Evalyasyon in vitro souch ki pi aktif probyotik ki kapab amelyore fonksyon baryè entesten yo ak anpeche maladi enflamatwa nan sistèm gastwoentestinal laⅡ

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Kilti selil yo

Selil adenokarcinom nan kolon imen Caucasian Caco{{0}} (ATCC® HTB{-37™) ak selil epitelyal HT29-MTX ki sekrete larim imen nan kolon an (Sigma Aldrich) yo te premye kiltive separeman, tou de itilize. DMEM (Gibco) mwayen complétée ak 10% fetal serum bovine (Gibco), 100 IU/mL penisilin, 100 mg/mL streptomycin (Gibco) ak 2 mM glutamin (Gibco), nan 37 ◦C nan yon atmosfè 5% CO2. Lè sa a, yo te mete ko-kilti yo nan plak 12-wellTranswell® (avèk insert polikarbonat 12 mm ak porositë 0.4 µm) lè yo kouvri selil yo nan lòj basolateral la nan yon rapò 75:25 Caco-2:HT. 29-MTX, epi li fèt pandan 21 jou, chanje mwayen an chak 2 jou.

Klike sou pou soulaje konstipasyon rapid

2.2. Tansyon bakteri

Tansyon Lactobacillus, ki gen ladan Limosilactobacillus fermentum izole nan lèt buffalo [32], Levilactobacillus brevis SP-48, Lacticaseibacillus rhamnosus IMC501, Limosilactobacillus reuteri LR92 ak Lacticaseibacillus paracaseder, R.I. fèmantasyon bioreactor pwosesis ak friz-seche yo jwenn poud yo itilize kòm materyèl la kòmanse. Anvan eksperyans lan, poud yo te resuspende ak grandi nan Man, Rogosa, ak Sharpe bouyon (MRS-Oxoid) nan 37 ◦C nan kondisyon mikwo-aerofil pou 24 èdtan.

2.3. Selil Tretman

Selil ko-kilti yo te trete ak diferan tansyon nan Lactobacillus spp. (108 CFUs/mL) nan yon miltiplisite enfeksyon (MOI) nan 100, pou kont li oswa nan konbinezon ak 20 µg/mL oflipopolysaccharide (LPS) nan S. Typhimurium, pou 24 èdtan nan 37 ◦C nan 5% CO2 nan DMEM san antibyotik.

2.4. PCR an tan reyèl

Pou evalye ekspresyon pro- ak anti-enflamatwa sitokin, HBD-2, ak TJs, selil yo nan fen tretman yo te lave twa fwa ak PBS esteril, epi RNA total la te ekstrè lè l sèvi avèk High Pure RNA Isolation Kit ( Roche Diagnostics).Yon total de 2{{20}}0 ng RNA selilè yo te ranvèse transkripsyon (Expand Reverse Transcriptase, Roche) nan ADN konplemantè (cDNA) lè l sèvi avèk primè hexamer o aza (randomhexamers, Roche) nan 42 ◦C pou 45 min, dapre enstriksyon manifakti a. PCR an tan reyèl pou IL-6, IL-8, TNF-, IL-1, TGF-, HBD-2, Occludin, Zonulin-1, ak Claudin{{ 14}}yo te fèt ak twous LC Fast Start DNA Master SYBR Green (Roche Diagnostics) lè l sèvi avèk 2 µL cDNA, ki koresponn a 10 ng RNA total nan yon volim final 20 µL, 3 mMMgCl2 ak 0.5 µM sans ak antisans primè ( Tablo 1). Apre anplifikasyon, analiz koub k ap fonn yo te fè pa chofe a 95 ◦C pou 15 s nan yon tanperati tranzisyon 20 ◦C / s, refwadisman a 60 ◦C pou 15 s ak yon pousantaj tranzisyon tanperati 20 ◦C / s, ak Lè sa a chofe echantiyon an nan 0.1 ◦C/s a 95 ◦C. Lè sa a, rezilta yo te analize lè l sèvi avèk lojisyèl LightCycler (Roche Diagnostics). Koub estanda chak pè Jadendanfan te etabli ak dilusyon seri de cDNA. Tout PCR yo te kouri an triple. Espesifik lanan pwodwi yo anplifikasyon te verifye lè l sèvi avèk elektwoforèz sou yon jèl agarose 2% ak vizyalizasyon pa tach bromur etidyòm [6].

2.5. ELISA Essay

Prezans IL-6, IL-8, IL-1, TNF-, TGF-, HBD-2, Zonulin-1, Occludin, andClaudin{{7 }} nan lysates selilè yo nan ko-kilti Caco-2/HT{29-MTX ki enfekte ak diferan souch laktobazili ak oswa san LPS yo te analize lè l sèvi avèk tès iminosorban ki lye ak anzim (ELISA; Invitrogen, IL{{12). }}, IL-8, IL-1 alfa, TNF alfa, ak TGF beta-1 HumanELISA Twous; Phoenix Pharmaceuticals, Inc. Defensin 2, beta (Human)—ELISA Twous; Elabscience Biotechnology Inc. Zonulin Imèn, OCLN Imèn (Occludin) ak Kit ELISA Imèn CLDN1 (Claudin 1).

2.6. Adhesion ak Envazivite Essay

Kapasite L. brevis, L. reuteri, ak L. rhamnosus pou redwi kapasite adhesiveness andinvasiveness S. Typhimurium ak EIEC nan kokilti entesten yo te envestige nan twa diferan kalite eksperimantal: (i) tès konpetitif, nan ki selil epitelyal entesten yo te enkube ansanm. ak laktobazil (108 CFU/mL) ak S. Typhimuriumor EIEC (108 CFU/mL) pou 2 èdtan. (ii) Egzamen anpèchman, kote selil yo te preenkube ak laktobazil (108 CFUs/mL) pou 2 èdtan, ak Lè sa a, S. Typhimurium oswa EIEC (108 CFUs/mL) te ajoute ak enkubasyon pou yon lòt 2 èdtan. (iii) Test deplasman kote selil yo te pre-enkube ak S. Typhimurium oswa EIEC (108 CFUs/mL) pou 2 èdtan ak Lè sa a, laktobazil (108 CFUs/mL) yo te ajoute ak plis enkubasyon pou 2 èdtan. Nan fen tan sa a, monokouch ki enfekte yo te lave anpil nan PBS, Lè sa a, lize ak yon solisyon 0.1% Triton X-100 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) nan PBS pou 10 minit nan chanm. tanperati pou konte bakteri entènalize yo. Aliquot yo nan lysate selil yo te seri dilye ak plake sou Hektoen agar (OXOID) ak enkubasyon nan 37 ◦C lannwit lan pou quantifier totalviable selil ki asosye bakteri (CFU/mL). Pou tès envazivite yo, apre yo fin enkubasyon ak bakteri, monokouch ki enfekte yo te lave anpil ak PBS esteril epi yo te enkube plis pou 2 èdtan anplis nan mwayen DMEM, ki te konplete ak gentamiinsulfate (250 µg ml-1) (Sigma-Aldrich) pou touye bakteri ekstraselilè yo, Lè sa a, selil yo te lysed ak plake jan yo te dekri deja pou quantifier kantite total enteralize bakteri (CFU/mL).

2.7. Analiz estatistik

Diferans enpòtan nan mitan gwoup yo te evalye atravè de-fason ANOVA ak GraphPad Prism 8.0, epi konparezon ki genyen ant mwayen yo te kalkile lè l sèvi avèk yon T-tès Elèv la. Done yo eksprime kòm vle di ± devyasyon estanda (SD) nan twa eksperyans endepandan.

Medikaman èrbal natirèl pou soulaje konstipasyon-Cistanche

Cistanche se yon genus plant parazit ki fè pati fanmi Orobanchaceae. Plant sa yo konnen pou pwopriyete medsin yo epi yo te itilize nan Medsin Tradisyonèl Chinwa (TCM) pandan plizyè syèk. Espès Cistanche yo jwenn sitou nan rejyon arid ak dezè nan Lachin, Mongoli, ak lòt pati nan Azi Santral. Plant Cistanche yo karakterize pa tij charnèl yo, jòn epi yo trè apresye pou benefis potansyèl sante yo. Nan TCM, yo kwè ke Cistanche gen pwopriyete tonik epi li souvan itilize pou nouri ren an, amelyore vitalite, ak sipòte fonksyon seksyèl. Li itilize tou pou adrese pwoblèm ki gen rapò ak aje, fatig, ak byennèt jeneral. Pandan ke Cistanche gen yon istwa long nan itilize nan medikaman tradisyonèl yo, rechèch syantifik sou efikasite li yo ak sekirite se kontinyèl ak limite. Sepandan, li se li te ye genyen divès konpoze byoaktif tankou glikozid fenilethanoid, iridoid, lignans, ak polisakarid, ki ka kontribye nan efè medsin li yo.

Wecistanche apoud cistanche, tablèt cistanche, kapsil cistanche, ak lòt pwodwi yo devlope lè l sèvi avèkdezèsistanchkòm matyè premyè, tout nan yo ki gen yon bon efè sou soulaje konstipasyon. Mekanis espesifik la se jan sa a: Cistanche kwè gen benefis potansyèl pou soulaje konstipasyon ki baze sou itilizasyon tradisyonèl li yo ak sèten konpoze li genyen. Pandan ke rechèch syantifik espesyalman sou efè Cistanche a sou konstipasyon limite, yo panse ke li gen plizyè mekanis ki ka kontribye nan potansyèl li yo soulaje konstipasyon. Efè laksatif:Cistanchedepi lontan yo te itilize nan Medsin Tradisyonèl Chinwa kòm yon remèd pou konstipasyon. Yo kwè ke li gen yon efè laksatif twò grav, ki ka ede ankouraje mouvman entesten ak pwovoke konstipasyon. Efè sa a ka atribiye a divès konpoze yo te jwenn nan Cistanche, tankou glikozid fenilethanoid ak polisakarid. Imidite entesten yo: Ki baze sou itilizasyon tradisyonèl yo, Cistanche konsidere kòm gen pwopriyete idratan, espesyalman vize entesten yo. Pwomosyon idratasyon ak wilaj nan trip yo ka ede adousi zouti ak fasilite pasaj pi fasil, kidonk soulaje konstipasyon. Efè anti-enflamatwa: Konstipasyon ka pafwa asosye ak enflamasyon nan aparèy dijestif la. Cistanche gen sèten konpoze, ki gen ladan glikozid phenylethanoid ak lignan, ke yo kwè gen pwopriyete anti-enflamatwa. Pa diminye enflamasyon nan trip yo, li ka ede amelyore regilarite mouvman entesten ak soulaje konstipasyon.