Espektrometri mas tandem segondè-rezolisyon idantifye yon modèl gangliozid patikilye nan maladi ren dyabetik bonè nan pasyan ki gen dyabèt tip 2 Ⅱ

2.2. Analiz estriktirèl detaye nan espès polisyalite ki asosye ak macroalbuminuria pa HCD MS/MS

Depistaj HR-MS te demontre ke ganglioside pasyan makroalbuminurik karakterize pa kontni an jeneral asid sialik ki wo. Yo te idantifye pa mwens pase kat gangliotetraoses pentasialo nan klas GQ1 nan echantiyon A3 ak yon presizyon mas segondè. Iyon nan m/z 812.7{{10}}68, detekte sèlman nan spectre mas depistaj nan A3, te asiyen, dapre kalkil mas, nan triply deprotonated ak sodyate GQ1 (d18:1/18). :0). Yo nan lòd yo estriktirèl karakterize espès sa a ki asosye ak makroalbuminuria an detay, nou izole ion nan m/z 812.7068 epi soumèt li bay HCD MS/MS nan HR nan mòd nan ion negatif. Objektif eksperyans tandem MS sa a se te: (i) ankèt sou estrikti chèn oligosakarid la; (ii) konfimasyon konpozisyon seramid la, ki te postule lè nou konsidere mas molekil GQ1 tout antye; (iii) kolekte done espesifik sou lokalizasyon monosakarid Neu5Ac yo sou kolòn vètebral oligosakarid la, ki mennen nan diskriminasyon izomè nan senk estrikti ki pi komen GQ1(d18:1/18:0) (Figi 3) ki ta ka prezan nan pipi a. pasyan makroalbuminurik.

Yo montre spectre fwagmantasyon [M-4H+Na]3− ion precurseur yo detekte nan m/z 812.7068, ki te pwodwi pa konbine TIC akeri pou de minit anba enèji kolizyon varyab nan yon seri 30–80 eV. nan Figi 4.

Figi 3. Senk izomè ki pi komen nan GQ1(d18:1/18:0): (A) GQ1a(d18:1/18:{{10}}) izomer; (B) GQ1b(d18:1/18:{{20}}) izomè; (C) GQ1c(d18:1/18:0)izomè; (D) GQ1d (d18:1/18:0) izomè; (E) GQ1e (d18:1/18:0) izomè.

Sèvis sipò Wecistanche-Pi gwo ekspòtatè cistanche nan Lachin nan:

Imèl:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Achte pou plis detay espesifikasyon:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

KLIKE LA POU JWENN NATIRÈL ÒGANICY ÈKSTRÈ CISTANCHE AK 25% ECHINACOSIDE AK 9% ACTEOSIDE POU ENFEKSYON REN.

Done MS/MS yo valide (d18:1/18:0) konpozisyon seramid la pa Y0 nan m/z 564.8704 ak Y1 nan m/z 726.5845. ki koresponn ak sekans Glc-Cer, osi byen ke ion klivaj entèn la, S, nan m/z 325.1828 ki koresponn ak asid gra C18:0 (Figi 5). Menm jan an tou, estati siyalilasyon an jeneral nan molekil la tou dokimante. Pakonsekan, pa ion nan B1 detekte nan m/z 290.0868 ak kontrepati sodyate li yo nan m/z 312.0686 ki koresponn ak detachman nan yon sèl rezidi Neu5Ac soti nan ion paran an, ansanm ak eleman nan distal detekte nan m/z 581.1807 ak m/z 603.162. , konfime ensidan an nan Neu5Ac-Neu5Ac lyen an.

Figi 5. Schema fwagmantasyon HCD MS/MS fè eksperyans pa [M-4H{++Na+ ] 3− precurseur nan m/z 812.7068 ak sekans iyon dyagnostik pou izomè estriktirèl GQ1d la.

Lè nou konsidere pozisyon lyezon ki pi komen nan résidus Neu5Ac nan swa Gal entèn oswa ekstèn, gen senk kandida estriktirèl posib pou GQ1(d18:1/18:0), jan yo montre nan Figi 3. Sepandan, ion nan m/z 1032.3662 ki te fòme pa yon lyezon doub ak klivaj entèn kwa bag epi li asiyen nan Z4 /Y0/ 2,4A2 , ansanm ak ion ki detekte nan m/z 936.7894 kòm Y2 / 3,5A1, sipòte atachman tout kat résidus Neu5Ac nan Gal anndan an. Malgre ke ensidans lòt izomè estriktirèl pa ka konplètman eskli, de iyon fragman sa yo demontre ke motif estriktirèl la ki konsistan avèk kandida (D) la, ki koresponn ak izomè d GQ1(d18:1/18:0) , se definitivman prezan nan echantiyon an A3. Konplo a nan Figi 5 dekri chemen an fwagmantasyon eksperyans nan ion précurseur ki koresponn ak GQ1d (d18:1/18:0).

Pwochen kandida polisyalik ki asosye ak makroalbuminuri a pou analiz estriktirèl detaye se [M-3H+ ] 3− ion ki detekte sèlman nan spectre mas tès depistaj echantiyon A3 nan m/z 708.3379 epi yo bay li, sou baz kalkil mas egzak, nan GT1(d18:1/18:0). Iyon sa a te izole ak soumèt nan analiz la fwagmantasyon pa tandem MS lè l sèvi avèk HCD. Spectre iyon pwodwi ki te pwodwi pa rezime eskanè akeri pou 2 min nan enèji kolizyon varyab ant 30 ak 80 eV prezante nan Figi 6, ansanm ak estrikti chimik espès sa a ak plasman nan siyal yo pi gwo. Mekanis fwagmantasyon an anba kondisyon MS/MS anplwaye yo, ansanm ak iyon fragman dyagnostik yo, montre nan Figi 7. Pou amelyore vizibilite tout iyon pwodwi yo asiyen, Tablo 3 konplete lis siyal yo idantifye nan spectre ki prezante nan Figi 6 la.

Figi 6. Analiz estriktirèl pa (-) nanoESI HR HCD MS/MS nan [M-3H+ ] 3− ion precurseur yo detekte nan echantiyon A3 a nan m/z 708.3379, ki, dapre ak kalkil mas, koresponn ak GT1(d18:1/18:0). Tan akizisyon: 2 min; enèji kolizyon varyab nan 30–80 eV. Inset: estrikti izomè GT1b(d18:1/18:0) dedwi nan done MS/MS.

Fragmantasyon HCD te lakòz plizyè iyon sekans, ki te fèt kòm yon rezilta nan lyezon glikozidik ak klivaj kwa bag. Iyon sa yo trè itil pou plasman sekans idrat kabòn tout antye, ak idantifikasyon izomè pozisyon GT1, ak konfimasyon konpozisyon aglycone seramid la.

D18:1/18:0 Kalite seramid la revele pa ion Y0 nan m/z 564.5353 epi sipòte pa sekans Glc-Cer idantifye atravè Y1 nan m/z 726.5879. Anplis de sa, plasman iyon an pwouve prezans yon izofòm GT1. Iyon nan m/z 493.1669, ak yon konpozisyon NeuAc-GalNAc, ka rive sèlman nan GT1, ki karakterize pa sialylation nan rezidi GalNAc la. Rès iyon fragman yo sijere egzistans izomè estriktirèl GT1b nan echantiyon A3 la. Estrikti GT1b la sipòte pa tout iyon ki soti nan fen ki pa diminye nan molekil la, dokimante pa seri a Y-tip, akonpaye pa de iyon Z, nan ki youn parèt nan pi ba abondans (Figi 6). Sepandan, Y2 / B2 detekte kòm yon ion nan abondans jis nan m / z 888.6405 bay prèv sou sekans Gal-Glc-Cer, petèt soti nan swa GT1a oswa GT1b izomè apre desialylation respektif la pa swa Neu5Ac oswa Neu5Ac-Neu5Ac detachman soti nan. Gal anndan an oswa soti nan yon izomè ki gen yon Gal enteryè ki pa ranplase, tankou GT1d la.

Nan lòt men an, Y2 detekte nan m/z 734.5701 pwouve lokalizasyon eleman disialo Neu5AcNeu5Ac nan Gal anndan an, yon konfigirasyon ki konsistan avèk izomè GT1b la. Prezans gwoup distal la pwouve tou pa ion B2 nan m/z 581.1828.

Nan HCD MS/MS, plizyè siyal yo gen rapò ak molekil pasyèl desialylation, tankou Y4 ak / oswa Y3 iyon ki koresponn ak sekans Gg4Cer desialylated la; sepandan, iyon sa yo pa ka endike sit atachman Neu5Ac nan nwayo Gg4 glikan net la. Anplis de sa, siyal la nan m/z 364.1243 ki koresponn ak sekans Gal-GalNAc ki asiyen nan iyon B3 /B1 klivaj entèn GT1b la se atribiye a izomè GT1c la paske glikofòm sa a gen yon disakarid Gal-GalNAc tèminal ki pa ranplase. Pakonsekan, eksepte Y2 a, ki asosye ak GT1b a, tout iyon ka leve soti nan lòt izomè pozisyon Neu5Ac, tankou GT1a, GT1, GT1c, oswa menm raman rapòte GT1d la. Nan lòt men an, Y2 tèt li ta ka yon rezilta nan yon evènman ki ba-pwobabilite, ki tou elimine Neu5Ac a soti nan eleman nan esè lye nan Gal enteryè a.

Etandone ke, eksepte pou divilge GT1, done MS / MS ki gen rapò ak klivaj kosyon glikozidik yo pa t 'kapab bay san anbigwite lòt izomè GT1 nan melanj A3 a, nou analize plis ak anpil atansyon iyon klivaj bag yo nan lòd yo dekouvri posib fwagmantasyon enteryè sipòte GT1b. Nou te remake ion ki ba entansite triple chaje nan m/z 634.6067, ki konsistan avèk 0,2 kalite klivaj kwa bag nan youn nan résidus asid sialik tèminal yo, ki nan ka a nan espès GT1b, ka rive nan swa 0, 2X4 oswa 0,2X3 oswa toude. Paske GT1b izomè se jeneralman pi komen pase GT1, Figi 6 ak 7 prezante plasman an ion ak konplo a fwagmantasyon espesifik nan GT1b.

Akòz simetri chèn Gal-GalNAc-Gal, pa gen okenn posibilite pou konplètman eskli lòt izomè estriktirèl. Malgre ke done HCD MS/MS yo demontre egzistans GQ1d(d18:1/18:0), GT1 (d18:1/18:0), ak GT1b(d18:1/18: 0) nan echantiyon A3 a, yo pa ka eskli posiblite lòt izomè GQ1 ak GT1. Sepandan, rezilta nou yo endike ke twa izomè-GQ1d (d18:1/18:0), GT1b (d18:1/18:{{30}}), ak GT1 (d18:1). /18:0) yo definitivman prezan nan echantiyon A3 a epi yo ka plis etidye kòm makè molekilè nan makroalbuminuria.

3. Materyèl ak Metòd

3.1. Kritè Enskripsyon Sijè

Yo nan lòd yo devlope ak valide metòd la, yon kowòt tès depistaj nan tip 2 DM pasyan ak matyè kontwòl an sante yo te evalye nan yon etid pilòt kwa-seksyonèl. Yo te divize yon total de 30 pasyan DM tip 2 ki te patisipe nan Depatman Nefroloji pou Pasyan Ekstèn ak Depatman Dyabèt ak Maladi Metabolik yo te divize an 3 gwoup.albumin pipi/rapò kreyatinin(UACR) jan sa a: 10 pasyan ki gen normoalbuminuria (A1, defini kòm UACR < 30 mg / g), 10 ak mikroalbuminuria (A2, UACR 30-300 mg / g), ak 10 ak makroalbuminuria (A3, UACR > 300 mg / g). Yo te enskri tou dis sijè kontwòl sante ki gen laj ak sèks (C) ki te ale nan biwo yon doktè jeneralis pou tchèkòp woutin san yo pa konnen istwa maladi ren ak san DM (ekskli pa yon valè HbA1c mwens pase oswa egal a 5.6%) tou te enskri nan sa a. etid

Tout pasyan ki te enkli nan etid la te gen yon minimòm 5-ane DM, fonksyon ren ki estab pou omwen 2 zan, bon kontwòl tansyon (<130/80 mmHg), negative urinary sediment, and a negative urine culture. The exclusion criteria were represented by other causes of proteinuria (other glomerular diseases, neoplasia, or autoimmune diseases), hematuria, poor control of DM (HbA1c > 10%), liver diseases, and pregnant or lactating women. The patients had no indication for byopsi ren(mank ematuri ak lòt kòz proteinuria, pa gen yon bès rapid nan GFR).

3.2. Deklarasyon Etik

Etid la te fèt an akò ak Deklarasyon èlenki, ak pwotokòl la te apwouve pa Komite a Etik nan rechèch nan Enstitisyon an (Komisyon Konsèy la Etid Imèn-"Victor Babes" University of Medsin ak Famasi Timisoara, Nr. 15/12.09.2016 Lopital Ijans Konte, nimewo 100/23.11.2016). Tout pasyan yo ak kontwòl yo te dakò pou yo patisipe nan etid la lè yo siyen yon fòm konsantman enfòme.

3.3. Evalyasyon Laboratwa

Ganglioside pipi 30 pasyan DM tip 2 te envestige nan yon etid pilòt kwa-seksyonèl pa yon tès konparatif ak 10 kontwòl ki an sante. Paramèt byochimik yo refere a ure serik ak kreyatinin, proteinuri 24 èdtan, UACR, sediman pipi, ak kilti pipi. Tout pasyan yo te negatif pou enfeksyon urin. Te konpozisyon an nan melanj ganglioside natif natal yo detekte nan 24 h echantiyon pipi kolekte. Espesimèn pipi pasyan yo ak kontwòl yo te estoke pou yon ti tan nan -20 ◦C epi yo te dekonjle anvan tès la.CKDte defini dapre gid KDIGO pou evalyasyon an akjesyon maladi ren kwonik. eGFR a te kalkile lè l sèvi avèk lamaladi ren kwonikfòmil ekwasyon kolaborasyon epidemyoloji (CKD-EPI kreyatinin 2009 ekwasyon) [16].

3.4. Ganglioside ekstraksyon ak pirifikasyon

Ekstraksyon gangliozid te swiv metòd Svennerholm ak Fredman [17] devlope epi Vukeli´c et al te modifye. [18]. Nou te deja adapte pwotokòl sa a pou fè ekstraksyon ak pirifye gangliozid nan likid kò epi aplike li nan gangliosid likid serebrospinal (CSF). Metòd la dekri an detay nan etid anvan nou an ki gen rapò ak pwofil ak analiz fwagmantasyon nan gangliozid CSF pa espektrometri mas [19]. Yon ti tan, lipid yo te ekstrè de fwa lè l sèvi avèk melanj klowofòm (C) / metanol (M) / dlo (W) nan yon rapò volim total de 1: 2: 0.75 C / M / W, ak "W" ki koresponn nan pipi; Se poutèt sa, melanj lan te genyen 4 mL C, 8 mL M, ak 3 mL echantiyon pipi. Yo te achte klowofòm ak metanol nan klas analyse nan Merck (Darmstadt, Almay) epi yo te itilize san plis pou pirifye. Apre yon separasyon konplè nan faz yo, apre pwosedi ki dekri nan [19], yo te kolekte faz anwo a ki gen glikosfingolipid polè.

Pirifikasyon gangliozid brit kolekte yo te reyalize nan plizyè etap [19]: retire konplèks pwoteyin-sèl presipite, ki te swiv pa santrifujasyon, filtraj jèl sou yon kolòn Sephadex G-25 (Sigma-Aldrich, Burlington, MA, USA). ) yo nan lòd yo retire kontaminan ki pa gen anpil pwa molekilè, epi finalman, dyaliz lannwit lan nan 4 ◦C kont dlo. Gangliosides yo te extrait nan kondisyon ki idantik nan tout aliquot pipi, bay melanj A1 (normoalbuminuria), A2 (mikroalbuminuria), A3 (makroalbuminuria), ak C (kontwòl).

3.5. Preparasyon Egzanp pou Spectrometry Mas

Ekstrè yo pirifye A1, A2, A3, ak C ganglioside yo te evapore pou konplete sechrès nan yon sistèm SpeedVac Concentrator SPD 111 V (Savant, Düsseldorf, Almay) makonnen ak yon ponp vakyòm. Pou tès depistaj MS, yo te fonn chak ekstrè sèk nan methanol pi pou jenere solisyon stock la epi estoke nan -20 ◦C. Anvan analiz MS, solisyon stock yo te santrifuje nan yon santrifujeur modèl Sigma 2-16 (Sartorius AG, Göttingen, Almay). Pou Orbitrap MS perfusion, echantiyon k ap travay ak yon konsantrasyon 5 pmol·µL -1 nan methanol pi bon kalite yo te jwenn nan dilye aliquot nan solisyon an stock. Konsantrasyon ganglioside nan solisyon enfuze a te kalkile pou yon pwa molekilè mwayèn nan 2000 g mol-1.

3.6. Orbitrap Mass Spectrometry ak nanoESI

Eksperyans MS yo te fèt sou yon espektwomèt mas LTQ Orbitrap Velos Pro™ (Thermo Fisher Scientific, Bremen, Almay) ekipe ak yon sous nanoES offline ES 259 ​​(Thermo Fisher, Bremen, Almay).

Enstriman an se yon espektromèt mas ibrid ki konbine de diferan kalite analizè mas ak bay yon foul moun nan avantaj: segondè sansiblite ak presizyon, bon kalite done ak vitès nan analiz, potansyèl la pou deteksyon konpozan minè nan melanj konplèks, konsomasyon echantiyon ki ba, ak evite kont-egzamen ak transfere soti nan echantiyon an echantiyon.

Premye analizè a se yon pyèj iyon lineyè kwadwiplè doub-presyon ki kapab izole yon iyon ak yon rapò mas-a-chaj espesifik (m/z) ak aktive li pa mete enèji sinetik nan ion ki gen m/z espesifik la nan lòd. lakòz kolizyon-induit disosyasyon. Dezyèm analizè a se Orbitrap la, ki gen ladann yon elektwòd ekstèn silendrik ak yon elektwòd enteryè barik, pyèj iyon yo nan òbit sikilè alantou elektwòd enteryè a. Li gen ekselan pouvwa rezoud epi li ofri posiblite pou sekans espès iyonik konplèks nan eksperyans miltip etap MS (MSn) pa teknik fragmantasyon efikas.

Kapilè borosilikat (10 cm nan longè) yo te rale ak yon rale mikropipèt Sutter p-97 pou pwodui kapilè elektwospray ak gwosè pwent 10 µm ak longè 4 mm. Yon volim 10 µL nan solisyon an nan yon konsantrasyon 5 pmol·µL -1 nan metanol te prezante nan do a nan emeteur a, epi yo te mete yon fil platinum 0.25 mm nan solisyon an. Valè potansyèl yo aplike nan fil platinum lan ak kòn lan te ajiste nèt ale pou reyalize yon ionizasyon efikas nan eleman yo. Pwosesis nanoESI te inisye pa mete paramèt enstrimantal yo jan sa a: vòltaj nanoESI, 0.80 kV; vòltaj kòn, 40-60 V; tanperati desolvasyon, 80 ◦C; S-lens RF nivo, 60%. Valè sa yo nan paramèt MS yo amelyore ionizasyon an ak yon espre fiks epi, an menm tan an, minimize fwagmantasyon nan sous nan rezidi Neu5Ac labile ki tache ak nwayo oligosakarid nan molekil gangliozid la.

Tout spectre mas (MS ak tandem MS) yo te akeri nan mòd HR, deteksyon mòd iyon negatif, ak nan ranje 200-2000 m/z. MS analiz yo te akeri ak rezolisyon an mete sou 60,000. Espektromèt mas la te opere ak kontwole pa LTQ Tune Plus v2.7 (Thermo Scientific, Bremen, Almay), ak MS done akizisyon ak pwosesis yo te reyalize lè l sèvi avèk lojisyèl Xcalibur 3.0.63 (Thermo Scientific, Bremen, Almay).

Eksperyans MS/MS te fè nan LTQ pa CID nan selil kolizyon an lè l sèvi avèk elyòm 5.0 pite nan yon presyon 50 psi kòm gaz la kolizyon. Yo te akeri analiz MS/MS yo ak yon rezolisyon ki tabli a 20,000. Seleksyon iyon ak fwagmantasyon yo te fè manyèlman. Iyon précurseurs yo te chwazi nan yon lajè izolasyon 1 m/z inite ak fragmenté pa HCD lè l sèvi avèk enèji kolizyon varyab nan seri a 30-80 eV pou amelyore kouvèti iyon fragman yo.

TIC yo ak spectre mas ki sòti nan konbine analiz yo akimile yo te trete lè l sèvi avèk lojisyèl Xcalibur 2.1 (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA), ki pèmèt pou fè ekstraksyon nan spectre yo, osi byen ke lisaj yo ak soustraksyon.

Anvan eksperyans yo, yo te kalibre echèl la m/z deyò lè l sèvi avèk referans dedye a ke yo rekonèt kòm Pierce® ESI Negative Ion Solution soti nan Thermo Scientific (Waltham, MA, USA). Nan mòd iyon negatif, estanda sa a bay yon spectre ak yon kouvèti iyonik jis nan ranje m / z tcheke nan tou de MS ak tandem MS eksperyans.

Pou optimize kondisyon nanoESI MS ak MS/MS nan mòd iyon negatif, konparezon, ak evalyasyon done, yo te mezire fraksyon estanda gangliozid sa yo, ki disponib nan komès: GM1 (sèvo bèf); GD1a, GD1b, GT1b, ak GQ1b (sèvo kochon); ak GM3 ak GD3 (lèt bèf) ki soti nan Avanti Polar Lipids (Birmingham, AL, USA), osi byen ke ekstrè gangliozid antye ki soti nan sèvo bèf, komèsyal ke yo rekonèt kòm melanj Cronassial, soti nan Abano Terme (Padoua, Itali).

3.7. Abreviyasyon Gangliosides

Pou plasman gangliozid, sistèm abrevyasyon yo te entwodwi an 1980 pa Svenner-holm [20], ansanm ak rekòmandasyon 1998 Komisyon IUPAC-IUB sou Nomenklati Biochimik [21] te aplike jan sa a:

LacCer-Gal 4Glc 1Cer; GM3-II3 - -Neu5Ac-LacCer; GD3-II3 - -(Neu5Ac)2-LacCer; GT3-II3 - -(Neu5Ac)3-LacCer; GM2-II3 - -Neu5Ac-Gg3Cer; GD2-II3 - -(Neu5Ac)2-Gg3Cer; GM1a oswa GM1-II3 - -Neu5Ac-Gg4Cer; GM1b-IV3 - -Neu5Ac-Gg4Cer; GalNAc-GM1b-IV3 - -Neu5Ac-Gg5Cer; GD1a-IV3 - -Neu5Ac, II3 - -Neu5Ac-Gg4Cer; GD1b-II3 - -(Neu5Ac)2- Gg4Cer; GT1b-IV3 - -Neu5Ac, II3 - -(Neu5Ac)2-Gg4Cer; GQ1b-IV3 - -(Neu5Ac)2, II3 - - (Neu5Ac)2-Gg4Cer; nLM1 oswa 30 -nLM1-IV3 - -Neu5Ac-nLc4Cer; LM1 oswa 30 -izoLM1-IV3 - - Neu5Ac-Lc4Cer; nLD1-disialo-nLc4Cer.

3.8. Entèpretasyon done MS

Paske pa gen okenn lojisyèl òdinatè dedye, baz done, oswa lòt sèvis IT pou ede entèpretasyon tès depistaj gangliozid la ak spectre mas tandem ki disponib jiska prezan, nan etid sa a, iyon molekilè detekte yo te asiyen nan espès ganglioside pa kalkil mas egzak ak sou baz la. nan enfòmasyon nou te akeri deja sou kalite sa a nan glikosfingolipid ak chemen yo li te ye byosentèz. Nan entèpretasyon done MS ak MS/MS ak kalkil mas, nou te ede nou pa gwo envantè ganglioside molekilè ak iyon fragman ke nou te idantifye ak karakterize nan divès tisi imen ak likid jiska dat lè l sèvi avèk apwòch MS avanse. Estrikti sa yo reprezante baz done orijinal nou yo, ki te enkli nan etid nou te pibliye deja [12,19,22-31]. Espès roman yo rapòte nan travay sa a konplete dosye gangliozid ki egziste kounye a.

Plasman iyon sekans kolòn vètebral oligosakarid ki te pwodwi nan HCD MS/MS te swiv nonmenklati jeneralman aksepte [24,25].

4. Konklizyon

Nan etid sa a, nou devlope yon apwòch ki baze sou HR MS ak tandem MS pou detèminasyon ganglioside nan DKD pa yon tès konparatif nan ekstrè urin soti nan pasyan normo, mikwo-, ak makroalbuminurik, osi byen ke kontwòl sante, te pote soti nan solisyon ki idantik. ak kondisyon enstrimantal yo. Objektif final la nan etid nou an se te detèmine chanjman ki fèt nan konpozisyon an ak estrikti nan gangliosides ren eksprime nan DKD vs kontwòl ak nan diferan etap nan maladi a.

Segondè sansiblite, repwodibilite, rezolisyon, ak presizyon mas ki ofri pa platfòm MS optimize pou objektif sa a te pèmèt nou etabli ke degre siyalilasyon espès yo eksprime parèt jwe yon wòl enpòtan nan pwogresyon maladi a, ki reprezante yon makè DKD. , menm nan etap la normoalbuminuria nan tip 2 pasyan DM. Anplis de sa, modifikasyon yo obsève nan konpozisyon Cer montre ke, akote estrikti glikan an, lipid la ka konsidere tou yon anprent molekilè pou etap DKD.

Nan faz ki pi avanse nan rechèch la, MS/MS pa HCD te anplwaye pou analiz estriktirèl espès yo ak yon wòl biomarker posib. Nan ka echantiyon A3 a, iyon molekilè yo, ki, dapre kalkil mas, yo te jwenn koresponn ak GQ1(d18:1/18:0) ak GT1(d18:1/18:{{1). 0}}), respektivman, yo te izole ak soumèt nan fwagmantasyon nan selil kolizyon enstriman an. Objektif eksperyans sa yo se te kolekte enfòmasyon sou konfigirasyon estriktirèl detaye molekil la. Kondisyon yo sekans optimize, an patikilye ranje enèji kolizyon an ak presyon gaz kolizyon, pwovoke klivaj espesifik nan lyezon glikozidik yo, ki te lakòz fòmasyon nan iyon fragman detekte kòm siyal enpòtan nan spectre mas tandem yo. Plizyè iyon yo te jwenn dyagnostik pou sèten izomè ki gen rapò ak lokalizasyon pati Neu5Ac yo nan chèn idrat kabòn molekil gangliozid la. Baze sou iyon sekans estriktirèl enfòmatif sa yo, nou dekouvri ke GQ1d(d18:1/18:0), GT1 (d18:1/18:0), ak GT1b(d18:1/18: 0) izomè yo prezan nan echantiyon A3 a epi yo asosye ak makroalbuminuria.

Rezilta yo jwenn yo mande pou plis validation kèk ipotèz nan etid longitudinal ki fèt sou pi gwo kòwòt yo nan lòd yo pwouve yon relasyon nan kozalite ant konpleksite nan gangliosides yo detekte nan pipi a nan.Pasyan DKDak patisipasyon nan ren trè bonè nan kou a nan DM tip 2, menm nan etap nan normoalbuminuria. Sepandan, nou konsidere ke rezilta prezan yo louvri yon direksyon rechèch nan direksyon ankèt la nan wòl nan pwogresyon maladi jwe pa sialylation, O-acetylation, ak O-fucosylation nan gangliosides, osi byen ke modifikasyon yo pa O-GalNAc ak CH3COO-. Yon lòt aspè benefik nan rezilta sa yo se devlopman posib nan pwosedi pou dyagnostik DKD bonè ki baze sou profil ganglioside lè l sèvi avèk espektrometri mas avanse.

Referans

1. Ghaderian, SB; Beladi-Mousavi, SS Wòl dyabèt melitus ak tansyon wo nan maladi ren kwonik.J. Ren. Inj. Prev.2014, 3, 109–110. [CrossRef] [PubMed] 

2. Johansen, KL; Chertow, GM; Foley, RN; Gilbertson, DT; Herzog, CA; Ishani, A.; Israni, AK; Ku, E.; Tamura, MK; Li, S. US Renal Data System 2020 Anyèl Done Rapò: Epidemyoloji maladi ren nan Etazini.Am. J. Kidney Dis.2021, 77, A7–A8. [CrossRef] [PubMed] 

3. Lin, YC; Chang, YH; Yang, SY; Wu, KD; Chu, TS Mizajou nan fizyopatoloji ak jesyon maladi ren dyabetik.J. Med. Asoc.2018, 117, 662–675. [CrossRef] [PubMed] 

4. Vallon, V.; Thomson, SC Fonksyon ren nan modèl maladi dyabetik: Sistèm tubulaires nan fizyopatoloji nan ren dyabetik.Ann. Rev Physiol.2012, 74, 351–375. [CrossRef] 

5. Milas, O.; Gadalean, F.; Vlad, A.; Dumitrascu, V.; Velciov, S.; Gluhovschi, C.; Bob, F.; Popescu, R.; Ursoniu, S.; Jianu, DC; et al. Sitokin pro-enflamatwa yo asosye ak domaj podosit ak malfonksyònman tubulèr proximal nan etap bonè nan maladi ren dyabetik nan pasyan dyabèt tip 2.J. Diab. Konplike.2020, 34, 107479. [CrossRef] 

6. Petrica, L.; Ursoniu, S.; Gadalean, F.; Vlad, A.; Gluhovschi, G.; Dumitrascu, V.; Vlad, D.; Gluhovschi, C.; Velciov, S.; Bob, F.; et al. Nivo mRNA ki asosye ak podosit urin yo gen rapò ak malfonksyònman tibil proximal nan nefropati dyabetik bonè nan dyabèt tip 2.Dyabèt. Metab. Sendr.2017, 9, 31–43. [CrossRef] 

7. Kwak, DH; Rho, YI; Kwon, OD; Ahan, SH; Chante, JH; Choo, YK; Kim, SJ; Choi, BK; Jung, KY Diminisyon gangliozid GM3 nan glomeruli dyabetik streptozocin-induit nan rat.Lavi Sci.2003, 72, 1997–2006. [CrossRef] 

8. Masson, E.; Troncy, L.; Ruggiero, D.; Wiernsperger, N.; Lagarde, M.; El Bawab, S. a-Series Gangliosides Mediate efè yo nan glikasyon avanse pwodwi fen sou pwoliferasyon pericyte ak mesanjyal selil: yon medyatè komen pou retin ak ren mikroanjyopati?Dyabèt2005, 54, 220–227. [CrossRef] 

9. Zador, Z.; Deshmukh, GD; Kunkel, R.; Radin, NS; Shayman, JA Yon wòl pou akimilasyon glikosfingolipid nan ipètrofi ren nan dyabèt melitu streptozocin-induit.J. Clin. Investig.1993, 91, 797–803. [CrossRef]

10. Ene, CD; Penescu, M.; Anghel, A.; Neagu, M.; Budu, V.; Nicolae, I. Siveyans Nefropati dyabetik pa Gangliosides sikile.J. Immunoass. Immunochem.2016, 37, 68–79. [CrossRef]