Hyperoside diminye enflamasyon nan selil HT22 atravè sirt1 aktivite Wnt/-Catenin ak Sonic Hedgehog Pathways Pati 1

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

Neuroenflamasyon jwe yon wòl enpòtan nan patojèn ak pwogresyon chanjman nerodevlopman, pèt tande sansoryèl, ak sèten maladi neurodegenerative. Hyperoside (quercetin-3-O- -D-galactoside) se yon konpoze aktif izole nan plant Hypericum. Nan etid sa a, nou mennen ankèt sou efè pwoteksyon oksijene sou neroenflamasyon ak mekanis molekilè posib li yo. Lipopolysaccharide (LPS) ak hyperoside yo te itilize pou trete selil HT22. Vitabilite selil la te mezire pa tès MTT. Pousantaj apoptoz selil la te mezire pa tès sikometri koule. Nivo ekspresyon mRNA entèleukin-1 (IL-1), entèleukin-6(IL{-6), entèleukin-8(IL{-8), ak faktè necrosis timè- (TNF-a) yo te detèmine pa reyaksyon chèn transkripsyon ranvèse-polymerase quantitative. Nivo estrès oksidatif endis superoksid dismutase (SOD), espès oksijèn reyaktif (ROS), katalaz (CAT), glutatyon (GSH), ak malondialdehyde (MDA) yo te mezire pa twous yo. Ekspresyon nan faktè nerotwofik ak relasyon ki genyen ant hyperoside, silans kwazman kalite enfòmasyon règleman 2 homolog -1(SIRT1) ak Wnt/-catenin, ak erison nan sonik te egzamine pa Western blotting. Nan selil HT22 LPS yo, hyperoside ankouraje siviv selil yo; soulaje nivo IL-1, IL-6, IL{-8, TNF-, ROS, MDA, Bax, ak kaspas-3; epi ogmante ekspresyon CAT, SOD, GSH, Bcl-2, BDNF, TrkB, ak NGF. Anplis de sa, hvperoside ogmante ekspresyon SIRT1. Pli lwen ankèt mekanistik te montre ke hyperoside soulaje enflamasyon LPS-pwovoke, estrès oksidatif, ak apoptoz pa upregulating SIRTl aktive Wnt / -catenin ak chemen erison sonik. Ansanm, done nou yo sijere ke hyperoside aji kòm yon pwoteksyon nan neroenflamasyon.

Tanpri klike la a pou w konnen plis

1. Entwodiksyon

Neuroenflamasyon se yon enflamasyon kwonik nan tisi nan sèvo, ki jwe yon wòl enpòtan nan patojèn nan ak pwogresyon nan chanjman nerodevlopman, pèt tande sansoryèl, ak sèten maladi neurodegenerative [1-5]. Nan premye etap yo nan chemen oditif santral la, pèt tande bri ak pèt tande kondiktif yo gen rapò ak neroenflamasyon [6]. Anplis de sa, neroenflamasyon kontribye nan lanmò newòn ak deteryorasyon newolojik lè yo ogmante pwodiksyon faktè proenflamatwa ak estrès oksidatif [7]. Anpil etid yo montre ke newòn ipokanp yo sansib a neroenflamatwa ak lakòz konplikasyon newolojik [8]. Sepandan, toujou pa gen okenn ajan efikas oswa metòd pou retabli ak anpeche domaj newòn ki te koze pa neuroinflammation. Kidonk, idantifikasyon efikas ajan kandida pwoteksyon enflamatwa enpòtan anpil.

Hyperoside(quercetin3-O- -D-galactoside) se yon konpoze aktif izole nan plant Hypericum. Li gen aktivite antioksidan ak anti-enflamatwa, diminye surcharge kalsyòm ak anpeche apoptoz [9, 10]. Etid anvan yo te konfime ke hyperoside efektivman anpeche konplikasyon newolojik ki te koze pa neuroinflammation. Nan modèl estrès oksidatif ipèglisemi ak enflamasyon egi dyabèt la, administrasyon iperozid anpeche malfonksyònman mantal, neroenflamasyon, ak estrès oksidatif ki te koze pa DM atravè chemen siyal TNF-/NF-Bx/caspase-3 [11]. Nan maladi tankou maladi Parkinson la, hyperoside aji kòm yon ajan pwoteksyon lè li diminye deklanchman microglia ki pwovoke LPS [12]. Jiskaprezan, gen kèk etid sou efè pwoteksyon hyperoside sou nero-enflamasyon, ak mekanis a pa te konplètman elisid.

Lipopolysaccharide (LPS) lajman itilize pou aktive sistèm iminitè natirèl la. Etid anvan yo te montre ke LPS anjeneral yo itilize pou prepare modèl neroenflamasyon pwovoke pa repons enflamatwa [13,14]. Nan etid sa a, nou ekspoze selil HT22 a LPS pou imite yon modèl selilè neroenflamasyon. Ansanm, yo te etidye efè pwoteksyon hyperoside sou neroenflamasyon ak mekanis molekilè posib li yo atravè modèl sa a. Nou te jwenn ke hyperoside pwoteje selil HT22 kont enflamasyon LPS-induit; estrès oksidatif ak apoptoz yo gen rapò ak SIRT1levels. Pli lwen analiz te montre ke hyperoside soulaje enflamasyon LPS-induit, estrès oksidatif, ak apoptoz pa upregulating SIRT1 aktive Wnt / -catenin ak chemen erison sonik.

2. Materyèl ak Metòd

2.1.Reyaktif ak Dwòg. LPS, hyperoside, ak 3-(4,5- bromur dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyltetrazolym

(MTT) yo te achte nan men Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Dulbecco a modifye Eagle mwayen ki gen 10 pousan fetal serum bovine(FBS) te achte nan men Gibco (Carls-bad, USA). LiCl ak sonic erison agonist SAg te achte nan men Merck (San Diego, CA, USA). Antikò prensipal kont Bcl-2, Bax, caspase-3, BDNF, NGF, SIRT1, Wnt1, -catenin, Shh, Patch, ak GAPDH ak antikò segondè yo te achte nan men Cell Signaling (Boston, MA, USA). 2.2. Kilti Selil ak Tretman. Liy selil newòn murin HT22 la te achte nan men Kunming Cell Bank nan Akademi Syans Chinwa a (Kunming, Lachin). Selil HT22 yo te simen nan 2 × 104 selil / byen nan yon plak 6-byen ak kiltive nan DMEM a ak 10 pousan serom fetis bovin, 100U / ml penisilin, ak 100ug / ml streptomycin nan 37C nan yon 5 pousan CO, imidite. enkibatè. Lè HT22 rive nan 70 pousan konfluyans apre 24 èdtan, transfè selil yo te pretrete ak diferan konsantrasyon hyperoside ak LPS (1ug/ml).

Cistanche ka amelyore iminite

2.3.Selil Viabilite. Vitabilite selil yo te detèmine pa tès MTT.

Yon ti tan, selil HT22 yo te simen nan 24-plak byen nan yon dansite 2 × 104 selil / ml pou 24 èdtan. Selil yo te mouri grangou lannwit lan epi yo te pretrete yo ak diferan konsantrasyon iperozid pou 24 èdtan ki te swiv pa enkubasyon ak LPS （1ug/ml） pou yon lòt 24h. Mwayen an te rafrechi ak enkube ak 50ul MTT (5 mg / ml prepare nan saline fosfat-tanpon) pou 4 èdtan nan 37C. Apre sa, yo te retire solisyon an epi ajoute DMSO nan plak yo. Yo te mezire absorbans nan 570nm lè l sèvi avèk yon lektè plak.

2.4.Western Blotting.

Yo te ajoute tanpon RIPA nan selil HT22 (Invitrogen; USA) pou kolekte pwoteyin total la; Lè sa a, konsantrasyon pwoteyin yo te detèmine evalye lè l sèvi avèk metòd la BCA (Invitrogen, USA).

Echantiyon pwoteyin yo te melanje ak yon tanpon chaj 5x ak denatire nan bouyi a. Pwoteyin yo te separe pa 15 pousan SDS-PAGE epi yo te transfere sou manbràn fliyò polivinilidèn. Apre sa, manbràn yo te enkube ak antikò prensipal (Bcl-2, Bax, caspase-3, BDNF, NGF, SIRT1, Wntl, -catenin, Shh, Patch, ak GAPDH) nan 4Covernight. Lè sa a, jou kap vini an, manbràn yo te lave ak PBS ak enkubasyon ak antikò segondè pou 1 èdtan. Finalman, bann pwoteyin yo te mezire lè l sèvi avèk lojisyèl ImageJ la. Done yo te kolekte nan omwen twa eksperyans endepandan.

2.5.qRT-PCR. Total RNA selil HT22 yo te izole lè l sèvi avèk TRIzol RNA Ekstraksyon Twous (Invitrogen, Grand Island, NY, USA), epi yo te transkri RNA total izole a nan cDNA lè l sèvi avèk yon twous transkripsyon ranvèse (Takara, Kyoto, Japon). SYBR Premix Ex Taq II (Takara, Kyoto, Japon) te itilize pou fè anplifikasyon qRT-PCR. Primè anplifikasyon IL-1, I{-6, ak TNF yo te jan sa a:IL-1 ,5'-GATGGTCGCATTAGCTCC-3'ak 5'-GCCTGTAGCTGTAGCGTC{{15} }';IL-6,5'-ATTG CGGCGGCTGACGCGTAG-3'ak 5'-GTCTGTTGCGC GAGCTGGTA-3';IL-8,5'-GTCGAGCTGCCGCGTAGCG T{{26} }'ak 5'-CGGATGCGTGCAGC-3'; ak TNF-a,5'-CGTCAGCCGATTTGCTATCT-3'and5'-CGGACTCCG CAAAGTCTAAG-3'.Te ekspresyon relatif mRNA analize ak metòd 2-Act.

2.6.SOD, GSH, ak MDA Assay. Nou mezire espès oksijèn (ROS), katalaz (CAT), superoksid dismutase (SOD), glutatyon (GSH), ak aktivite nivo malondialdehyde (MDA) lè l sèvi avèk twous tès korespondan yo (Nanjing Jian-cheng Bio Company, Lachin).

2.7.Flow Cytometry.

Yo te itilize tès sitometri koule pou mezire pousantaj apoptoz selil la dapre yon rapò anvan [15]. Selil HT22 nan chak gwoup yo te rekòlte epi yo te sispann sispann. Selil apoptotik yo te make doub ak anexin V-FITC ak PI lè l sèvi avèk yon twous deteksyon annexin V-FITC/PI apoptoz (Beyotime Biotechnology, Lachin) pou 30 minit nan tanperati chanm nan fè nwa a. Lè sa a, entansite fliyoresans selil yo te quantifier pa flow cytometry.

2.8. Analiz estatistik.

Nan etid sa a, yo te konpare diferans ki genyen ant de gwoup lè l sèvi avèk yon tès t, ak sa ki pami gwoup yo te analize pa yon sèl-fason analiz de divèjans (ANOVA).Tout done yo te prezante kòm valè yo vle di±

Figi 1: Hyperoside soulaje apoptoz ak enflamasyon nan selil HT22 LPS-induit yo. Vitabilite selil HT22 te mezire pa tès MTT la. Vitabilite selil yo te obsève pa yon mikwoskòp (100x) (a, b). Ekspresyon Bcl-2, Bax, ak caspase-3 nan selil HT22 yo te mezire pa Western blotting (c). Yo te mezire pousantaj apoptoz selil HT22 pa tès sitometri koule (d). Nivo IL-1, IL-6. IL-8 ak TNF-mRNA nan selil HT22 yo te mezire pa art-PCR(e);* yo te konsidere kòm siyifikatif konpare ak kontwòl (*P<0.05);# was="" considered="" significant="" compared="" to="" lps="" ("p=""><>

Atik sa a soti nan Hindawi Neural Plasticity Volim 2021, Atik ID 8706400, 10 paj https://doi.org/10.1155/2021/8706400