Efè Runing II sou kwasans ak metastaz timè transplantasyon nan sourit ki gen kansè nan mamè ak mekanis li yo.

Objektif:

Pou etidye efè Runing II (yon preparasyon èrbal Chinwa pou kansè nan mamè) sou kwasans ak metastaz nan timè transplantasyon kansè nan mamè MA-891-pote sourit TA2 ak mekanis li yo. Metòd: Modèl kansè nan mamè MA-891 selil transplantasyon timè sourit TA2 ak metastaz nan poumon yo te devlope pou obsève efè Runing II sou kwasans ak metastaz timè transplantasyon an. Metòd imunohistochimik ak analiz imaj yo te adopte pou detekte nivo faktè kwasans endothelial vaskilè (VEGF), reseptè faktè kwasans endothelial vaskilè (VEGFR), konte mikwo-veso (MVC), ak zòn mikwo-veso (MVA).

Rezilta: Nan gwoup Running II a, pousantaj anpèchman pwa timè a ak pousantaj anpèchman metastaz nan poumon yo te 37.3 pousan ak 65.4 pousan respektivman, kwasans timè a ak metastaz nan poumon yo te evidamman anpeche; Ak nivo VEGF ak VEGFR, MVC, ak MVA te siyifikativman diminye an konparezon ak sa yo nan gwoup kontwòl timè a (P).<0.05). Conclusion: The Chinese herbal preparation Running II can inhibit the metastasis of tumors by inhibiting angiogenesis, and the mechanism is possibly related to the down-regulation of VEGF and VEGFR expression.

Anplis de sa, an menm tan an nan rechèch, nou te jwenn ke echinase nan Cistanche gen yon efè anti-timè. Pou aplikasyon echinacoside nan dwòg antitumoral, envansyon prezan an premye ajoute MTH1, pirofosfataz inòganik, ak dGTP nan solisyon reyaksyon an (100mM pH8.0 Tris-acetic asid, 40mM NaCl, 10mM). acetate mayezyòm, 0.005 pousan Tween20 ak 1mMDTT) Nan metòd la, yo te enkube anzim nan ak substra nan tanperati chanm pou 1 èdtan ak Lè sa a, 25 ul nan solisyon an malachite vèt yo te ajoute mete fen nan reyaksyon an. Absorbans la te detekte nan 630 nm ak yon lektè microplate BIO-RAD iMark. Rezilta yo te montre ke echinacoside te gen yon efè inhibition enpòtan sou aktivite anzim nan MTH1; Dezyèmman, efè echinacoside sou selil timè nan nivo selilè te detekte pa MTT tès, ak rezilta yo te montre ke echinacoside te kapab siyifikativman anpeche kwasans selil kansè nan kolon SW480 ak selil osteosarcoma imen U2OS, ak envansyon prezan an anpeche kwasans echinacoside. MTH1, yon anzim espesifik ki kenbe siviv nan selil timè yo, mennen nan enkòporasyon nan nukleotid oksidize nan ADN, sa ki lakòz letal ADN doub-seksyon repo nan selil kansè yo, kidonk pwodwi efè anti-timè. Nouvo aplikasyon medikal la pral mete fondasyon pou devlopman nouvo dwòg antitumor nan tan kap vini an.

Klike sou pwodwi efè cistanche

Mo kle:

timè mamè; anjojenèz; faktè kwasans endothelial vaskilè (VEGF); Running II (yon preparasyon èrbal Chinwa pou kansè nan mamè)

Kansè mamè se yon timè malfezan ki menase anpil sante fi ak ensidans maladi a klase premye pami timè malfezan fi, ak yon tandans ogmante ane pa ane. Malgre ke metòd terapetik li yo te fè kèk pwogrè, pousantaj siviv alontèm pou pasyan ki gen kansè nan mamè pa te ogmante akòz kwasans lan pwogrese ak metastaz nan timè. Angiogenesis timè yo se yon kondisyon debaz pou kwasans, envazyon, ak metastaz timè yo.

Se poutèt sa, anpèchman anjyogenesis timè yo se yon fason efikas pou anpeche pwodiksyon ak devlopman timè ak pwolonje lavi pasyan an.1 Nan etid la prezan, mekanis nan dwòg Chinwa Running II a ak fonksyon pou konplete qi ak nourisan Yin, reglemante wout ak veso konsepsyon, rezoud mas, ak detoksikasyon nan anpeche timè ak anti-metastaz te etidye nan anjyogenesis ak faktè regilasyon li yo nan timè a transplante'tèt kansè nan mamè MA-891 nan sourit TA2 ak metastaz nan poumon.

MATERYÈL

Swasant SPF fi TA2 sourit, ki peze (20±2) g, ki gen laj 6-8 semèn, yo te achte nan men Depatman Bèt Laboratwa, Tianjin University of Medical Sciences. Se Prof. Luo Liqin, laboratwa patolojik, Enstiti timè, Akademi Chinwa Syans Medikal, ki te bay souch selil MA-891 kansè nan mamè sourit la.

Runing II konpoze de Sheng Huang Qi (Radix Astragali Mongolici), Shan Ci Gu (Pseudobulbus Cremastrae), Tai Zi Shen (Radix Pseudostellariae), Gou Qi Zi (Fructus Lycii), E Zhu (Rhizoma Curcumae Phaeocaulis), Yi Yi Ren ( Semen Coicis), Yin Yang Huo (Herba Epimedii), Dang Gui (Radix Angelicae Sinensis), elatriye, ak rapò dòz 1.67: 1.67: 1.33: 1.33: 1.33: 1.33: 1.33: 1, ki te prepare yon dekoksyon pa la. Seksyon famasetik, Lopital Longhua, dapre yon teknik tradisyonèl, epi kenbe nan 4ć pou itilize; Cyclophosphamide (CTX, 200mg/ampoule, nimewo branch: 981104) ak tamoksifèn (TAM) te pwodwi pa Shanghai Hualian Pharmaceutical Co Ltd; Saline nòmal te pwodwi pa Shanghai Fumin Pharmaceutical Co.

Antikò poliklonal faktè endothelial vaskilè (VEGF) (dilusyon k ap travay 1:25–1:50), reseptè faktè kwasans endothelial vaskilè (VEGFR, dilusyon k ap travay 1:30–1:50), ak antikò poliklonal FVIIIAg (dilusyon k ap travay 1:50). ) yo te achte nan men Santa Cruz Biotechnology Inc; EnVision dezyèm antikò, lapen anti-rat VEGF antikò, kabrit anti-lapen FVIII Ag antikò ak kabrit anti-lapen VEGFR antikò, ak EnVision Kit yo te achte nan men Dako Co, Denmark; 3, 3- Diaminobenzidine (DAB) te achte nan Shanghai Huamei Bioengineering faktori.

METÒD

Devlopman nan modèl bèt

Modèl bèt la te devlope ak enferans nan metòd Luo ak Gao, et al.2,3. Selil MA-891 kansè nan mamè kiltive in vitro nan sourit la nan yon faz siviv logaritmik yo te chwazi epi konsantrasyon selil yo te kontwole kòm 1x107 /ml. Anba kondisyon yo aseptik, selil kansè nan mamifè yo te vaksinen nan pati anba lar sourit TA2 nan axilla dwat la (0.2 ml / sourit, sa vle di 2X106 selil / sourit).

Gwoup bèt ak metòd administrasyon

De jou apre inokulasyon, sourit yo te owaza divize an 4 gwoup, 15 sourit nan chak gwoup. 1) Gwoup kontwòl timè: 0.4 ml saline nòmal yo te administre intragastrik, yon fwa chak jou, senk fwa chak semèn. 2) Gwoup Runing II: Runing II te dilye ak saline nòmal ak 0.4 ml dilution sa a ki koresponn ak 48 g·kg{{10}}·d-1 ki te kalkile dapre tablo tache "Tablo konvèsyon ant zòn sifas kò imen ak bèt" nan "Metodoloji etid sou famasi dwòg Chinwa"4 te bay entragastrik, yon fwa chak jou, senk fwa chak semèn. 3) gwoup kontwòl CTX: Konsènan dòz la itilize pa Jiang Bo, 5 CTX te dilye ak saline nòmal, ak 0.4 ml ki koresponn ak 50 mg·kg-1·d-1 te bay entragastrik, yon fwa chak lòt jou, twa fwa chak semèn. 4) Gwoup kontwòl TAM: Yo te dilye TAM ak saline nòmal epi yo te administre 0.4 ml ki koresponn ak 2.7 mg·kg-1·d-1 intragastrik, yon fwa chak jou, senk fwa chak semèn. Yo te bay dwòg yo pou 3 semèn nan tout kat gwoup yo.

Pran echantiyon

Sou 22yèm jou apre administrasyon an, sourit yo te sakrifye pa dislokasyon vètebral matris yo epi yo te peze. Lè sa a, mas timè a ak nan poumon yo te pran ak peze respektivman. Vrè pwa kò sourit la=pwa kò a pondéré – pwa timè a. Nœuds gri sou sifas poumon, sa vle di, metastaz focuses, te konte pa je toutouni. Mas timè a te plase nan yon solisyon 10 pousan fòmaldeyid net pou fikse, ki te swiv pa parafin embedding, ultrathin sectioning, imunohistochemical Envision de-etap tansyon, ak detèminasyon nan VEGF, VEGFR, konte microvessel (MVC), ak zòn microvessel (MVA).

Pousantaj anpèchman pwa timè a

Pousantaj anpèchman timè=(pwa timè an vle di nan gwoup kontwòl la apre tretman an - vle di pwa timè nan gwoup medikaman an apre tretman) / vle di pwa timè nan gwoup kontwòl la apre tretman an × 100 pousan.

Pousantaj anpèchman metastaz nan poumon

Pousantaj anpèchman metastaz nan poumon=(mwayèn nimewo ne metastaz nan poumon nan gwoup kontwòl la - nimewo vle di metastaz nan poumon nan gwoup medikaman an)/mwayèn nimewo ne metastaz nan poumon nan gwoup kontwòl la x 100 pousan.

Immunohistochemical Envision de-etap tach

Seksyon parafin nan 4 μm te pran, ki te swiv pa deparafine woutin ak xylene, dezidratasyon gradyan, ak lave ak PBS, 5 min x 3 fwa; seksyon an te benyen nan 0.01 mol/L, pH6.0 sitrat tanpon, mete nan yon fou mikwo ond nan 98ć pou 10 min pou reparasyon antijenik ak natirèlman refwadi nan tanperati chanm apre yo fin pran nan men an. fou mikwo ond; degoute antikò an premye (antikò mansyone pi wo a ak dilution nan antikò korespondan respektivman), 37ć, 90 min, lave ak PBS, 5 min x 3 fwa; degoute Envasion dezyèm antikò, nan tanperati chanm pou 60 min, lave ak PBS, 5 min x 3 fwa; degoute solisyon DAB ki fèk prepare pou devlope koulè, kontwole devlopman koulè pou 3-10 minit anba yon mikwoskòp, kontre pou 45 s ak campeachy, rense ak dlo tiyo, seche ak yon soufle, aliye ak jansiv net. Selil la ak sitoplasm nan granules mawon-jòn oswa nwa-mawon te konsidere kòm pozitif. Seksyon pozitif li te ye nan kansè nan mamè te itilize kòm yon kontwòl pozitif, ak sa a nan ki tanpon PBS ranplase pou premye antikò a te itilize kòm yon kontwòl negatif.

Analiz imaj

Yo te itilize kamera videyo ACE (rezoud pouvwa 930 liy) ak analizeur imaj LEICAQ500W ak sistèm analiz LEICA konplè otomatik. Anba yon mikwoskòp x 200, 2 jaden vizyon nan chak seksyon yo te chwazi owaza pou detèminasyon an nan VEGF oswa 3 jaden vizyon pou detèminasyon an nan VEGFR ak MVA, ak pousantaj nan zòn pozitif nan zòn nan jaden vizyon antye te kalkile nan tout gwoup yo. . Pou detèminasyon MVC, yo te chwazi 5 rejyon ki gen veso sangen ki pi rich yo nan chak seksyon anba yon mikwoskòp x 100, ak Lè sa a, anba x 400 mikwo-veso yo nan chak jaden vizyon nan 5 rejyon ki pa gen sipèpoze yo te konte, epi yo te itilize mwayen an. kòm yon kontwa mwayèn mikwo-veso (MVC) nan timè a.

Metòd estatistik

Yo te itilize lojisyèl SPSS8.0 epi yo te itilize tès chi-kare a pou konparezon ant pousantaj yo, epi yo te itilize yon tès t oswa ANOVA yon sèl pou konparezon mwayen.

REZILTA

Efè ki anpeche timè ak anti-metastaz Running II sou timè transplantasyon kansè nan mamè MA-891-ki gen sourit TA2 ak metastaz nan poumon.

It was shown in Table 1 that the tumor weight inhibition rate was 37.3% in the Runing II group and 86.2% in the CTX control group, both tumor inhibition rates being >30 pousan, ak diferans enpòtan (tou de P<0.05) as compared with both tumor-bearing control group and TAM control group, indicating that both Runing II and CTX have a certain tumor-inhibiting effect. And there was a significant difference (P<0.05) between the Runing II group and the CTX control group in the tumor inhibition rate, indicating that the tumor-inhibiting effect of Runing II was lower than that of CTX. The lung metastasis inhibition rate was 65.4% in the Runing II group and 43.9% in the CTX control group, with significant difference (both P<0.05) as compared with a tumor-bearing control group and TAM control group, indicating that both Runing II and CTX have a certain tumor metastasis-inhibiting action. And there was a significant difference between the Runing II group and the CTX control group (P<0.05) in the lung metastasis inhibition rate, suggesting that the anti-metastasis action of Runing II is superior to that of CTX.

Efè Running II sou ekspresyon VEGF ak VEGFR nan timè transplante'tèt MA-891- ki gen sourit TA2

Jan yo montre nan Tablo 2, ekspresyon VEGF ak VEGFR nan tou de gwoup Running II ak gwoup kontwòl CTX yo te siyifikativman pi ba pase sa yo nan gwoup kontwòl timè a (P).<0.05), with a significant difference between the two. In the Running II group, the VEGF and VEGFR expressions were not significantly different from those in the CTX control group (P>0.05), ekspresyon VEGF la te siyifikativman pi ba pase sa nan gwoup kontwòl TAM (P).<0.05), and the VEGFR expression was similar to that in the TAM control group (P>0.05). In the CTX control group, the VEGF and VEGFR expression was lower than those in the TAM control group. In the TAM control group, the VEGF expressions were similar to that in the tumor-bearing control group (P>0.05), ak ekspresyon VEGFR la te pi ba pase sa nan gwoup kontwòl timè a (P<0.05).

Efè Running II sou MVA ak MVC nan timè transplantasyon an nan sourit MA-891-ki gen TA2

Jan yo montre nan Tablo 3, nivo MVA ak MVC nan kansè transplantasyon an nan gwoup medikaman yo te siyifikativman pi ba pase sa yo nan gwoup kontwòl timè a (P).<0.05); in the Running II group, the levels of MVA and MVC were significantly higher than those in the CTX control group (P<0.05), the level of MVC was lower than that in the TAM control group (P<0.05), and the MVA level was similar to that in the TAM control group (P>0.05).

DISKISYON

Medikaman Chinwa tradisyonèl kenbe jenèz la ak devlopman nan rezilta timè nan efè konplè nan faktè idyopatik ak senpati, men ak estrès la sou ansyen an. Nan yon etid klinik anvan, Pwofesè Lu ak Tang te fè konnen deficiency vital-qi nan enteryè a ak disharmony nan otowout ak veso konsepsyon yo se kòz prensipal yo nan jenèz timè, ak envazyon entèn, k ap deplase ak gaye nan patojèn kansè yo se kondisyon prensipal yo nan kwasans ak metastaz nan kansè nan mamè.6 Se poutèt sa, nan tretman, yo defann nourisan qi vital ak retire mas. Kouri II se yon fòmil Chinwa èrbal ki adisyone nan pratik klinik la nan plizyè ane dapre prensip tretman ranfòse rezistans kò a an premye epi elimine faktè patojèn dezyèm fwa. Nan fòmil la, Sheng Huang Qi (Radix Astragali Mongolici), Tai Zi Shen (Radix Pseudostellariae), Gou Qi Zi (Fructus Lycii), Yin Yang Huo (Herba Epimedii) se engredyan souveren, ak efè sipleman qi ak nourisan Yin, reglemante. veso oto ak konsepsyon, ki konfòm ak karakteristik souvan wè nan kansè nan mamè tankou tou de qi ak yin deficiency ak disharmony nan veso oto ak konsepsyon. Klinikman, fòmil sa a reyalize efè a evidan nan pwolonje tan siviv, ogmante kalite lavi a, estabilize konsantre timè, ak anpeche metastaz nan kansè.

Etid la te etabli modèl kansè nan mamè MA-891 souch selil transplante'tèt timè sourit TA2 ak metastaz nan poumon ak obsève efè Running II sou kwasans timè solid ak metastaz nan poumon, epi li te jwenn ke te gen diferans enpòtan nan timè a. pousantaj anpèchman ak pousantaj anpèchman metastaz nan poumon ant gwoup Running II a ak gwoup ki gen timè, ak ant gwoup Running II ak gwoup kontwòl CTX, ki montre ke Running II gen fonksyon evidan pou anpeche kwasans timè ak anti-metastaz. Anplis de sa, tamoksifèn (TAM) pa gen fonksyon evidan pou anpeche kwasans timè ak anti-metastaz nan sourit modèl yo, yo menm jan ak rezilta kansè mamè MA-891 se souch selil ER ak rapò sou aksyon dirèk. nan konsantrasyon ba nan TAM aletranje.7

Timè a se yon maladi tipik ki depann de veso sangen, ak kwasans li yo, enfiltrasyon, ak metastaz depann sou anjyogenesis. An menm tan an, neovaskularizasyon an ankò bay yon kanal metastaz pou selil timè yo, kreye kondisyon favorab pou kwasans, metastaz, ak difizyon timè a. 8, 9 VEGF se yon faktè pro-angiogenic ak aksyon ki pi fò, inik, ak espesifik sou selil endothelial vaskilè, ak anpil selil timè ka sekrete VEGF, ki ogmante pèmeyabilite vaskilè ak dirèkteman aji sou selil endothelial vaskilè atravè obligatwa nan reseptè VEGF la, ankouraje divizyon li yo ak pwopagasyon, pwovoke anjyogenesis nan timè ak enfliyanse nimewo mikwo-veso, ankouraje kwasans ak metastaz nan timè.10,11 Pifò selil timè gen ekspresyon VEGF segondè, pandan y ap nan tisi yo nòmal, sèlman yon ti kantite ògàn tankou ren, ovè, elatriye, gen pi wo ekspresyon VEGF. Se poutèt sa, kèk entelektyèl di ke VEGF ka itilize kòm makè nan metabolis timè ak metastaz12 ak plis ideyal pati sib nan bloke neoangiogenesis nan timè,13 ak entèfere ak faktè vaskilè regilasyon nan timè ak lyen aji li yo, reglemante ekspresyon an nan faktè anjyogenesis, ak anpeche anjyogenesis posib kontwole kwasans ak metastaz nan timè.

Rezilta yo nan etid aktyèl la endike ke Runing II ka desann-regle ekspresyon nan VEGF ak VEGFR pètèt bloke siyal kondiksyon migrasyon VEGF-induit ak pwopagasyon nan selil endothelial, ak plis anpeche anjyogenesis nan timè, kidonk egzèse efè antineoplastic ak anti-metastasizing. .

Syans anvan yo te montre ke nan kou kwasans timè malfezan, kwasans rapid tisi a inevitableman pwovoke anoksi grav nan tisi lokal yo, ak anoksi ta ka ankouraje sentèz VEGF mRNA ak ralanti degradasyon VEGF mRNA pou pwovoke jenèz yon. gwo kantite nouvo veso kapilè lokal yo.14,15 Nan obsèvasyon selil imunohistochimik pozitif tach, otè yo te jwenn evidan ekspresyon VEGF nan sitoplasm nan mouri selil timè nekrotik, okontrè, mwens oswa pa gen ekspresyon VEGF nan selil timè ak pwopagasyon aktif. , ki ka gen rapò ak yon nivo ki pi wo nan anoksi pwovoke faktè nan selil timè, ki konfòme ak rapò a nan Chita pale KL, et al.16 Running II gen Dang Gui (ᔧᔦ Radix Angelicae Sinensis), E Zhu (Rhizoma Curcumae Phaeocaulis), Sheng Yi Yi Ren (Semen Coicis), Shan Ci Gu (Pseudobulbus Cremastrae), elatriye, ki fonksyon aktive sikilasyon san, rezoud flèm ak retire twoub. Yo anpeche sentèz ak sekresyon VEGF posib atravè amelyore mikrosirilasyon lokal timè a, ogmante rezèv oksijèn nan selil timè yo, kidonk anpeche kwasans timè a pou fè anti-metastaz.

REFERANS

1.Folkman J. Angiogenesis ak kansè nan tete. J Clin Oncol 1994; 12: 441-443.

2. Folkman J. Angiogenesis rechèch: soti nan laboratwa nan klinik. Fowòm (Genova) 1999; 9: 59-62.

3. Potgens AJ. Ekspresyon faktè pèmeyabilite vaskilè enfliyanse anjyogenesis timè nan liy melanom imen xenografted sou sourit toutouni. Am J Pathol 1995; 5: 775-782.

4.Sauter ER, Nesbit M, Watson JC, et al. Faktè kwasans endothelial vaskilè a se yon mache nan envazyon timè ak metastaz nan karsinom selil squamous nan tèt la ak kou. Clin Cancer Res 1999; 5: 775-782.

5.Warren RS, Yuan H, Matli MR, et al. Règleman pa faktè kwasans endothelial vaskilè pa ipoksi. J Biol Chem 1996; 271: 2746-2753.

6. Levy AP, Levy NS, Goldberg MA. Règleman apre transkripsyon faktè kwasans endothelial vaskilè pa ipoksi. J Biol Chem 1996; 271: 2746-2753.

7.Talks KL, Turley H, Gatter KC, et al. Ekspresyon ak distribisyon faktè HIF-1 alfa ak HIF-2 alfa ki ka fè ipoksi yo nan tisi nòmal imen, kansè, ak makrofaj ki asosye ak timè yo. Am J Pathol 2000; 157: 411-421.

For more information:1950477648nn@gmail.com