Efè Glyeosides Cistanche sou aprantisaj koyisyon ak plastisit sinaptik nan rat modèl privasyon dòmi

REZIME

Objektif: 'Pou eksplore si wi ou nonglikozid nan cistancheka amelyore aaprantisaj ak fonksyon mantal nan privasyon dòmimodèl rat pareglemante plastisit sinaptik. Metòd: Senkant gason rat Wistar yo te owaza divize an gwoup kontwòl vid (Kontwòl), gwoup kontwòl platfòm (PC), gwoup modèl (Modèl),glikozid nan gwoup cistanche(GCs), ak gwoup estazolam (Est). Modèl privasyon dòmi nan rat te prepare pa yon metòd anviwònman dlo milti-platfòm modifye. Yo te itilize labirent dlo Morris ak tès jaden ouvè pou detekte rat yo.fonksyon kognitif espasyal and chanjman emosyonèl. Yo te itilize tach Nissl pou obsève chanjman yo nanmòfoloji ak kantite selil nève yonan zòn nan CAl ipokanp nan rat. Western blot ak R'T - PCl te itilize pou detekte nivo ekspresyon synaptophysin(SYN), sibstans dans manbràn postsynaptic 95 (PSD - 95), ak faktè neurotrophic ki sòti nan sèvo (BDNF). Rezilta: rezilta labirent dlo Morris te montre ke konpare ak gwoup kontwòl la, laaprantisaj ak kapasite mantalnan rat nan gwoup Modèl la te siyifikativman diminye (P<0. 05 ), and theaprantisaj ak fonksyon memwa nan ratte amelyore tretman GCs (P<0. 05). The results of the open field test showed that compared with the Control group, the movement distance and standing times of the Model group were significantly increased ( P <0. 05 ), the resting time was significantly shortened( P <0.05), and the anxiety was increased, while after GCs treatment, the movement distance and standing times decreased ( P <0. 05), the resting time increased ( P<0. 05), and the anxiety was improved. The results of Western blot and R'T' - PCR showed that the protein and gene expression levels of BDNF, SYN, and PSD -95 in the Model group were significantly decreased ( P <0. 05), while after treatment with GCs, the expression levels of BDNF, SYN and PSD -95 were significantly up-regulated ( P <0.05).

Konklizyon: Glikozid nan cistancheka afekte plastisit sinaptik pa reglemante ekspresyon makè ki gen rapò ak sinaptik, kidonk amelyore aprantisaj ak fonksyon mantal rat modèl privasyon dòmi.

MO KLEGlikozid nan cistanche; Ipokanp; privasyon dòmi; Aprantisaj ak memwa; enkyetid; Plastisite sinaptik

GLYCOSIDES GWO NIVEO NAN CISTANCHE POU VANN

Twoub dòmi (SD)se yontwoub fonksyonèl nan dòmikoze pa yon seri de faktè konplèks tankou lensomni, rèv souvan, ak reveye fasil. Ensidans SD la piti piti ogmante nan dènye ane yo. Etid ki gen rapò te rapòte ke SD ka lakòzmaladi kadyovaskilè, malfonksyònman metabolik, maladi iminitè, ak maladi dejeneratif sistèm nève santral tankou maladi alzayme a [1]. SD ka lakòz domaj oksidatif nan newòn ipokanp yo, lakòz malfonksyònman mantal, epi pwodui chanjman atitid tankou enkyetid ak depresyon [2]. Cistanche deserticola se yon materyèl presye Chinwa medsin ki ka itilize kòm medikaman ak manje. Li gen efè tonifye ren an ak ranplir qi, mwatir trip yo ankouraje mouvman entesten, ak ranfòse Yang. Ekstrè prensipal la nan Cistanche deserticola, glikozid nan cistanche (GCs), gen efè antioksidan, anti-apoptotik, pwoteksyon fwa, ak efè neuroprotective [3]. Rechèch anvan nou an te jwenn ke GC yo ka amelyore aprantisaj ak fonksyon mantal sourit SAMP8 lè yo jwe yon wòl antioksidan ak anti-apoptotik [4]. Etid ki gen rapò yo te montre ke malfonksyònman mantal ki te koze pa SD se byen ki gen rapò ak plastisit sinaptik [5]. Sepandan, gen kèk rapò sou mekanis nan ki GCs kontwole plastisit sinaptik ak amelyore aprantisaj ak memwa andikap ak n bès kognitif nan rat pwovoke pa privasyon dòmi. Se poutèt sa, etid sa a gen pou objaktif pou eksplore si GCs afekte plastisit sinaptik pa reglemante ekspresyon de makè ki gen rapò ak sinaptik, kidonk amelyore aprantisaj ak fonksyon mantal rat nan modèl privasyon dòmi, epi bay nouvo lide tretman ak plan pou tretman aprantisaj ak defisyans mantal ki te koze pa twoub dòmi ak GCs.

1 Materyèl ak Metòd

1. 1 Bèt eksperimantal

Rat Wistar gason ki gen laj 6 a 8 semèn, ki peze 280 a 300 g, yo te achte nan men Beijing Sibeifu, ak yon lisans pwodiksyon bèt [SCXK (Beijing) 2019-0010]. Tout bèt yo te kenbe nan Sant Eksperyans Animal nan Baotou Medical College nan kondisyon sa yo: tanperati (24 ± 1) degre, imidite 50% a 55%, 12 h limyè ak 12 h fè nwa, e pa gen okenn restriksyon sou manje ak dlo. Eksperyans sa a te apwouve pa komite etik lekòl la [Baoyi Lunshen 2022 No (63)].

1. 2 pwensipal réactifs ak enstriman

Total glikozid Cistanche deserticola te achte nan men Shaanxi Baoji Cosmeceuticals Development Co, Ltd (nimewo pakèt: KSM20220609011); Estazolam tablèt yo te achte nan men CSPC Pharmaceutical Group Ouyi Pharmaceutical (nimewo pakèt: 044220343); Pwoteyin chaje tanpon (P1015), RIPA lysis tanpon (R0010), solisyon chemiluminescent (PE0010), elatriye tout te achte nan Beijing Solebao; Postsynaptic dansite sibstans 95 (PSD-95) antikò (AB192757), sinaptofizin (SYN) antikò (ab32127), te achte nan men Abcam, USA; faktè nerotwofik ki sòti nan sèvo (BDNF) (48503-2), -aktin (52901), achte nan men SAB, USA; kabrit anti-lapen IgG segondè antikò (SA00001-20), achte nan Proteintech, USA; rat melatonin (MT), ELISA twous (MM-0657R1), te achte nan men Jiangsu Enzyme Immunity Industry Co, Ltd. Paraffin slicer (Leica, Almay); mikwoskòp optik (Leica, Almay); Morris dlo labirent, bwat tès jaden louvri (Shanghai Xinruan); enstriman elektwoforèz vètikal

(Beijing Liuyi Konpayi); Shaker dekolorizasyon (Beijing Liuyi Company); sistèm analiz D 'pwoteyin (Shanghai Tanon Teknoloji); fliyoresans quantitative PCR enstriman (Xi'an Tianlong Teknoloji co, Ltd).

1. 3 Metòd eksperimantal

1. 3. 1 Gwoup bèt ak administrasyon dwòg

5 0 rat gason Wistar yo te owaza divize an gwoup kontwòl vid (gwoup kontwòl), gwoup kontwòl platfòm (kontwòl Plat-form, gwoup PC), gwoup modèl (gwoup modèl), total glikozid nan gwoup Cistanche deserticola (gwoup GCs). , 50 mg/kg), ak gwoup estazola (gwoup Est, 0.54 mg/kg), ak 10 rat nan chak gwoup. Gwoup kontwòl la ak gwoup PC yo te bay 0.9% saline pa gavage. Tout gwoup yo te gavage a 7 am chak jou apre modèl la te kòmanse, ak gavage a te dire pou 21 jou.

1. 3. 2. Preparasyon nan modèl bèt privasyon dòmi

Modèl privasyon dòmi an te etabli lè l sèvi avèk metòd anviwònman dlo ki modifye milti-platfòm [6]. Ekipman eksperimantal la se te yon tank dlo rektangilè 130 cm × 50 cm × 45 cm. Yo te mete yon ti platfòm ki gen yon dyamèt 5 cm ak yon wotè 20 cm nan tank dlo a. Platfòm gwoup PC a te gen yon dyamèt 10 cm ak yon wotè 20 cm. Tank dlo a te ranpli ak dlo nan yon pwofondè de apeprè 18 cm, epi tanperati dlo a te kenbe nan (20 ± 1) degre. Yon semèn anvan kòmansman eksperyans lan, rat yo te mete nan bwat privasyon dòmi chak jou pou 60 minit pou familyarize tèt yo ak anviwònman an. Apre modèl la te etabli, eksepte pou gwoup kontwòl la, rat yo nan chak gwoup yo te mete sou ti platfòm la alè soti 8 am a 8 pm chak jou pou privasyon dòmi pou 21 jou youn apre lòt. Tout rat yo te pèmèt yo manje ak bwè lib epi deplase lib sou platfòm la, ak 12 èdtan nan altènasyon limyè ak nwa chak jou.

1.3.3 Eksperyans labirent dlo Morris

Labirent dlo Morris te divize an 4 zòn, plen ak dlo, epi platfòm la te plase nan kadran 4yèm lan. Sifas dlo a te apeprè 2 cm anwo platfòm la. Melanin manjab manje yo te ajoute nan dlo a, epi tanperati dlo a te kenbe nan (25 ± 1) degre. (1) Eksperyans navigasyon pozisyon: Yo te chwazi sant chak zòn epi yo te mete rat yo dousman nan dlo a. Yo te pèmèt yo eksplore lib. Tan li te pran pou rat yo jwenn platfòm sib la nan 60 segonn te anrejistre. Rat ki pa jwenn platfòm la te gide sou platfòm la epi yo te rete pou 20 segonn. Fòmasyon an te kontinye pandan 5 jou. (2) Tès eksplorasyon espasyal: Nan 6yèm jou a, yo te retire platfòm la epi yo te mete rat yo nan dlo ki soti nan sant 2yèm kadran an kont miray la. Kantite fwa rat yo te pase platfòm la nan 120 s ak tan yo te rete nan kadran 4yèm yo te anrejistre.

1.3. 4 Eksperyans jaden louvri

Yo te itilize yon bwat eksperimantal 100 cm × 100 cm × 50 cm, epi anba bwat la te divize an 9 kadriyaj. Yo te mete chak gwoup rat nan chanm eksperimantal louvri jaden an davans pou adapte yo ak anviwònman andedan kay la pou 60 min. Nan kòmansman eksperyans lan, yo te mete rat tès yo nan kwen fiks yo nan bwat eksperimantal la louvri, epi kantite fwa kanpe, distans mouvman, ak tan estatik rat yo nan 5 min yo te anrejistre lè l sèvi avèk lojisyèl analiz konpòtman. . Anviwònman an te oblije rete trankil pandan eksperyans la, epi yo te siye aparèy eksperimantal la ak dlo pwòp ak alkòl respektivman ant de eksperyans pou evite sant rat anvan an ki afekte jijman konpòtman pwochen rat la.

1. 3. 5 Test imunosorban ki lye ak anzim (ELISA)

Deteksyon nan nivo serik MT nan rat Rat yo te anestezi pa piki entraperitoneal, epi yo te kolekte 5 mL san nan aorta nan vant. Apre w fin tann 30 minit nan tanperati chanm, san an te santrifuje pou jwenn serom. Yo te ajoute 40 μL echantiyon diluan nan chak pi, ak Lè sa a, yo te ajoute 10 μL nan echantiyon an yo dwe teste. Apre sele ak fim sele a, enkube a 37 degre pou 30 min. Lave 5 fwa, ajoute 50 μL nan solisyon etikèt anzim, epi enkube nan 37 degre pou 30 minit apre sele ak fim nan sele. Lave 5 fwa, Lè sa a, ajoute solisyon an koulè-devlope ak solisyon an sispann reyaksyon an vire. Yo te mezire valè OD chak pi pa enstriman etikèt anzim nan yon longèdonn 450 nm.

１. ３. ６ Tach Nissl

Twa rat yo te pran nan chak gwoup, epi yo te retire tisi nan sèvo pa dekapitasyon. Tisi nan sèvo yo te fiks ak 4% solisyon polymethyl metakrilat, epi tisi a te dezidrate, benyen nan solisyon sir, ak entegre, epi tisi a te tranche pa metòd konvansyonèl yo. Tranch yo te kenbe ak yon epesè 5 μm, rense ak PBS, tache ak 0. 1% ble toluidin pou 0. 5 h, diferansye ak 95% alkòl, dezidrate ak 100% alkòl, transparans ak xylene, ak sele ak jansiv net. Chanjman yo nan mòfoloji ak kantite newòn nan rejyon CA1 nan ipokanp rat la te obsève anba yon mikwoskòp ak imaj yo te kolekte.

１. ３. 7 Eksperyans Western blot

Kat rat yo te chwazi nan chak gwoup, epi ipokanp la izole pa dekapitasyon. Yo te melanje tisi ipokanp la ak tanpon RIP A nan liz nan yon anviwònman beny glas epi yo te santrifuje pou jwenn supernatant la. Konsantrasyon nan pwoteyin te detekte pa metòd la BCA. 20 ug pwoteyin te ajoute ak tanpon chaje pwoteyin pou elektwoforèz. Apre elektwoforèz pwoteyin yo te fini, yo te transfere manbràn nan nan 300 mA koule konstan, bloke ak 5% poud lèt ekreme, yo te enkube antikò prensipal la nan 4 degre lannwit lan, epi yo te enkube antikò segondè a nan tanperati chanm pou 2 èdtan. Apre yo fin itilize solisyon devlopman koulè a, yo te itilize sistèm analiz chemiluminescence pou analiz estatistik gwoup pwoteyin.

1. 3. 8 RT-PCR eksperyans

Twa rat yo te chwazi nan chak gwoup pou prepare omojene tisi ipokanp. RNA total nan likid tisi a te ekstrè pa metòd Trizol la epi yo te mezire konsantrasyon an. Yo te itilize yon twous sentèz cDNA jèn pou transkripsyon ranvèse, epi yo te itilize yon reyaksyon anplifikasyon quantitative fluoresans pou detekte nivo ekspresyon relatif mRNA pwoteyin ki gen rapò ak sinaptik lè l sèvi avèk yon twous quantitative fluoresans. Rezilta yo te analize lè l sèvi avèk 2-ΔΔCt, epi sekans premye yo montre nan Tablo 1.

1.4 Metòd estatistik

Rezilta done ki konfòme ak distribisyon nòmal la te eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda (x ± s), epi analiz estatistik yo te fèt lè l sèvi avèk lojisyèl GraphPad Prism 9.5. Yo te itilize analiz yon sèl-faktè nan divèjans pou konparezon ant plizyè echantiyon, ak P <0.05 endike ke diferans lan te estatistik enpòtan.