Konsekans konsomasyon jèstasyonèl ki ba-pwoteyin sou ekspresyon MicroRNA nan ren anbriyon ak nan selil nefwon ansèyman nan fetis gason an.
Mar 08, 2022
Entwodiksyon
Mank eleman nitritif yo ka lakòz chanjman siyal nan chemen esansyèl yo pandan plizyè etap nan devlopman fetis la, ki ka lakòz ògàn irevokabl ak maladi sistèm nan adilt [1]. Pwogramasyon fetis la refere a nenpòt joure pandan devlopman, ki lakòz efè alontèm sou estrikti oswa fonksyon yon òganis [2]. Dezòd nan pwogramasyon fetis la lakòz pwa nesans ki ba, mwens nefwon, ak ogmante risk kadyovaskilè akrenmaladi nan adilt [3-6]. Etid pa lòt otè ak nou te demontre pi ba pwa nesans, 28 pousan mwens nefron, redwi.renekskresyon sèl, kwonikensifizans ren, ak tansyon wo atè nan jèstasyonèl ki ba-pwoteyin (LP) konsomasyon konpare ak estanda (NP) pwoteyin konsomasyon pitit pitit nan adilt [3-7]. Nefrogenesis enplike kontwòl sere nan ekspresyon jèn, sentèz pwoteyin, ak renovasyon tisi. Etid yo te demontre ke nimewo nefwon yo detèmine pa entèraksyon ki genyen ant boujon urèt (UB) ak metanephros mesenchyme (MM) selil progenitor [8-10]. Siyal ki soti nan MM pwovoke UB-estimile kwasans ak branch nan sistèm nan tubules. Nan vire, pwopagasyon MM ak diferansyasyon, ki konstitye yon bouchon mesenchymal (CM), se medyatè pa UB fini [11].
CISTANCHE AP AMELYORE MALADI REN/REN
Te gen yon enterè grav nan wòl chanjman epijenetik, konsènan efè alontèm estrès prenatal, sou devlopman fetis la [12]. MicroRNAs (miRNAs) se genomic kode ti RNA ki pa kode apeprè 22 nukleotid nan longè epi yo jwe yon wòl esansyèl nan règleman pòs-transkripsyon ekspresyon jèn sib [13-16]. miRNAs kontwole ekspresyon jèn apre-transcriptionally pa reglemante tradiksyon mRNA oswa estabilite nan sitoplasm la [17, 18]. Etid fonksyonèl yo endike ke miRNA yo patisipe nan pwosesis byolojik kritik pandan devlopman ak nan fizyoloji selil [13, 16]. Chanjman nan ekspresyon yo te obsève nan plizyè patoloji [16, 19]. Kidonk, karakterizasyon miRNA yo te ede konprann règleman jèn yo ak pwopagasyon selilè, diferansyasyon, ak apoptoz epi eksplike maladi fizyoloji, ki gen ladan.renmaladi [20-22]. Etid yo te rapòte ke pandanrenontogeny miRNA yo endispansab pou devlopman nefwon [23-26]. Anplis, underexpression nan kèk miR NAs nan selil progenitor MM diminye pwopagasyon selil, sa ki lakòz diferansyasyon bonè, epi kidonk, diminye kantite nefron [27, 28]. Fenomèn sa a karakterize pa ogmante apoptoz ak gwo ekspresyon Bim nan selil progenitor [27]. Kidonk, miRNAs modile balans ki genyen ant apoptoz ak pwopagasyon selil prensipal metanephric sa yo [29].
Nou te ipotèz ke chanjman epigenetik enkoni ak pwofil ekspresyon miRNA yo asosye akrenmaladi devlopman nan pitit matènèl ki gen restriksyon nan pwoteyin. Kidonk, nou vize evalye modèl miRNA ak prevwa ekspresyon jèn nan fetis larennan 17 jou jèstasyonèl (17-DG) pitit gason ki gen restriksyon nan pwoteyin pou idantifye chemen molekilè ak maladi ki enplike nanrenpwopagasyon selil ak diferansyasyon pandanrendevlopman.
Mo kle:ensifizans ren; ren tubulaires; maladi ren; devlopman ren; ren
Materyèl ak metodoloji
Bèt ak rejimEksperyans yo te fèt jan sa dekri an detay anvan [5, 6] sou rat fi ak gason ki gen laj nan rat Wistar HanUnib ki te marye ak frè ak sè (250–300 g) ki soti nan yon bèt elvaj CEMIB/UNICAMP te founi. , Campinas, SP, Brezil. Anviwònman an ak lojman prezante bon kondisyon pou jere sante yo ak byennèt pandan pwosedi eksperimantal la. Touswit apre yo fin sevraj nan twa semèn, bèt yo te kenbe anba tanperati kontwole (25˚C) ak kondisyon ekleraj (07:00–19:00h) ak aksè gratis nan dlo tiyo ak manje estanda laboratwa wonjè (Purina Nuvital). , Curitiba, PR, Brezil: Na plis kontni: 135 ± 3μEq/g, K plis kontni: 293 ± 5μEq/g), pou 12 semèn anvan elvaj. Komite Etik Enstitisyonèl sou Itilizasyon Animal nan Inivèsite Leta São Paulo (#446-CEUA/UNESP) te apwouve pwotokòl eksperimantal la, epi yo te suiv direktiv jeneral Kolèj Eksperyans Animal Brezilyen an ki te etabli pandan tout ankèt la. Li te deziyen jou 1 nan gwosès la kòm jou kote fwoti vajen an te ekspoze espèm. Apre sa, yo te kenbe baraj ad libitum pandan tout gwosès la sou yon manje laboratwa izokalorik wonjè ak swa kontni pwoteyin estanda [NP, n=36] (17 pousan pwoteyin) oswa kontni pwoteyin ki ba [LP, n=51 ] (6 pousan pwoteyin). Yo te detèmine konsomasyon manje matènèl NP ak LP chak jou (ansuit nòmalize pou pwa kò), epi yo te anrejistre pwa kò nan baraj chak semèn nan tou de gwoup yo. Sou 17 jou nan gwosès (17-DG), baraj yo te anestezi pa ketamin (75mg/kg) ak xylazine (10mg/kg), epi matris la te ekspoze. Yo te retire fetis yo epi imedyatman elimine yo pa dekapitasyon. Yo te peze fetis yo epi yo te ranmase ke ak branch yo pou fè sèks. Metanephros yo te kolekte pou Next Generation Sequencing (NGS), RT-qPCR, ak analiz imunohistochimik.
CISTANCHE AP AMELIORE ENFÒK REN/RENAL
Detèminasyon sèksEtid aktyèl la te fèt sèlman nan pitit gason 17-DG, epi sèks yo te detèmine pa analiz sekans PCR konvansyonèl Sry (Polymerase Chain Reaction). ADN nan te ekstrè pa lysis anzimatik ak proteinaz K ak Phenol-Chloroform. Pou reyaksyon, yo te itilize Master Mix Colorless-Promega, ak kondisyon monte bisiklèt manifakti a. Teknoloji ADN Integrated (IDT) te fè sentèz premye sekans sa yo anba a: Pi devan: 5'-TACAGCCTGAGGACATATTA-3'Reverse: 5'-GCACTTTAACCCTTCGATTAG-3'.
Ekstraksyon RNA totalRNA te ekstrè nan NP (n=4) ak LP (n=4) antyerenlè l sèvi avèk Trizol reyaktif (Invitrogen), dapre enstriksyon yo espesifye pa manifakti a. Kantite RNA total te detèmine pa absòbe a nan 260 nm lè l sèvi avèk yon espektrofotomèt nanoVue (GE Healthcare, USA). Entegrite RNA te asire lè w jwenn yon Nimewo Entegrite RNA—RIN > 8 ak Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Almay) [30].
miRNA-Seq ak analiz doneSekans yo te fèt sou platfòm MiSeq (Illumina). Pwotokòl la te swiv enstriksyon manifakti a ki disponib nanYon ti tan, sekans lan gen ladan konstriksyon bibliyotèk, e sa a te itilize 1ug total RNA. Nan etap sa a, adaptè yo konekte, 3 'ak 5' la. Apre ligasyon adaptè yo, yo te fè yon reyaksyon transkripsyon ranvèse pou kreye cDNA. Lè sa a, li te anplifye pa yon reyaksyon PCR estanda, ki itilize primè ki gen yon endèks sekans pou idantifikasyon echantiyon-sa a bibliyotèk cDNA, sibi elektwoforèz jèl agarose pou izolasyon miRNA. Apre kantite, yo te nòmalize konsantrasyon bibliyotèk la a 2 nM lè l sèvi avèk 10 nM Tris-HCl, pH 8.5, epi sekans transcriptom te fèt pa MiSeq Reagent Kit v2 (50 sik).
Analiz done yo te fèt an kolaborasyon ak Tao Chen, Ph.D. soti nan Divizyon Jenetik ak Molekilè Toksikolojik, Sant Nasyonal pou Rechèch Toksikolojik, Jefferson, AR, USA. Done ki soti nan Next Generation Sequencing (NGS) nan miRNA yo te pwodwi nan fòma FASTA ak enpòte nan BaseSpace.com (Illumina, USA). Kalite done yo te evalye lè l sèvi avèk baz rele CASAVA lojisyèl devlope pa manifakti a (Illumina). Analiz yo te fè pa BaseSpace miRNA analiz (ki soti nan University of Torino, Kanada) ak kat sekans nan miRNA diferan pa Small RNA (Illumina, USA) pou jenom nan rat. Yo te analize etid miRNA ki eksprime diferan lè l sèvi avèk lojisyèl Ingenuity Pathway Analysis (Ingenuity, USA).
validasyon ekspresyon miRNAYo te itilize kat pitit gason ki soti nan diferan pitit nan chak gwoup pou miRNA a (miR{{0}}p, -144-3p, -298-5p, kite-7a{{ 4}}p, -181a-5p, -181c-3p, ak -199a-5p) analiz ekspresyon. Yon ti tan, 450 ng RNA te ranvèse transkripsyon, san yo pa pre-anplifikasyon, lè l sèvi avèk TaqMan1 Micro RNA Ranvèse Transcription Twous la, dapre direktiv manifakti a. ADN konplemantè (cDNA) te anplifye lè l sèvi avèk TaqMan MicroRNA Assays (Life Technologies, USA) ak TaqMan1 Universal PCR Master Mix, No AmpErase1 UNG (2x) sou StepOnePlusTM Real-Time PCR System (Applied BiosystemsTM), dapre enstriksyon manifakti a. Analiz done yo te fèt lè l sèvi avèk ekspresyon jèn relatif evalye lè l sèvi avèk metòd la quantifikasyon konparatif (Pfaffl, 2001). Dapre analiz estabilite, yo te itilize U6 snRNA ak U87 scaRNA kòm jèn referans. Tout kantite relatif yo te evalye lè l sèvi avèk lojisyèl DataAssist, v 3.0, lè l sèvi avèk metòd ΔΔCT. Done miRNA yo te pwodwi swiv gid MIQE yo [31].
CISTANCHE AP AMELIORE FONKSYON REN/REN
RT-qPCR nan prevwa jèn sibPou sentèz cDNA a, yo te itilize twous transkripsyon ranvèse cDNA High Capacity (Life Technologies, USA). Reyaksyon RT-qPCR pou Bax, Bim, Caspase-3, Kolagen 1, GDNF, PCNA, TGF -1, Bcl-2, Bcl-6, c-Myc, c -ret, cyclin A, Map2k2, PRDM1, Six-2, Ki-67, MTOR, -catenin, ZEB1, ZEB2, NOTCH1, ak jèn IGF1 te fèt pa SYBR Green Master Mix (Life Technologies, USA) ) te founi pa IDT1 Integrated DNA Technologies (Tablo 1). Reyaksyon yo te fè nan yon volim total de 20 μL lè l sèvi avèk 2 μL nan cDNA (dilye 1:30), 10μL SYBER Green Master Mix (Life Technologies, USA), ak 4 μL nan chak jadendanfan espesifik (5 nM). Yo te fè anplifikasyon ak deteksyon lè l sèvi avèk StepOnePlusTM Real-Time PCR System (Applied BiosystemsTM). Valè Ct yo te konvèti nan valè ekspresyon relatif lè l sèvi avèk metòd ΔΔCt ak done metanephros pitit pitit nòmalize ak GAPDH kòm yon jèn referans [32].
Imunohistochimi,Yo te retire fetis la (n {{0}} pou chak gwoup) epi imedyatman te fikse nan 4 pousan paraformaldehyde (0.1M fosfat, pH 7.4). Materyèl yo te dezidrate, diafanize, epi enkli nan paraplast, epi blòk yo te koupe an seksyon 5-μm-epesè. Seksyon histolojik yo te deparafinize ak trete pou imunofluoresans ak imunoperoksidaz. Seksyon yo te
enkubasyon ak yon solisyon bloke (8 pousan fetal serom bovin, 2.5 pousan albumin bovin, ak 2 pousan poud lèt ekreme nan PBS). Apre sa, mete antikò prensipal la (anti-Sis-2) dilye nan PBS ki gen 1 pousan lèt ekreme lannwit lan anba frijidè. Apre lave ak PBS, seksyon yo te enkube ak yon antikò segondè espesifik, konjige ak Alexa 488 fluorophore, dilye nan menm tanpon an, ki gen 1 pousan lèt pou 2 èdtan nan tanperati chanm. Apre lave siksesif ak PBS, yo te monte glisad yo ak kouvèti lè l sèvi avèk mwayen asanble fliyoresan Vectashield (Vector Laboratories, Inc. Burlingame). Fliyoresans nan echantiyon an te detekte pa mikwoskospi konfokal lazè. Imaj yo te jwenn ak sistèm Focus Imagecorder Plus la. Pou c-Myc, Ki-67, Bcl-2, TGF -1, - catenin, ZEB1, ZEB2, Caspase 3 clived, cyclin A ak pwoteyin WT1, yo te fè imunohistochimi. Glisad yo te idrate, epi apre yo fin lave nan PBS pH 7.2 pou 5 minit, yo te fè rekiperasyon antijenik la ak tanpon citrate pH 6.0 pou 25 minit nan cuisinier a presyon. Glisad yo te lave nan PBS. Imedyatman, bloke andojèn peroksidaz ak oksijene idwojèn ak metanol te fèt pou 10 minit nan fè nwa a. Seksyon yo te relave nan PBS. Lè sa a, bloke nan ki pa espesifik obligatwa yo te swiv, ak glisad yo te enkube ak yon solisyon bloke (5 pousan ekreme lèt poud, nan PBS) pou 1 èdtan. Seksyon yo te enkube ak antikò prensipal la (Tablo 2), dilye nan 1 pousan BSA lannwit lan nan frijidè a. Apre lave ak PBS, seksyon yo te ekspoze a antikò segondè espesifik pou 2 èdtan nan tanperati chanm. Glisad yo te lave ak PBS. Tranch yo te revele ak DAB (3,3'- diaminobenzidine tetrahydrochloride, Sigma-Aldrich CO1, USA). Apre yo fin lave siksesif nan dlo k ap koule, glisad yo te kontre ak ematoksilin, dezidrate, epi monte ak yon kouvèti, lè l sèvi avèk Entellan1. Imaj yo te jwenn lè l sèvi avèk fotomikwoskòp (Olympus BX51) oswa yon konfokal Zeiss LSM 780-NLO sou yon mikwoskòp Axio Observer Z.1 (Carl Zeiss AG, Almay) nan Enstiti Nasyonal Syans ak Teknoloji sou Fotonik aplike nan selil yo. Biyoloji (INFABIC) nan Inivèsite Leta Campinas.
Kantifikasyon mòfolojiParafine 5 μmrenseksyon yo te analize lè l sèvi avèk CellSens Dimension lojisyèl ki soti nan yon fotomikwoskòp (Olympus BX51). Larentranch yo te jwenn aksè pou detèmine zòn nefrojèn, pwoteyin CM ak UB ak nimewo selilè, ematoksilin-eozin tache nan 17-DG LP fetis (n=5) konpare ak pitit NP ki gen laj (n {{4}). }}) ki soti nan diferan manman. Nou te mezire tout CM ak UB nan chak metanephros analize (4NP ak 4LP soti nan diferan manman), ak analiz estatistik te fèt pa t-tès, ak valè yo te eksprime kòm vle di ± SD. Yo te konsidere p�0.05 la enpòtan. GraphPad Prism v01 Software, Inc., USA, te itilize pou analiz estatistik ak konstriksyon figi.
Analiz estatistikYo te itilize t-tès la, epi valè yo te eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda (SD). P�0.05 te konsidere kòm enpòtan. Lojisyèl GraphPad Prisma v. 01 (GraphPad Software, Inc., USA) te itilize pou analiz estatistik ak konstriksyon figi.
Rezilta yo
Ekspresyon miRNA pa miRNA-SeqPou konprann chanjman microRNA ki asosye ak pwoteyin matènèl ki ba yorenpwogramasyon, nou te fè ekspresyon de yon analiz mondyal pwofil miRNA. Li te idantifye 44 miRNAs dereglementé (p � 0.05), nan ki 19 ak 25 miRNAs, respektivman, yo te monte-oswa desann-regleman (Tablo 3). Yo te idantifye tèt miRNA yo eksprime ak fonksyon yo, chemen, ak rezo yo lè l sèvi avèk Ingenuity Software (Tablo 4).
Validasyon ekspresyon miRNANan bèt gwoup LP yo, Let-7a-5p, miR-181a-5p, miR-181c-3p yo te reglemante, pandan ke miR-127-3p, miR-144-3p, ak miR{-199a-5p yo te anba reglemante parapò ak bèt NP yo. Rezilta yo pa montre okenn diferans nan ekspresyon miR-298, konpare tou de gwoup yo (figi 1). Tablo 5 revele valè yo jwenn pa miRNAs sekans ak done yo validation RT-qPCR. Malgre ke diferans enpòtan ekspresyon miRNA yo te obsève nan LP parapò ak pitit NP, chanjman pliye (FC) nan miRNA valide yo te menm jan ak tou de teknik.
sib miRNA-gène
Jèn ekspresyon sib prevwa diferan miRNA tankou Six-2, Bcl{-2, PRDM1, cyclin A, PCNA, GDNF, Kolagen 1, Caspase 3, ak Bim nan LP pa t diferan anpil ak NP. fetis. Sepandan, Bax, TGF -1 Bcl-6, c-ret, Map2k2, Ki-67, mTOR, -catenin, ZEB1, ZEB2, ak ekspresyon jèn IGF1 yo te regilasyon nan {{15} }}Gwoup DG LP konpare ak kontwòl ki gen laj. Kontrèman, c-Myc, ak NOTHC1 te downregulated nan pitit matènèl pwoteyin limite (figi 2).
Mas kò fetis la ak mòfometri metanephros17-Mas kò DG LP a pa t diferan de pitit NP ki gen laj. Sepandan, mesenchyme metanephros LP a te montre yon zòn redwi 7.6 pousan ak yon rediksyon 29 pousan nan epesè cortical a pase gwoup NP (Fig 3).ImunohistochimiNan etid la prezan, fetis LP a te montre yon rediksyon enpòtan (apeprè 69 pousan) nan sis -2 fliyoresans bouchon pase pitit NP (figi 4).
Analiz sis -2 imunoperoksidaz la demontre yon kantite selil redwi (14 pousan) nan LP CM soti nan ki asosye ak 28 pousan redui sis -2 plis selil ki gen rapò ak zòn nan bouchon konpare ak pitit NP (figi 4). Etid la te montre tou yon rediksyon pousan enpòtan nan selil imunostain c-Myc CM ak UB (mwens 14 pousan) nan LP parapò ak pitit NP (figi 4). Anplis de sa, pousantaj nan zòn ki make Ki-67 nan CM te 48 pousan pi piti nan LP konpare ak fetis NP, pandan y ap Bcl-2 ak iminoreaktivite kaspas-3 clivé pa t diferan de tou de gwoup yo (figi. 5 ak 6). Etid la te montre tou yon rediksyon pousan enpòtan nan selil imunostain c-Myc CM ak UB (mwens 14 pousan) nan LP parapò ak pitit NP (figi 4). Anplis de sa, pousantaj zòn ki make Ki-67 nan CM te 48 pousan pi piti nan LP konpare ak fetis NP, pandan y ap Bcl-2 ak iminoreaktivite kaspas-3 clivé pa t diferan de tou de gwoup yo (figi. 5 ak 6). Nan lòt men an, nan LP, zòn ki make CM ak UB -catenin yo te ogmante 154 ak 85 pousan, respektivman, konpare ak sa ki disponib nan pitit NP (Fig 7). An menm tan an, distribisyon iminoreaktivite mTOR te tou okipe yon zòn siyifikativman pi vaste nan LP CM (139 pousan) ak UB (104 pousan) pase nan fetis la NP (figi 7). Nan pitit LP a, TGF -1 nan selil UBS tach ogmante (apeprè 30 pousan), pandan ke yo nan CM a, selil imunostained yo pa t diferan ki gen rapò ak gwoup la NP (Figi 8). ZEB1 metanephros-tache, ki chita nan selil nwayo CM yo, amelyore 30 pousan nan LP konpare ak fetis la NP (Fig 8). Ansanm, imunofluoresans ZEB2 a, byenke prezan nan estrikti metanephros antye, te menm jan an nan tou de gwoup eksperimantal (Fig 8). Etid aktyèl la, pran an kont ekspresyon miRNA ak mRNA ak pwoteyin
Diskisyon
Konesans sou mekanis selilè ak molekilè nan nefrogenez ogmante [33-37]. Sepandan, anpil faktè regilasyon ak siyal chemen ki enplike nanrenontogenesis rete klè [38]. miRNA yo jwe yon wòl enpòtan nan reglemante ekspresyon jèn pandanrendevlopman [25, 39–41]. Dapre nou konnen, analiz ekspresyon miRNA ak mRNA nan selil matènèl LP 17-DG mesenchyme gason yo pa te fèt. Nou pwopoze yon nouvo mekanis molekilè ki enplike nan anpeche nefrogenesis bonè, sa ki lakòz yon kantite redui nan nefron. Nou te itilize NGS pou evalye ekspresyon miRNA epi nou te jwenn ke 19 miRNA yo te monte-e 25 downregulated nan 17-DG LP konpare ak NP metanephros. Pami 10 pi gwo miRNA deregleman yo, nou te chwazi 7 miRNA ak sib byolojik ki enplike nan pwopagasyon, diferansyasyon, ak apoptoz selilè. Tou de analiz done miRNA-Seq ak TaqMan te revele chanjman ki konsistan ak espesifik nan ekspresyon miRNA nan bèt LP ki gen rapò ak kontwole bèt NP ki gen laj.
Fanmi miR-181 la konpoze de kat manm byen konsève, sètadi miR-181a, miR-181b, miR-181c, ak miR-181d [ 42]. Nan selil neoplastik, miR-181a aji kòm yon sipresyon timè, anpeche pwopagasyon selilè ak migrasyon epi pwovoke apoptoz selilè [43]. Etid sa a te revele ogmante ekspresyon miR-181a-5p nan 17-DG LP parapò ak pitit NP ki gen laj. Malgre ke ekspresyon mRNA caspase pa te chanje, yon ogmantasyon de fwa nan rapò mRNA Bax/Bcl-2 nan LP konpare ak pitit NP sijere ogmante apoptoz nan CM a, ki endike ke apoptoz se reglemante post-transcriptionally. Etid yo montre ke fanmi an BCL ankouraje lage cytochrome nan mitokondri yo ak Lè sa a, inibit aktivasyon an nan Casp3, kidonk anpeche apoptoz selilè [44]. Li et al. te itilize yon modèl blesi nan poumon egi pou revele ke miR-181a ki twò eksprime gen rapò ak diminye nivo pwoteyin Bcl-2; okontrè, miR-181a anpèchman ogmante nivo Bcl-2 [45]. Etid sa a te konfime rezilta Lv et al., ki te demontre ke miR-181c kontwole ekspresyon Sis-2 ekspresyon ak pwopagasyon selil negatif, paralèl ak pèt fenotip selil mesenchymal yo pandanrendevlopman nan pitit LP 17-DG [25].
Xiang et al. demontre ke ogmante ekspresyon miR-144 siprimerenpwopagasyon karsinom, sa ki lakòz yon faz G2/M ki pi kout. Anplis, Xiang et al. revele ke twòp ekspresyon nan miR-144 anpeche jèn mTOR ak ekspresyon pwoteyin [46]. Nijland et al. demontre ke yon ogmantasyon nan siyal mTOR enpòtan anpil pou detèmine kantite nefwon nan anbriyon ki gen manman yo te sibi restriksyon nitritif [47]. Sib mamifè rapamicin konplèks 1 (mTORC1) esansyèl pou devlopman anbriyon; sepandan, ki jan konplèks sa a kontwole balans ki genyen ant kwasans ak otofaji anba kondisyon fizyolojik ak estrès anviwònman an rete enkoni [48]. Se poutèt sa, siyal mTOR ka patisipe nan repons selilè nan bèt ki ekspoze a konsomasyon LP pandan gwosès; nan pèsepsyon, endiksyon, ak revokasyon otofaji; ak an repons a disponiblite eleman nitritif entraselilè [46]. Ipotetikman, pandan restriksyon pwoteyin grav, ekspresyon redwi miR-144-3p ka asosye ak ogmante ekspresyon mTOR, apeprè 139 pousan ak 104 pousan nan selil CM ak UB, respektivman, pou konpanse pèt nefwon nan {{. 11}}Desandans DG LP Chen et al. defini miR-127 kòm yon nouvo regilatè senesans selil atravè Bcl-6 [49]. Pan et al. rapòte ke miR-127 underexpression korelasyon ak pwopagasyon selil ogmante nan selil fwa [50]. Etid sa a te montre yon diminisyon nan pwopagasyon selilè ak yon rediksyon enpòtan nan selil ki gen etikèt pozitif pou Ki-67 nan CM bèt ki gen restriksyon nan pwoteyin. Anplis, yo te obsève yon rediksyon nan zòn nefrojèn ak pwopagasyon nan pitit LP, ki te konsistan avèk rezilta Menendez-Castro et al. nan 8.4 pousan pwojeksyon ki gen restriksyon nan pwoteyin [51, 52]. Kidonk, ogmante ekspresyon Ki-67 ak Bcl{-6 mRNA, akonpaye ak ekspresyon miR-127-3p redwi nan 17-DG LP bouchon an ta ka asosye ak mekanis kontregleman pou kenbe. pwopagasyon.
Solèy et al. demontre ke twòp ekspresyon nan miR-199a-5p diminye pwopagasyon selil sistik ak pwovoke apoptoz, anplis kontwole sik selil la [53]. Nan etid sa a, ekspresyon miR-199a-5p redwi nan 17-DG LP akonpaye pa ogmante transkripsyon Ki-67, yon makè pwopagasyon selilè, ak Map2k2. ki asosye ak reyaktif Ki-67 nan LP 17-DG metanephros. Kidonk, malnitrisyon jèstasyonèl ankouraje diferansyasyon atravè yon mekanis pòs-transkripsyon. Miyò, rezilta nou yo revele yon wòl represyon nan zenk-dwèt E bwat obligatwa homeobox 1 (ZEB1), yon pwodiktè EMT, ki kenbe pluripotans selil souch pandan diferansyasyon selil souch anbriyon. se konnen -catenin aktive transkripsyon ZEB1 nikleyè ki lakòz ekspresyon ZEB1 [34]. Chemen siyal TGF a, youn nan chemen ki pi byen etidye yo, ka pwovoke EMT pandan devlopman anbriyon. Plizyè TGF tankou ligand yo mande pou devlopman anbriyon. Sepandan, se pa tout efè TGF-medyatè sou EMT depann de ZEB1/2, selil knockout ka pwovoke ekspresyon jèn mesenchymal fibronectin ak N-cadherin. Sepandan, E-cadherin pa reglemante ankò, epi fib aktin yo fòme tou [54]. Karner et al. rapòte ke pandanrendevlopman, Wnt9b/ -catenin la
chemen siyal, ki eksprime nan tou de UB a ak CM, se obligatwa tou de pou renouvèlman nephron progenitor selil ak diferansyasyon, yo te esansyèl pou fòmasyon nan nephrons pandan anbriyogenesis [55]. Wnt9b/-catenin evolisyonèman konsève jwe yon wòl enpòtan nan devlope ògàn, tisi, ak reparasyon blesi nan òganis pluriselilè. Yon etid te demontre ke c-Myc se yon sib transcriptional nan -catenin, reglemante pwopagasyon ak diferansyasyon nan.renepitelyòm tubulaires [56]. Ekspresyon nan -catenin nan nivo jèn ak pwoteyin ogmante pandan peryòd yo etidye nanrendevlopman nan 17-DG LP fetis la. Pan et al. rapòte ke Myc kolabore ak -catenin ankouraje renouvèlman an nan selil progenitor nephron [10]. Isit la konpare ak laj-matche pitit NP, LP te montre pi ba ekspresyon c-Myc. Se poutèt sa, bèt sa yo ka gen yon rezèv pi ba nan selil renouvlab ki nesesè pou pwopagasyon ak siviv epi yo ka reflete pi piti kantite nephrons nan modèl LP la. Anplis,
Wnt/-catenin ak chemen siyal Notch yo ka kowòdone règleman ekspresyon Sis-2 epi yo enplike nan downregulation ekspresyon Sis-2 nan selil progenitor nephron yo. Etid yo te demontre ke nivo ki ba nan -catenin ta ka oblije kenbe sis -2 ekspresyon ak selil progenitor CM nan eta a endiferansye; nplis de sa, nivo ki wo nan - catenin detèmine sò selil nefwon an [57, 58]. Kidonk, nou ipotèz ke siyal cMyc ak Notch redwi, akonpaye ak ogmante ekspresyon -catenin, redwi ekspresyon Six-2 pa 28 pousan nan pitit 17-DG LP ak korelasyon ak diferansyasyon selil CM bonè ak selil souch redwi ak nimewo nefwon nan adilt. Anplis, done nou yo ka soutni ke, nan selil MM desandan LP, ekspresyon Let-7a-5p ak -catenin ki ogmante ak siyal Notch redwi ka modile c-Myc, Six-2, ak ekspresyon Ki-67, ki mennen nan yon rediksyon nan renouvèlman pwòp tèt ou nan selil zansèt yo. Rediksyon nan selil CM ki rete yo mennen nan yon rediksyon nan nimewo nefwon ak devlopman nan tansyon wo atè akrenmaladi nan adilt (figi 10). Konfòm ak sa yo ki nan Boivin et al., rezilta nou yo endike ke ogmante CM -catenin deranje kwasans UB ak nefrogenesis [59]. Etid yo montre ke faktè kwasans glial-derived neurotrophic factor (GDNF), yon regilatè enpòtan nan kwasans UB, siyal atravè reseptè a c-Ret tirozin kinaz ak Gfra1 ko-reseptè [60, 61]. Nan 17-desandans DG LP, yon siyifikatif
ogmantasyon nan mRNA kodaj reseptè c-Ret ta teyorikman mennen nan yon ogmantasyon nan kwasans UB. Sepandan, nan etid sa a, ekspresyon GDNF pa t chanje, sa ki sijere ke malgre yon ogmantasyon nan mRNA cRet, branch UB te redwi. Précédemment, nou te obsève yon rediksyon 28.3 pousan nan branch boujon ureterik apre 14.5 jou restriksyon nan pwoteyin jestasyonèl [4], ki ta ka asosye ak yon rediksyon 28 pousan nan etikèt Sis -2 nan selil MM, malgre pa gen okenn chanjman nan GDNF. transkripsyon. -catenin pwobableman kominike ak reseptè c-ret a epi li transpòte nan nwayo selil UB a, ankouraje ekspresyon TGF -1 nan selil epitelyal yo, anpeche branch UB epi lakòz diferansyasyon twò bonè nan selil progenitor CM, jan yo wè nan {{11} }DG LP pitit [62– 64]. Se poutèt sa, GDNF ka pa esansyèl nan medyatè siyal mesenchymal nan boujon ureterik la; sepandan, mekanis la rete yo dwe elisidé. Vreman vre, nou te demontre ke MM ki soti nan 17-desandans DG LP te montre yon ogmantasyon espesifik nan ekspresyon Let-7 miRNA, sa ki lakòz anpil pwoblèm.rendevlopman, kidonk konfime wòl modulation jèn sa yo nan tan devlopman nefrogenesis [65].
Nan premye etid faktè kwasans ki sanble ak ensilin (IGF), wòl dominan IGF-1 ak -2 nan kwasans fetis la te elisid pa prèv abondan, men sitou endirèk. Yo te jwenn IGF yo aji kòm faktè pwopagasyon ak diferansyasyon nan selil fetis kiltive yo ak anbriyon preenplantasyon. Anplis, yo te jwenn IGF yo sekrete pa selil fetis kiltive yo ak eksplant nan vitro [66]. Faktè kwasans, ki gen ladan IGF, ka lakòz yon tranzisyon epithelial-mesenchymal pasyèl oswa konplè. Aktivasyon nan chemen IGF rezilta nan upregulation nan EMT pa pwovoke ekspresyon ZEB1 [67]. Malgre ke plizyè faktè kwasans kandida yo patisipe nanrendevlopman, si yo patisipe nan nefrogenesis se enkoni. Diferan faktè kwasans yo ka bezwen nan diferan moman. Gen kèk faktè kwasans ki ka redondants nan kontèks sa a. Pandan devlopman anbriyon, yo bezwen seri sekans EMT ak MET pou diferansye kalite selil espesyalize yo epi kreye yon estrikti ki genyen twa dimansyon. Nan etid sa a, yo te jwenn entèkonvètibilite mesenchymal-epitelial pou kenbe plastisit selilè, sa ki sijere prezans yon sistèm trè enduzib nan kondisyon LP pou anbriyon an. Ekspresyon fanmi Let-7 miRNA yo te etidye anpil nan divès tisi fetis la. Ogmantasyon nan ekspresyon Let-7 miRNA gen rapò ak pwopagasyon redwi ak ogmantasyon bonè nan diferansyasyon selil MM, ak konsekans, diminye nimewo nefron [27, 15, 68-71]. Pi wo ekspresyon Let-7 yo te demontre nan òganis ki pi wo yo pandan dènye faz anbriojenèz serebral nan wonjè yo [72, 73]. Nagalakshmi et al. te revele ke ekspresyon Let-7 miRNA te chanje sò selil epitelyal UB soti nan precursè nan eta diferansye [71]. Kontrèman, Yermalovich et al. te demontre twòp ekspresyon Lin28b, yon pwoteyin ki konekte RNA, ki asosye ak miRNAs Let-7 suppressive. Malgre ke lin28 ak Let-7 se regilatè yo konnen nan distribisyon ontogenik nan envètebre, wòl sa yo nan devlopman ògàn mamifè yo pa konprann [65]. Nan etid sa a, ogmantasyon nan ekspresyon Let-7a-5p miRNA nan fetis la LP ta ka asosye ak rediksyon pwopagasyon selil CM, konpwomèt nefrogenesis parapò ak gwoup NP la. Kidonk, nou sipoze ke repwesyon pwopagasyon selil CM ak sispansyon bonè nan nefrojenèz ki te koze pa ogmante Let-7 miRNA ka rive dirèkteman oswa endirèkteman atravè ekspresyon Lin28b ki diminye tanporèman nan 17-DG LP. Efè sa a ka afekte anpilrendevlopman nan 17-DG LP, ki konfime ke jèn sa a kontwole tan devlopman pandan nefrogenesis. Nan etid sa a, ogmante ekspresyon Let-7a-5p miRNA kowenside ak yon diminisyon nan ekspresyon c-Myc. Myc patisipe nan pwopagasyon, kwasans, apoptoz, ak diferansyasyon selilè pandanrenorganogenesis [74-76]. Nan desandan LP 17-DG a, ekspresyon jèn MM c-Myc te redwi, epi zòn iminoreaktivite CM c-Myc te 14 pousan pi piti lè yo konpare ak sa ki nan pitit NP. An menm tan, yo te obsève yon diminisyon 14 pousan nan nimewo selil CM pou diminye 48 pousan iminoreaktivite Ki-67 nan LP parapò ak pitit NP la. Toujou, etid yo te montre ke c-Myc jwe yon wòl enpòtan nan faz final la nan branch UB ak nan estimile pwopagasyon selil progenitor CM [74].
CISTANCHE AP AMELIORE RENFEKSYON REN/REN
nivo redwi nan selil souch, kenbe yo nan yon eta endiferansye. Sepandan, nan etid sa a, ekspresyon fò nan Let-7a-5p miRNA nan CM a downregulated ekspresyon c-Myc, kidonk diminye pwopagasyon selil progenitor ak diferansyasyon selil bonè nan LP 17-DG a. pitit (figi 10). Etid sou larensourit transjenik c-Myc revele yon diminisyon similtane nan selil CM iminopozitif c-Myc ak S-ix -2 ki asosye ak pwopagasyon selil souch redwi [74]. Etid sa a montre yon rediksyon enpòtan (28 pousan) nan sis -2 selil pozitif, yon espesifikrenmakè selil souch yo, tankou diminisyon yo obsève nan nimewo nefwon yo, nan CM pitit 17-DG LP a konpare ak pitit NP yo. An 2009, Fogelgren et al. te demontre ke sis-2 ekspresyon jèn diminye pandan ontojenèz fetis la lè yo asosye ak kantite nefwon diminye, tansyon wo, ak kwonik.ensifizans ren[77]. Kidonk, ekspresyon jèn sis -2 redwi nan selil progenitor CM endike siyal diferansyasyon pwovoke pandanrendevlopman nan 17-desandan DG LP yo. Men, redondans yo ta dwe itilize ak prekosyon-defo sibtil nan nefrogenesis ka vin evidan ak analiz pi detaye oswa nan diferan kondisyon. Nivo mRNA IGF1 yo te pi wo pandan peryòd inisyal devlopman metanephric, ak transkripsyon yo te detekte nan tout MM a, tandiske nivo yo te bese pandan plis devlopman. Sepandan, pandanrennbrijenèz, yon balans delika ant faktè kwasans nefwon (IGF1) ak faktè kwasans inhibitory (TGF -1) kontwole branch UB.
Konklizyon
Malgre ke plizyè otè te etidye nephrogenesis [34, 37, 78], yo konnen ti kras sou mekanis yo ki detèmine nimewo nephron. Etid sa a demontre ke anpil miRNAs, mRNAs, ak pwoteyin selil progenitor MM yo chanje nan 17-desandan DG LP la, ki mennen nan pwopagasyon redwi ak diferansyasyon selil bonè (figi 11). Balans delika sa a ant renouvèlman nephron progenitor ak diferansyasyon esansyèl pourendevlopman paske echèk pou reyalize yon kantite adekwat nefron se yon faktè risk pou kwonikrendezòd.
