Aktivite anti-aje in vitro nan ekstrè etanòl ki soti nan Pink Rambutan (Nephelium Lappaceum Linn.) Pou aplikasyon pou po Pati 1

abstrè

Aje po karakterize pa karakteristik tankou ondilasyon, pèt elastisite, laksite, aparans ki graj teksti, melasma, ak tach. Plizyè kalite rechèch te konsantre sou anpeche ak trete aje po ak anpil engredyan natirèl. Etid sa a te vize evalye aktivite anti-aje pou aje anti-po nan ekstrè etanolik nan Pink rambutan (PR) (Nephelium lappaceum Linn.) soti nan fèy (L), branch (B), grenn (S), ak kale soti nan fwi mi (R) ak jèn (Y). Rendeman ekstraksyon nan tout Pink Rambutan (PR) ekstrè pa Maceration (M) ak ekstraksyon Soxhlet (Sox) lè l sèvi avèk 95 pousan etanòl kòm sòlvan, te varye ant 10.62 pousan rive 30 .63 pousan . Flavonoid yo te jwenn kòm phytochemicals prensipal yo nan prèske tout ekstrè PR yo. Ekstrè PR-YM ak PR-Y-Sox yo te bay pi gwo kontni fenolik total pa tès Folin-Ciocalteu nan 67.60 ± 4.38 mgGAE/g, ak kontni total flavonoid pa analiz kolorimetrik klori aliminyòm modifye 678.72 ±. 23.59 mgQE/g, respektivman. Ekstrè PR-LM yo te montre twa aktivite antioksidan ki pi wo yo; elimine radikal lib (SC50 nan 0.320 ± 0.{{40}}70 mg/mL) , anpèchman peroksidasyon lipid (LC5 0 nan 0.274 ± 0.029 mg / mL), ak aktivite chelation metal (MC50 nan 0.203 ± 0.021 mg / mL). Tout ekstrè PR yo nan 0.01 ak 0.1 mg / mL pa te montre okenn sitotoksisite sou selil B16F10, ak fibroblast po moun, respektivman. Menm jan an tou, ekstrè nan PR-R-Sox ekspoze pi wo a anti-melanogenesis sou selil B16F10 (52. 7 ± 0.9 pousan), epi, aktivite a anpèchman djondjon tirosinaz (IC50 nan 0.04 ± 0.02 mg/mL), ki te siyifikativman konparab ak asid kojik (p <0.05). Ekstrè PR-Y-Sox la te montre byosentèz kolagen an pa metòd Sirius Wouj la, ak eksitasyon jèn anti-aje (Sirt1 ak Foxo1) sou fibroblasts po moun pa metòd RT-PCR, ki te sanble ak estanda ʟ-ascorbic asid ak resveratrol, respektivman. Etid sa a sijere ke PR-R-Sox ak PR-Y-Sox ekstrè yo ka devlope plis kòm ajan natirèl anti-aje pou blanchi ak anti-rid nan pwodui kosmetik, kosmetik, ak endistri pharmaceutique. 2023 Otè a (yo). Pibliye pa Elsevier BV sou non King Saud University.

Glycoside nan cistanche ka ogmante tou aktivite SOD nan kè ak tisi fwa, ak siyifikativman redwi kontni an nan lipofuscin ak MDA nan chak tisi, efektivman scavenging divès kalite radikal oksijèn reyaktif (OH-, H₂O₂, elatriye) ak pwoteje kont domaj ADN ki te koze. pa OH-radikal. Cistanche phenylethanoid glikozid gen yon gwo kapasite scavenging nan radikal gratis, yon pi wo kapasite diminye pase vitamin C, amelyore aktivite a nan SOD nan sispansyon espèm, redwi kontni an nan MDA, epi yo gen yon sèten efè pwoteksyon sou fonksyon manbràn espèm. Cistanche polisakarid ka amelyore aktivite SOD ak GSH-Px nan eritrosit ak tisi nan poumon sourit eksperimantal senesan ki te koze pa D-galaktoz, osi byen ke diminye kontni an nan MDA ak kolagen an nan poumon ak plasma, ak ogmante kontni an nan elastin, gen yon bon efè scavenging sou DPPH, pwolonje tan an nan ipoksi nan sourit senesan, amelyore aktivite a nan SOD nan serom, ak retade koripsyon fizyolojik nan poumon nan sourit senesan eksperimantal Avèk koripsyon selilè mòfolojik, eksperyans yo te montre ke Cistanche gen bon kapasite antioksidan. epi li gen potansyèl pou yo dwe yon dwòg pou anpeche ak trete maladi po aje. An menm tan an, echinacoside nan Cistanche gen yon kapasite enpòtan pou elimine radikal gratis DPPH epi li gen kapasite pou elimine espès oksijèn reyaktif epi anpeche degradasyon kolagen an radikal gratis, epi tou li gen yon efè reparasyon bon sou domaj anyon radikal gratis timin.

Klike sou Ki kote mwen ka achte Cistanche

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

1. Entwodiksyon

Globalman, popilasyon ki aje nan mond lan ap grandi pi vit pase tout lòt gwoup laj yo. Òganizasyon Mondyal Lasante te estime ke popilasyon mondyal la ki gen plis pase 60 ane ak plis ta dwe 2.1 milya dola nan 2050, epi yo pral fè fas ak kondisyon komen ki gen ladan artroz, dyabèt, pèt tande, maladi alzayme, maladi kwonik obstriktif poumon (COPD), depresyon ak demans. , kansè, ak maladi newolojik ak kadyovaskilè (Darawsha et al., 2021, WHO, 2021). Po se youn nan ògàn ki pi vizib pandan pwosesis aje. Aje po gen rapò ak kominikasyon sosyal paske bon aparans fè yon enpresyon favorab ak amelyore konfyans nan tèt yo. Aje po afekte pa faktè anviwònman oswa ekstèn tankou polyan lè, ksenobiotik, radyasyon UV, ak fimen, ak pa faktè entèn tankou jenetik, metabolis selilè, òmòn, ak pwosesis metabolik (Darawsha et al., 2021). Anpil resan kalite rechèch yo te konsantre sou kenbe po an sante nan ranvwaye, anpeche, ak trete aje amelyore aparans po a nan rejenerasyon ak enteresan pwosesis natirèl fizyolojik pwoteje po a kont aje.

Espès oksijèn reyaktif (ROS) ki soti nan estrès oksidatif selilè ka lakòz endiksyon lanmò selil apoptotik pa deklanchman pwosesis enflamatwa ak chemen siyal yo, ogmante nivo metaloproteinaz (MMP), degradasyon lipid enstore, ak chanje estrikti fibrilè. pwoteyin ki gen ladan kolagen ak elastin ki akòz aje po a (Miastkowska and Sikora, 2018, Darawsha et al., 2021). Apre melanogenesis, melanin se yon pigman polifenolik ki pwodui nan melanosom melanosit ki sitiye nan je bèt yo, cheve, ak po, epi ki ka pwoteje po a domaje nan radyasyon iltravyolèt (Ali and Naaz, 2018). Tirozinaz se anzim ki gen kwiv, ki ka transfòme L-tirosin an L-dopa ak L-dopa an odopaquinone-H plis pa idroksilation ak reyaksyon oksidasyon, ak Lè sa a, pase nan entèmedyè finalman nan melanin (Solano, 2018). ROS la tou jwe yon wòl enpòtan nan règleman an nan estrès oksidatif selilè nan melanosit ki se selil dendritik ki lokalize nan kouch fondamantal nan epidèm nan po a. Medyatè enflamatwa yo nan po a tankou interleukin (IL), prostaglandin E2, faktè nekwoz timè, ak entèferon-gama ki sitou sekrete pa selil Th, lenfosit, selil dendritik, ak monosit, kontwole aktivite tirozinaz enteresan ak regilasyon TYRP{{11 }} ak ekspresyon TYRP-2 ak pwomosyon pwopagasyon melanosit ki gen rapò ak pwodiksyon melanin (Fu et al., 2020). Sepandan, twòp pwodiksyon ak gwo akimilasyon melanin lakòz aje po tankou melasma, freckles, tach nwa, lentigo, ak maladi ipèpigmantasyon, ki ka estetik endezirab (Ali ak Naaz, 2018).

Sirtuin yo se nikotinamid nikleyè adenin dinukleotide (NAD plis)-depandan klas III histone deacetylase ki kontwole senesans selilè ak apoptoz, ak kwasans selil pa kontwole p53, faktè transcription forkhead (FOXOs), ak peroxisome proliferator-aktive reseptè gama (PPAR-c) ki enplike règleman metabolis, diferansyasyon selilè, siviv, ak aje. (Son et al., 2021). SIRT1, SIRT6, ak raman SIRT7 nan fanmi sirtuin yo te reglemante pou pwoblèm dèrmatolojik, tankou enflamasyon po, enfeksyon nan po, kansè, maladi otoiminitè, maladi dèrmatolojik eritye, espesyalman aje po (Son et al., 2021). Osi byen, FOXO1 se yon faktè transcription ki sitiye nan sitoplasm la. SIRT1 deacetylates FOXO1 ak aktive transkripsyon FoxO1 la nan plizyè chemen tankou MAPK (pwoteyin kinaz aktive mitogen), pwoteyin kinaz (AKT), ak pankreyas ak duodnal homeobox-1 (Pdx1) chemen (Sin et al., 2015) . Ogmantasyon ekspresyon mRNA Sirt1 ak Foxo1 kontwole metabolis glikoz, reparasyon ADN, neropwoteksyon, diferansyasyon, pwoteksyon vaskilè, ak sekresyon ensilin; ak diminye aje ak maladi ki gen rapò ak laj tankou estrès oksidatif, senesans selilè, neurodegeneration, enflamasyon, rezistans ensilin, maladi kadyovaskilè, adiposite, ak steatoz fwa osi byen ke aje po (Son et al., 2021).

Lwa 1940 sou famasetik (dwòg) ak pwodui kosmetik defini yon dwòg kòm ''tout medikaman pou itilizasyon entèn oswa ekstèn pa èt imen oswa bèt, ak tout sibstans ki gen entansyon itilize pou, oswa nan dyagnostik, tretman, alèyman, oswa prevansyon. nenpòt maladi oswa dezòd nan imen oswa bèt." Kosmetik se nenpòt atik ki gen entansyon fwote, vide, vide, oswa flite sou, prezante nan, oswa aplike nan nenpòt pati nan kò imen an pou netwaye, anbeli, ankouraje atirans, oswa chanje. aparans, epi li gen ladan nenpòt atik ki gen entansyon itilize kòm yon eleman nan kosmetik. Cosmeceuticals se ibrid kosmetik-famasetik ki gen entansyon amelyore sante ak bote atravè engredyan ki enfliyanse teksti byolojik ak fonksyon po a (Joshi and Pawar, 2015). Kounye a, anti-aje. pwodui kosmetik, pwodui kosmetik, ak pharmaceutique gen ladan konpoze aktif ki netralize radikal gratis tankou vitamin E, vitamin C, glutatyon, ak coenzyme Q10; ak retade aje po a soti nan ondilasyon ak melasma tankou asid nikleyik, idrolysat pwoteyin, ekstrè alg, lwil plant, fitohormone. , cytokines, ak neuropeptides (Kim et al., 2015, Miastkowska and Sikora, 2018), osi byen ke polifenol ak flavonoid ki soti nan divès kalite ekstrè plant natirèl tankou ekstrè yo nan Vigna soutèren, Stichopus japonicus, Citrus aurantifolia, Ananus comosus, ak esculenta (Chutoprapat et al., 2020; Ding et al., 2020 Boonpisuttinant et al., 2022, Jampa et al., 2022).

Pink rambutan oswa Ngo See Chom Pu (Nephelium lappaceum L.) se yon plant ki soti nan fanmi Sapindaceae, ki se plant endijèn nan distri Klung, pwovens Chanthaburi, nan pati lès Thailand. Fwi woz rambutan (PR) yo dous epi yo gen yon bon gou. Yo gen yon kale mens ak yon krout jòn-woz ak yon kolòn vètebral limyè-woz ak yon pwent limyè vèt, ki diferan de lòt espès yo tankou Ngo Rongrien ak Ngo Nasarn, ki gen koulè wouj limyè ak epin. Fitochimik prensipal yo jwenn nan plant rambutan yo se asid ellajik, korilagin, geraniin, quercetin, ak rutin (Phuong et al., 2019, Phuong et al., 2020). Li te deja rapòte ke detach yo nan rambutan ki soti nan lòt espès yo te jwenn yo gen yon wo nivo nan konpoze fenolik epi yo gen anpil aktivite byolojik tankou DPPH radikal scavenging, anti-enflamatwa, antiviral, antikansè, ak anti-bakteri (Chingsuwanrote et al. ., 2016; Hernández-Hernández et al., 2019; Rohman, 2017; Sukmandari et al., 2017; Thitilertdecha ak Rakariyatham, 2011). Sepandan, ekstrè rambutan woz yo pa gen okenn rapò syantifik pou aktivite byolojik, espesyalman aktivite anti-aje pou sante po ak rezon ayestetik. Se poutèt sa, etid aktyèl la te vize evalye ak evalye potansyèl la nan ekstrè PR nan aplikasyon pou po nan pwodui kosmetik, pwodui kosmetik, ak edikaman. Envestigasyon yo nan aktivite biyolojik in vitro anti-aje ki gen ladan anpèchman tirozinaz ak antimelanogenesis la, byosentèz kolagen an, ak eksitasyon ekspresyon Sirt1 ak Foxo1 mRNA, ak twa aktivite anti-oksidatif ak sitotoksisite sou fibroblasts po imen, endike efikasite nan. ak sekirite nan ekstrè yo PR ki ka plis devlope nan pwodwi natirèl swen pou po.

2. Materyèl ak metòd

2.1. Preparasyon ak ekstraksyon

Yo te ranmase senk pati nan Pink rambutan (PR) ki gen ladan fèy (L), branch (B), grenn (S), ak po ki soti nan fwi mi (R) ak jèn (Y) nan Klung District, Chantaburi, Thailand soti nan mwa jen rive. Out 2017. Yo te idantifye espesimèn bon yo pa yon botanist nan èrbyòm Forest nan Thailand epi anrejistre nan èrbyòm (Kòd: RSPG-RMUTT-0102) nan pwodwi natirèl inovatè ki soti nan Thai Wisdom Research Unit, Fakilte Medsin Integrative, RMUTT. , Pathum Thani, Thailand. Tout pati yo nan rambutan woz la te koupe, lave ak dlo tiyo, seche nan 60 degre nan yon dife pou chofe fou a lè cho, ak tè nan poud lè l sèvi avèk yon moulen. Tout pati nan rambutan woz yo te ekstrè pa Maceration ak Soxhlet ekstraksyon lè l sèvi avèk etanòl 95 pousan kòm yon sòlvan, ki se pi souvan itilize pou fè ekstraksyon nan plant medsin paske li an sekirite ak ekonomik. Yon ti tan, 10 g nan chak nan PR poud yo te ekstrè pa (1): Maceration a (M) nan 100 mL nan 95 pousan (v / v) etanòl (Bangkok Alkòl Endistriyèl, Thailand) ak souke a nan 200 rpm nan tanperati chanm. (25 ± 2 degre) pou 48 h; ak (2): ekstraksyon Soxhlet la (Sox) ak 100 mL nan 95 pousan (v/v) etanòl nan 80 ± 5 degre C pou 24 h. Apre sa, ekstrè yo te premye filtre nan lenn mouton ak Lè sa a, pase nan yon papye filtre ki konekte nan yon ponp vakyòm. Filtrate yo te kolekte, pisin, epi sèk pa yon evaporator rotary. Ekstrè brit PR yo te kenbe nan boutèy an vè epi estoke nan 4 degre nan frijidè a jiskaske yo itilize. Rendeman ekstraksyon yo te pote soti sou yon baz pwa sèk. 95 pousan etanòl la te itilize kòm yon sòlvan pou fonn ekstrè PR yo anvan eksperyans yo.

2.2. Phytochemicals, total phenolics ak flflavonoids, ak quercetin sa ki nan liv

Fitochimik tankou anthraquinones, alkaloid, karotenoid, glikozid, flavonoid, tanen, ak xanthones nan ekstrè PR yo te envestige jan yo dekri deja (Boonpisuttinant et al., 2022). Rezilta kalitatif yo eksprime kòm (plis) pou prezans ak (-) pou absans fitochimik. Kontni fenolik total (TPC) yo te teste pa tès Folin-Ciocalteu jan yo dekri deja (Boonpisuttinant et al., 2022). Yon ti tan, yo te ajoute 50 lL ekstrè PR yo, 75 lL reyaktif Folin-Ciocalteu (Sigma-Aldrich, USA), ak 75 lL 7.5 pousan (w/v) Na2CO3 (Loba Chemie, peyi Zend) nan yon {{13} }byen microplate, dousman melanje, ak Lè sa a, enkube nan tanperati chanm nan yon kote ki fè nwa pou 90 min. Apre sa, yon lektè microplate te mezire absorpsyon yo nan longèdonn 725 nm. Kontni fenolik yo te kalkile nan koub estanda asid galik (Sigma-Aldrich, USA). Rezilta yo te pote soti kòm mg nan ekivalan asid galik (GAE) / g nan ekstrè.

Kontni total flavonoid (TFC) pa metòd klori aliminyòm modifye te teste apre Shraim et al. (2021). Yon ti tan, yo te ajoute 50 lL nan ekstrè PR yo, 25 lL nan 10 pousan AlCl3 (BDH Prolabo Chemicals, Bèljik), ak 100 lL nan 5 pousan NaNO2 (Loba Chemie, peyi Zend) nan yon 96-byen microplate. Apre 5 min enkubasyon, plak yo te ajoute 25 lL nan 1 M NaOH (BDH Prolabo Chemicals, Bèljik). Yo te pèmèt reyaksyon an enkubasyon nan tanperati chanm pou 10 minit. Apre sa, yon lektè microplate te mezire absorpsyon yo nan longèdonn 450 nm. Kontni flavonoid yo te kalkile nan koub estanda quercetin (Sigma-Aldrich, USA). Rezilta yo te pote soti kòm mg nan ekivalan Quercetin (QE) / g nan ekstrè.

Kontni quercetin nan ekstrè PR yo te envestige pa metòd HPLC (Shaikh and Jain, 2018). Yon ti tan, yo te fonn yon kantite kercetin estanda ki te peze avèk presizyon nan metanol nan yon flacon volumetrik 100 mL, pou jwenn yon solisyon stock 1,000 lg/mL. Solisyon estanda yo te imedyatman 2-pliye seri dilye a 3.125 mg/mL. Pou preparasyon echantiyon, yo te fonn 2.5 g ekstrè yo nan 25 mL metanol nan 25 mL flakon volumetrik la pou jwenn 1,000 mg/mL. Tout analiz yo te fèt sou yon sistèm HPLC Agilent 1260 infinity (Waters, Milford, MA, USA) ekipe ak yon detektè etalaj fotodyòd. Kolòn analyse yo itilize se yon kolòn Agilent Zorbax pwolonje C18 (5l × 100 mm × 4.6 mm) ak yon faz mobil metanol: 0.1 pousan asid ortofosfò (75:25) nan yon pousantaj koule 0.6 mL / min. Tanperati kolòn nan te kenbe nan 25 degre ak longèdonn deteksyon an te mete nan 370 nm. Tout solisyon ak solvang yo te filtre nan yon filtè 0.22 lm ak degaze. Volim piki echantiyon an te 10 lL, ak tan an kouri te 8 min.

2.3. Aktivite antioksidan

2.3.1. Aktivite gratis radikal scavenging

Se Boonpisuttinant et al., aktivite scavenging radikal gratis ekstrè PR yo te teste pa metòd 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). (2019). Yo te ajoute yon kantite 100 lL nan ekstrè PR yo oswa asid ʟ-ascorbic (Sigma-Aldrich, USA) kòm kontwòl pozitif ak 100 lL nan 0.1 mg/mL solisyon DPPH (Sigma-Aldrich, USA) nan etanòl absoli. 96 byen microplate. Apre enkubasyon nan tanperati chanm nan yon kote ki fè nwa pou 30 min, yo te mezire absorpsyon yo nan longèdonn 515 nm lè l sèvi avèk yon lektè mikroplak. Pousantaj aktivite DPPH radikal scavenging yo te kalkile dapre fòmil sa a:

pousan aktivite DPPH pou netwaye radikal {{0}}[A0 -A1/A0]×100 (1)

Kote A0 se absorbans kontwòl la ak A1 se absòbe echantiyon yo genyen. Lè sa a, konsantrasyon yo bay 50 pousan scavenging (SC50) yo te kalkile nan graf ki trase ant pousan nan scavenging radikal gratis ak konsantrasyon echantiyon yo.

2.3.2. Anpèchman peroksidasyon lipid

Anpèchman peroksidasyon lipid nan ekstrè PR yo te teste pa metòd Ferric-thiocyanate Boonpisuttinant et al. (2019). Yo te ajoute yon kantite 50 lL nan ekstrè PR oswa a-tokoferol (Sigma-Aldrich, USA) kòm kontwòl pozitif ak 50 lL asid linoleik nan 50 pousan (v/v) DMSO (Sigma-Aldrich, USA) nan yon. 96 byen microplate. Reyaksyon an te inisye pa adisyon 50 lL nan 5 mM NH4- SCN ak 50 lL nan 2 mM FeCl2. Apre enkubasyon nan 37 degre nan yon kote ki fè nwa pou 60 min, yo te mezire absorbances yo nan yon longèdonn 490 nm lè l sèvi avèk yon lektè microplate. Pousantaj nan anpèchman peroksidasyon lipid yo te kalkile dapre fòmil sa a:

Kote A0 se absorbans kontwòl la ak A1 se absòbe echantiyon yo genyen. Konsantrasyon yo bay 50 pousan nan anpèchman peroksidasyon lipid (LC50) yo te kalkile nan graf ki trase ant anpèchman an peroksidasyon lipid pousan ak konsantrasyon echantiyon yo.

2.3.3. Chelation metal

Chelation an metal nan ekstrè PR yo te teste pa metòd la chelating ion ferrous (FIC) pa Boonpisuttinant et al. (2019). Yo te ajoute yon kantite 50 lL ekstrè PR oswa EDTA (Loba Chemie, peyi Zend) kòm kontwòl pozitif, 1 mg/mL FeCl2, ak 50 lL 1 mg/ml ferrozine nan 1 pousan HCl (TCI, USA). yon microplate 96 byen. Apre enkubasyon nan tanperati chanm nan yon kote ki fè nwa pou 60 min, yo te mezire absorpsyon yo nan longèdonn 570 nm lè l sèvi avèk yon lektè microplate. Pousantaj metal chelation yo te kalkile dapre fòmil sa a:

Kote A0 se absorbans kontwòl la ak A1 se absòbe echantiyon yo genyen. Konsantrasyon ki bay 50 pousan chelation metal (MC50) yo te kalkile nan graf ki trase ant chelation metal pousantaj ak konsantrasyon echantiyon yo.

2.4. Anpèchman tirozinaz djondjon

Aktivite anpèchman tirozinaz djondjon ekstrè PR yo te teste pa metòd dopachrome modifye (Boonpisuttinant et al., 2022). Yon kantite 50 lL nan ekstrè PR yo oswa asid kojik (Sisco Research Laboratories (SRL), peyi Zend) kòm kontwòl pozitif, 50 lL nan 0.1 mg/mL L-tirozin (Sigma- Aldrich, USA), yo te ajoute 50 lL nan 0.1 mM tanpon fosfat, ak 50 lL nan 0.1 mg/mL djondjon tirozinaz (Sigma-Aldrich, USA) yo te ajoute nan yon 96-byen microplate. Anvan ak apre enkubasyon nan 37 degre C nan yon kote ki fè nwa pou 60 min, yo te mezire absorbances yo nan longèdonn 450 nm lè l sèvi avèk yon lektè microplate. Pousantaj yo nan anpèchman tirozinaz djondjon yo te kalkile dapre fòmil sa a:

pousan anpèchman tirozinaz djondjon=[(A - B)-(C - D)]/=(A - B)×100 (4)

Ki kote A se absorpsyon nan vid la apre enkubasyon, B se absòsyon nan vid la anvan enkubasyon, C se absòsyon nan echantiyon yo apre enkubasyon, ak D se absòsyon nan echantiyon yo anvan enkubasyon. Konsantrasyon yo ki bay 50 pousan anpèchman tirozinaz (IC50 mg/mL) yo te kalkile nan graf ki trase ant anpèchman an tirozinaz pousan ak konsantrasyon echantiyon yo.

2.5. In vitro aktivite anti-aje sou kilti selil yo

2.5.1. Kilti selil yo

Melanom murin (B16F10) ak fibroblast po moun yo te itilize pou mennen ankèt sou anti-melanogenesis, byosentèz kolagen an, ak anti-aje ekspresyon mRNA Sirt1 ak Foxo1, respektivman. De selil sa yo te jwenn nan American Type Culture Collection (ATCC), Virginia, USA. Selil yo te kiltive nan Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) (Sigma-Aldrich Biotechnology, St. Louis, MO, USA) complétée ak 10 pousan serom fetal bovine (FBS) (Sigma-Aldrich Corporation, St. Louis, MO, USA). ), 100 IU/ml penisilin ak 100 mg/mL streptomycin (Gibco BRL, Gaithersburg, USA) nan kondisyon estanda yo nan 37 C anba enkibatè CO2 5 pousan anvan eksperyans yo.

2.5.2. Tès sitotoksisite sou fibroblast po moun

Konsantrasyon divès kalite ekstrè PR yo te envestige pou sitotoksisite sou melanom murin yo (B16F10) ak fibroblast po moun pa 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl la). )-2,5-diphenyl tetrazolyum bromur (MTT) assay jan Boonpisuttinant et al. (2022). Fibroblast po imen yo nan dansite 1 × 104 selil pou chak pi yo te plake nan plak 96-byen, ajiste volim nan 180 lL ak DMEM a, epi enkubasyon nan 37 degre anba yon atmosfè 5 pousan CO2 pou 24 èdtan. Lè sa a, ekstrè yo nan divès konsantrasyon yo te ajoute. Selil yo te enkube nan 37 degre C anba yon atmosfè 5 pousan CO2 pou 24 èdtan. Apre sa, selil yo te lave ak 10 mM PBS nan pH 6.8 pou 3 fwa epi li te ajoute 1 mL nan 0.5 mg / mL nan solisyon MTT te (Sigma-Aldrich, USA). Apre enkubasyon nan tanperati chanm pou 3 èdtan, yo te retire solisyon MTT, epi yo te ajoute 100 lL dimethyl sulfoxide (DMSO) nan chak pi. Plak yo te dousman souke nan 200 rpm pou 15 min. Absorbans yo nan longèdonn 570 nm nan solisyon yo te mezire lè l sèvi avèk yon lektè microplate. Pousantaj yo nan viabilite selil yo te kalkile dapre fòmil sa a:

Ki kote Acontrol se absorpsyon kontwòl la ak yon echantiyon se absorpsyon echantiyon yo.

2.5.3. Anti-melanogenesis sou selil B16F10

Anti-melanogenesis sou selil B16F10 nan ekstrè PR yo te egzamine lè l sèvi avèk metòd ki te dekri deja pa Boonpisuttinant et al. (2022). Selil B16F10 yo nan dansite 2.5×105 selil pou chak pi yo te simen nan 6-plak byen epi yo te enkube a 37 degre anba yon atmosfè 5 pousan CO2 lannwit lan. Ekstrè yo nan yon konsantrasyon nan 0.01 mg / mL Lè sa a, yo te ajoute. Asid kojik te itilize kòm yon kontwòl pozitif. Selil yo te enkube a 37 degre anba yon atmosfè 5 pousan CO2 pou 72 èdtan. Apre sa, supernatant yo te kolekte nan tib mikwofij pwòp yo, tandiske selil yo te lave ak 10 mM Phosphate Buffer Saline (PBS) nan pH 6.8 pou 3 fwa, fonn nan 200 lL nan 10 pousan NaOH, ak enkubasyon nan 60 degre 1 h. . Absorbans yo nan longèdonn 450 nm nan supernatant yo ak lisat selil yo te mezire lè l sèvi avèk yon lektè microplate. Pousantaj kontni melanin yo te kalkile dapre fòmil sa a:

2.5.4. Byosentèz kolagen an sou fibroblast po moun

Byosentèz kolagen an nan ekstrè PR yo te egzamine kòm metòd ki dekri deja pa Boonpisuttinant et al. (2022). Fibroblast po imen yo nan yon dansite 5 × 105 selil pou chak pi yo te simen nan 6-plak byen epi yo te enkube a 37 degre anba yon atmosfè 5 pousan CO2 lannwit lan. Lè sa a, yo te ajoute ekstrè yo nan yon konsantrasyon 0.1 mg/mL. ʟ-ascorbic asid te itilize kòm yon kontwòl pozitif. Selil yo te enkube a 37 degre anba yon atmosfè 5 pousan CO2 pou 24 èdtan. Apre sa, selil yo te lave ak 10 mM PBS nan pH 6.8 pou 3 fwa, ajoute 1 mL nan 0.1 pousan (w/v) solisyon wouj Sirius (Sigma-Aldrich, USA) nan asid pikrik satire (Sisco Research Laboratories (SRL). ), peyi Zend), ak Lè sa a, enkube nan tanperati chanm pou 1 èdtan. Yo te retire lank la, epi yo te lave plak yo ak 1 mL 10 mM HCl (Merck Millipore, Almay) 5 fwa. Lè sa a, selil yo te fonn lè yo ajoute 1 mL 0.1 M NaOH. Absorbans yo nan longèdonn 450 nm nan supernatant yo ak lisat selil yo te mezire lè l sèvi avèk yon lektè microplate. Pousantaj kantite kolagen an te kalkile dapre fòmil sa a:

Ki kote, Csample te kontni kolagen an nan echantiyon yo, ak Ccontrol te kontni an kolagen an nan kontwòl la.

2.5.5. Stimulasyon jèn anti-aje sou fibroblast po moun

Eksitasyon an nan jèn anti-aje (Foxo1 ak Sirt1) nan ekstrè yo PR yo te detèmine pa RT-PCR la jan yo dekri deja pa Polouliakh et al. (2020). Fibroblast po imen yo nan dansite 5 × 105 selil pou chak pi yo te simen nan 6-plak byen enkubate a 37 degre C anba yon atmosfè 5 pousan CO2 lannwit lan. Ekstrè yo nan konsantrasyon nan 0.01 mg / mL yo te Lè sa a, te ajoute. Apre enkubasyon pou 24 èdtan, RNA total la te ekstrè ak NucleoSpin RNA Plus (Macherey Nagel, Dueren, Almay) dapre enstriksyon manifakti a. Kantite RNA total la te mezire pa fliyomèt Qubit 2.0 (Invitrogen, Massachusetts, USA.). Jadendanfan espesifik pou RT-PCR ki gen ladan Foxo1, Sirt1, ak b-aktin yo te achte nan Macrogen Oceania, Ostrali. Yo te swiv sekans primè espesifik yo; Foxo1: 5′ -GAC GCC GTG CTA CTC GTT-3′(Avant) ak 5′-CGG TTC ATA CCC GAG GTG-3′(Reverse); Sirt1: 5′ -TAG CCT TGT CAG ATA AGG AAG GA-3′(Avant), 5′ -ACA GCT TCA CAG TCA ACT TTG T-3′ (Anvers); ak b-aktin: 5′ TCA TGC AGT GTG ACG TTG ACA TCC GT -3′ (Anvan), 5′ -CCT AGA AGC ATT TGC GGT GCA CGA TG -3′ (Reverse). Melanj PCR yo te genyen 1x SuperScriptTM III One-Step RT-PCR System ak PlatinumTM Taq DNA Polymerase Supermix (Invitrogen, Massachusetts, USA.), 250 nM primè espesifik, ak 2 lg RNA. Tout reyaksyon RT-PCR yo te fèt sou TProfessional Basic Gradient 070–601 (Biometra GmbH, Göttingen, Almay) nan kondisyon anplifikasyon: 60 degre C 30 min pou transcription ranvèse; Lè sa a, 40 sik nan 94 degre pou 15 s nan denaturasyon, 55 degre C pou 30 s nan recuit, ak 68 degre pou 30 s nan ekstansyon; epi finalman nan 68 degre C pou 5 min. Apre pwosesis RT-PCR yo, yo te separe pwodwi PCR yo sou yon jèl agaroz 1.5 pousan melanje ak Novel Juice 6x DNA Loading Buffer (GeneDireXTM, Lachin), yo wè ak yon transilluminator, ak Lè sa a, foto lè l sèvi avèk Quantity One 4.6.8 (debaz) (Bio-Rad Laboratories, Inc., Kalifòni). Imedyatman, dansite gwoup la te quantifye lè l sèvi avèk Imaj J (Vèsyon 1.47, Enstiti Nasyonal Sante, Bethesda, MD, USA), e li te nòmalize nan jèn nan antretyen, b-aktin.

2.6. Analiz estatistik

Tout eksperyans yo te eksprime kòm mwayèn ± devyasyon estanda (SD) nan eksperyans endepandan yo (n {{0}}). Diferans estatistik yo te analize pa ANOVA ak tès Tukey (p <0.05). Relasyon ki genyen ant byoaktivite yo te teste pa koyefisyan korelasyon Pearson la.

3. Rezilta yo

3.1. Ekstraksyon pwodiksyon an, karakteristik fizik, ak sa ki fitochimik nan ekstrè PR yo

Rendeman ekstraksyon, karakteristik fizik, ak kontni fitochimik nan ekstrè PR yo te ekspoze nan Tablo 1. Rendeman ekstraksyon ekstrè PR yo te varye ant 10.62 pousan ak 30.63 pousan. Konpozan phytochemical prensipal yo nan ekstrè PR yo te flavonoid. Eksepsyonèl, ekstrè rambutan woz ki soti nan grenn (PR-SM ak PR-S-Sox) pa t gen flavonoid men yo te montre sèlman glikozid kòm fitochimik yo. Se sèlman, ekstrè yo PR ki soti nan detach yo mi ak jèn pa Maceration (M) te montre prezans nan xanthones, ki se yon polifenol chalè-labile. Anplis de sa, pwodiksyon an ekstraksyon nan ekstrè PR yo pa ekstraksyon Soxhlet (Sox) te sanble pi wo pase Macerasyon (M).

3.2. Total fenolik (TPC), flavonoid (TFC), ak quercetin sa ki nan ekstrè PR yo

Ekstrè PR a soti nan kale nan jèn fwi pa Macerasyon an (PRY-M) te bay pi gwo kontni fenolik total pa tès FolinCiocalteu nan 67.60 ± 4.38 mgGAE/g, pandan y ap ekstrè PR a soti nan kale nan jèn fwi pa la. Ekstraksyon Soxhlet (PR-Y-Sox) te bay pi gwo kontni flavonoid total pa analiz kolorimetrik klori aliminyòm modifye nan 678.72 ± 23.59 mgQE/g (figi 1) (p <{24}}.05). Sepandan, PR-BM, PR-SM, ak PR-S-Sox ekstrè yo pa montre okenn kontni fenolik. Li te revele ke tout ekstrè PR yo te demontre kontni quercetin detèmine pa analiz HPLC. Anplis de sa, ekstrè PR a soti nan kale fwi mi pa Maceration (PR-RM) te bay pi gwo kontni quercetin nan 190.10 ± 0.28 lg / mL. (figi 2).

3.3. Antioksidan ak aktivite anpèchman tirozinaz djondjon nan ekstrè yo PR

Tablo 2 demontre twa aktivite anti-oksidatif yo, ki gen ladan aktivite scavenging radikal gratis pa metòd DPPH, anpèchman peroksidasyon lipid pa metòd Ferric-thiocyanate; chelation metal la pa metòd la FIC; ak anpèchman tirozinaz djondjon nan ekstrè PR yo. Pifò nan ekstrè PR yo eksepte ekstrè PR-LM, PR-BM, ak PR-S-Sox yo te montre aktivite siperyè radikal gratis ak ranje SC5{{10}} 0.{ {18}}23 – {{20}}.045 mg/mL, ki te konparab ak estanda asid ʟ-ascorbic (SC50 nan 0. 036 ± 0.{{40}}{03 mg/mL) nan p < 0.05. Anplis de sa, ekstrè PR-LM la te montre pi gwo anpèchman peroksidasyon lipid la ak LC5 0 nan 0.274 ± 0.029 mg/mL, ak aktivite chelation metal la ak MC50 la. nan 0.203 ± 0.021 mg / mL, ki te konparab ak estanda a-tokoferol (LC50 nan 0.122 ± 0.015 mg / mL) ak EDTA (MC50 nan 0.518 ± 0.034 mg / mL), respektivman (p <0.05). Tout ekstrè PR yo demontre aktivite anpèchman djondjon tirozinaz la, pandan y ap ekstrè PR-R-Sox la te montre aktivite ki pi wo a ak IC50 nan 0.04 ± 0.02 mg/ml, ki te konparab ak asid kojik estanda (IC50 nan 0.02 ± 0.01 mg). /ml) (p <0.05).

3.4. Sitotoksisite nan ekstrè PR yo

Fig. 3 showed the cytotoxicity on the B16F10 cells (A) human skin fibroblasts by the MTT assay of the PR extracts. All of the PR  extracts at the concentrations of 0.01 and 0.1 mg/mL had no cytotoxicity on the B16F10 cells and human skin fibroblasts, respectively since they gave>80 pousan rantabilite relatif konpare ak gwoup la ki pa trete. Malgre sa, konsantrasyon ki pi wo nan tout ekstrè PR yo te konsidere kòm sitotoksik sou selil sa yo. Konsantrasyon ki pi wo pase sa yo ki nan 1 mg / ml pa te teste depi li pa t 'kapab konplètman fonn nan sòlvan an.

3.5. Anti-melanogenesis nan ekstrè yo PR

In this study, there is a screening method from many samples,  therefore we highlight only the highest concentration that had no cytotoxicity on both cells and might have the highest anti-melanogenesis activity. This concentration is the highest concentration that showed no cytotoxicity on the B16F10 cells after being treated with the PR extracts and kojic acid (>80 pousan viabilite selil) (done yo pa montre). Fig. 4 montre anti-melanogenesis sou selil melanom murin (B16F10) nan ekstrè PR yo nan konsantrasyon 0.01 mg/ml. Tout ekstrè PR montre antimelanogenesis sou selil B16F10. Ekstrè PR yo soti nan fèy, branch, grenn, ak fwi mi ak jèn pa ekstraksyon Soxhlet (PR-L-Sox, PR-B-Sox, PR-S-Sox, PR-R-Sox, ak PR-Y-Sox). ) te montre anti-melanogenesis ki pi wo nan 50.6-54.1 pousan, ki te dramatikman siperyè asid kojik estanda (37.9 ± 3.9 pousan) pa anviwon 1.5 pli, tandiske aktivite ekstrè RB-M ak PR-YM yo te konparab ak asid la. estanda asid kojik (p <0.05).

3.6. Stimulasyon byosentèz kolagen an nan ekstrè PR yo

Tout ekstrè PR nan konsantrasyon {{0}}.1 mg/ml te montre eksitasyon byosentèz kolagen an sou fibroblasts po moun yo detèmine pa metòd Sirius Wouj la. Konsantrasyon 0.1 mg/ml nan ekstrè PR yo ak asid ʟ-ascorbic se konsantrasyon ki pi wo a ki pa montre okenn sitotoksisite sou fibroblasts po moun yo. Ekstrè PR yo soti nan fèy ak branch pa ekstraksyon Soxhlet (PR-LM ak PR-BM ekstrè) demontre pi wo byosentèz kolagen an (16.46 ± 0.{{20}}7 pousan ak 14.66 ± 0.09 pousan, respektivman), ki te pi ba pase asid estanda ʟ-ascorbic (34.07 ± 0.03 pousan) pa apeprè 2 pli (p <0.05) (Fig. 5).

3.7. Stimulasyon jèn anti-aje

Fig. 6 te montre eksitasyon jèn anti-aje ki gen ladan jèn Sirt1 ak Foxo1 sou fibroblasts po imen yo nan ekstrè PR yo nan 0.01 mg/ml te detèmine pa teknik RT-PCR la. Konsantrasyon {{20}}.01 mg/ml nan ekstrè PR yo ak resveratrol se konsantrasyon ki pi wo a ki pa montre okenn sitotoksisite sou fibroblast po moun yo. Enteresan, PR-L-Sox, PR-S-Sox, PRR-M, PR-R-Sox, PR-YM, ak PR-Y-Sox ekstrè nan 0.01 mg / ml ekspoze pi gwo eksitasyon nan Foxo1 anti-aje. ekspresyon mRNA (495 bp), ki te dramatikman siperyè resveratrol estanda a pa apeprè 2 pli (p <0.05). Nan lòt men an, ekstrè PR-S-Sox ak PR-Y-Sox te montre eksitasyon ki pi wo a ekspresyon mRNA Sirt1 anti-aje (160 bp), ki te pi ba pase sa yo ki nan resveratrol (p <0.05). Malgre ke prèske tout ekstrè PR demontre eksitasyon ekspresyon jèn anti-aje, ekstrè PR-R-Sox ak PR-BM pa ankouraje ekspresyon Sirt1 ak Foxo1, respektivman.

4. Diskisyon

Plizyè plant natirèl yo anjeneral te tès depistaj pou fitochimik yo, konpoze bioaktif, ak pwopriyete byolojik yo jwenn nouvo engredyan natirèl pwomèt pou medikaman, sipleman manje, ak aplikasyon kosmetik. Ranbutan woz se youn nan fwi lokal yo nan distri Klung, pwovens Chanthaburi, Thailand. Gen kèk rapò syantifik sou aktivite byolojik ak pharmaceutique li yo, espesyalman aktivite anti-aje li yo. Nan etid sa a, senk pati nan Pink Rambutan, ki gen ladan fèy, branch, grenn, ak kale soti nan fwi mi ak jèn, yo te ekstrè pa Maceration a ak ekstraksyon Soxhlet la lè l sèvi avèk 95 pousan etanòl kòm sòlvan. Plizyè fitochimik ki fèk dekouvri, tankou quercetin, ki se metabolit segondè nan plant, yo te etidye pou efè anti-aje nan selil, bèt, ak imen (Phuong et al., 2020). Soti nan konklizyon yo nan etid sa a, flavonoid yo te phytochemicals prensipal yo nan ekstrè yo PR. Li te deja rapòte ke ekstrè yo soti nan lòt espès yo nan Rambutan yo te prezante ak fitochimik ki gen ladan flavonoid, tanen, ak karotenoid, ki korelasyon ak pwopriyete antioksidan yo (Rohman, 2017). Absans xanthones pa ekstraksyon Soxhlet a ta ka soti nan tanperati ki wo (Yuvanatemiya et al. 2022, Sankeshwari et al., 2018). Quercetin se youn nan konpoze ki pi abondan fenolik ak flavonoid yo jwenn nan anpil fwi ak legim, osi byen ke nan rambutan (Phuong et al., 2020). Nan etid sa a, tanperati ki pi wo (80 degre C) nan pwosesis Soxhlet la ka ekstrè yon sibstans ki pa chalè ki gen ladann quercetin plis pase pwosesis la frèt. Kantite quercetin detèmine pa analiz HPLC ka itilize kòm yon makè pou kontwòl kalite ekstrè PR yo sou echèl pwodiksyon an. Koefisyan korelasyon Pearson (R2) ant TFC ak TPC nan ekstrè PR yo te 0.825 klasifye yon relasyon trè fò (R2=± 0.80 a ± 1.00) (p <0.01) ki vle di si TFC a ogmante, TPC a ta ogmante dramatikman tou. Anplis de sa, koyefisyan R2 ant TPC a ak kontni an quercetin nan ekstrè PR yo te 0.650 klasifye yon relasyon fò (R 2=± 0.60 a ± 0.79) (p <0.05). Diferans nan pwodiksyon ekstraksyon, phytochemicals, osi byen ke TPC, TFC, ak quercetin nan ekstrè PR yo ta ka afekte pa solvang yo, pwosesis ekstraksyon, ak tanperati (Chutoprapat et al., 2020). Plizyè etid yo te jwenn ke flavonoid ak konpoze fenolik, osi byen ke quercetin, gen yon pakèt aktivite byolojik ak pharmaceutique, ki gen ladan anti-mikwòb, antioksidan, anti-enflamasyon, ak aktivite anti-aje (Panche et al., 2016, Shahidi). ak Yeo, 2018, Musika et al., 2021, Wang et al., 2022).

Jan yo te di deja, espès oksijèn radikal, oswa ROS, ka lakòz domaj ki gen rapò ak laj nan nivo selil ak tisi, akselere kwonolojik ak aje anviwònman an karakterize pa ondilasyon ak pigmantasyon atipik (Papaccio et al., 2022). Antioksidan natirèl yo ka elimine radikal gratis, sa ki lakòz efè anti-enflamatwa redwi, prevansyon kansè, dyabèt, ak maladi nan sèvo, rediksyon san presyon ak ateroskleroz, ak ralanti aje po a (Miracle Uwa, 2{{20} }17). Radikal gratis scavenging, anpèchman peroksidasyon lipid, ak chelation metal yo te lajman envestige kòm sistèm pou mennen ankèt sou aktivite antioksidan nan pwodwi natirèl. Pou DPPH scavenging radikal gratis, elektwon yo enpè nan molekil DPPH yo redwi lè yo resevwa yon atòm idwojèn soti nan antioksidan yo vin molekil idrazin (Ionita, 2021). Metòd peroksidasyon lipid la baze sou oksidasyon kwiv (II) nan iyon kwiv (III) pase pa yon emulsyon asid linoleik (Bakir et al., 2017), pandan y ap metòd chelation metal la baze sou oksidasyon kwiv (II). pou fòme yon konplèks ferrik-ferrozine (Wong et al., 2014). Prezans flavonoid ak kontni fenolik nan ekstrè PR nan etid sa a ka kontribye nan twa aktivite antioksidatif yo. Yo te jwenn ke konpoze fenolik yo (egzanp, korilagin, asid ellagic, geraniin, ak quercetin) ki soti nan ekstrè rambutan yo montre aktivite antioksidan pa DPPH radikal scavenging ak anpèchman peroksidasyon lipid (Hernández-Hernández et al., 2019, Phuong et al., 2019, Monrroy et al., 2020, Araujo et al., 2021). Sa a se menm jan ak rapò anvan yo ke ekstrè kale yo soti nan lòt espès yo nan Rambutan montre TPC ak TFC ki wo, osi byen ke montre pi fò aktivite antioksidan tankou ABTS, DPPH, O2-scavenging, ferrik diminye pouvwa tès (FRAP). ), ajan chelating, ak peroksidasyon lipid (Lourith et al., 2017, Rohman, 2017, Monrroy et al., 2020). Enteresan, koyefisyan R2 ant chelation metal la ak anpèchman peroksidasyon lipid nan ekstrè PR yo te montre yon korelasyon pozitif trè fò nan 0.953, klasifye yon relasyon solid nan yon nivo enpòtan nan p <0.01.

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】