Fine patikil matyè 2.5 kontwole Melanogenesis nan selil melanom imen A375
Jul 19, 2023
Pou Editè a: Etid epidemyolojik yo montre ke patikil amann 2.5 (PM2.5) ekspoze ogmante risk pou yo ipèpigmantasyon po.[1] Yon etid resan te pwouve ke PM2.5 te kapab pwovoke melanogenesis pa reglemante tyrosinase (TYR), ak tyrosinase ki gen rapò ak pwoteyin 1 (TYRP1) ak 2 (TYRP2) ekspresyon atravè aryl idrokarbone reseptè (AhR) / mitogen-aktive pwoteyin kinaz siyal aktivasyon.[ 2] AhR a gaye toupatou nan selil po yo ak ligasyon li yo kontwole oksidasyon / anti-oksidasyon, fonksyon baryè epidèm, repons foto-induit, iminite natirèl, ak melanogenesis. Li ka aktive pa dioxin ak idrokarbur aromat polisiklik (konstitiyan yo nan PM2.5) ak aktivasyon li yo pwovoke transkripsyon nan jèn ki kode tou de faz I ak faz II anzim metabolis ksenobiotik (sitokrom P450 [CYP] 1A1, CYP1A2, ak CYP1B1). [3,4] BaP ak dioxins danjere yo aktive AhR ak jenerasyon espès oksijèn reyaktif (ROS), ki se CYP1A1 medyatè omwen an pati. Anplis de sa, estrès oksidatif CYP1A1-medyatè responsab pou pwodiksyon sitokin pro-enflamatwa, tankou interleukin (IL)-1, IL-6, ak IL-8 nan anviwònman an. kontaminan-trete keratinosit imen.[3,5] Sepandan, gen anpil etid sou efè toksik PM2.5 sou selil melanogenetic yo. Isit la, nou trete selil melanom imen A375 ak divès kalite konsantrasyon nan PM2.5 pou mennen ankèt sou si PM2.5 ka ankouraje melanogenesis, ak relasyon li yo ak siyal AhR, estrès oksidatif, ak repons enflamatwa.
Glycoside nan cistanche ka ogmante tou aktivite SOD nan kè ak tisi fwa, ak siyifikativman redwi kontni an nan lipofuscin ak MDA nan chak tisi, efektivman scavenging divès kalite radikal oksijèn reyaktif (OH-, H₂O₂, elatriye) ak pwoteje kont domaj ADN ki te koze. pa OH-radikal. Cistanche phenylethanoid glikozid gen yon gwo kapasite scavenging nan radikal gratis, yon pi wo kapasite diminye pase vitamin C, amelyore aktivite a nan SOD nan sispansyon espèm, redwi kontni an nan MDA, epi yo gen yon sèten efè pwoteksyon sou fonksyon manbràn espèm. Cistanche polisakarid ka amelyore aktivite SOD ak GSH-Px nan eritrosit ak tisi nan poumon sourit eksperimantal senesan ki te koze pa D-galaktoz, osi byen ke diminye kontni an nan MDA ak kolagen an nan poumon ak plasma, ak ogmante kontni an nan elastin, gen yon bon efè scavenging sou DPPH, pwolonje tan an nan ipoksi nan sourit senesan, amelyore aktivite a nan SOD nan serom, ak retade koripsyon fizyolojik nan poumon nan sourit senesan eksperimantal Avèk koripsyon selilè mòfolojik, eksperyans yo te montre ke Cistanche gen bon kapasite antioksidan. epi li gen potansyèl pou yo dwe yon dwòg pou anpeche ak trete maladi po aje. An menm tan an, echinacoside nan Cistanche gen yon kapasite enpòtan pou elimine radikal gratis DPPH epi li gen kapasite pou elimine espès oksijèn reyaktif epi anpeche degradasyon kolagen an radikal gratis, epi tou li gen yon efè reparasyon bon sou domaj anyon radikal gratis timin.
Klike sou Cistanche Tubulosa Supplement
【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】
PM2.5 yo te kolekte pandan sezon livè (soti desanm rive janvye) nan Beijing. HY-1000 entèlijan gwo-koule total sispann patikil (TSP) echantiyon (si ou vle PM2.5 kouto, Qingdao Hengyuan Teknoloji Devlopman co, Ltd, Qingdao, Lachin) te itilize pou echantiyon filtre kwatz. Manbràn kwatz la te benyen nan etanòl 75 pousan ki te swiv pa souke ultrasons. Yo te itilize dlo esteril pou prepare yon solisyon stock ki gen gwo konsantrasyon. Selil melanom imen A375 yo te kiltive nan 5 pousan CO2 nan 37 degre nan Dulbecco's Modified Eagle's Medium regilye (Invitrogen Co., Ltd., Carlsbad, CA, USA) ki gen serom fetis bovin (Gibco, Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Selil A375 yo te trete ak diferan konsantrasyon PM2.5 (0, 100, 200, ak 400 ug/mL) pou 24 èdtan, epi selil yo te itilize pou etid sa yo. Yo te itilize tès t Elèv ki pa marye ak analiz divèjans yon sèl pou analiz estatistik, epi yo te konsidere P <0.05 siyifikatif estatistik.
Pou mennen ankèt sou enfliyans PM2.5 sou selil A375 yo, yo te detekte pwopagasyon selil yo lè l sèvi avèk yon twous CCK-8 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), epi yo te detekte apoptoz selil lè l sèvi avèk Annexin V fluorescein isothiocyanate/ Propidyòm iodide (FITC/PI) apoptoz twous (Multisciences, USA), ki baze sou enstriksyon manifakti a. Rezilta yo endike ke PM2.5 te montre sitotoksisite konsantrasyon depandan nan selil A375, men li pa afekte apoptoz la [Siplemantè Figi 1, http://links.lww.com/ CM9/A917].
Metòd NaOH te itilize pou detèmine kontni melanin. Selil A375 ki te trete PM2.5-yo te lave ak salin tanpon fosfat (PBS) epi liz ak dlo. Lysates yo te santrifuje nan 12, 000 r/min pou 5 minit, lave ak 10 pousan asid trichloroacetic (500 mL) (Sigma, St. Louis , MO, USA) ak 75 pousan etanòl (500 mL), ak Lè sa a, klarifye ankò. Apre sa, yo te ajoute 50 mL 1 mol/L NaOH ki gen 10 pousan dimethyl sulfoxide nan granules yo pou 1 èdtan nan 80 degre. Yo te mezire absorpsyon nan 490 nm (OD 490) lè l sèvi avèk yon lektè microplate. Kòm TYR se anzim melanogenic ki pi enpòtan an, nou te detekte aktivite TYR la lè l sèvi avèk tès levodopa (L-DOPA). Plak Sixwell (Corning, USA) yo te simen ak selil A375 nan yon dansite 3 105 selil/pi. Lè sa a, selil yo te lave ak PBS ak lysed ak 0.5 pousan deoxycholate sodyòm (Sigma). Lysate la te divize an twa gwoup, epi 0.1 pousan L-DOPA (Sigma) te ajoute nan chak echantiyon. Apre 5 minit, yo te mezire OD 490 epi yo te itilize 0.1 pousan L-DOPA kòm estanda. Nou menm tou nou mezire nivo ekspresyon mRNA ak pwoteyin nan TYR. Total RNA te ekstrè lè l sèvi avèk yon twous mini RNeasy (Qiagen, Valencia, CA, USA). Transkripsyon ranvèse te fèt lè l sèvi avèk twous ReverTra Ace qPCR RT (TOYOBO, Japon). Apre sa, reyaksyon chèn polymerase an tan reyèl (qRT-PCR) te fèt sou Bio-Rad CFX96 TouchTM Realtime PCR Master Mix (TOYOBO, Japon). Jadendanfan Invitrogen yo prezante nan Tablo Siplemantè 1, http://links. lww.com/CM9/A917, epi yo te kalkile nivo ekspresyon chak mRNA lè l sèvi avèk metòd 2*DDCT. Nivo ekspresyon pwoteyin yo te analize pa Western blotting. Selil yo te lave ak PBS ak lysed nan tanpon RIPA (Beyotime, Lachin) ki gen fliyò phenylmethylsulfonyl (pwotease inhibitor melanj, 20:1, Sigma-Aldrich). Konsantrasyon pwoteyin yo te mezire lè l sèvi avèk yon twous tès pwoteyin BCA (Beyotime, Lachin). Pwoteyin total la te bouyi nan 70 degre pou 10 minit, separe nan yon jèl 4 pousan -12 pousan nan 200 V pou 40 minit, transfere nan yon manbràn nan 4 degre lè l sèvi avèk 120 mA pou 75-100 minit, ak Lè sa a, enkube ak 5 pousan. lèt ki pa gen anpil grès pou 1 èdtan. Lè sa a, manbràn yo te sonde ak anti-TYR, anti-AhR, anti-CYP1A1, ak anti-CYP1B1 antikò (Abcam) lannwit lan nan 4 degre. Antikò IgG anti-sourit ki konjige peroksidaz refor (Proteintech, USA) te itilize kòm yon antikò segondè. Rezilta yo endike ke PM2.5 ogmante kontni melanin ak aktivite TYR nan yon fason ki depann de dòz la. Tou de nivo ekspresyon mRNA ak pwoteyin nan TYR yo te kontwole [figi siplemantè 2 A–D, http://links.lww.com/CM9/A917].
PM2.5 ka ogmante aktivite TYR pa aktive chemen AhR la. Pou detèmine si PM2.5 afekte siyal AhR, nou detekte nivo transkripsyon AhR ak jèn klasik en li yo CYP1A1 ak CYP1B1 pa qRT-PCR ak Western blot. Rezilta yo te montre ke PM2.5 ogmante nivo ekspresyon mRNA AhR ak CYP1A1, osi byen ke ekspresyon pwoteyin CYP1A1 [Siplemantè Figi 2 E-G, http://links.lww.com/ CM9/A917].
Aktivasyon AhR lakòz jenerasyon ROS, ki ka ogmante aktivite TYR tou.[5] Pakonsekan, nou evalye pwodiksyon ROS la lè l sèvi avèk 20,70 -dichlorofluorescein diacetate (DCFHDA) ak sikometri koule. Apre 24 èdtan nan tretman ak PM2.5, selil A375 yo te enkube ak DCFH-DA (5mmol / L) pou 30 minit nan 37 degre nan fè nwa a. Selil yo te lave de fwa nan PBS, epi yo te mezire fliyoresans pa yon sitomèt koule. Entansite fluoresans mwayen an te mezire lè l sèvi avèk lojisyèl FACS Diva 6.0 (BD Bioscience, New York, NY, USA). Kòm yo panse pwodiksyon ROS pwovoke CYP1A1-yo responsab repons enflamatwa a,[5] nivo ekspresyon mRNA sitokin pro-enflamatwa yo (IL-1a, IL-6, IL{ {19}}, ak faktè necrosis timè [TNF]-a) yo te mezire. Yo te jwenn ke PM2.5 ogmante pwodiksyon ROS, osi byen ke IL-1a, IL-6, ak IL{-8 nivo mRNA nan selil A375 [Figi Siplemantè 2 H ak I, http ://links. lww.com/CM9/A917].
Konklizyon yo nan etid sa a endike ke PM2.5 ankouraje melanogenesis, ak ogmante tou de aktivite ak ekspresyon nan TYR nan selil A375. Anplis, PM2.5 ta ka aktive siyal AhR, ak pwovoke estrès oksidatif ak repons enflamatwa, ki ka yon kaskad siyal melanojèn ki responsab pou ipèpigmantasyon.
Rekonesans
Nou eksprime rekonesans sensè nou an pou sa ki annapre yo: Prof. Dr Masutaka Furue ak Prof. Dr. Tsuji Gaku nan Kyushu University Hospital ki te amelyore maniskri a epi ki te ede ak enfòmasyon ki gen rapò ak AhR la. Nou rekonesan tou pou koreksyon angle pwofesè Dr Robert Schwartz ki soti nan Rutgers New Jersey Medical School ofri.
Finansman
Etid sa a te sipòte pa yon sibvansyon nan Fondasyon Nasyonal Syans Natirèl Lachin nan (No. 2101000271).
Konfli enterè yo
Okenn.
Referans
Peng F, Xue CH, Hwang SK, Li WH, Chen Z, Zhang JZ. Ekspozisyon nan matyè amann patikil ki asosye ak lentigo senil nan fanm Chinwa: yon etid kwa-seksyonèl. J Eur Acad Dermatol Venereol 2016;31:355–360. doi: 10.1111/jdv.13834.
Shi Y, Zeng Z, Liu J, Pi Z, Zou P, Deng Q, et al. Matyè patikil ankouraje ipèpigmantasyon atravè aktivasyon siyal AhR / MAPK ak ogmante nivo parakrin a-MSH nan keratinosit. Environ Pollut 2021;278:116850. doi: 10.1016/j.envpol.2021. 116850.
Peng F, Tsuji G, Zhang JZ, Chen Z, Furue M. Potansyèl wòl PM2.5 nan melanogenesis. Environ Int 2019;132:105063. fè 10.1016/j. envint.2019.105063.
Napolitano M, Patruno C. Aryl idrokarbone reseptè (AhR) yon sib posib pou tretman maladi po. Med Hypotheses 2018;116:96–100. doi: 10.1016/j.mehy.2018.05.001.
Dijkhoff IM, Drasler B, Karakocak BB, Petri-Fink A, Valacchi G, Eeman M, et al. Enpak matyè patikil nan lè a sou po: yon revizyon sistematik soti nan epidemyoloji nan syans vitro. Pati Fib Toxicol 2020;17:35. fè 10.1186/s12989-020-00366-y.
【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】
