Efè presyon perfusion sou pèt Podocyte nan ren sourit izole perfused
Mar 13, 2022
Résumé
Background/Objektif: Podosit yo pèdi nan pifò maladi glomerulèr, ki mennen nan glomerulosclerosis ak pwogresif.maladi ren. Anjeneral, li sipoze ke podosit yo ekspoze a koule nan filtraj e konsa nan fòs siyifikatif taye ki kondwi detachman yo soti nan manbràn nan sousòl glomerular (GBM). Nan kontèks sa a, efasman pwosesis pye yo te pwopoze kòm yon repons adaptasyon potansyèl pou ogmante adezyon podosit ak GBM la. Metòd: Nou te teste ipotèz sa yo lè l sèvi avèk netwayaj optik ak analiz morfometrik 3-dimansyon wo rezolisyon nan murin perfused izole.ren.Nou te envestige dinamik detachman podocyte nan diferan presyon perfusion (50, 300 ak plis pase 450 mmHg) nan sourit ki an sante jèn oswa granmoun (20 kont 71 semèn ki gen laj), oswa sourit sou fòm piki ak yon serom anti-GBM pou pwovoke pye mondyal. efasman pwosesis. Rezilta: Rezilta yo montre ke podosit ki an sante nan sourit jèn yo byen tache ak GBM a e menm presyon supramaximal pa t 'koze detachman enpòtan. Konpare ak jèn sourit, nan sourit ki gen laj ak sourit ki gen anti-GBM nefrit ak efasman pwosesis pye, gradyèl pèt pwogresif nan podosit te fèt deja anvan perfusion. Gwo presyon perfusion te lakòz yon pèt adisyonèl relativman minè nan podosit nan sourit ki gen laj. Nan sourit ki gen nefrit anti-GBM, siyifikatif pèt podocyte adisyonèl ki te fèt nan pwen sa a bonè lè yo ogmante presyon perfusion a 300 mmHg oswa pi wo. Konklizyon: Travay sa a bay premye prèv eksperimantal ke podosit yo ekstraòdinè rezistan a presyon perfusion ki ogmante nan yon ansyen viv izole.renmodèl perfusion. Se sèlman nan maladi glomerulèr, kantite siyifikatif nan podosit blese detache apre ogmantasyon egi nan presyon perfusion.
Mo kle:tansyon wo glomerulèr; ipèfiltrasyon glomerulèr; estrès mekanik; Pwogresyon; Maladi ren kwonik
CISTANCHE AP AMELYORE MALADI REN/REN
Entwodiksyon
Tansyon wo glomerulè ak ipèfiltrasyon domaje glomerulus la ki mennen nan maladi glomerulè pwogresif. Yo kwè lajman ke ogmante presyon perfusion ekspoze touf la nan estrès mekanik ogmante defi adezyon nan podosit nan manbràn sousòl glomerular (GBM), kontribye nan detachman yo [1, 2]. Podosit yo trè différenciés, selil pòs-mitotik, esansyèl pou yon baryè filtraj glomerulè entak. Pèt Podocyte gen plis chans rezilta detachman selil solid ki soti nan GBM olye ke apoptoz oswa nekwoz [3-6] paske li te posib pou kiltive podosit refè nan pipi pasyan yo [4]. Detachman nan podosit solid nan GBM a ka lakòz mekanis atachman andikape oswa fòs altèmekanik. Atachman ki gen pwoblèm nan GBM a ka akòz aksidan selilè oswa ekspresyon redwi nan molekil adezyon epi li se sitou ki asosye ak maladi glomerulè enflamatwa. Konsènan fòs mekanik ki enpòtan pou podosit la, gen de detèminan kle, sètadi presyon filtraj ak koule filtraj [7-9]. Presyon filtraj jenere estrès miray sikonferans ak aji kòm yon fòs distending sou GBM la. Varyasyon nan presyon idrostatik transmural yo konpanse efektivman pa kapasite GBM pou aji kòm yon manbràn elastik epi elaji oswa retresi nan zòn sifas la [8, 10]. Nan lòt men an, koule filtraj atravè GBM a egzèse fòs tanjansyèl sou sifas la nan podosit, sa vle di estrès taye. Nou konnen nan etid in vitro ke podosit yo trè sansib a estrès taye detache soti nan substra yo lè yo ekspoze a estrès taye plis pase 0.025 Pa [11] ak adopte yon fenotip entèmedyè ki ka ede yo kontrekare fòs ki sòti nan koule [12]. Si tansyon wo glomerulè afekte podosit atravè yon presyon filtraj ogmante ak / oswa filtraj ogmante rete toujou klè. Nan etid sa a, nou bay premye analiz kapasite podocytes pou reziste fòs mekanik ogmante nan yon modèl ansyen vivo. Pèt Podocyte te quantifye ak rezolisyon segondè lè l sèvi avèk netwaye tisi ak analiz mòfometrik 3-dimansyon nan sourit jèn ak an sante.
Materyèl ak Metòd
Tout eksperyans bèt yo te fèt dapre direktiv lwa Alman an pou byennèt bèt yo epi yo te apwouve pa Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz Nordrhein-Westfalen (Az 84-02.04. 2015.A469). Sourit yo te loje nan yon etablisman espesifik san patojèn ak aksè gratis nan manje ak dlo ak yon sik 12-èdtan lajounen/swa. Elvaj ak jenotip yo te fè selon pwosedi estanda. Sourit Pod-rtTA / LC1 / R26R / H2BeGFP sou yon background jenetik FVB / N yo te dekri anvan [13]. Pou aktive ekspresyon transjèn Pod-rtTA-eGFP, sourit yo te resevwa doxycycline atravè dlo pou bwè ad libitum pou 7 jou (2 g / l, 5 pousan sikwoz, pwoteje kont limyè) ki te swiv pa yon peryòd lave nan 1 semèn dapre rapò anvan yo. Anti-GBM nefrit te pwovoke pa yon sèl piki intraperitoneal nan 5 mg / g bodyweight serom nefrotoksik jan yo dekri deja [14].
CISTANCHE AP AMELIORE FONKSYON REN/REN
Perfusion nan ren
Izole arenmodèl perfusion te itilize jan sa dekri yon lòt kote [15]. Yon ti tan, sourit yo te narkotize ak yon piki intraperitoneal nan xylazine / ketamin (0, 1ml / 10g pwa kò ip), ak Lè sa a, ren yo te perfused ak yon konplèks modifye Krebs-Henseleit-solisyon (Tablo 1) complétée ak 5. pousan albumin serik bovine (BSA) nan 37 degre imite milye fizyolojik la pandan eksperyans la. Vasodilatasyon maksimòm nanrenvaskilè te pwovoke pa 1. piki lar verapamil (50µl) imedyatman apre endiksyon anestezi ak 2. adisyon papaverin nan solisyon an perfusion. Apre premye perfusion pou 5 minit nan 50 mmHg, yo te enjekte yon lektin fluorescent (Communis I - RCA120; Vector Laboratories: RL-1082; 4 ul nan 986 ul nan saline) pou mete etikèt sou selil endothelial yo.renyo te perfused pou plis 5 minit ak modifye Krebs-Henseleit-solisyon ak 5 pousan BSA. Apre sa, bò gòch larenki te sèvi kòm pè kontwòl nan chak eksperyans te retire apre ligasyon atansyon nan bò gòch larenveso yo, koupe an tranch, epi dirèkteman benyen nan 3 pousan paraformaldehyde (PFA) nan saline ki gen tanpon fosfat (PBS). Dwat laren was perfused either for additional 5 minutes at 300 mmHg or with supramaximal pressure (>>300mmHg, presyon filtraj yo te estime yo dwe byen pi wo pase 400 mmHg), aplike manyèlman, volim total de 50 ml solisyon perfusion. Larenyo te perfuze ak yon presyon konstan 50 mmHg oswa 300 mmHg lè l sèvi avèk yon ponp presyon kontwole (Universal Perfusion Systems UP-100, Hugo-Sachs Electronics, Almay). Lè sa a dwat larente retire, koupe an tranch 2 mm, ak benyen nan 3 pousan paraformaldehyde (PFA) nan fosfat-tanpon saline (PBS).
Imaj 3D ak analiz enfòmatik PFA-immersionrentranch yo te enkube sou yon shaker mekanik pou 5 jou nan tanperati chanm. Apre sa, echantiyon fiks yo te lave nan 1x PBS epi yo mete yo nan yon shaker mekanik lannwit lan nan tanperati chanm.renLè sa a, tranch yo te mete yo nan etanòl 100 pousan segondè (Merck; 100983) pou 1 èdtan nan tanperati chanm ak souke dou (omwen 1 chanjman nan etanòl fre), ki te swiv pa imèsyon dirèk nan Ethyl Cinnamate (ECi) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO; 112372) epi yo te kite lannwit lan nan yon shaker dou nan tanperati chanm anba pwoteksyon limyè. Translusid tisi yo te reyalize nan mwens pase 1 èdtan. Pou mikwoskòp dwat, nou te itilize chanm jetab ki te bati nan kay la jan sa te dekri anvan [16]. Pifò eksperyans yo te fèt lè l sèvi avèk yon 2-mikwoskòp foton (LaVision BioTec TriMScope, "Medizinische Fakultät RWTH Aachen, IZKF Aachen, Core Facilities). Yo te itilize lojisyèl imaj Fiji pou deplase atravè aks Z nan chak pil seksyon optik seri. epi izole glomeruli endividyèl atravè rekòt 3D [16] 40 glomeruli paren(20 subcortical ak 20 juxtamedulary) yo te chwazi pou analiz. Kidonk, an total 1200 glomeruli te analize nan etid sa a pou jwenn rezilta ak presizyon ase. Podocytes yo te idantifye kòm eGFP plis selil yo. Kantifikasyon volim kapilè, volim glomerulè ak nimewo nwayo (pwen) ak volim te fèt lè l sèvi avèk yon lojisyèl rann ak analiz 3D (Imaris v9.1; Bitplane AG, Zurich, Swis) Yo te kalkile distans podosit ki soti nan poto vaskilè a. Bitplane XTension "Spot ki pi pre. Distans". Otomatik quantification nan podocytes te fèt jan sa te dekri deja [17]. Analiz imaj yo te fèt lè l sèvi avèk Imaris (Biplane AG Zurich, Swis). Chak glomerulus te defini pa arteriol aferan lektin li yo. 20 subcortical ak 20 juxtamedulary (defini pa distans yo soti nan sifas la cortical).
CISTANCHE AP AMELIORE DOULÈ REN/REN
Mikwoskopi limyè ak imunofluoresans
Pou mikwoskòp limyè, 4 pousan tanpon fòmalin-fiksrenfragman yo te dezidrate, entegre nan parafine ak tache ak asid peryodik-Schiff (PAS). Pousantaj glomerul ki pa nòmal/blese yo te kalkile dapre idantifikasyon 50 koup transvèsal glomerulè reprezantan pou chak sourit chwazi pandan yon ti mache sistematik atravèrencortical. Pwotokòl imunofluoresan estanda nou an [18] te fèt sou seksyon 2 μm parafine ki entegre. Yo te itilize antikò sa yo: poul poliklonal anti-GFP (ab13970; Abcam), sourit monoklonal anti-synaptopodin (sc-515842; Santa Cruz Biotechnology), poliklonal lapen anti-sourit p57 (sc-8298; Santa -Cruz Biotechnology), lapen poliklonal anti-WT1 (sc-192; Santa-Cruz Biotechnologie), Cy2 bourik anti-poul (703-225-155; Dianova, Hamburg, Almay), Alexa Fluor546 kabrit anti-sourit IgG1 (A-21123; Thermo Fischer), bourik poliklonal anti-lapen AF555 (A31572; Life Technologies, Carlsbad, CA).
Mikwoskopi elektwonik
Ti moso nan cortical yo te fiks nan Karnovsky-solisyon ak entegre nan Epon (Serva, Heidelberg, Almay). Seksyon ultramens yo te egzamine ak yon mikwoskòp elèktron transmisyon ZEISS Leo 906 nan 60 kV pa yon agrandisman soti nan 3597-6000x. Echantiyon yo te lave nan 0.1 M fosfat Soerensen a (Merck, Darmstadt, Almay), pòs-fiks nan 1 pousan OsO 4 (Roth, Karlsruhe, Almay) nan 17 pousan sikwoz tanpon (Merck, Darmstadt, Almay) ak dezidrate pa monte etanòl seri ( 30, 50, 70, 90 ak 100 pousan) pou 10 min chak. Dènye etap la te repete 3 fwa. Espesimèn dezidrate yo te enkube nan oksid pwopilèn (Serva, Heidelberg, Almay) pou 30 min, nan yon melanj de résine Epon (Serva, Heidelberg, Almay) ak oksid pwopilèn (1:1) pou 1h epi finalman nan Epon pi pou 1h. Polymerization Epon te fèt nan 90 degre pou 2h. Seksyon ultramens (70-100 nm) te koupe pa ultramicrotome (Reichert Ultracut S, Leica ak yon kouto dyaman (Leica) epi ranmase sou gri Cu/Rh (HR23 Maxtaform, Plano, Wetzlar Almay). Kontras la te amelyore pa tach ak 0.5 pousan acetate uranyl ak 1 pousan sitrat plon (tou de EMS, Minik, Almay). Yo te wè echantiyon yo nan yon vòltaj akselerasyon 60 kV lè l sèvi avèk yon mikwoskòp elèktron transmisyon Zeiss Leo 906 (Carl Zeiss, Oberkochen, Almay).
Analiz estatistik
Analiz estatistik yo te fèt ak lojisyèl GraphPad Prism v8. Tout valè yo eksprime kòm vle di ± SD. Pou yon konparezon de 2 gwoup, yo te itilize yon tès t. Konparezon plizyè gwoup te fèt lè l sèvi avèk analiz divèjans; post hoc Tukey koreksyon te itilize pou konparezon miltip. Tout tès yo te 2-kid epi yo te defini siyifikasyon estatistik kòm P <>
Rezilta yo
Metòd semi-otomatik pou detèmine kantite podosit pou chak glomerulus Twa gwoup yo te etidye, sa vle di sourit ki an sante jèn ak granmoun ak sourit ki gen glomerulonefrit anti-GBM (♂:♀ 1:1). Jenn sourit ki an sante te gen 15-21 semèn, tandiske granmoun (ki gen laj) te gen 74 semèn. Pwosesis global pye efasman te pwovoke nan sourit 14-20 semèn nan atravè yon sèl piki nan serom anti-GBM 3 jou anvan yo mete izole perfused la.renmodèl (Fig. 1A), jan yo dekri anvan [19].
Pou detèmine enfliyans presyon perfusion intrarenal sou podosit,renyo te sibi presyon perfusion diferan nan izole arenmodèl perfusion. Premyèman, tou derenyo te toujou perfused nan 50 mmHg pou 5 min. Pou teste si solisyon perfusion nou an konsève entegrite nan glomerulus la nan solid la unfixedren, 2 sourit yo te perfused nan yon presyon konstan de 100 mmHg pou 90 min. Perfusion, koule urin (25 µl/min/gr pwa kò) ak clearance inulin (22 µl/min) te rete estab pandan tout tan an (Siplemantè Figi 1 - pou tout materyèl siplemantè gadewww.cellphysiolbiochem.com).Nan sourit eksperimantal, apre premye perfusion nan 50 mmHg, bò gòch laren was removed and served as a control in all experiments. Next, constant pressure of 300 mmHg or a pressure significantly higher than 300 mmHg (>>300 mmHg; Presyon filtraj supramaksimal nan apeprè 450 - 500 mmHg) yo te aplike sou dwa ki rete a.renpou 5 min. (Fig. 1B). Nan perfused nan izoleren, Podosit yo te idantifye lè l sèvi avèk etikèt nikleyè ak eGFP-histone nan sourit transjenik nou yo eksprime eGFP anba pwomotè podocin (eGFP:Pod-rtTA sourit). Nimewo Podocyte yo te quantifye lè l sèvi avèk yon konbinezon de etikèt metabolik nan vivo sa a ak mòfometri 3D (figi 1C).
Pèt Podocyte nan sourit ki an sante ak ki gen laj
Healthy mice contained 87.46 ± 5.66 (SD) podocytes per glomerulus at baseline (i.e.at physiological perfusion pressure of 50 mmHg) (Fig. 2A). Juxtamedullary glomeruli were larger than those in the outer cortex (Supplementary Fig. 2), but this was not associated with higher podocyte numbers (87.0± 23.65 vs. 90.1 ± 18.49, respectively, Fib 2B). No differences in the number of podocytes related to sex were observed (see below). In young mice, there was no significant loss of podocytes at high (300 mmHg) or maximal (>>300 mmHg) perfusion pressures (85.62 ± 10.83 and 81.98 ± 6.45 podocytes per glomerulus, respectively) (Fig. 1A). On PAS sections, mild histological changwere observed particularly in aged mice (Fig. 2A), which were independent of perfusion pressures. In addition, tubular dilatation and interstitial edema were apparent as a result of perfusion. In humans, older age (53 ± 10 years) has been associated with absolute and relative podocyte depletion [20]. Compared to young mice, our mice aged 72 weeks contained significantly lower numbers of podocytes per glomerulus at baseline (52.81 ± 13.8 SD), indicating that about 40% of the podocytes had been lost. Perfusion at high or maximal pressures resulted in only a very mild reduction of podocyte numbers (48.65 ± 16.8 SD and 41.06 ± 17.7 SD, respectively). Because of the precision of the counting method (absolute podocyte numbers in 40 glomeruli per mouse) [21], the loss of podocytes of 7.9% and 22% after perfusion with 300 or >>300 mmHg respektivman konpare ak debaz sijere ke ogmantasyon minè sa a nan pèt podocyte ak pi wo presyon se pa yon konyensidans konklizyon. Sou seksyon PAS, yo te obsève chanjman glomerulè twò grav nan sourit ki gen laj nan debaz (ekspansyon mesanjyal ak sklewoz okazyonèl, Fig. 2F). A
Pèt Podocyte apre aksidan egi
Yo te aplike serom anti-GBM sou jèn sourit ki an sante pou pwovoke blesi enpòtan ak espesifik nan podosit. Nan pwen an trè byen bonè (sa vle di 3 jou) apre endiksyon nan glomerulonefrit anti-GBM, yo te obsève efasman pwosesis pye jeneralize nan tout glomeruli pa mikwoskospi elektwonik transmisyon (figi 3A-D). Nan izole perfusedrenobtained from these mice, at baseline (i.e. perfusion with 50mmHg) podocyte numbers per glomerulus were reduced by 20% compared to controls (69.76 ± 7.07 vs 87.46 ± 5.66, respectively) (Fig. 3E). Perfusion with higher pressures (300 and >>300 mmHg) resulted in significant further reductions of podocyte numbers per glomerulus (50.84 ± 7.82 and 53.18 ± 4.26, respectively), i.e. 27% and 24% additional reduction (Fig. 3E). When analyzing individual glomeruli, the anti-GBM mice, perfusion with >>300 mmHg te lakòz plis pase 80 pousan pèt podosit nan yon minorite nan glomeruli yo (figi 3E). Sa a se nan liy ak nati a fokal nan modèl la maladi anti-GBM. Nan glomeruli juxtamedullary, pèt podosit te pi pwononse konpare ak glomeruli subcortical (56.66 ± 16.9 ak 47.35 ± 17.07, respektivman) (Fig. 3F)
By transmission electron microscopy (TEM), specific changes were observed after high perfusion pressures, in particular focal podocyte detachment from the GBM and denuded basement membrane (Fig. 3D). Cellular debris was present within the capillaries as well as within Bowman's space (>>300 mmHg); andotelyo a pa t 'montre chanjman enpòtan. PAS tach idantifye dilatasyon tubulaires. Twa jou apre piki a nan serom anti-GBM, pa gen okenn blesi crescentic devlope ankò (figi 3G-I). Gason yo te montre yon pi wo degre nan pèt podocyte konpare ak fi (63.71 ± 2.11 vs 75.81 ± 3.83 podocytes pou chak glomerulus), ki konsistan avèk obsèvasyon ke sourit mal yo gen plis sansib a antiserom anti-GBM epi yo fòme plis kwasans selilè nan kou a. maladi a (figi 3J). Sepandan, pèt adisyonèl nan podosit apre presyon wo perfusion te menm jan an nan gason ak fi (Fig. 3J).
Fig. 3. Pèt Podocyte apre aksidan egi. (AB) Mikwoskopi elektwonik transmisyon soti nan yon kontwòlren per- fused at a low pressure and after supramaximal pressure (>>300 mmHg) shows normal foot process architecture. (C-D) Transmission electron microscopy reveals the typical finding of foot process effacement after injection of anti-GBM serum at baseline. After perfusion with higher pressure, areas of denuded basement membrane were observed. (E) Total number of podocytes per mouse in anti-GBM mice at baseline and under higher (300 mmHg) or supramaximal pressures (>> 300 mmHg); (each circle represents 1 kidney; n=7 control kidneys with 50mmHg, n=8 anti-GBM kidneys with 50mmHg, n=4 kidneys with 300 mmHg or >> 300mmHg). (F) Total number of podocytes per glomerulus in juxtamedullary and subcortical glomeruli; each circle represents 1 subcortical glomerulus (n= 20 glomeruli pro mouse) and each triangle represents 1 juxtamedullary glomerulus (n= 20 glomeruli pro mouse). (G-I) Histologic staining of anti-GBM mice at baseline identified protein casts, whereas three days after injection of anti-GBM serum no crescentic lesions could be found. After perfusion with higher pressure, tubule-interstitial dilatation and edema were observed. (J) Total podocyte number per mouse between males and females; each circle represents 1 kidney (n=4 control kidneys with 50mmHg, n=4 anti-GBM kidneys with 50mmHg, n=2 kidneys with 300 mmHg or >>300mmHg). Pou konparezon miltip ANOVA. ****P<0.0001, ***p ="" <="" 0,0001,=""><0.01,><0.05 and="" ns="" and="" ns="not" statistically="" significant;="" error="" bars="" represent="" means="" ±="">
Trase podosit yo pèdi nan tubul yo
eGFP plis podosit yo te obsève regilyèman nan lumèn nan tib proximal yo kote yo te parèt yo konfòme yo ak bwòs-fontyè a nan selil tubul proximal (figi 4A). Podosit sa yo pa te lave nan hyperperfusedrens, olye de sa yo te respekte olye sere sou fwontyè a bwòs kenbe tèt ak koule nan ekstraòdinè nan pipi prensipal la nan presyon trè wo perfusion. Pou konfime idantite yo, podosit yo te ko-tache ak podocyte-espesifik makè (sa vle di, p57, synaptopodin ak WT -1) anplis de makè a trase liyaj jenetik nikleyè eGFP (figi 4B). Nimewo Podocyte yo te siyifikativman pi ba nan glomeruli sa yo ki gen podocytes aderan nan tubul proximal ki asosye, ak prezans nan podosit nan tubul envers korelasyon ak kantite podosit pou chak glomerulus (Fig. 4C).
Pèt preferansyèl nan podosit nan kote perihilèr
Finally, we investigated whether podocyte loss driven by an acute increase in perfusion pressures might occur in preferential locations of the glomerulus (i.e. at the vascular pole vs. the tubular pole of the glomerular tuft). To analyze the spatial distribution of podocyte detachment, the vascular pole was marked in each glomerulus (acquired in 3D) based on the lectin signal and the distance of each podocyte from the vascular pole was determined semi-automatically. The individual distances from the vascular pole were separated into quartiles (Fig. 4E). As depicted in Fig. 4E, the majority of podocytes clustered in the 2 middle quartiles (i.e. quartile 2 and 3). Less than 12 % of the podocytes localized to either in the first, i.e. vascular pole, or the fourth quartile, i.e. most distant from the vascular pole. Upon perfusion with pressures >>300 mmHg, pa gen okenn chanjman enpòtan nan distribisyon an espasyal nan podosit yo te obsève nan sourit jèn ak an sante. Nan sourit ki gen laj, distans podocyte soti nan poto vaskilè yo te jeneralman ogmante, gen plis chans reflete ipètrofi glomerulèr, tandiske hyperperfusion te lakòz yon detachman preferansyèl nan podosit tou pre poto vaskilè a (1ye katil redwi soti nan 11.5 a 4.9 pousan nan sourit ki gen laj, Fig. 4E). ). Menm jan an tou, yo te obsève yon detachman preferansyèl nan podosit tou pre poto vaskilè a nan podosit efase (anti-GBM, 1ye katil redwi soti nan 25 a 5 pousan).
Diskisyon
Nan etid sa a, nou te egzamine efè egi nan presyon filtraj ki wo ak koule filtraj sou pèt podosit nan ren murin perfused izole, lè l sèvi avèk metòd ki pi egzak kounye a pou detèmine nimewo podosit. Premye gwo konklizyon etid nou an se ke podosit ki an sante yo pa sansib a estrès taye egi nan vivo, jan yo sijere deja pa etid kilti selil [11]. Nan sipriz nou an, pa menm ekstrèm presyon suprafizyolojik (plis pase 450 mmHg) pwovoke siyifikatif detachman podocyte. Olye de sa, mikwoskospi elektwonik transmisyon revele ke tout twa kouch baryè filtraj la rete relativman byen konsève. Sourit ki pi gran yo te montre nimewo podocyte redwi (jan yo te rapòte deja) e sa a te asosye ak sèlman trè limite ogmante sansiblite nan presyon wo perfusion. Dezyèm pi gwo konklizyon an se te ke anvan blesi podocyte rann podosit sansib a detachman an nan presyon perfusion segondè. Sourit anti-GBM te montre pwosesis pye mondyal efasman twa jou apre piki antiserom anti-GBM ak nimewo enpòtan detache nan presyon perfusion segondè. Nan sourit ki gen laj, nou ipotèz ke fizyoloji podosit relativman byen konsève, fè yo mwens sansib a detachman. Lè w aplike yon apwòch konte semi-otomatik, yo te analize chak glomerulus separeman (total de 1200 glomeruli analize). Nou konfime ke glomeruli juxtamedullary gen yon volim ki pi wo pase glomeruli subcortical. Enteresan, nimewo podocyte yo te menm bagay la tou, ki montre ke dansite podocyte redwi nan glomeruli juxtamedullary. Anplis de sa, glomeruli juxtamedulary yo te tou plis vilnerab a ogmante presyon filtraj konpare ak glomeruli subcortical. Konklizyon sa yo ka eksplike an pati, poukisa blesi FSGS yo ka obsève nan yon frekans ki pi wo nan glomeruli sa yo pi gwo [22, 23].
Fig. 4. Deteksyon podosit nan prox la adjasan. tibil. (A) Imaj reprezantatif ki montre eGFP plis podosit (vèt) nan tubul yo. (B) Tach imunofluoresans nan podosit ko-marke pa transgene iston eGFP (vèt), ak makè yo podocyte andojèn p57 (wouj), wt-1 (wouj), ak sinaptopodin (koulè wouj violèt). (C) Asosyasyon kantite podosit pou chak glomerulus ak kantite podosit yo idantifye nan tubil la (n=81 glomeruli ki soti nan sourit kontwòl, n= 41 glomeruli ki soti nan sourit ki gen laj, ak n= 81 glomeruli soti nan sourit anti GBM). Pou konparezon miltip, yo te itilize ANOVA. ****P<0.0001,>< 0.01="" and="" ns="not" statistically="" significant;="" error="" bars="" represent="" means="" ±="" sd;="" in="" the="" graph,="" each="" circle="" represents="" 1="" podocyte;="" (d)="" schematic="" showing="" how="" the="" distance="" of="" podocytes="" from="" vascular="" pole="" was="" calculated.="" (e)="" distances="" of="" individual="" podocytes="" from="" the="" vascular="" pole.="" the="" individual="" distances="" from="" the="" vascular="" pole="" were="" separated="" into="">
Yon limit nan etid sa a se peryòd obsèvasyon kout la, paske pa gen okenn konklizyon yo ka fè konsènan adaptasyon alontèm nan podosit nan ogmante presyon filtraj. Li te pwopoze ke premye repons nan podocytes ekspoze a estrès taye se sibi chanjman pwoteksyon estriktirèl [8, 24]. Chanjman sa yo enkli pèt fant filtraj yo (sa vle di FPE) ak ranplasman fant-diafragm pa junctions occluding oswa sere. Yo te deja dekri jonksyon okluyan yo nan plizyè modèl maladi glomerulè [25-28]. Sepandan, nan etid nou an, nou te obsève ke podosit ak FPE yo te pi fasil pou pi gwo presyon=perfusion. Pakonsekan, rezilta nou yo te montre ke chanjman adaptasyon sa yo pa t ase pou pwoteje kont detachman oswa potansyèlman menm opoze a, ke yo rann podosit yo pi fasil pou detachman. Apre sa, li ka diskite ke izole a perfusedrense pa yon sistèm fizyolojik e ke presyon yo te aplike yo te pi wo pase nan kondisyon in vivo. Pou konesans nou, pa gen okenn lòt modèl lè l sèvi avèk yon entak solidrenegziste ki ta pèmèt envestige efè ogmante presyon perfusion dirèkteman. Pa aplikasyon vazodilatatè anvan ak pandan perfusion, maksimòm dilatasyon veso pre-glomerular yo pwovoke pou pèmèt koule san restriksyon (ipèfiltrasyon) ak transmisyon maksimòm presyon perfusion ogmante nan glomerulus la. Nan etid la prezan, yo te etidye efè egi nan pi wo presyon perfusion. Efè alontèm nan hyperperfusion patolojik ta ka pi danjere, ki mennen nan menm plis pèt podocyte. Sepandan, etid nou an sijere, ke pèt kwonik sa a nan podosit pa kondwi pa fòs la absoli nan koule filtraj per se men pito pa chanjman yo (mal-) adaptasyon nan podosit ki diminye aderans yo nan GBM la. Pasyan ki gen maladi glomerulè yo benefisye de tretman antiipètansif lè yo anpeche chanjman estriktirèl (mal-) adaptatif nan podosit.
Konklizyon
Travay sa a bay premye prèv nan vivo ki montre podosit an sante yo ekstraòdinè byen fèm tache ak GBM a nan ren sourit ki an sante epi yo ka reziste menm presyon perfusion trè wo. Aje oswa menm plis pwononse blesi egi podocyte ak efasman mondyal, rann podosit sansib a detachman an nan ogmante presyon perfusion.