Sentèz vèt ak karakterizasyon nan nanopartikil fè sentèz soti nan ekstrè fèy akeuz nan Vitex Leucoxylon ak aplikasyon byomedikal li yo.

Résumé:Metòd ekstraksyon frèt te itilize pou jwenn extrait aqueuse deVitex leucoxylonfèy nan yon rapò 1:10. Nanopartikil fè (FeNPs) yo te sentèz lè l sèvi avèk ekstrè fèy akeuz nanV. leukoxylonkòm yon ajan rediksyon. Apwòch fitomedsin lan te itilize pou fè FeNPs lè w melanje 1 mL ekstrè plant ak 1 mM sulfat ferrik. Yo te itilize mikwoskopi elèktron analiz (SEM), espektroskopi enfrawouj Fourier-transfòm (FTIR), espektroskopi iltravyolèt-vizib (UV-Vis), ak espektroskopi radyografi enèji-dispersive pou egzamine FeNP yo sentetiz. Reyaksyon rediksyon an te montre pa yon chanjman nan koulè solisyon an, ak fòmasyon nan koulè nwa konfime ke FeNP yo te fòme. Yo te jwenn pi gwo absòpsyon (max) nan 395 nm nan analiz espektral UV-Vis. Spectres FTIR deV. leukoxylonekstrè fèy akeuz te montre chanjman nan kèk pik, sètadi 923.96 cm.−1 ak 1709.89 cm−1, ak gwoup fonksyonèl asid carboxylic, aldehydes enstore, ak ketonn, ki te manke nan espèk FTIR nan FeNPs epi yo responsab pou fòmasyon FeNPs. FeNPs ak dyamèt ant 45 ak 100 nm yo te obsève nan imaj SEM. Kreyasyon FeNP yo te konfime pa EDX, ki montre yon siyal fò nan rejyon an fè metalik nan 6-8 Kev. XRD revele yon nati cristalline ak yon dyamèt mwayèn nan 136.43 nm.Antioksidan,anti-enflamatwa, sitotoksik, akgeri blesitès an vitro rapòte aktivite enpòtan nan FeNP yo. Konklizyon yo kimilatif nan etid la prezan endike ke sentèz la vèt nan FeNPsranfòse aktivite byolojik li yoepi li ka sèvi kòmyon posib ajan pou geri blesi nan poepiajan sitotoksik kont kansè. Se etid nan lavni ki nesesè sou idantifikasyon an nan mekanis ki enplike nan sentèz la nan FeNPs paV. leukoxylonak aplikasyon byomedikal li yo.

Mo kle:Vitex leucoxylon; nanopartikil fè; SEM; geri blesi; sitotoksik

CISTANCHE BENEFIS POUANTIOXIDANT,ANTI-ENflamatwa, SITOTOXIK, AKgerizon blesi

1. Entwodiksyon

Aplikasyon nan nanoteknoloji nan syans ak teknoloji pou fabrike nouvo materyèl nan nivo nanokal se yon jaden k ap grandi rapidman [1]. Nanoteknoloji tranzaksyon ak materyèl manifakti nan nivo atomik pou jwenn pwopriyete diferan, ki ka manipile pou aplikasyon pi pito. Domen sa a ap grandi rapidman ak aplikasyon li nan syans ak teknoloji pou fabrike nouvo materyèl nan nivo nanokal [2]. Plizyè sektè endistriyèl yo te anbrase nanoteknoloji nan dènye ane yo akòz aplikasyon li yo nan domèn sistèm depo elektwonik [3], bioteknoloji [4], separasyon mayetik ak prekonsantrasyon analit sib yo, livrezon dwòg vize [5], ak machin pou jèn ak dwòg. livrezon [3,5,6]. Kontinwe, patikil sa yo gen potansyèl pou fè yon enpak sibstansyèl sou sosyete a kòm yon rezilta nan pakèt aplikasyon pou yo ka itilize yo. Nanopartikul (NPs) se mas nan patikil ki gen yon gwosè ki mwens pase yon santèn nanomèt epi yo konsidere yo kòm mas estriktirèl kle nan jaden an nan nanoteknoloji. Aktivite pi wo NP yo se tou de karakteristik defini yo ak kalite yo pi remakab pou yo [7]. NP òganik ak inòganik yo se de klasifikasyon prensipal yo ki ka aplike nan nanopartikil. Nanopartikul inòganik yo ka gen ladan NP mayetik, NP metal nòb (tankou lò ak ajan), ak NP semi-conducteurs (tankou dyoksid Titàn ak oksid zenk). Nanopartikul òganik yo ka gen ladan NP kabòn. Nanopartikul inòganik yo atire gwo atansyon paske yo ofri pwopriyete materyèl siperyè ansanm ak adaptabilite fonksyonèl. Yo te envestige kòm zouti posib pou D 'medikal kòm byen ke pou tretman maladi akòz karakteristik sa yo gwosè yo posede [8]. Pwopriyete chimik, fizik, ak byolojik divès kalite NP yo enfliyanse anpil pa yon varyete de paramèt, ki gen ladan gwosè nanopartikil ak mòfoloji, osi byen ke kouch sifas, ki nòmalman detèmine pandan sentèz nan nanopartikil. Pèt aktivite byolojik entansyonèl ki te koze pa yon diminisyon nan estabilite koloidal. pH, fòs iyonik, ak yon pakèt pwoteyin ki kominike avèk AgNP nan sikonstans ki enpòtan yo tout gen yon enpak sou estabilite koloidal. Kòm yon rezilta, seleksyon teknik sentèz apwopriye enpòtan pou jwenn karakteristik patikil yo vle pou aplikasyon espesifik [9].

Kounye a, gen yon gran varyete NP ki ka sentèz lè l sèvi avèk yon varyete de pwosesis fizik, chimik, byolojik ak ibrid. Dapre konklizyon yo nan yon gwo kantite etid rechèch, pwosesis fizik ak chimik pou pwodwi nanopartikul yo enkli itilizasyon solvang òganik, konpoze danjere, kantite enèji enpòtan ak ajan estabilize ki pa biodégradables [10]. Se poutèt sa, nan jaden an nan nanoteknoloji vèt, sentèz la nan NPs lè l sèvi avèk materyèl natirèlman disponib tankou ekstrè plant, divès mikwo-òganis, metabolit yo, ak kèk sibstans natirèl humic [11,12] kòm ajan diminye ak capping ap vin de pli zan pli popilè. Metòd sentèz ki zanmitay anviwònman an yo te itilize pou pwodwi yon gran varyete nanopartikil metalik, ki gen ladan ajan, lò, fè, kwiv, ak zenk. Devlopman metòd fasil ak anviwònman akseptab pou sentèz NP se youn nan konsantre kle nan nanoteknoloji. Biomateryèl tankou mikwo-òganis ak ekstrè plant yo ka itilize nan pwosesis pou prepare yon gran varyete NP [13,14]. Sepandan, paske kèk òganis se patojèn, li danjere pou okipe yo. Yo nan lòd yo pwospere, mikwo-òganis yo bezwen kenbe nan kilti ak sibi kondisyon ak anpil atansyon kontwole, ki gen ladan tanperati, pH, ak lòt paramèt. Paske li elimine pwosesis travayè pou kenbe kilti mikwòb la, sentèz NP lè l sèvi avèk pati plant yo ka pafwa pwouve yo gen plis avantaj pase lòt pwosesis byolojik [15]. Kòm yon rezilta, li te ranpòte anpil atansyon akòz karakteristik nannan li yo, ki gen ladan itilizasyon resous natirèl, rapidite, ekolojik-zanmi, ak benignness. Karakteristik atiran sa yo se absoliman nesesè pou itilize nan aplikasyon medikal. Nanopartikul yo ki te pwodwi pa sentèz vèt yo gen yon gwosè ki byen defini ak anba kontwòl, yo gratis nan polyan, ak metòd la se senp pou echèl. Sa yo se kèk nan benefis adisyonèl nan sentèz vèt [16]. Aktivite byolojik nan nanopartikil sentèz yo lajman detèmine ak amann pa materyèl vèt yo itilize pou estabilite ak rediksyon iyon metal. Youn nan pwopriyete ideyal yo nan NP yo ta dwe ke li dwe gen yon kapasite eksepsyonèl pou fè diskriminasyon ant sib potansyèl (patojèn) ak selil mamifè (lame) [17].

Poutèt sa, ekstrè akeuz fèy V. leucoxylon te envestige pou potansyèl li yo fasilite fòmasyon nan nanopartikul fè (FeNPs) nan rechèch aktyèl la. Iron se youn nan eleman ki ka jwenn nan pi gwo abondans sou Latè. Dènyèman, li te vin rekonèt kòm yon nouvo klas nan NP enpòtan akòz lefèt ke li posede yon varyete de pwopriyete inik, ki gen ladan gwo coerciveness ak superparamagnetism. Cataly sis, aparèy elektwonik, depo enfòmasyon, detèktè, teknoloji livrezon dwòg, byomedsin, aparèy anrejistreman mayetik, ak netwayaj anviwònman an se sèlman kèk nan anpil aplikasyon curieux ki te sèvi ak FeNPs [18]. Anplis, dapre yon kantite etid, FeNP yo ka kreye nan ekstrè plant divès kalite. Ekstrè plant sa yo enkli fèy Eucalyptus globulus [19], fèy grenad [20], ak sann kale bannann [21]. Plant la V. leucoxylon, ki te itilize nan etid aktyèl la, se yon manm nan fanmi an Verbenaceae. Li konnen tou kòm pye bwa chaste senk fèy (Kannada: Sengeni, Holenekki, Hollalakki) epi yo ka jwenn nan rejyon an sou bank larivyè Lefrat la nan forè Evergreen ak semi-evergreen ak forè kaduk imid sou rivyè. Li ka rive nan yon wotè ki rive jiska 20 m epi li klase kòm yon pye bwa kaduk ki modès ak gwo. Sou longè forè Ghats Lwès peyi Zend yo, yo ka jwenn li an gwo kantite. V. leucoxylon fèy ekstrè perfusion yo te rapòte posede yon gran varyete aktivite famasi tankou anti-enflamatwa, antioksidan, antisikotik, depresè, antiparkinsonian, ak aktivite antihyperlipidemic [22]. Pandan tout listwa e sitou nan medikaman popilè, pwodwi natirèl yo te itilize pou tretman yon pakèt maladi ak maladi. Pratik sa a dat tounen nan tan lontan. Metòd chimi pwodwi natirèl ki te alantou pou yon tan long te fè li posib jwenn yon varyete gwo metabolit byoaktif segondè ki soti nan sous tè ak maren. Yon kantite enpòtan nan sibstans natirèl sa yo kounye a yo te konsidere pou itilize kòm potansyèl pharmaceutique [23].

Gen yon gwo kantite pwodui chimik ki rive natirèlman ak eleman nitritif ki poko dekouvri ki itil limanite. Kòm yon konsekans sa a, gen yon demann imedya pou rechèch ak devlopman nan opsyon terapetik inovatè ki ka itilize avèk siksè nan entèvansyon terapetik pandan y ap kreye yon kantite minimòm efè negatif.

Pwosesis sentèz vèt yo sijere kounye a pou FeNP se diferan ak pri-efikas. Nan etid aktyèl la, yo te fè yon tantativ pou kreye nanopartikul nan tanperati chanm san yo pa itilize nenpòt pwodwi chimik oswa teknik fizik. Yo te chwazi plant Vitex leucoxylon nan yon efò pou fè sentèz nanopartikul fè, ak modèl konplè sistematik nan vitro yo te pote soti pou evalye puisans nan nanopartikul fè. Se sèlman yon kantite limite nan etid rechèch sou konsèp nan nanopartikul ak aplikasyon byomedikal yo te pibliye sou plant sa a. Kòm yon konsekans, nou deside ke li ta benefisye fè rechèch sa a ak objektif sa yo nan tèt ou: tès depistaj pou fitochimik ak mezire kantite metabolit segondè nan V. leucoxylon; sentèz vèt ak karakterizasyon FeNP soti nan V. leucoxylon; etid konparatif nan efè antioksidan ak anti enflamatwa nan V. leucoxylon ak FeNPs li yo nan vitro; aktivite sitotoksik nan vitro nan ekstrè fèy akeuz nan V. leucoxylon ak FeNP li yo kont kansè po, kansè nan poumon, ak kansè nan bouch; nan vitro blesi-geri aktivite nan ekstrè fèy akeuz nan V. leucoxylon ak FeNPs sentetik li yo pa esè grafouyen.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Koleksyon Materyèl Plant

Nan mwa mas 2022, yo te ranmase fèy fre nan V. leucoxylon nan zòn forè Anshi nan Western Ghats yo nan distri Uttar Kannada nan eta Karnataka nan peyi Zend. Doktè Kotresha K., Taxonomist, Depatman Botanik, Karnataka Science College, Dharwad, te idantifye ak otantifye fèy yo; Karnataka, lè w refere a echantiyon bon an depoze nan Depatman Botanik, Karnataka Science College, Dharwad, Karnataka. Apre yo fin kolekte, materyèl fèy fre plant la te lave anba dlo tiyo k ap koule, seche solèy la, epi answit mouye nan yon poud koryas lè l sèvi avèk yon moulen mekanik. Yo te kenbe poud lan nan resipyan ki te sele nan tanperati chanm pou li te kapab itilize pita nan pwosesis la nan ekstraksyon sòlvan brit.

2.2. Preparasyon ekstrè plant

Sèvi ak yon aparèy Soxhlet, 25 g fèy an poud yo te ekstrè pou 48 èdtan ak 250 mL dlo distile. Ekstrè akeuz la te konsantre plis lè l sèvi avèk yon roto-evaporator, epi li te fin cheche nan desiccators anvan yo te kenbe nan yon boutèy ki fèmen nan 4 ◦C jiskaske yo itilize. Pou sentèz FeNPs, yo te itilize ekstrè akeuz kòm yon ajan diminye ak estabilize.

2.3. Solvang ak reyaktif

Tout pwodwi chimik yo ak solvants yo te travay yo te nan bon jan kalite analyse epi yo te achte nan men Hi-media (Hubli, peyi Zend).

2.4. Analiz fitochimik

Apre pwosedi ki dekri pa Deepti et al. (2012), ekstrè fèy brut V. leucoxylon te teste kalitatif pou prezans divès konstitiyan fitochimik tankou flavonoid, alkaloid, fenol, glikozid, sterol, lignin, saponin, anthraquinones, tanen, ak sik diminye [24].

2.5. Sentèz nan nanopartikul fè

Premyèman, yo te ajoute 1 mL nan ekstrè fèy V. leucoxylon akeuz nan 1 0 mL nan 0.05 mM FeSO4 solisyon akeuz, epi yo te melanj lan souke. Nan tanperati chanm ak nan yon anviwònman fè nwa, pwosesis melanj reyaksyon konplè a te pote soti. Reyaksyon oksidasyon/rediksyon an te klèman vizib apre melanj reyaksyon san koulè a ​​te enkube ak reyaji pou kantite tan ki nesesè [25]. Yo nan lòd yo retire nenpòt tras nan ekstrè akeuz nan FeNPs yo ki fèk sentèz, ki te pèmèt yo sèk an poud apre santrifujasyon nan 10, 000 rpm pou dis 10 minit pandan peryòd reyaksyon an vle, melanj akeuz ki gen FeNP yo te santrifuje. yon dezyèm fwa epi redispèse nan dlo doub distile epi seche [26].

2.6. Karakterizasyon FeNPs

Plizyè metòd, tankou espektroskopi iltravyolèt-vizib (UV-Vis), espektroskopi enfrawouj ki transfòme Fourier (FTIR), mikwoskòp elèktron, ak espektroskopi radyografi dispèsyon enèji, difraksyon radyografi (XRD), analizeur gwosè patikil, ak zeta. potansyèl yo, yo te itilize yo nan lòd yo karakterize FeNP yo.

2.6.1. Analiz ki baze sou UV-vizib-spèktroskopi

Premyèman, yo te evalye 1 mL aliquot solisyon koloidal FeNPs nan kuvèt kwatz lè l sèvi avèk espektroskopi UV-vizib (U-3310, Hitachi, Tokyo, Japon), lè l sèvi avèk dlo distile kòm referans ak 0.05 mM FeSO4 kòm yon vid, valide rediksyon an nan iyon yo ferrik nan solisyon an koloidal [27].

2.6.2. Analiz ki baze sou FTIR

Gwoup fonksyon (gwoup) ki te mare sou sifas fè a epi ki te enplike nan sentèz FeNP yo te idantifye lè l sèvi avèk espektroskopi FTIR (S700, Nicolet, MA, USA), [28]. Apre 72 èdtan nan enkubasyon, FeNP yo te izole pa repete santrifujasyon (3-4 fwa) nan melanj reyaksyon yo nan 10, 000 rpm pou 15 min. Supernatant la te ranplase pa dlo deyonize epi yo te estoke i grenn nan kòm poud. Apre yo fin cheche, yo te mete FeNP yo nan yon analiz FTIR lè l sèvi avèk pwosesis granules bromur potasyòm nan yon rapò 1:100.

2.6.3. Analiz-Electron-Mikwoskopi-Baze analiz

Yo te itilize mikwoskospi elektwonik (JSM-IT 500, Jeol, Boston, MA, USA) pou egzamine nanopartikil yo epi etabli fòm sifas yo. Substra yo te prepare sou yon pwòp 5 mm × 5 mm Si substra cleaved soti nan yon wafer 100 mm dyamèt. Yo te pèmèt substra a reyaji pou 2 èdtan a 6 èdtan epi yo te prepare echantiyon an pa santrifuje yon solisyon koloidal nan 10, 000 rpm pou 5 min. Te granules a cheche apre yo te resantrifige anpil fwa, apre sa li te redispèse nan dlo deyonize epi yo te repete pwosedi a. Finalman, yo te jwenn granules sèk la, ki te plis sibi karakterizasyon estriktirèl la pa analiz SEM dapre pwosedi ki dekri nan Enstiti Nasyonal pou Estanda ak Teknoloji, NIST -2007 [29].

2.6.4. Enèji dispersion radyografi

Apre siye sou yon kadriyaj kwiv ki kouvri ak kabòn, yo te analize FeNP redwi yo lè l sèvi avèk EDX (JSM-IT 500, Jeol, Boston, MA, USA), ki te pèmèt tou detèmine konpozisyon elemantè a.

2.6.5. Zeta Potansyèl

Obsèvasyon NP Potansyèl zeta a se yon zouti itil pou jwenn plis enfòmasyon sou estabilite NP koloidal yo. Anplitid potansyèl zeta bay yon allusion sou estabilite posib koloyid la. Dapre Meléndrez et al. (2010), yo konsidere patikil yo ki estab si valè potansyèl zeta yo swa pi pozitif pase plis 30 mV oswa plis negatif pase 30 mV [30]. Reyalite sa a ta dwe pran an konsiderasyon. Lazè zeta mèt la te itilize pou jwenn lekti potansyèl zeta sifas yo (Malvern zeta sezer 2000, Malvern, UK). Echantiyon likid nan nanopartikul yo, totalize 5 mililit, yo te dilye ak 50 mililit dlo doub-distile, epi yo te itilize 2 mm pou chak mèt kare nan klori sodyòm kòm solisyon elektwolit sispann. Apre sa, pH la te modifye jiskaske li rive nan nivo vle a. Echantiyon yo te ajite pou yon total de 30 minit. Apre souke veso a, yo te note pH la nan ekilib, epi yo te detèmine potansyèl zeta nan patikil metalik yo. Nan objektif pou detèmine potansyèl sifas FeNP yo, yo te itilize zeta potansyèl yo. Nan chak egzanp, valè a te deklare se mwayèn rezilta twa mezi endividyèl yo. Lè valè potansyèl zeta yo te varye ant pi wo pase plis 30 mV pou pi ba pase 30 mV, yo te detèmine kritè pou estabilite NP yo [31].

2.6.6. Patikil Size Analyzer

Yo nan lòd yo detèmine gwosè patikil echantiyon an, tès PSA yo te fèt sou li apre li te lyofilize epi dispèse lè l sèvi avèk yon ultrasonicator (SZ-100, Horiba, Kyoto, Japon).

2.6.7. X-ray difraksyon analiz (XRD) analiz

Nanopartikil fè sentèz soti nan ekstrè fèy akeuz nan V. leucoxylon yo te sibi analiz XRD (Smart Lab SE, Rigaku, Tokyo, Japon) pou detèmine nati a ak gwosè mwayèn nan nanopartikil yo.

2.7. Detèminasyon nan Aktivite Antioksidan lè l sèvi avèk Metòd In Vitro

2.7.1. Egzamen pouvwa antioksidan Ferrik-Ion-Reducing (FRAP)

Dapre Oyaizu (1986), ak yon ti modifikasyon, yo te evalye pouvwa rediksyon iyon ferrik [32]. Pou 30 min nan 50 ◦C, yo te ajoute 2.5 mL nan 20 mM tanpon fosfat ak 2.5 mL nan 1 pousan ferricyanide potasyòm nan 2.5 mL nan ekstrè fèy V. leucoxylon ak FeNPs sentetiz li yo melanje ak konbinezon an. Apre peryòd enkubasyon an, yo te konplete melanj lan ak 2.5 mL 10 pousan w/v trichloroacetic asid ak 0.5 mL 0.1 pousan w/w klori ferrik anvan yo te enkube pou yon lòt 10 min. Finalman, yo te itilize yon espektrofotomèt UV-V pou detekte absòbe a nan 700 nm. Kòm yon estanda, yo te itilize asid ascorbic. Chak echantiyon yo te teste twa fwa.

2.7.2. Oksijene Idwojèn Esay Scavenging

Ki baze sou kapasite V. leucoxylon akeuz fèy ekstrè ak FeNP sentetik li yo pou retire oksijene idwojèn, yo te evalye aktivite antioksidan nan konpoze sa yo. Premyèman, {{0}}.6 mL tanpon fosfat (pH-7.4) ki gen 4 mM H2O2 te ajoute nan 0.5 mL asid ascorbic estanda nan yon konsantrasyon li te ye, osi byen ke tib ki gen ekstrè plant nan divès konsantrasyon. sòti nan 100 µL a 500 µL (pH-7.4). Sèvi ak yon tanpon fosfat ak solisyon vid idwojèn san oksijene, nou evalye absorpsyon solisyon an nan 230 nm apre 10 min. Yo te itilize tanpon fosfat pou kreye kontwòl olye pou echantiyon an oswa estanda [33]. Chak echantiyon yo te teste twa fwa. Apwòch fòmil la te itilize pou kalkile pousantaj anpèchman an.

2.7.3. DPPH gratis-radikal-scavenging

Assay V. leucoxylon fèy ekstrè ak FeNPs sentetize yo te teste pou kapasite yo nan scavenge radikal gratis lè l sèvi avèk DPPH radikal kòm yon reyaktif [34]. Echantiyon yo te konbine avèk solisyon radikal DPPH (60 M) nan etanòl (100 µL) nan diferan konsantrasyon (w/v). Yo te itilize yon espektrofotomèt UV-Vis pou mezire absorbans melanj lan nan 517 nm apre 30 min enkubasyon nan fè nwa a nan tanperati chanm. Asid ascorbic te anplwaye kòm yon estanda pou eksperyans la. Yo te itilize ekwasyon sa a pou detèmine aktivite DPPH chak echantiyon:

kote Ac reprezante absorpsyon reyaksyon kontwòl la, ki fèt lè w melanje 100 L etanòl ak 100 L solisyon DPPH, ak At reprezante absorpsyon echantiyon tès la. Eksperyans yo te fèt nan triple. Yo te kalkile valè IC50 pou chak echantiyon. Yon nivo ki pi wo nan aktivite radikal gratis te endike nan melanj reyaksyon an ki gen yon absòbe pi ba.

2.7.4. Phosphomolybdenum (PM) Esay

Aktivite antioksidan total te detèmine lè l sèvi avèk Prieto et al., 1999, teknik estanda. Chak tib tès ki gen 3 mL dlo distile ak 1 mL solisyon reyaktif molybdat te resevwa yon ekstrè fèy akeuz nan V. leucoxylon ak FeNP li yo nan konsantrasyon varye ant 100 µL ak 500 µL. Tib sa yo te enkube pou 90 min nan 95 ◦C. Yo te mezire absorbans melanj reyaksyon an nan 695 nm apre tib sa yo te ajiste nan tanperati chanm pou 20-30 min apre enkubasyon. Estanda referans la se asid ascorbic [35].

2.8. Evalyasyon nan aktivite anti-enflamatwa in vitro

Efè anti-enflamatwa nan ekstrè fèy akeuz V. leucoxylon ak FeNPs pwodwi li yo te evalye lè l sèvi avèk metòd denaturasyon pwoteyin ki dekri pa Elias et al., 1988, ak modifikasyon ti tay [36]. Kòm yon dwòg estanda, yo te itilize diclofenac sodyòm. Yo te melanje yon melanj reyaksyon ki gen 2 mL konsantrasyon li te ye nan FeNPs manifaktire (100 g/mL) ak estanda diclofenac sodyòm (100 g/mL) ak 2.8 mL saline ki gen tanpon fosfat (pH 6.4) ak 2 mL ze poul fre. albumin (1 mM) ak enkubasyon nan 27 ± 1 ◦C pou 15 min. Denaturasyon te pwovoke pa mete melanj reyaksyon an nan yon beny dlo nan 70 ◦C pou 10 min. Apre refwadisman, yo te mezire absorbans nan 660 nm lè l sèvi avèk dlo distile doub kòm yon vid. Chak tès te fèt twa fwa. Yo te itilize fòmil sa a pou kalkile pousan anpèchman denaturasyon pwoteyin:

kote, Nan=absòbe echantiyon tès la; Ac=absòbe kontwòl.

2.9. Detèminasyon sitotoksik ak aktivite antikansè nan nanopartikul fè lè l sèvi avèk MTT Assay

Yo te evalye efè V. leucoxylon ak FeNPs sentetiz li yo sou viabilite selil fibroblast L292 ki pa kansè yo ak aktivite antikansè li yo sou kansè po (A375), kansè nan poumon (A549), ak kansè nan bouch (KB-3-1). lè l sèvi avèk tès MTT estanda a, dapre Carmichael et al., (1987) [37]. Tout liy selil yo te jwenn nan Sant Nasyonal pou Syans Selilè (NCCS), Pune, peyi Zend. Pousantaj anpèchman nan kwasans selil (IC50) valè yo te sòti lè l sèvi avèk koub dòz-repons pou chak liy selil, epi yo te itilize fòmil sa a pou kalkile pousantaj kwasans lan. Konvèsyon MTT nan yon pwodwi formazan koulè wouj violèt pa dehydrogenase mitokondriyo selil ki an sante se baz eksperyans sa a [38].

2.10. Etid gerizon blesi an vitro lè l sèvi avèk tès esè grate

Kapasite gaye ak migrasyon selil liy selil L292 ki te koze pa echantiyon ak konsantrasyon li te ye nan ekstrè plant ak nanopartikil fè yo te egzamine nan ankèt aktyèl la [39]. Yo te itilize plak kilti selil bèt ak medya DMEM ak 10 pousan FBS ak 2 pousan antibyotik Pen-Strep (Darmstadt, Almay) pou kòmanse pwosesis kilti selil la. Yo te itilize yon pwent pipèt plastik esteril pou grate konfluan monokouch selil yo apre yo fin grandi jiska apeprè 50,000 selil pou chak mL. Yo te itilize solisyon PBS pou retire nenpòt debri selil ki pa vle. Kòm yon kontwòl negatif, selil ki pa trete yo te itilize, tandiske asid ascorbic estanda yo te itilize kòm yon kontwòl pozitif pou echantiyon polymère nan konsantrasyon li te ye. Pou pwochen 24 èdtan yo, selil yo te kenbe nan 37 ◦C ak 5 pousan CO2. Pou egzamen an nan migrasyon selil relatif ak fèmti blesi, kouch selil yo grate yo te enkube ak imaj nan entèval ki sòti nan 0 h a 6 h a 12 h ak 24 h. Yo te itilize kalibrasyon MagVision Software (X64, 2016, Magnus, New Delhi, peyi Zend) nan rezolisyon 4× pou quantifier distans diferans lan. Pou detèmine fèmen blesi a ak pousantaj migrasyon, yo te itilize fòmil ki anba a:

parapò ak sa ki annapre yo: Yon 0h=zòn blesi mezire imedyatman apre yo fin grate; ATh=zòn blesi yo mezire apre h èdtan; Rm=to migrasyon (µm/h); Wf=premye lajè blesi (µm); ak T=tan migrasyon (èdtan).

2.11. Analiz estatistik

Done yo prezante kòm devyasyon estanda mwayèn ak erè estanda, epi yo te fè chak eksperyans twa fwa. Yo te itilize vèsyon lojisyèl SPSS 20 pou fè yon analiz yon sèl-fason nan divèjans (ANOVA) sou diferans ki genyen nan nòt mwayèn ki te egziste ant gwoup yo.

Mande plis:

Imèl:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel: plis 86 15292862950

SHOP:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop