SD (ug/mL) nan omwen twa tès endepandan ki fèt an kopi. Valè IC yo ak koub dòz-repons korespondan yo te kalkile ak lojisyèl Graphpad Prism@ (San Diego, CA, USA; vèsyon 9, pou MacOS).

3.5.2.Hyaluronidase anpèchman

Egzamen anpèchman hyaluronidase la te yon ti kras modifye nan sa ki te pwopoze pa Ferreres et al.【56】. Yon ti tan, 25 μL chak ekstrè （9mg/mL）,175 μL asid hyaluronik (HA)（0.7 mg/mL), ak 25 μL hyaluronik (HAase)（90{{ 14}} U/mL nan NaCl0.9 pousan ）yo te melanje nan yon tib reyaksyon. Ekstrè akeuz yo te prepare nan dlo, ak ekstrè asetòn yo te prepare nan DMSO. Apre 30 min nan enkubasyon nan 37 degre, yo te sispann reyaksyon an pa adisyon a nan 25 μL nan tetraborate di-sodyòm (0.8 M nan dlo), ki te swiv pa enkubasyon pou 3 min nan 90 degre nan yon beny dlo. Tib reyaksyon yo te refwadi nan tanperati chanm anvan yo te ajoute 375 uL solisyon DMAB [4-(Dimethylamino)benzaldehyde]. Apre 20 min nan enkubasyon nan 37 degre, yo te mezire absorpsyon nan pwodwi ki gen koulè pal fòme nan 560 nm, nan yon lektè microplate Synergy, HT Multi-deteksyon (Biotek, Bad Friedrichshall, Almay) opere atravè lojisyèl GEN5IM. Kontwòl negatif la te fèt nan absans ekstrè. Disodium cromoglycate (DSCG) te itilize kòm yon kontwòl pozitif.

Twa tès endepandan yo te fèt an triple, ak rezilta yo te eksprime kòm pousantaj nan anpèchman anzim an konparezon ak kontwòl la ki pa trete.

3.5.3.Elastase anpèchman

Yo te fè tès anpèchman elastaz pankreyas pòsin dapre Mota ak kòlèg travay [57] ak modifikasyon ti tay. Ekstrè akeuz yo te prepare nan dlo, pandan y ap ekstrè asetòn yo te prepare nan DMSO.Brèfman, nan yon plak 96-byen, 50 μL nan ekstrè a te melanje ak 90 uL nan tanpon HEPES (0.1 M), 10 uL N-succinyl-Ala-Ala-Ala p-nitroanilide substra (100 uM), 70 uL nan tanpon acetate (200 mM), ak 30 μL nan elastaz (1 U/mL) yo te plak la enkube nan 37 degre pou 10 min, epi yo te mezire absorbans pwodwi reyaksyon an nan 405 nm, nan yon lektè microplat Synergy HT Multi-deteksyon (Biotek, Bad Friedrichshall, Almay) ki te opere atravè GEN51M. Kontwòl negatif la te fèt nan absans ekstrè, epi yo te itilize asid ascorbic kòm yon kontwòl pozitif.poud cistancheTwa tès endepandan yo te fèt an triple. Rezilta yo te eksprime kòm pousantaj nan anpèchman anzim an konparezon ak kontwòl la ki pa trete.

3.5.4.Tyrosinase Anpèchman

Yo te fè tès anpèchman tirozinaz la dapre Adhikari et al.[58] ak ti modifikasyon. Yon ti tan, nan yon 96-plak byen, yo te melanje 20 μL chak ekstrè ak 10{0 μL tirozinaz （30 U/mL nan tanpon fosfat）. Ekstrè akeuz yo te prepare nan dlo, pandan y ap ekstrè asetòn yo te prepare nan DMSO. Te melanj lan enkube a 30 degre pou 8 minit. Lè sa a, yo te ajoute 80 μL L-DOPA (L-3,4-dihydroxyphenylalanine) solisyon (2.5 mM nan tanpon fosfat), epi absòpsyon (T0, absòpsyon nan yon moman "zewo") te imedyatman. mezire ak yon lektè Microplate Synergy HT Multi-deteksyon (Biotek, Bad Friedrichshall, Almay) opere atravè lojisyèl GEN5TM, nan 475 nm. Detèminasyon absòbe a nan T0 (anvan pwodwi reyaksyon an te fòme) pèmèt eliminasyon an nan entèferans posib akòz koulè natirèl la nan ekstrè yo anba etid. Apre 8 min nan enkubasyon nan 30 degre, yo te mezire absorpsyon an ankò (T8). Pousantaj nan anpèchman tirozinaz nan prezans ekstrè cyanobakteri yo te kalkile an konparezon ak kontwòl la (negatif) ki pa trete, kote diferans ki genyen ant absorbances yo (T{ {21}}T0) koresponn ak 100 pousan aktivite anzim. Kontwòl negatif la te fèt nan absans ekstrè, epi yo te itilize asid kojik kòm yon kontwòl pozitif. Twa tès endepandan yo te fèt an triple. Rezilta yo te eksprime kòm pousantaj nan anpèchman anzim an konparezon ak kontwòl la ki pa trete.

3.5.5.Faktè Pwoteksyon Solèy (SPF)

Faktè pwoteksyon solèy in vitro te detèmine dapre Rohr ak kòlèg travay yo [59] ak modifikasyon ti tay. Ekstrè akeuz yo te prepare nan dlo, pandan y ap ekstrè asetòn yo te prepare nan asetòn. Yon ti tan, yo te mezire absorpsyon nan 2mL nan chak ekstrè (20 ak 1000 ug / mL), nan yon espektrofotomètr (ki soti nan 290 a 320 nm, 5 nan 5 nm). SPF a te kalkile lè l sèvi avèk fòmil Mansur [60] te pwopoze a: kote EE (A) se spectre efè eritemal, I （A） se spectre entansite solè, Abs（λ）se absòbe ekstrè, ak CF se koreksyon an. faktè (28) detèmine lè l sèvi avèk yon krèm pwotèj kont solèy komèsyal ak yon valè SFP li te ye nan 30.

3.6.Estatistik analiz

Analiz estatistik yo te fèt lè l sèvi avèk lojisyèl estatistik IBM SPSS (vèsyon 23.0 pou macOS, IBM Corporation, New York,NY, USA,2015). Kolmogorov-Smirnov ak Leven te analize done pou nòmal ak omojènite divèjans yo. tès yo, Lè sa a, soumèt nan yon ANOVA yon sèl-fason lè l sèvi avèk yon HSD Tukey a (onètman diferans enpòtan) kòm yon tès post-doc, oswa nan yon tès t ki pa pè. Yo te itilize yon tès korelasyon Pearson pou konpare done ekspresyon nòmal ant pwofil chimik yo ak aktivite byolojik ekstrè sianobakteri yo.

3.7. Analiz prensipal eleman (PCA)

PCA te itilize pou transfòme yon kantite varyab potansyèlman korelasyon nan yon kantite varyab relativman endepandan, ki kapab klase dapre kontribisyon yo nan eksplike varyasyon an nan seri a done antye [61]. Konpozan relativman enpòtan nan modèl ki gen gwo dimansyon ka idantifye avèk siksè. Done orijinal ki gen gwo dimansyon yo ka trase sou yon espas dimansyon ki pi ba yo, epi kidonk konpleksite yon pwoblèm klasifikasyon modèl ki gen gwo dimansyon redwi anpil [62]. Pou etid sa a, yo te fè rekonesans modèl ki baze sou PCA lè l sèvi avèk IBM SPSS estatistik lojisyèl (vèsyon 23.0 pou macOS, IBM Corporation, New York, NY, USA, 2015). Matris done a fèt nan metabolit yo prezan nan ekstrè akeuz ak asetòn nan kat tansyon cyanobakteri yo, ak aktivite yo nan konsantrasyon ki pi wo a teste.

4. Konklizyon

Aktivite byolojik parèt nan ekstrè cyanobakteri yo analize isit la te pwouve yo byen klè korelasyon. Dapre prezans nan PBPs bioaktif, ekstrè akeuz yo te pi efikas pou pwoteksyon UV ki, ansanm ak kapasite radikal scavenging yo, sijere yo kòm engredyan pwomèt yo dwe itilize nan fòmilasyon anti-aje ki vize a anpeche aje po anvayi pa faktè ekstèn. Nan lòt men an, ekstrè yo asetòn pwouve pi efikas nan anpeche aktivite a nan anzim ki responsab pou degradasyon nan matris la po ak pèt nan estrikti po, kidonk yo te pi apwopriye pou aje po ki gen rapò ak laj.extrait salsa cistancheKonplo a fè ekstraksyon sekans nou pwopoze a te kapab pwouve avantaje, sa ki pèmèt jwenn nan pwodui chimik diferan ekstrè byoaktif atravè monetizasyon nan byomass cyanobakteri, fè pwosesis la pi dirab ak ekonomikman atire. Ansanm, ekstrè sianobakteri yo te pwouve yo merite plis eksplwatasyon nan jaden an nan aje po, vize rechèch la pou engredyan natirèl, san danje, ak dirab pou fòmilasyon kosmetik.

Atik sa a se extrait de Mar. Drugs 2022, 20, 183. https://doi.org/10.3390/md20030183 https://www.mdpi.com/journal/marinedrugs