Efè diferan pati ekstrè Cistanche Deserticola sou efè ipoglisemi Db / Db sourit nwa Ⅱ

2 Metòd eksperimantal

2.1 Preparasyon Cistanche deserticola pwodwi trete Cistanche deserticola:

Pran Cistanche deserticola materyèl medsin, lave enpurte, vapè nan yon chodyè nan presyon nòmal pou 2 èdtan, koupe an 6 mm, epi sèk nan 70 degre. Cistanche deserticola: Pran moso dekoksyon Cistanche deserticola, ajoute kantite ki apwopriye nan diven diri, melanje byen, krème pou 8 èdtan (diven diri jòn: dlo=1:1), vapè anba presyon ki wo pou 4 èdtan, epi sèk nan 70 degre. (Sèvi ak 30 mL diven diri pou chak 100 g Cistanche deserticola).

NATIRÈL ÒGANIC CISTANCHE EXTRÈ

Sèvis sipò Wecistanche-Pi gwo ekspòtatè cistanche nan Lachin nan:

Imèl:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Achte pou plis detay espesifikasyon:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-boutik

2.2 Anrichisman diferan pati extrait Cistanche deserticola/Cistanche deserticola

Pran 30 g Cistanche deserticola/Tamarococcus deserticola poud, ajoute 10 fwa kantite dlo, chalè, ak rflu pou fè ekstraksyon de fwa, 2 èdtan chak fwa, konbine ekstrè yo, konsantre, ajoute etanòl jiskaske kontni alkòl la rive nan 60%, presipite nan tanperati ki ba pou 12 èdtan, epi filtre ak aspirasyon. , presipite a se pati nan polisakarid brit. Konsantre supernatant la nan yon konsantrasyon apwopriye, aplike li nan résine adsorption macroporous D101, epi elite li ak dlo ak etanòl nan konsantrasyon diferan nan sekans. Kolekte eluate dlo a epi konsantre anba presyon redwi nan yon keratin epè, ki se fraksyon total oligosakarid la; lave ak 40% etanòl. Delikid, konsantre, epi sèk anba presyon redwi, ki se fraksyon total glikozid nan Cistanche deserticola.

2.3 Detèminasyon kontni diferan pati ekstrè nan Cistanche deserticola/Cistanche deserticola

2.3.1 Detèminasyon kontni total polisakarid Cistanche deserticola/Cistanche deserticola.

Peze echantiyon glikoz la 20. 00 mg nan yon flacon volumétrique 5{0 mL pou fè 0. Pou yon solisyon estanda glikoz 4 mg·mL-1, pipète 3, 4, 5, 6, ak 7mL respektivman nan yon flakon volumétrique 50 mL, delye nan volim ak dlo, epi pipète 2.0 mL nan. chak solisyon glikoz gradyan konsantrasyon nan yon tib tès. Pran yon lòt kantite egal dlo distile kòm yon kontwòl vid, ajoute 1 mL 5% fenol nan chak tib, byen souke, byen vit ajoute 5 mL nan asid silfirik konsantre, kite l pou 10 minit, mete l nan yon beny dlo 40 degre pou 15 minit, retire li, byen vit refwadi nan tanperati chanm, epi mezire valè absorpsyon an nan 490 nm, pran absorbans (A) kòm òdone a ak konsantrasyon glikoz la (C) kòm absis la, trase yon koub estanda, epi jwenn la. ekwasyon regresyon Y=8.37X-0.162 8 (R2=0.994 6). Egzakteman peze 1.0 g nan total poud polisakarid matyè premyè ak pwodwi, mete yo nan 50 mL flakon volumetrik respektivman, ajoute dlo pou fonn epi ajiste volim nan mak la, avèk presizyon trase 2.0 mL nan yon tib tès, epi mezire nan menm bagay la. fason kòm metòd preparasyon koub estanda. , se sa.

2.3.2 Detèminasyon kontni betain nan Cistanche deserticola/Cistanche deserticola

2.3.2.1 Preparasyon solisyon referans:

Peze avèk presizyon 1.17 mg nan solisyon referans betaine, mete l nan yon flakon volumetrik 5 mL, ajoute 50% metanol pou fonn ak delye nan volim, epi li pare.

2.3. 2. 2 Kondisyon kwomatografik

Kolòn kwomatografik la se Ecosil {{0}}AMINO kolòn kwomatografik (4.6 mm × 250 mm, 5 μm), faz mobil: acetonitrile-dlo (99.5 ∶ 0.5) , tanperati kolòn: 30 degre, longèdonn deteksyon: 194 nm, to koule: 0.6 mL·min-1, volim piki 10 μL, chromatogram yo montre nan Figi 1. 2.3.2.3 Preparasyon nan solisyon tès jisteman peze poud nan fraksyon total oligosakarid nan pwodwi kri ak fini 1.0 g, respektivman mete nan flakon volumetrik 5 mL, ajoute dlo distile pou fonn ak delye nan volim, souke byen, pase nan 0.45 μL manbràn filtre mikropore, epi li pare.

2.3.2.4 Egzanp Detèminasyon Kontni

Jis absòbe total solisyon tès oligosakarid la nan Cistanche deserticola anvan tout koreksyon ak prepare, mezire li dapre kondisyon ki anba "2.3.2.2", epi kalkile kontni an betaine nan echantiyon an.

2.3.3 Detèminasyon kontni echinacoside, verbascoside, ak heterocymicifugarin nan Cistanche deserticola/Cistanche deserticola

2.3.3.1 Preparasyon solisyon referans

Egzakteman peze 4.50 mg echinakozid, 4.80 mg verbascoside, ak 5.05 mg comimicin heterologous nan 5 mL flakon volumetrik, ajoute 50% metanol pou fonn ak delye nan mak la, epi pran chak kontwòl Mete 200 μL nan solisyon echantiyon an nan piki a. flakon, ajoute 400 μL 50% metanol, epi melanje byen pou fè yon solisyon referans melanje, souke byen, epi li pare.

2.3.3.2 Kondisyon kwomatografik

Kolòn kwomatografik la se Ecosil C18 (4.6 mm × 250 mm, 5 μm), metanol se faz mobil A, 0.1% asid fòmik se faz mobil B, elisyon gradyan, {{ 12}} ~ 45 min, 30% A→ 70% A, to koule a se 1.0mL·min-1, tanperati kolòn lan se 30 degre, longèdonn deteksyon an se 330 nm, volim piki a se 10μL, ak kwomatogram nan montre nan Figi 2.

2.3.3.3 Preparasyon solisyon tès la

Egzakteman peze 1.0 g nan total poud glikozid matyè premyè ak pwodwi, mete yo nan 100 mL flakon volumetrik, ajoute 50% metanol pou fonn ajiste volim nan mak la, epi souke. byen. Egzakteman trase 5 mL nan chak echantiyon nan yon flakon volumétrique 10 mL, ajoute 50% metanol pou fè volim nan, souke byen, epi pase nan yon manbràn filtre mikwopore 0.45 μm jwenn.

2.3.3.4 Egzanp Detèminasyon Kontni

Egzakteman trase echantiyon total glikozid Cistanche deserticola a epi mezire li selon kondisyon ki anba "2.3.3.2". Kalkile sa ki nan echinacoside, verbascoside, ak heterologous konplis nan echantiyon an.

2.4 Gwoupman bèt, modèl, ak administrasyon dwòg

Chanm bèt la gen 12 èdtan limyè ak 12 èdtan nan fènwa, yon imidite relatif 50% a 70%, ak yon tanperati chanm nan 18 a 22 degre. db / db sourit nwa ak db / m sourit nwa (gwoup kontwòl nòmal) yo te manje nòmalman ak manje òdinè, ak eksperyans la te kòmanse nan 9 semèn ki gen laj. Eksepte pou gwoup kontwòl nòmal la, rès sourit nwa db/db yo te chwazi owaza selon nivo sik nan san ak pwa kò. Divize an 8 gwoup, sètadi gwoup modèl, gwoup kontwòl pozitif, Cistanche deserticola total polisakarid gwoup, Cistanche deserticola total oligosakarid gwoup, Cistanche deserticola total glikozid gwoup, Tartschistanche deserticola total polysaccharide gwoup, Tarthouse deserticola total oligosakarid gwoup, Tartschistanche deserticola gwoup total de glukosid. Eksepte pou kontwòl nòmal

Eksepte pou gwoup modèl la ak gwoup modèl la, rat yo nan lòt gwoup yo te bay administrasyon entragastric nan yon dòz 2 mL/100 g pou 4 semèn youn apre lòt. Konsantrasyon likid la te 4.1 g·kg-1. Gwoup kontwòl nòmal la ak gwoup modèl la te trete menm jan an. Bay yon sèten kantite saline nòmal nan vant la.

2.5 Efè diferan pati ekstrè Cistanche deserticola sou nivo glikoz nan san db/db sourit nwa

2.5.1 Tès oral tolerans glikoz (OGTT).

Apre 26 jou nan administrasyon an, yo te jèn pou 12 èdtan, epi 60 minit apre administrasyon an jou kap vini an, sourit nwa yo nan chak gwoup yo te bay 2.0 g·kg{-1 glikoz. nan 0, {{10}}.5, 1.0, ak 2 respektivman. .0 h san venn ke yo te pran pou mezire valè glikoz nan san an. Avèk valè glikoz nan san kòm òdone ak tan kòm absis la, yo te fè yon tablo chanjman glikoz nan san, epi yo te kalkile zòn ki anba liy koub glikoz nan chak gwoup eksperimantal dapre fòmil (AUC, hmmoL·L{). {13}}) [19]. AUC=A × {{20}}.25 + B × 0.50 + C × 0.75 + D. Nan fòmil la: A, B, C, ak D se valè glikoz nan san nan 0, 0.5, 1.0, ak 2.0 h respektivman.

2.5.2 Kalkil endèks rezistans ensilin ak endèks arterioskleroz

Yo te kalkile endèks rezistans ensilin nan dapre metòd literati [20]: HOMA-IR=Glikoz × Ensilin / 22. 5. HOMA - =20 × Ensilin / (Glukoz - 3.5) × 100%. IR se rezistans ensilin ak (%) se fonksyon -selil. Inite molè glikoz la se mmol·L-1

. Yo bay ensilin an mU·L-1. Kantite glikoz ak ensilin yo mezire pandan jèn. Endèks ateroskleroz la (Atherogenic endèks) te kalkile dapre metòd ki dekri pa Zheng et al. [21]. Metòd kalkil: Atherogenic i index=(TC-HDL-C) / HDL-C.

2.5.3 Efè diferan pati ekstrè Cistanche deserticola/Cistanche deserticola sou INS serik ak HbA1c sourit nwa db/db

Pran echantiyon serom ki nan frizè yo epi pote yo nan tanperati chanm anvan ou sèvi ak yo pou fè tès ak INS ak HbA1c anzim ki lye ak twous imunoessai. Fè egzateman swiv metòd ak etap ki nan enstriksyon twous yo.

2.6 Efè diferan pati ekstrè Cistanche deserticola/Cistanche deserticola sou nivo estrès oksidatif fwa sourit nwa db/db

Pran echantiyon serom ki nan frizè yo epi pote yo nan tanperati chanm anvan ou sèvi ak yo pou fè tès ak twous imunoassay ki lye ak anzim MDA ak SOD. Fè egzateman swiv metòd ak etap ki nan enstriksyon twous yo.

2.7 Efè diferan pati ekstrè Cistanche deserticola/Cistanche deserticola sou metabolis grès epatik sourit nwa db/db

Nivo TG, TC, HDL-C, ak LDL-C nan serik rat yo te mezire lè l sèvi avèk twous ki enpòtan yo. Pou etap mezi espesifik, al gade enstriksyon yo pou twous yo.

2.8 Efè diferan pati ekstrè Cistanche deserticola/Ratiana kanfr sou UA, Cr, ak mALB nan plasma ak pipi sourit nwa db/db

Pran echantiyon plasma ak pipi nan frizè epi pote yo nan tanperati chanm anvan w sèvi ak yo pou fè tès UA, Cr, ak mALB twous imunoessai ki lye ak anzim yo. Fè egzateman swiv metòd ak etap ki nan enstriksyon twous yo.

2.9 Obsèvasyon seksyon patolojik pankreyas ak ren pa tach HE

Pankreyas la ak tisi ren yo tranpe nan 10% paraformaldehyde fixative pou 24 èdtan yo te retire, lave ak dlo distile, epi estoke nan 70% etanòl. Echantiyon tisi yo te retire, dezidrate ak etanòl gradye, netwaye, entegre nan parafin, seksyone, ak Lè sa a, tache ak ematoksilin ak eozin (H&E tach). Apre lakòl seksyon an fin cheche, sèvi ak yon sistèm dijital D 'wo rezolisyon pou obsève ak pran foto nan seksyon yo.

2.10 Detèminasyon kolagen tisi ren tip-IV pa imunohistochimi

Pou ekspresyon, seksyon ren yo te dewaxed nan dlo ak Lè sa a, sibi rekipere antijèn. Yo te bloke ak 10% serom kabrit ak enkubasyon ak antikò prensipal la nan 4 degre lannwit lan. Apre lave, yo te enkube antikò segondè a. Solisyon aktyèl la te DAB pou devlopman koulè. Lave, dezidratasyon, ak sele yo te fèt anba yon mikwoskòp optik. Obsève ekspresyon pwoteyin kolagen an tip IV nan tisi ren yo.

2.11 Metòd estatistik

Sèvi ak lojisyèl GraphPad Prism Version 5.01 (2007, GraphPad Software re inc) pou analize done yo ak rezilta yo.

Rezilta a se vle di±SEM Endike ke diferans ki genyen ant de gwoup yo se One-way

ＡＮＯＶＡ( ｏｌｌｏｅｄｅＢｏｎｅｒｒｎｎ′ yon pè kolòn tès) metòd, P<0.05 is a significant difference and has statistical significance.