Efè Glyeosides nan Cistanche sou aprantisaj koyisyon ak plastisit sinaptik nan rat modèl privasyon dòmi

REZIME

Objektif:Pou eksplore si glikozid yo nan cistanche ka amelyore aprantisaj la ak fonksyon mantal nan rat modèl privasyon dòmi pa reglemante plastisit sinaptik.

Metòd: Senkant gason rat Wistar yo te divize owaza nan yon gwoup kontwòl vid (Kontwòl), gwoup kontwòl platfòm (PC), gwoup modèl (Modèl),glikozid gwoup cistanche (GCs), ak estazolam gwoup (Est). Modèl privasyon dòmi nan rat te prepare pa yon metòd anviwònman dlo milti-platfòm modifye. Labirent dlo Morris ak tès jaden ouvè yo te itilize pou detekte fonksyon kognitif espasyal ak chanjman emosyonèl rat yo. Yo te itilize tach Nissl pou obsève chanjman ki fèt nan mòfoloji ak kantite selil nève yo.ipokanp CAl zòn nan rat. Western blot ak R'T - PCR yo te itilize pou detekte nivo ekspresyon synaptophysin(SY'N), sibstans dans manbràn postsinaptik 95 (PSD -95), akFaktè nerotwofik ki sòti nan sèvo (BDNF). 

Rezilta;Rezilta labirent dlo Morris te montre ke konpare ak gwoup kontwòl la, laaprantisaj ak kapasite mantal nan ratnan gwoup Modèl la te siyifikativman diminye (P<0. 05 ), and the learning and memory function of rats wasamelyore tretman GCs ( P <0. 05). The results of the open field test showed that compared with the Control group, the movement distance and standing times of the Model group were significantly increased ( P <0. 05 ), the resting time was significantly shortened( P <0.05 ), and the anxiety was increased, while after GCs treatment, the movement distance and standing times decreased ( P <0. 05 ), the resting time increased ( P <0. 05), and the anxiety was improved. The results of Western blot and R'T - PCR showed that the pwoteyin ak nivo ekspresyon jèn nan BDNF, SYN, ak PSD -95nan gwoup Mlodel la te diminye anpil (P<0. 05 ), while after treatment with GCs, the expression levels ofBDNF, SYN and PSD -95 were significantly up-regulated ( P <0.05). Conclusion: Glycosides of cistanche may af. feet synaptic plasticity by regulating the expression of synaptic-related markers, thereby improving the learning and cognitive function of sleep deprivation model rats.

ÈRBAL CISTANCHE FORMULATION SUPPLEMENTS POUAMELYORE FONKSYON APPRANN AK KOGNITIF

MO KLEGlikozid nan cistanche; Ipokanp; privasyon dòmi; Aprantisaj ak memwa; enkyetid; Plastisite sinaptik

Twoub dòmi (SD)se yontwoub fonksyonèl nan dòmi nòmalkoze pa yon seri de faktè konplèks tankoulensomni, rèv, epireveye fasil. Nan dènye ane yo,ensidans SD late ogmante piti piti. Etid ki gen rapò te rapòte ke SD ka lakòzmaladi kadyovaskilè,malfonksyònman metabolik,maladi iminitè, episistèm nève santralmaladi dejeneratif tankou maladi alzayme a [1]. SD ka lakòz domaj oksidatif nan newòn ipokanp yo, lakòz malfonksyònman mantal, epi pwodui chanjman atitid tankou enkyetid ak depresyon [2]. Cistanche deserticola se yon materyèl presye medsin ki ka itilize kòm tou de medikaman ak manje nan peyi Lachin. Li gen efè tonifye ren an ak ranplir qi, mwatir trip yo ankouraje mouvman entesten, ak ranfòse Yang. Ekstrè prensipal la nan Cistanche deserticola, glikozid nan cistanche (GCs), gen efè antioksidan, anti-apoptotik, pwoteksyon fwa, ak efè neuroprotective [3]. Rechèch anvan nou an te jwenn ke GC yo ka amelyore aprantisaj ak fonksyon mantal sourit SAMP8 lè yo jwe yon wòl antioksidan ak anti-apoptotik [4].

Etid ki gen rapò yo te montre ke malfonksyònman mantal ki te koze pa SD se byen ki gen rapò ak plastisit sinaptik [5]. Sepandan, gen kèk rapò sou mekanis nan ki GCs kontwole plastisit sinaptik ak amelyore aprantisaj ak memwa andikap ak n bès mantal nan rat pwovoke pa privasyon dòmi. Se poutèt sa, etid sa a gen pou objaktif pou eksplore si GC yo afekte plastisit sinaptik pa reglemante ekspresyon makè ki gen rapò ak sinaptik, kidonk amelyore aprantisaj ak fonksyon mantal rat ak modèl privasyon dòmi, epi bay nouvo lide tretman ak plan pou GCs pou trete aprantisaj ak mantal. andikap ki te koze pa twoub dòmi.

1 Materyèl ak metòd

1.1 Bèt eksperimantal

Rat Wistar gason ki gen laj 6 a 8 semèn, ki peze 280 a 300 g, yo te achte nan men Beijing Sibeifu, ak yon lisans pwodiksyon bèt [SCXK (Beijing) 2019-0010]. Tout bèt yo te kenbe nan Sant Eksperyans Animal nan Baotou Medical College nan kondisyon sa yo: tanperati (24 ± 1) degre, imidite 50% a 55%, 12 h limyè ak 12 h fè nwa, e pa gen okenn restriksyon sou manje ak dlo. Eksperyans sa a te apwouve pa komite etik lekòl la [Baoyi Lunshen 2022 No (63)].

1. 2 pwensipal réactifs ak enstriman

Total glikozid Cistanche deserticola te achte nan men Chengdu Xiyu Cistanche Biotechnology co, Ltd (nimewo pakèt: KSM20220609011); Estazolam tablèt yo te achte nan men CSPC Pharmaceutical Group Ouyi Pharmaceutical (nimewo pakèt: 044220343); Pwoteyin chaje tanpon (P1015), RIPA lysis tanpon (R0010), solisyon chemiluminescent (PE0010), elatriye tout te achte nan Beijing Solebao; Sibstans dansite postsynaptic nan 95 (PSD-95) antikò (AB192757) ak sinaptofizin (SYN) antikò (ab32127) te achte nan men Abcam, USA Company; Faktè nerotwofik ki sòti nan sèvo (BDNF) (48503-2) ak -aktin (52901) yo te achte nan men SAB Company, USA; kabrit anti-lapen IgG segondè antikò (SA00001-20) te achte nan men Proteintech Company, USA; rat melatonin (MT) ak ELISA Scientific Research Kit (MM-0657R1) yo te achte nan men Jiangsu Enzyme Immunoassay Industry Co., Ltd. Paraffin slicer (Leica, Almay); mikwoskòp optik (Leica, Almay);

Morris dlo labirent, bwat tès jaden louvri (Shanghai Xinruan); aparèy elektwoforèz vètikal (Beijing Liuyi Company); Shaker dekolorizasyon (Beijing Liuyi Company); sistèm analiz D 'pwoteyin (Shanghai Tanon Teknoloji); fliyoresans quantitative PCR enstriman (Xi'an Tianlong Teknoloji co, Ltd).

1.3 Metòd eksperimantal

1.3.1 Gwoupman bèt ak administrasyon dwòg

5 0 rat gason Wistar yo te owaza divize an gwoup kontwòl vid (gwoup kontwòl), gwoup kontwòl platfòm (kontwòl Plat-form, gwoup PC), gwoup modèl (gwoup modèl), total glikozid nan gwoup Cistanche deserticola (gwoup GCs). , 50 mg/kg), ak gwoup estazolin (gwoup Est, 0.54 mg/kg), ak 10 rat nan chak gwoup. Gwoup kontwòl la ak gwoup PC yo te bay 0.9% saline pa gavage. Tout gwoup yo te gavage a 7 am chak jou apre modèl la te kòmanse, ak gavage a te dire pou 21 jou.

1.3. 2. Preparasyon nan modèl bèt privasyon dòmi

Modèl privasyon dòmi an te etabli lè l sèvi avèk metòd anviwònman dlo ki modifye milti-platfòm [6]. Ekipman eksperimantal la se te yon tank dlo rektangilè 130 cm × 50 cm × 45 cm. Yo te mete yon ti platfòm ki gen yon dyamèt 5 cm ak yon wotè 20 cm nan tank dlo a. Platfòm gwoup PC a te gen yon dyamèt 10 cm ak yon wotè 20 cm. Tank dlo a te ranpli ak dlo nan yon pwofondè de apeprè 18 cm epi yo te kenbe tanperati dlo a nan (20 ± 1) degre. Yon semèn anvan kòmansman eksperyans lan, rat yo te mete nan bwat privasyon dòmi chak jou pou 60 minit pou familyarize tèt yo ak anviwònman an. Apre modèl la te etabli, eksepte pou gwoup kontwòl la, rat yo nan chak gwoup yo te mete sou ti platfòm la alè soti 8 am a 8 pm chak jou pou privasyon dòmi pou 21 jou youn apre lòt.

Tout rat te gen aksè gratis nan manje ak dlo epi yo te deplase lib sou platfòm la. Sik limyè ak nwa a te 12 èdtan chak jou.

1. 3. 3 Eksperyans labirent dlo Morris

Labirent dlo Morris te divize an 4 zòn, plen ak dlo, epi platfòm la te plase nan kadran 4yèm lan. Sifas dlo a te apeprè 2 cm anwo platfòm la. Melanin manjab manje yo te ajoute nan dlo a, epi tanperati dlo a te kenbe nan (25 ± 1) degre. (1) Eksperyans navigasyon pozisyon: Yo te chwazi sant chak zòn epi yo te mete rat yo dousman nan dlo a. Yo te pèmèt yo eksplore lib. Tan li te pran pou rat yo jwenn platfòm sib la nan 60 segonn te anrejistre. Rat ki pa jwenn platfòm la te gide sou platfòm la epi yo te rete pou 20 segonn. Fòmasyon an te kontinye pandan 5 jou. (2) Tès eksplorasyon espasyal: Nan 6yèm jou a, yo te retire platfòm la epi yo te mete rat yo nan dlo ki soti nan sant 2yèm kadran an kont miray la. Kantite fwa rat yo te pase platfòm la nan 120 s ak tan yo te rete nan kadran 4yèm yo te anrejistre.

1. 3. 4 Eksperyans jaden ouvri

Yo te itilize yon bwat eksperimantal 100 cm × 100 cm × 50 cm, epi anba bwat la te divize an 9 kadriyaj. Yo te mete chak gwoup rat nan chanm eksperimantal louvri jaden an davans pou adapte yo ak anviwònman andedan kay la pou 60 min. Nan kòmansman eksperyans lan, yo te mete rat tès yo nan kwen fiks nan bwat eksperimantal la louvri, epi kantite fwa kanpe, distans mouvman, ak tan estatik rat yo nan 5 minit yo te anrejistre lè l sèvi avèk lojisyèl analiz konpòtman. Anviwònman an te oblije rete trankil pandan eksperyans lan, epi yo te siye aparèy eksperimantal la ak dlo ak alkòl respektivman ant de eksperyans pou anpeche sant premye rat la afekte jijman konpòtman pwochen rat la.

1. 3. 5 Esè imunosorban ki lye ak anzim (ELISA)

Deteksyon nan nivo serik MT nan rat Rat yo te anestezi pa piki entraperitoneal, epi yo te kolekte 5 mL san nan aorta nan vant. Apre w fin tann 30 minit nan tanperati chanm, yo te santrifuje san an pou jwenn serom. Yo te ajoute 40 μL nan diluan echantiyon nan chak pi, ak Lè sa a, yo te ajoute 10 μL nan echantiyon an yo dwe teste. Apre sele ak yon fim sele, plak la te enkube nan 37 degre pou 30 min. Lave 5 fwa, 50 μL nan solisyon etikèt anzim yo te ajoute, epi yo te plak la sele ak yon fim sele ak enkube nan 37 degre pou 30 min. Lave 5 fwa, ak Lè sa a, solisyon an devlopman koulè ak solisyon an revokasyon reyaksyon yo te ajoute nan vire. Valè OD chak pi te mezire pa yon labeler anzim nan yon longèdonn 450 nm.

1. 3. 6 Tach Nissl

Twa rat yo te chwazi nan chak gwoup, epi yo te retire tisi nan sèvo pa dekapitasyon epi yo te fikse ak yon solisyon polyoxyethylene 4%. Tisi a te dezidrate, benyen nan solisyon sir, entegre, ak tranche pa metòd konvansyonèl yo. Yo te kenbe tranch yo ak yon epesè 5 μm, rense ak PBS, tache ak 0.1% toluidine ble pou 0.5 èdtan, diferansye ak 95% alkòl, dezidrate ak 100% alkòl, transparan ak xylene, ak sele ak jansiv net. Chanjman yo nan mòfoloji ak kantite newòn nan rejyon CA1 nan ipokanp rat la te obsève anba yon mikwoskòp ak imaj yo te kolekte.

1. 3. 7 Eksperyans Western blot

Kat rat yo te chwazi nan chak gwoup, epi ipokanp la izole pa dekapitasyon. Tisi ipokanp lan te melanje ak tanpon RIP A lysis nan yon anviwònman beny glas epi yo te santrifuje tisi a pou jwenn supernatant la. Konsantrasyon nan pwoteyin te detekte pa metòd la BCA. 20 ug pwoteyin te ajoute ak tanpon chaje pwoteyin pou elektwoforèz. Apre elektwoforèz pwoteyin yo te fini, yo te transfere manbràn nan 300 mA koule konstan, bloke ak 5% poud lèt ekreme, yo te enkube antikò prensipal la nan 4 degre lannwit lan, epi yo te enkube antikò segondè a nan tanperati chanm pou 2 èdtan. Apre yo fin itilize solisyon devlopman koulè a, bann pwoteyin yo te analize estatistikman lè l sèvi avèk yon sistèm analiz D 'chimiluminesans.

1. 3. 8 Eksperyans RT-PCR

Twa rat yo te chwazi nan chak gwoup yo prepare omojene tisi ipokanp. RNA total nan likid tisi a te ekstrè pa metòd Trizol la epi yo te mezire konsantrasyon an. Yo te itilize yon twous sentèz cDNA fastking pou transkripsyon ranvèse, epi yo te fè yon reyaksyon anplifikasyon quantitative fluoresans lè l sèvi avèk yon twous quantitative fluoresans pou detekte nivo ekspresyon relatif mRNA pwoteyin ki gen rapò ak sinaptik. Rezilta yo te analize lè l sèvi avèk 2-ΔΔCt. Sekans premye yo montre nan Tablo 1.

Tablo 1 sekans premye RT-PCR

1.4 Metòd estatistik

Rezilta done ki konfòme ak distribisyon nòmal la te eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda (x ± s), epi analiz estatistik yo te fèt lè l sèvi avèk lojisyèl GraphPad Prism 9.5. Yon sèl-fason analiz de divèjans yo te itilize pou konparezon ant plizyè echantiyon, ak P < 0.05 endike ke diferans lan te estatistik enpòtan.