Pwopriyete benefisye pou sante ekstrè grenn rezen ak enfliyans li sou makè byochimik chwazi nan san, fwa ak ren Rattus Norvegicus.
Mar 10, 2022
Résumé:Kadmyòm (Cd) se yon metal lou ki rive nan tout zòn nan anviwònman an, ki gen ladan chèn alimantè a. Nan kò a, li lakòz estrès oksidatif pa pwodwi radikal gratis ki danjere nan selil yo. Ekstrè grenn rezen (GSE) gen yon pakèt eleman biyolojik aktif ki ede netralize efè negatif radikal gratis. Nan etid sa a, yo te kontwole efè GSE prepare nan Sezon cultivar semi rezistan grapevine, ki rich nan fenolik, sou mak byochimik rat mawon ki ekspoze a efè Kadmyòm. GSE ogmante aktivite antioksidan ikid ki nan san ak, nan larenak fwa a, kontni Cd te siyifikativman bese pa GSE ko-administrasyon. An konsekans, ogmantasyon nan kontni kreyatinin ak aktivite alanin aminotransferaz ak diminisyon nan aktivite katalaz ak superoksid dismutase ki te koze pa Kadmyòm yo te ralanti pa GSE ko-administrasyon. Rezilta yo nan travay sa a revele ke ekstrè grenn rezen ofri yon efè pwoteksyon kont konsomasyon nan metal lou nan òganis lan.
1. Entwodiksyon
Kadmyòm (Cd) se yon metal lou ki rive nan tout zòn nan anviwònman an; li fè pati kwout Latè a, li nan dlo, li akimile nan plant, epi li prezan nan òganis yo. Anplis de chèn alimantè a (an tèm de plant yo, pifò sereyal, rekòt rasin, ak legim yo se sous, pandan y ap pami ògàn bèt yo, prensipalman fwa a akrense yon sous), yon sous enpòtan Kadmyòm pou moun se lafimen sigarèt, espirasyon ki soti nan divès kalite combustion, endistri métallurgique, ak kèk enstalasyon elektrik [1,2]. Nan kò a, Kadmyòm mare sitou nan metalothionein, albumin, ak lòt pwoteyin plasma nan san an. Kadmyòm se yon metal danjere toksik ki lakòz estrès oksidatif lè li pwodui radikal gratis ki danjere nan selil yo. Radikal gratis ka domaje pwoteyin, lipid, anzim, ak ADN, epi kidonk yo dwe netralize pa antioksidan anvan yo antre nan selil yo [3].
Si yo pa netralize, Cd lakòz dezentegrasyon globil wouj [4], akimile nan òganis lan—, espesyalman nan fwa a akren—e, akòz resanblans li ak zenk, ki se yon eleman esansyèl, li fasil antre nan reyaksyon anzimatik epi patisipe nan pwosesis byochimik [5]. Li elimine sèlman trè dousman ak difikilte nan òganis lan [6]. Li se byen li te ye ke antioksidan ka gen yon efè pwoteksyon kont estrès oksidatif ak domaj metal lou, ak travay eksperimantal sa a te baze sou reyalite sa a. Ekstrè grenn rezen (GSE) gen yon pakèt eleman biyolojik aktif nan matris li [7] ki ede netralize efè negatif radikal gratis. GSE pwoteje selil yo kont domaj nan reglemante domaj oksidatif selilè, diminye domaj ògàn yo, amelyore balans ki genyen ant oksidan ak antioksidan, epi redwi liberasyon medyatè enflamatwa. Li tou gen efè anti-enflamatwa, antiapoptotik, ak pro-proliferative [8]. Kontni wo nan flavan-3-ol oswa procyanidins kondanse, ki se anba envestigasyon kòm yon metòd altènatif nan tretman pou maladi grav, se patikilyèman enpòtan [9,10]. Sepandan, kontni an ak konpozisyon nan fenolik grenn rezen, osi byen ke aktivite antioksidan nan ekstrè grenn nan, ka enfliyanse pa cultivar rezen, rootstock, kondisyon klimatik, oswa teknik k ap grandi [11-13] ak, Se poutèt sa, pwopriyete antioksidan, kòm byen ke efè pwoteksyon nan yon ekstrè konkrè, pa ka fasil prevwa. Objektif travay sa a se te etidye efè pwoteksyon GSE ki te prepare apati de cultivar rezen semi-rezistan Cerason sou makè byochimik nan san, plasma, fwa, akrennan rat mawon ki te ekspoze a efè Kadmyòm.
Mo kle:ekstrè grenn rezen; antioksidan; kadmyòm; rattus norvegicus; makè byochimik; efè pwoteksyon; ren, Ren
CISTANCHE AP AMELIORE FONKSYON REN/REN
2. Rezilta ak Diskisyon
2.1. Aktivite antioksidan ak konpozisyon fitochimik nan ekstrè grenn rezen
Ekstrè grenn rezen ki te prepare nan varyete semi-rezistan Cerason te teste pou aktivite antioksidan, kontni total polifenolik, ak antioksidan endividyèl chwazi. Aktivite antioksidan yo te detèmine espektrofotometrik lè l sèvi avèk kat metòd ki baze sou diferan prensip (DPPH• , ABTS• plus , FRAP, FR) ak total konpoze polifenolik yo te detèmine ak metòd Folin–Ciocalteu. Tou depan de metòd yo itilize a, aktivite antioksidan an te varye ant 7 a 31 mg / g ekivalan asid galik (GAE) ak kontni total polifenolik la te 9.3 mg / g GAE (Tablo 1). Rezilta yo nan pati sa a nan eksperyans la lonje dwèt sou gwo potansyèl antioksidan nan grenn rezen.
2.2. In Vivo Detèminasyon nan efè ekstrè grenn rezen nan rat yo
2.2.1. Detèminasyon kontni kadmyòm nan san, fwa, ak renKadmyòm se metal toksik ki pi komen nan manje. Apre administrasyon oral, li absòbe nan trip la, transpòte nan fwa a, ak konjige nan gwoup thiol nan metallothionein (MT). Apa de sa, Cd kapab tou mare ak albumin, oswa lòt pwoteyin nan san an [14]. Imedyatman, Cd akimile nan kò a, se elimine sèlman dousman nan kò a atravè pipi a ak poupou epi li gen yon mwatye lavi byolojik apeprè 20 ane. Pi gwo kantite (apeprè yon tyè) kadmyòm yo jwenn nan larencortical. Nan san an, pifò kadmyòm (apeprè 90 pousan) prezan nan globil wouj yo. Li se toksik nan yon pakèt ògàn ak objektif prensipal yo se laren, zo, ak poumon [15–17]. GSE te rapòte pi ba konsantrasyon Kadmyòm nan globil wouj yo ak nanren,Lè nou konsidere ke kontni li nan fwa a te rapòte ogmante [14]. Rezilta yo pou kontni kadmyòm nan san nan etid sa a yo montre nan Figi 1A. Nan kòmansman eksperyans lan, yo te jwenn 3.2 µg/kg Kadmyòm nan san bèt yo. Pandan eksperyans la, apre 14 jou, valè kadmyòm mwayèn nan gwoup la ak adisyon GSE ak Kadmyòm te siyifikativman pi wo pase nan lòt gwoup (10.8 µg/kg, p=0.023). Apre 28 jou, varyasyon done yo te twò wo pou obsève yon siyifikasyon estatistik.
Nan kòmansman eksperyans la, pa gen okenn kadmyòm detekte nan fwa yo (Figi 1B) nan bèt yo eksperimantal. An konsekans, pa gen okenn kadmyòm detekte nan fwa bèt yo nan gwoup kontwòl ak GSE pandan eksperyans la. Nan lòt men an, apre 14 jou nan eksperyans la, valè an kadmyòm vle di nan gwoup la ak adisyon a nan Kadmyòm te 5.8 mg / kg ak nan gwoup la ak adisyon a nan Kadmyòm ak GSE, valè an mwayèn te 5.2 mg / kg. Tou de valè sa yo te siyifikativman diferan de gwoup kontwòl la (p=0.002 ak p=0.018 pou gwoup la sèlman Kadmyòm ak gwoup la ak Kadmyòm ak GSE, respektivman). Apre 28 jou, valè an mwayèn nan gwoup la ak adisyon nan Kadmyòm te ogmante a 6.7 mg / kg, ki te diferan anpil de nivo a Kadmyòm nan gwoup la ak adisyon a nan Kadmyòm ak GSE, ki te diminye yon ti kras nan 4.8 mg / kg. (p=0.008).
Nan kòmansman an nan eksperyans la, pa gen okenn kadmyòm te detekte nan laren(Figi 1C) nan bèt eksperimantal yo. An konsekans, pa gen okenn kadmyòm te detekte nan larennan bèt yo soti nan kontwòl la ak gwoup GSE pandan eksperyans la. Nan lòt men an, apre 14 jou, valè an kadmyòm vle di nan gwoup la ak adisyon a nan Kadmyòm te 9.5 mg / kg ak nan gwoup la ak adisyon nan Kadmyòm ak GSE, valè an mwayèn te 6.5 mg / kg. Tou de valè sa yo te siyifikativman diferan de gwoup kontwòl la (p < 0.001="" pou="" tou="" de="" gwoup).="" apre="" 28="" jou,="" valè="" an="" mwayèn="" nan="" gwoup="" la="" ak="" adisyon="" nan="" kadmyòm="" te="" ogmante="" a="" 16.6="" mg="" kg,="" ki="" te="" diferan="" anpil="" de="" nivo="" a="" kadmyòm="" nan="" gwoup="" la="" ak="" adisyon="" a="" nan="" kadmyòm="" ak="" gse,="" ki="" te="" ogmante="" sèlman="" yon="" ti="" kras="" nan="" 10.4="" mg="" kg="" (p="0.009)." kidonk,="" nan="">renak nan fwa a, kontni Cd te siyifikativman bese pa administrasyon GSE. GSE gen konpoze fenolik ki ka chelate Cd, kidonk diminye akimilasyon Cd. Fòmasyon chelate sa yo pwobableman te lakòz yon kapasite redwi nan pwoteyin yo mare Cd, ki konsa ka elimine pi efikasman nan kò a [18].
2.2.2. Detèminasyon nan kontni kreatinin ak ure
Ki gen rapò ak akimilasyon Kadmyòm nanren, larense youn nan ògàn sib ki pi enpòtan pou toksisite Cd-induit. Se poutèt sa, larenmakè kreyatinin ak ure yo te detèmine nan plasma a. Detèminasyon an nan kreyatinin se yon bon endikatè nan filtraj glomerulèr epi yo itilize sitou pou kontwole kou a nan.maladi ren. Relasyon ki genyen ant konsantrasyon kreyatinin ak filtraj glomerulè se hyperbolic; kòm filtraj glomerulè diminye, sekresyon kreyatinin tou diminye [19]. Ogmantasyon konsomasyon nan kadmyòm nan metal lou mennen nandomaj nan ren, ak Se poutèt sa redwi efikasite sekresyon kreyatinin. Kòm yon rezilta, yon wo nivo kreyatinin nan san endike yonrendezòd [20].
Nan etid nou an, nivo yo nan kreyatinin yo te ogmante pa Cd, an konkordans ak rezilta deja pibliye [21]. Valè kontni kreyatinin an mwayèn (Figi 2A) nan bèt eksperimantal yo nan kòmansman eksperyans lan te 3.0 mg/L. Nan gwoup la ki te resevwa Kadmyòm, te gen yon ogmantasyon siyifikatif nan valè kontwole yo a 5.1 mg/L (apre 14 jou, p=0.015) ak nan 6.2 mg/L (apre 28 jou, p < 0.001).="" nan="" gwoup="" la="" pou="" gse="" te="" ko-administre="" ak="" kadmyòm,="" ogmantasyon="" nan="" makè="" sa="" a="" te="" pi="" ba="" (4.2="" mg="" l="" apre="" 14="" jou="" ak="" 5.5="" mg="" l="" apre="" 28="" jou)="" ak="" estatistik="" siyifikatif="" sèlman="" apre="" 28="" jou,="" lè="" yo="" konpare="" ak="" kontwòl="" (="" p=""><0.001). se="" konsa,="" ogmantasyon="" nan="" konsantrasyon="" kreyatinin="" te="" ralanti="" pa="" gse="" ko-administrasyon,="" sijere="" yon="" rediksyon="" nan="" efè="" a="" toksik="" ki="" te="" koze="" pa="" kadmyòm.="" nan="" gwoup="" la="" k="" ap="" resevwa="" gse="" sèlman,="" te="" gen="" valè="">
Ure se quantitativement pwodwi degradasyon ki pi enpòtan nan asid amine ak pwoteyin. Li fòme nan fwa a soti nan amonyak lage pa reyaksyon deaminasyon pandan metabolis asid amine. Li se elimine nan òganis la sitou pa larenpa filtraj glomerulèr ak resorption tubulaires [22]. Nan ka a nanmaladi ren, to a nan pwodiksyon ure depase pousantaj la nan clearance li yo, ki rezilta nan yon ogmantasyon nan nivo ure nan san. Anplis, Kadmyòm anpeche enkòporasyon asid amine nan pwoteyin, sa ki lakòz uremi [21]. Nan lòt men an, lè fonksyon fwa a echwe, sentèz ure diminye epi kidonk tou konsantrasyon li nan plasma [20]. Kidonk, konsantrasyon san ure depann de kontni pwoteyin dyetetik,reneskresyon, ak fonksyon metabolik fwa a.
Nan etid nou an, nivo ure yo te ogmante pa Cd, an konkordans ak rezilta deja pibliye [21]. Valè kontni ure an mwayèn (Figi 2B) nan bèt eksperimantal yo nan kòmansman eksperyans la te 207 mg/L. Nan gwoup la k ap resevwa Kadmyòm, te gen yon ogmantasyon siyifikatif nan valè yo kontwole a 329 mg / L (apre 14 jou) ak 425 mg / L (apre 28 jou). Nan gwoup la pou GSE te ko-administre ak Kadmyòm, ogmantasyon nan makè sa a te sèlman yon ti kras pi ba-325 mg / L apre 14 jou ak 381 mg / L apre 28 jou. Tou de gwoup yo te resevwa sèlman Kadmyòm ak Kadmyòm ansanm ak GSE te diferan anpil de gwoup kontwòl la apre 14 (p=0.001 ak p=0.002, respektivman) ak 28 jou nan eksperyans la (p <0.001). pou="" tou="" de).="" nan="" gwoup="" la="" k="" ap="" resevwa="" gse="" sèlman,="" yo="" te="" jwenn="" valè="">
2.2.3. Detèminasyon Aktivite Antioksidan Plasma
Kadmyòm pwovoke yon seri efè ki konekte prensipalman ak estrès oksidatif. Kòm Cd pa redox-aktif, li pa jenere espès oksijèn reyaktif dirèkteman. Men, pwodiksyon yo apre ekspoze Cd yo te rapòte nan anpil etid ak revize pa Cuypers et al. [23]. Mekanis ki mennen nan twoub redox pandan ekspoze Cd gen ladan rediksyon glutatyon ki te koze pa afinite Cd ak gwoup thiol, ranplasman Fe pa Cd nan pwoteyin ki mennen nan ogmante konsantrasyon redox-aktif Fe gratis, malfonksyònman mitokondriyo, ak endiksyon nan. NADPH oksidaz, ki katalize fòmasyon radikal superoksid [23]. Pandan estrès oksidatif, konpoze antioksidatif tankou fenolik ka mete fen nan pwodiksyon nouvo espès reyaktif atravè konvèsyon yo nan fòm radikal ki estab. Se poutèt sa, ekstrè plant ki rich nan fenolik ka bay efè pwoteksyon kont Cd oswa Cd ki gen konpoze [24].
Nan etid sa a, valè mwayèn aktivite antioksidan plasma (Figi 3) nan bèt eksperimantal yo nan kòmansman eksperyans lan te 0.71 mg/L. Yo te obsève yon ti ogmantasyon nan tout gwoup eksperimantal yo konpare ak gwoup kontwòl la. Sepandan, diferans ki genyen sèlman siyifikatif te genyen ant gwoup GSE-trete ak gwoup kontwòl la apre 28 jou (p=0.012), ki konfime yon efè pozitif GSE sou aktivite antioksidan plasma. Rezilta yo te rapòte deja yo se Limit; pafwa, yo te jwenn yon ogmantasyon nan potansyèl antioksidan plasma ki te koze pa GSE [25] epi pafwa pa [14].
2.2.4. Detèminasyon Aktivite ALT ak AST
Estrès oksidatif ki gen rapò ak yon pèt nan entegrite fonksyonèl nan achitekti manbràn ki te koze pa ogmante peroksidasyon lipid. Nan vire, pèmeyabilite ogmante nan manbràn sitoplasmik la mennen nan flit nan anzim makè epatik (ALT ak AST) nan san [14]. Vreman vre, ALT ak AST yo dyagnostik enpòtan menm nan domaj fwa limite akòz entoksikasyon ak ogmantasyon yo nan serom ki te koze pa Kadmyòm te rapòte pi bonè [14] epi yo te konfime pa etid sa a. Valè aktivite ALT an mwayèn (Figi 4A) nan bèt eksperimantal yo nan kòmansman eksperyans lan te 0.84 µkat/L. Nan gwoup la ki te resevwa Kadmyòm, yo te anrejistre yon ogmantasyon siyifikatif nan valè kontwole yo nan yon mwayèn de 1.52 µkat/L apre 14 jou (p <{8}}.001), ak="" 1.87="" µkat/l="" apre="" 28="" jou="" (p="" {{{="" 13}}.004).="" nan="" gwoup="" la="" pou="" gse="" te="" ko-administre="" ak="" kadmyòm,="" ogmantasyon="" nan="" makè="" sa="" a="" te="" siyifikativman="" pi="" dousman="" pase="" nan="" gwoup="" la="" resevwa="" sèlman="" kadmyòm="" (1.23="" µkat/l="" apre="" 14="" jou="" ak="" 1.92="" µkat/l="" apre="" 28="" jou).="" apre="" 14="" jou="" eksperyans="" la,="" gwoup="" sa="" a="" te="" diferan="" de="" gwoup="" kontwòl="" (p="0.009)" ak="" gwoup="" kadmyòm="" (p="0.026)," tandiske,="" apre="" 28="" jou,="" li="" te="" diferan="" anpil.="" sèlman="" nan="" gwoup="" kontwòl="" la="" (p="0.003)." nan="" gwoup="" la="" ki="" resevwa="" gse="" sèlman,="" valè="" yo="" ogmante="" tou="" a="" 1.17="" µkat/l="" apre="" 14="" jou.="" valè="" sa="" a="" te="" diferan="" anpil="" de="" gwoup="" kontwòl="" la="" (p="0.024)" e="" li="" te="" konparab="" ak="" valè="" gwoup="" la="" ki="" te="" resevwa="" tou="" de="" gse="" ak="" kadmyòm.="" apre="" 28="" jou,="" valè="" gwoup="" gse="" sèlman="" te="" sanble="" ak="" gwoup="" kontwòl="">
Valè kontni an mwayèn AST (Figi 4B) nan bèt eksperimantal yo nan kòmansman eksperyans lan te 2.07 µkat/L. Nan gwoup la k ap resevwa Kadmyòm, yo te anrejistre yon ogmantasyon estatistik enpòtan nan valè yo obsève sèlman apre 28 jou eksperyans la (3.52 µkat/L, p=0.001). Etonan, nan gwoup la pou GSE te ko-administre ak Kadmyòm, ogmantasyon nan makè sa a te pi vit ak siyifikativman diferan de gwoup kontwòl la apre tou de 14 jou ak 28 jou (2.67 ak 2.84 µkat/L, respektivman, p {{15). }}.043 pou tou de), byenke valè a te yon ti kras pi ba pase gwoup kadmyòm sèlman apre 28 jou. Variant nan GSE-sèlman te gen valè nòmal.
Nan eksperyans nou an, administrasyon GSE te kapab ralanti ogmantasyon nan aktivite ALT. Efè sa a koresponn ak rezilta yo te rapòte deja [14] e petèt ki te koze pa scavenging peroksid lipid atravè transfè idwojèn soti nan yon konpoze fenolik nan oksijene lipid ki gen radikal gratis. Nan lòt men an, nan tèm long la, efè sa a te ba. Ogmantasyon nan aktivite AST ki te koze pa Kadmyòm te pito akselere pa administrasyon GSE. Sepandan, nan pi long tèm, te gen yon ti diminisyon nan aktivite AST. Kidonk, GSE ka pasyèlman konpanse efè toksik Cd sou manbràn selilè yo.
2.2.5. Detèminasyon SOD ak Aktivite CAT nan fwa a
Anplis de patisipasyon dirèk nan reyaksyon oksidatif, Kadmyòm inibit aktivite anzim antioksidan tankou SOD ak CAT, anzim ki kapab dezentoksike radikal superoksid ak oksijene idwojèn, respektivman [14]. SOD se yon anzim ki efektivman etenn radikal superoksid la epi konvèti li nan oksijene idwojèn ki mwens toksik, ki ka dekonpoze plis pa katalaz oswa peroksidaz [26]. CAT se yon anzim ki jwenn nan prèske tout òganis vivan ki ekspoze a oksijèn. Li aji kòm yon katalis pou dekonpozisyon oksijene idwojèn nan dlo ak oksijèn [27]. Li gen youn nan nimewo konvèsyon ki pi wo nan mitan anzim [28] epi, kòm yon anzim antioksidan, li se youn nan mekanis pwoteksyon ki mennen nan antretyen nan balans nan kò imen an [29]. Mekanis nan diminisyon Cd-induit nan aktivite anzim yo se pwobableman obligatwa dirèk nan Cd nan sit sa yo aktif nan anzim yo [30].
Diminisyon nan aktivite SOD ak CAT yo te obsève tou nan etid sa a. Nan kòmansman eksperyans lan, aktivite anzim SOD vle di nan fwa a (Figi 5A) nan bèt eksperimantal yo te 18.4 U / mg nan pwoteyin lan. Apre 14 jou nan eksperyans la, aktivite SOD te siyifikativman pi wo nan gwoup la k ap resevwa GSE (21.1 U/mg) pase nan tou de gwoup yo kadmyòm-resevwa (p <0.001 ak="" p="" {{{="" 9}}.009="" pou="" kadmyòm-sèlman="" ak="" kadmyòm="" ak="" gwoup="" gse,="" respektivman),="" men="" sèlman="" nan="" gwoup="" la="" k="" ap="" resevwa="" kadmyòm="" pou="" kont="" li="" te="" aktivite="" sod="" siyifikativman="" pi="" ba="" (16.7="" u/mg)="" pase="" nan="" gwoup="" kontwòl="" la="" (p="0" .005).="" apre="" 28="" jou="" eksperyans="" lan,="" tou="" de="" gwoup="" k="" ap="" resevwa="" kadmyòm="" yo="" te="" diferan="" anpil="" de="" gwoup="" kontwòl="" la="" (16.4="" u/mg,="" p="0.002" ak="" 17.6="" u/mg,="" p="0.023" pou="" kadmyòm).="" sèlman="" ak="" kadmyòm="" ak="" gse,="" respektivman)="" ak="" gwoup="" la="" trete="" ak="" gse="" sèlman="" (p=""><0.001 ak="" p="0.005" pou="" kadmyòm="" sèlman="" ak="" kadmyòm="" ak="" gse,="">
Nan kòmansman eksperyans lan, aktivite anzim CAT vle di nan fwa a (Figi 5B) te 32.7 U / mg nan pwoteyin lan. Apre 14 jou nan eksperyans la, aktivite CAT te siyifikativman pi wo nan gwoup la k ap resevwa GSE (33.5 U/mg) pase nan tou de gwoup yo resevwa Kadmyòm (p=0.002 ak p=0.031 pou la. Kadmyòm-sèlman ak Kadmyòm ak gwoup GSE, respektivman), men sèlman nan gwoup la k ap resevwa Kadmyòm pou kont li te aktivite CAT siyifikativman pi ba (23.8 U / mg) pase nan gwoup la kontwòl (p=0.005). Sepandan, apre 28 jou, aktivite CAT nan gwoup la k ap resevwa GSE ansanm ak Kadmyòm diminye pi lwen a 27.1 U / mg, rive nan valè gwoup la sèlman Kadmyòm (25.8 U / mg), epi li diferan anpil de gwoup kontwòl la (p { {21}}.033). Gwoup la trete ak GSE sèlman diferan anpil de tou de gwoup Kadmyòm yo (p=0.026 ak p=0.012 pou Kadmyòm sèlman ak Kadmyòm ak GSE, respektivman). Enteresan, diminisyon ki te koze pa Kadmyòm yo te ralanti pa GSE ko-administrasyon. Pou CAT, efè GSE sa yo te obsève deja [14]. Efè chelating nan konpoze fenolik ki genyen nan GSE gen chans rive nan diminye kapasite nan Kadmyòm nan mare nan sit la aktif nan anzim la.
2.2.6. Detèminasyon nan kontni MT
Kadmyòm pa sijè a nenpòt konvèsyon metabolik dirèk, men nan tout tisi, li se sitou mare nan metallothionein (MT). MT fè pati yon gwoup pwoteyin entraselilè, ki ba pwa molekilè, ki rich ak sistein ak yon pwa molekilè 6-10 kDa. Wòl prensipal MT nan òganis lan gen ladan kenbe omeyostazi zenk, dezentoksike metal lou, ak pwoteje kont estrès oksidatif. Ekspresyon MT se inducible pa anpil faktè ekzojèn ak andojèn tankou radyasyon UV, metal lou, òmòn estrès, radikal oksijèn gratis, medyatè enflamasyon, enfeksyon, chòk, ak onkogenèz [31,32]. MT se lajman sentèz nan fwa a akrenepi lage nan san an. Menm si MT responsab pou akimilasyon Kadmyòm nan tisi lè li bese eskresyon li yo, MT pwoteje kont toksisite egi ak kwonik ki lakòz Cd [33]. Nan etid nou an, yo te kontwole kontni MT nan san, fwa, akren.
Mwayèn valè kontni MT nan san an (Figi 6A) nan bèt eksperimantal yo nan kòmansman an nan eksperyans la te 23.9 nmol / g. Apre 14 jou, chanjman yo te minim epi, apre 28 jou, yo te obsève gwo varyasyon ant replike yo, sa ki lakòz enkonklizyon estatistik (p=0.948). Valè kontni MT vle di pou laren(Figi 6B) nan bèt yo eksperimantal nan kòmansman an nan eksperyans la te 21.46 nmol / g. Valè yo pa t chanje anpil nan okenn gwoup eksperimantal pandan eksperyans lan (p=0.938). Mwayèn valè kontni MT nan fwa a (Figi 6C) nan bèt eksperimantal yo nan kòmansman an nan eksperyans la te 17.15 nmol / g. Apre 14 jou, kontni MT la te ogmante yon ti kras nan tout gwoup eksperimantal ak diferans ki genyen nan gwoup kontwòl la te enpòtan pou gwoup Cd-sèlman ak gwoup GSE-sèlman (p=0.008 ak p=0 .046, respektivman). Apre 28 jou, kontni MT nan gwoup GSE la te retounen nan valè gwoup kontwòl la, tandiske kontni MT nan gwoup Cd la te ogmante e li te diferan de kontwòl ak gwoup GSE (p=0.046 ak p=0.035, respektivman). Nan gwoup la k ap resevwa GSE ansanm ak Kadmyòm, kontni MT la pa t diferan anpil de kontwòl-ki te an konkordans ak kontni Kadmyòm ki pi ba yo te jwenn nan fwa gwoup sa a-lè yo konpare ak gwoup Cd-sèlman (diferans lan te enpòtan apre 28 jou eksperyans lan).
Antou, chanjman estatistik enpòtan nan kontni MT ki te koze pa Cd yo te sèlman obsève nan fwa a. Anvan sa, yo te rapòte yon ogmantasyon MT nan san bèt eksperimantal k ap resevwa Kadmyòm [34]. Nan ka sa a, rezilta yo sijere ke dezentoksikasyon nan Cd atravè MT ka pito rive nan fwa a.
3. Materyèl ak Metòd
3.1. Eksperyans DesignRat mawon nan genus Wistar (uit semèn, 235 ± 3 g) yo te divize an kat gwoup sis moun: A) yon gwoup kontwòl rat swiv yon rejim òdinè (n=6); B) yon gwoup rat nan rejim GSE yo te ajoute (200 mg GSE/jou) (n=6); C) yon gwoup yo bay Kadmyòm (2 mg Cd/jou—konkrètman, CdCl2 fonn nan dlo) (n=6); ak D) yon gwoup ki te bay yon rejim alimantè ki gen Kadmyòm (2 mg Cd/jou) kote yo te ajoute GSE (200 mg GSE/jou) (n=6). Ekstrè a te pran nan grenn varyete Cerason grapevine; preparasyon ak karakterizasyon li yo dekri nan Seksyon 3.2. (Ekstrè Grenn Rezen). Ekstrè a te peze chak jou nan yon dòz 200 mg, anvan yo te administre nan rat yo mawon eksperimantal (200 mg GSE nan chak rat; 0.85 g / L kg nan mas kò). GSE a te administre ak dlo. Yo te bay rat yo melanj manje imid ak dlo inofansif (tibebe) ad libitum. Yon fwa pa semèn, bèt yo te chanje kabann yo. Apre 14 ak 28 jou eksperimantal, yo te elimine twa bèt ki soti nan chak gwoup epi yo te kolekte san yo atravè yon twou kè. Anvan koleksyon an, yo te bay medikaman intraperitoneal ak Fraxiparin (0.01 mL/kg) epi, apre sa, bèt yo te bay etè dyetil anba anestezi rale. Lè sa a, yo te kolekte yon echantiyon san nan mikwo tib tès ki kouvwi eparin (oswa tib ak EDTA-pou analiz MT ak Kadmyòm; san santrifujasyon ki vin apre), epi sa a te swiv pa santrifujasyon dou (800 g / 10 min) ak koleksyon san an. plasma pou plis analiz. Fwa a ak dwarenyo te ekstrè pou plis analiz. Etid la te fèt an akò ak Deklarasyon èlenki a, epi Komisyon Ekspè a te apwouve pwotokòl la pou asire byennèt bèt eksperimantal nan Inivèsite Mendel nan Brno (pou pwojè IGA-ZF/2016-AP011).
3.2. Ekstrè Grenn Rezen
Grenn pye rezen (varyete Cerason—Merlot × Seibel 13 666) yo te klase, netwaye, seche, epi mouye. Triyay la te fèt atravè marc yo sou yon machin separasyon, kote grenn yo te separe ak kale yo. Grenn yo separe nan fason sa a yo te imedyatman rense, grenn vid yo retire, ak grenn ki rete yo netwaye. Grenn yo netwaye ak lave yo te cheche nan yon seche rad nan 50 ◦C pou 12 èdtan. Sa a te swiv pa fanm k'ap pile nan grenn yo lè l sèvi avèk yon moulen IKA MF 10 Basic laboratwa (IKA Werke, Staufen im Breisgau, Almay). Grenn tè yo te ekstrè nan 75 pousan etanòl pou 120 èdtan (22 ◦C, souke nan 50 RPM; IKA KS 260 Basic, manifakti: IKA Werke, Staufen im Breisgau, Almay) nan yon rapò nan yon pati nan grenn tè a dis pati. nan etanòl (m / m). Apre sa, yo te mete ekstrè a nan tib tès 25 mL (Eppendorf, Hamburg, Almay) ak santrifuje (Hettich MIKRO 220 Centrifuge; Hettich, Westphalia, Almay) nan 4 ◦C ak RCF 25, 000× g. Yo te pran yon echantiyon santrifuje nan tib tès la epi yo transfere nan yon flakon distilasyon evaporateur vakyòm (IKA RV 10 dijital VC; IKA Werke, Staufen im Breisgau, Almay), kote etanòl la evapore. Evaporasyon an te fèt nan yon vakyòm nan 90 ◦C, epi ekstrè a te transfere nan asyèt Petri ak lyofilize nan yon vakyòm nan 53 ◦C (Heto PowerDry PL 3000 lyophilizer; Trigon-plus, Cestlice, Repiblik Tchekoslovaki). Apre yo te prepare, ekstrè a te administre bèt eksperimantal yo.
CISTANCHE AP AMELIORE RENFEKSYON REN/REN
3.3. Detèminasyon aktivite antioksidan ak kontni total polifenolik
Yo nan lòd yo asire objektivite nan rezilta yo, yo te itilize kat metòd fondamantalman diferan pou detèmine aktivite antioksidan. Yo te analize echantiyon yo sou yon espektrofotomèt otomatik BS-400 (Mindray, Shenzen, Lachin). Tout echantiyon yo te analize an triple, valè a ki kapab lakòz ki koresponn ak mwayèn nan mezi sa yo. Analiz sa yo te fèt apre Sochor et al. [35].
3.3.1. Detèminasyon Aktivite Antioksidan Sèvi ak Metòd ABTS
Yo te prepare yon solisyon pou detèminasyon aktivite antioksidan pa tès ABTS lè w melanje de solisyon—solisyon 1: 7 mM solisyon ABTS ki te prepare lè w peze m=9.60 mg pou chak 5 mL dlo distile; ak solisyon 2: 4.95 mM solisyon persulfat potasyòm prepare lè w peze m=1.67 mg pou chak 5 mL dlo distile. Solisyon an ki kapab lakòz dilye 1:10 ak dlo distile epi kite nan fè nwa a ak frèt pou 12 èdtan. Lè sa a, 150 µL reyaktif R1 (7 mM ABTS ak 4.95 mM persulfat potasyòm) te pipete nan kivèt plastik, ki te swiv pa adisyon a nan 3 µL nan echantiyon an, epi mezire nan yon espektrofotomètr (λ=660 nm) pou 12. min. Dapre koub kalibrasyon an, absorbans la te konvèti nan kontni ekivalan nan asid galik; aktivite antioksidan an te kalkile nan koub kalibrasyon an lè l sèvi avèk asid galik kòm yon estanda (10-200 mg · L1), ak rezilta yo te eksprime kòm ekivalan asid galik.
3.3.2. Detèminasyon Aktivite Antioksidan Sèvi ak Metòd DPPH
Premyèman, yo te peze m {{0}}.35 mg radikal DPPH. Kantite lajan sa a te transfere nan yon flakon volumetrik 250 mL ak fè moute ak metanol. Lè sa a, 150 µL reyaktif R1 (0.095 mM DPPH) te pipete nan kivèt plastik, ki te swiv pa adisyon a nan 15 µL nan echantiyon an yo dwe mezire. Tès DPPH la baze sou kapasite 2,2-difenil-1-picrylhydrazil ki estab radikal lib pou reyaji ak donatè idwojèn. DPPH montre gwo absòpsyon nan spectre spectroskopi iltravyolèt-vizib (UV-VIS). Yo te mezire absorpsyon pou 12 min nan λ=505 nm. Dapre koub kalibrasyon an, absorbans la te konvèti nan kontni asid galik ekivalan.
3.3.3. Detèminasyon Aktivite Antioksidan Sèvi ak Metòd Pouvwa Antioksidan Ferrik Diminye
Twa solisyon yo te itilize pou detèmine aktivite antioksidan lè l sèvi avèk metòd FRAP (ferric reduction antioxidant power)—(1) TPTZ solisyon: 10 mM TPTZ (m=78.02 mg) fonn nan 25 mL nan 40 mM HCl; (2) Solisyon FeCl3: 20 mM FeCl3 (m=135.13 mg) fonn nan 25 mL dlo distile; ak (3) solisyon tanpon acetate: 0.02 M tanpon acetate pH 3.6 (m=775 mg acetate sodyòm ki fonn nan 250 mL dlo distile, pH ajiste ak asid acetic). Twa solisyon yo te melanje nan rapò 1:1:10 (TPTZ: FeCl3: tanpon acetate). Lè sa a, 150 µL reyaktif yo te pipete nan kivèt plastik epi yo te ajoute 3 µL echantiyon an. Yo te mezire absorpsyon pou 12 min nan λ=605 nm. Aktivite antioksidan te kalkile nan koub kalibrasyon an lè l sèvi avèk asid galik kòm yon estanda (10-200 mg · L1). Rezilta yo te eksprime kòm ekivalan asid galik.
3.3.4. Detèminasyon Aktivite Antioksidan Sèvi ak Metòd Radikal Gratis Chlorophyllin
Yon total de 200 µL reyaktif R1 (0.1 M HCl, ekstrè klowofil, tanpon reyaksyon, katalis) te pipete nan kivèt plastik epi apre sa yo te ajoute 8 µL echantiyon an. Metòd sa a sèvi ak kapasite klowofilin (sèl sodyòm-kwiv nan klowofil) pou aksepte ak bay elektwon pandan y ap chanje stab maksimòm absòpsyon an. Pwosesis sa a kondisyone pa anviwònman an alkalin ak adisyon a nan yon katalis. Yo te mezire absorpsyon pou 12 min nan λ=450 nm. Dènye valè mezi yo te itilize pou kalkil la. Rezilta yo te eksprime kòm ekivalan asid galik.
3.3.5. Detèminasyon total polifenol konsantrasyon
Yo te itilize metòd Folin-Ciocalteu pou detèmine konpoze total polifenolik. Tout echantiyon yo te analize an triple, epi yo te jwenn valè ki kapab lakòz kòm mwayèn mezi sa yo. Yo te pipet yon echantiyon 40 µL nan yon kivèt (3 mL) epi dilye ak 1960 µL dlo distile. Apre sa, yo te ajoute 50 µL reyaktif Folin-Ciocalteu nan kuvèt la. Yo te souke melanj lan byen epi, apre 3 min, yo te ajoute 300 µL nan 20 pousan Na2CO3 solisyon dekaidrat. Te melanj reyaksyon an souke ak enkube nan 22 ◦C pou 120 min. Apre tan sa a, yo te mezire absorbans (SPECORD 210; Carl-Zeiss, Jena, Almay) nan λ=750 nm kont yon vid. Rezilta yo te eksprime kòm ekivalan asid galik.
3.4. Detèminasyon antioksidan pa HPLC
Detèminasyon konpozan antioksidan endividyèl lè l sèvi avèk segondè-pèfòmans likid chromatografi ak mas spectrometer. Analiz echantiyon yo te itilize pou estimasyon flavonoid ak proanthocyanin yo te fèt nan yon sistèm kwomatografik Agilent Technologies 12{{10}}0 (Jet Stream Technologies, Santa Clara, CA, USA) ki gen ladan l. aparèy sa yo: rezèvwa faz mobil, degazeur, ponp binè, rezèvwa echantiyon ak yon echantiyon oto, ak detektè mas ak yon Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS (Jet Stream Technologies, Santa Clara, CA, USA). Separasyon echantiyon yo te fèt nan kolòn kromatografi Zorbax SB C18 ak dimansyon 50 × 2.1 mm ak gwosè patikil 2.7 µm. Peryòd analiz la te toujou 6 minit. Pousantaj parèy gaz konpayi asirans lan te 0.6 mL·min1. Eleman òganik nan faz mobil lan se te metanol gradyan klas (sòlvan B) ak konstitiyan nan akeuz genyen 0.05 M nan fòma amonyòm (sòlvan A). Grayan nan faz k ap deplase a te jan sa a: tan 0 min: 50 pousan nan sòlvan A ak 50 pousan nan sòlvan B; tan 2.5 min: 100 pousan sòlvan A ak 0 pousan sòlvan B; tan 5 min: 50 pousan sòlvan A ak 50 pousan sòlvan B. Tanperati tèmostat kolòn lan te ajiste a 45 ◦C.
CISTANCHE AP AMELIORE DOULÈ REN/REN
3.5. Detèminasyon makè byochimik chwazi yo
Makè byochimik nan san an, plasma, fwa, akrennan bèt yo te kontwole pou detèmine efè pwoteksyon GSE kont efè negatif Kadmyòm. Yo te fè analiz sa yo: (1) Analiz Plasma: total aktivite antioksidan plasma, kreyatinin, ure, ALT, AST. (2) analiz san: MT. (3) analiz fwa: SOD, CAT, MT. (4)renanaliz: MT.
3.5.1. Detèmine Total Aktivite Antioksidan Plasma,Kreatinin, Ure, ALT, ak AST Yo te itilize yon analiz byochimik otomatik BS{{0}} (Mindray, Shenzen, Lachin) pou analize total aktivite antioksidan plasma, kreyatinin, ure, ALT, ak AST. Detèminasyon total aktivite antioksidan plasma a te itilize metòd radikal lib pou detèmine aktivite antioksidan plasma a [35]. Metòd sa a sèvi ak kapasite klowofilin (sèl sodyòm-kwiv klowofil) pou aksepte ak bay elektwon pandan y ap chanje maksimòm absòpsyon an. Pwosesis sa a kondisyone pa anviwònman an alkalin ak adisyon a nan yon katalis. Yon total de 200 µL reyaktif R1 (0.1 M HCl, ekstrè klowofilin, tanpon reyaksyon, ak katalis) te pipete nan kivèt plastik, apre sa yo te ajoute 8 µL echantiyon an. Yo te mezire absorbans la pou 12 min nan λ=450 nm, epi dènye valè mezi yo te itilize pou kalkil la. Aktivite antioksidan te kalkile nan koub kalibrasyon an lè l sèvi avèk asid galik kòm yon estanda ak rezilta yo te eksprime kòm yon ekivalan asid galik.
Detèminasyon kontni kreatininPrensip metòd la se detèminasyon fotometrik konplèks koulè kreyatinin ak picrate alkalin, pousantaj fòmasyon ki pwopòsyonèl ak konsantrasyon kreyatinin nan echantiyon an. Yo te itilize yon twous dyagnostik ki soti nan Greiner (Greiner GmbH, Pleidelsheim, Almay) pou detèmine kreyatinin la. Yon total de 180 µL reyaktif R1 (0.16 mM idroksid sodyòm) te pipete nan kivèt la, ki te swiv pa adisyon a nan 10 µL nan echantiyon an ak 30 µL nan reyaktif R2 a (4 mM asid pikrik). Yo te mezire absorbans la pou sis minit nan λ=505 nm. Valè absorpsyon nan reyaktif R1 pou kont li ak echantiyon an ak valè absorpsyon apre 6 min enkubasyon ak reyaktif R2 yo te itilize pou kalkil la.
Detèminasyon Alanine AminotransferaseYo te itilize yon twous dyagnostik ki soti nan Greiner (Greiner GmbH, Pleidelsheim, Almay) pou detèmine ALT. Premyèman, 15 0 µL reyaktif R1 (100 mM Tris tanpon pH 7.5; 500 mM L-alanine, 1200 U/L laktat dehydrogenase) ak 15 µL echantiyon plasma yo te otomatikman pipete nan kivèt yo. Apre sa, 30 µL reyaktif R2 (15 mM 2-oxoglutarate, 0.18 mM NADH) te otomatikman pipette epi melanj lan te enkube pou 5 min. Yo te mezire absorpsyon nan λ=340 nm. Valè absorbans yo nan reyaktif R1 pou kont li ak echantiyon an ak valè yo absòbe apre 5 min enkubasyon ak echantiyon an yo te itilize pou kalkil la. Rezilta a te konvèti selon koub kalibrasyon an nan aktivite anzim nan µkat/L.
Detèminasyon Aspartate AminotransferaseYo te itilize yon twous dyagnostik ki soti nan Greiner (Greiner GmbH, Pleidelsheim, Almay) pou detèmine AST. Premyèman, 150 µL reyaktif R1 (80 mM Tris tanpon pH 7.8, 240 mM L-aspartate, 1200 U/L malat dehydrogenase) ak 15 µL echantiyon plasma bèt eksperimantal yo te otomatikman pipete nan kivèt yo. Imedyatman, melanje ak enkubasyon yo te fèt nan 37 ◦C pou 270 s. Apre sa, 30 µL reyaktif R2 (15 mM 2-oxoglutarate, 0.18 mM NADH) te otomatikman pipette epi melanj lan te enkube pou 5 min. Yo te mezire absorpsyon nan λ=340 nm. Valè absorbans yo nan reyaktif R1 pou kont li ak echantiyon an ak valè yo absòbe apre 5 min enkubasyon ak echantiyon an yo te itilize pou kalkil la. Rezilta a te konvèti selon koub kalibrasyon an nan aktivite anzim nan µkat/L.
Detèminasyon ureYo te itilize pwosedi sa a pou detèmine ure a: 200 µL reyaktif R1 (Tris tanpon pH 7.8, ADP, urease, ak GLDH) ak 200 µL reyaktif R2 (2-oxoglutarate, NADH) yo te otomatikman pipete nan kivèt, ki te swiv pa yon echantiyon volim 4 µL, apre sa melanj lan te melanje ak enkubasyon nan 37 ◦C pou 30 s. Apre sa, yo te mezire absorpsyon nan λ=340 nm epi apre yon lòt 60 s, yo te mezire absorpsyon an ankò. Valè absorbans yo apre 30 s ak apre yon lòt 60 s yo te itilize pou kalkil la. Valè yo te soustraksyon youn ak lòt epi rezilta a te konvèti selon koub kalibrasyon an nan kontni ure a.
Detèminasyon Pwoteyin Total Sèvi ak Metòd Biuret laDetèminasyon an nan pwoteyin total pa metòd la Biuret dekri an detay nan yon lòt piblikasyon [9]. Yon total de 180 µL reyaktif Biuret (15 mM sodyòm potasyòm tartrate, 100 mM NaI, 5 mM KI, ak 5 mM CuSO4) te pipete nan kivèt la, ki te swiv pa 45 µL echantiyon an. Apre dis minit enkubasyon nan 37 ◦C, yo te mezire absorpsyon nan longèdonn λ=546 nm. Prensip la isit la se reyaksyon an nan kosyon an peptide ak Cu (II) nan yon anviwònman alkalin, ak fòmasyon nan yon koulè ble-vyolèt. Valè absorpsyon reyaktif la pou kont li ak valè absorpsyon apre dis minit enkubasyon ak echantiyon an te itilize pou kalkil la.
3.5.2. Detèminasyon Superoxide Dismutase (SOD) ak Catalase (CAT) Detèminasyon SOD Aktivite, Yo te itilize yon twous komèsyal (19160 SOD, Merck KGaA, Darmstadt, Almay) pou detèmine aktivite SOD (SOD, EC 1.15.1.1). Yo te fè mezi a nan yon kivèt plastik sou yon analizeur otomatik BS 400 (Mindray, Shenzen, Lachin). Premyèman, 200 µL reyaktif R1 (20 × tanpon dilye WST solisyon) yo te pipete nan kivèt la epi yo te enkube reyaktif la nan 37 ◦C pou 108 s (1 min, 48 s). Lè sa a, yo te pipete 20 µL echantiyon epi, nan 378 s (6 min, 18 s), yo te kòmanse reyaksyon an lè w ajoute 20 µL reyaktif R2 (167 × solisyon anzim tanpon dilye). Yo te enkube melanj lan pou 72 s (1 min, 12 s) ak Lè sa a, yo te mezire absorbans nan λ=450 nm. Yo te mezire sinetik reyaksyon an pou 180 s (3 min) epi yo te li absorbans la chak nèf segonn. Enstriman an kalkile ogmantasyon mwayèn nan absorpsyon pou chak minit (∆A) ak aktivite SOD echantiyon yo mezire, dapre ekwasyon kalibrasyon an. Rezilta yo te eksprime nan U / mL epi imedyatman konvèti nan mg nan pwoteyin.
3.5.3. Detèminasyon Kontni MetalothioneinDetèminasyon konsantrasyon metalothionein nan san, fwa, akrennan rat yo mawon te fèt lè l sèvi avèk teknik transfè adsorptive nidite (AdTS) ak voltametri batman kè diferans (DPV). Pou analiz la, yo te pran 200 µL nan sipènatant analize a epi melanje ak 1 800 µL reyaktif Brdicka a nan yon veso pou mezire, apre sa yo te fè detèminasyon elektwochimik li menm. Yo te fè tès la an konfòmite ak yon pwotokòl ki te deja dekri [37]. Yo te itilize yon koneksyon klasik twa-elektwòd. Elektwòd k ap travay la se te yon elektwòd gout mèki pandye (HMDE) ak yon zòn gout nan 0.4 mm2, pandan y ap elektwòd referans la te Ag/AgCl/3 M KCl ak oksilyè a te yon elektwòd platinum. Elektwolit baz la (1 mmol·L1 [CO(NH3)6] Cl3 ak 1 mol·L1 tanpon amonyòm; NH3(aq) plis NH4Cl, pH 9.6) te chanje pou chak echantiyon mezire. Paramèt DPV yo te jan sa a: potansyèl inisyal 0.7 V, potansyèl final 1.75 V, ebulisyon 5 s, tan depozisyon 240 s, tan modulasyon 0.0 5 s, tan entèval 0.25 s, etap potansyèl 0.00105 V, to eskanè 0.0042 V/s, ak anplitid modulasyon 0.02505 V. Yo te fè detèminasyon MT la sou yon aparèy mezire ki gen ladann yon Autosampler 695 ki konekte ak yon inite mezire VA Stand 693 ak kontwole. pa yon inite kontwòl 693 VA TraceAnalyser (tout Metrohm, Herisau, Swis). Tout sistèm mezi a te refwadi a 4 ◦C lè l sèvi avèk yon Julabo F25 (Julabo, Seelbach, Almay). Voltamogram yo jwenn yo te ekspòte nan pwogram VA Database 2.2 (Metrohm, Herisau, Swis), epi echantiyon yo analize yo te deoxygenated pa ebulisyon aktif nan Agon ak yon pite 99.999 pousan.
3.5.4. Detèminasyon kontni kadmyòm nan san, fwa, ak ren dekonpozisyon echantiyon yo Yo te itilize yon ekstraktè mikwo ond Ethos One (Milestone, Sorisole, Itali) pou dekonpozisyon fwa a akrenechantiyon yo, epi yo te itilize yon Ekstraktè mikwo ond Multiwave 3000 (Anton Paar Graz, Otrich) pou dekonpozisyon echantiyon san yo. Mineralizasyon te fèt nan yon fason mouye, lè l sèvi avèk 65 pousan asid nitrique (HNO3 supra pure) (Merck KGaA, Darmstadt, Almay) ak 30 pousan oksijene idwojèn (H2O2 supra pure) (Merck KGaA, Darmstadt, Almay) Yon total de 0.4 g nan fwa oswarenechantiyon an te peze nan yon seri resipyan Teflon, epi 5 mL 65 pousan HNO3, 3 mL 30 pousan H2O2, ak 2 mL Milli Q H2O te ajoute nan echantiyon an. Kontenè yo te fèmen ak enstriman an te kòmanse dapre enstriksyon manifakti a. Dekonpozisyon mikwo ond lan te dire pou 40 minit nan 210 ◦C. Imedyatman, echantiyon yo te refwadi pou 45 min epi estoke nan 4 ◦C nan resipyan PE. Yo te peze yon total de 0.01 g yon echantiyon san nan yon seri resipyan vè, epi yo te ajoute 300 µL 65 pousan HNO3 ak 200 µL 30 pousan H2O2 nan echantiyon an. Kontenè yo te fèmen ak enstriman an te kòmanse dapre enstriksyon manifakti a. Dekonpozisyon mikwo ond lan te dire pou 40 minit nan yon tanperati 140 ◦C. Imedyatman, echantiyon yo te refwadi pou 45 min epi estoke nan 4 ◦C jiskaske detèminasyon an pa AAS.
Detèminasyon Kadmyòm pa Spectrometry absòpsyon atomikYo te detèmine Kadmyòm nan sou yon aparèy AA Systems seri Agilent 280/240 (Agilent Technologies). Fwa a akrenechantiyon yo te analize nan flanm asetilèn-lè (Fa AAS), ak echantiyon san yo pa atomizasyon elektwotèmik (ETA AAS) nan yon longèdonn 228.8 nm. Yo te prepare yon seri kalibrasyon ak konsantrasyon 0–2{0 µg·L pou analiz ETA AAS ak 0–10 mg·L1 pou Fa AAS apati yon solisyon estanda Kadmyòm (Analytika Praha, Prag, Repiblik Tchekoslovaki), ak yon konsantrasyon 1.000 ± 0.002 g·L1. Sa a te swiv pa yon mezi nan seri solisyon yo kalibrasyon ak konstriksyon nan koub yo kalibrasyon, apre sa mineralizasyon an nan san an, fwa, akrenechantiyon yo te mezire.
3.6. Analiz estatistikTout mezi yo te fèt an triple. Valè Outlier yo te idantifye ak tès Grubbs ak eskli (an total, yo te jwenn de outliers). Anvan analiz estatistik, done yo te transfòme pa transfòmasyon logaritmik ak analize pa yon sèl-fason ANOVA (chak pwen tan separeman) ak yon tès Tukey HSD post-hoc. Yo te fikse papòt la pou siyifikasyon estatistik kòm p <>
4. Konklizyon
Te gen yon dènye tandans pharmaceutique ak ekonomik pou chèche nouvo dwòg nan mitan metabolit segondè plant yo, ki se sibstans ki ka ede pwoteje kont yon seri de maladi. Mèsi a eleman enpòtan biyolojik aktif ke grenn rezen genyen nan matris yo, yo ka (e yo deja) itilize pou rezon medikal. Ekstrè grenn rezen yo konnen yo pwoteje tisi kont domaj ki gen rapò ak estrès oksidatif ki te koze pa kadmyòm metal toksik lou. Pwoteksyon sa a pwobableman enfliyanse pa konpozisyon fenolik grenn rezen yo itilize. Nan etid sa a, yo te teste yon ekstrè grenn rezen ki te prepare nan varyete semi-rezistan Cerason ak yon kontni fenolik byen wo pou efè pwoteksyon kont chanjman kadmyòm ki lakòz. GSE etidye a te kapab ogmante aktivite antioksidan plasma lè yo administre pou kont li epi pi ba kontni kadmyòm nan fwa a akrennan rat yo lè yo ko-administre. An konsekans, ogmantasyon nan makè epatik anzim ALT akrenmakè kreyatinin ki te koze pa Kadmyòm yo te ralanti pa GSE. Anplis de sa, diminye aktivite yo nan anzim antioksidan SOD ak CAT ki te koze pa Kadmyòm yo te ralanti pa GSE ko-administrasyon. Rezilta sa yo montre ke GSE se yon ajan pwoteksyon ki pisan kont efè metal lou.
