Efè inhibition nan sikloheterofilin sou sentèz Melanin
May 17, 2023
Résumé:Etid sa a te fèt pou klarifye efè inhibition cycloheterophyllin sou sentèz melanin. Pou elicide efè inhibition cycloheterophyllin sou liy selil B16F10 la, yo te mezire viabilite selil, ekspresyon asid ribonukleik mesaje (mRNA), tès aktivite tirozinaz, ak tès pwodiksyon melanin. Efè cycloheterophyllin sou tyrosinase ki gen rapò ak pwoteyin 1 (TYRP1)/TYRP2/tyrosinase (TYR)/mikrophthalmia-asosye transkripsyon faktè (MITF) ekspresyon mRNA ak kontni melanin yo te detèmine. Quantitative an tan reyèl RT-PCR te montre ke cycloheterophyllin diminye nivo ekspresyon mRNA nan jèn TYRP1/TYRP2/TYR/MITF ak kontni pwodiksyon melanin pase -MSH-trete selil B16F10. Egzamen aktivite tirozinaz la revele ke cycloheterophyllin diminye pwodiksyon melanin nan selil B16F10 yo. Done sa yo montre ke cycloheterophyllin ogmante efè blanchiman nan selil B16F10 yo; konsa, cycloheterophyllin se yon engredyan ki pisan pou blanchiman po. Kidonk, yo ta dwe envestige plis rechèch sou mekanis aksyon cycloheterophyllin pou devlopman materyèl fonksyonèl.
Dapre etid ki enpòtan, cistanche se yon zèb komen ke yo rekonèt kòm "zèb mirak ki pwolonje lavi". Eleman prensipal li se cistanoside, ki gen efè divès kalite tankou antioksidan, anti-enflamatwa, ak pwomosyon fonksyon iminitè. Mekanis ki genyen ant cistanche ak blanchiman po manti nan efè a antioksidan nan glikozid cistanche. Melanin nan po moun pwodui pa oksidasyon tirozin ki katalize pa tirozinaz, ak reyaksyon oksidasyon mande pou patisipasyon oksijèn, kidonk radikal oksijèn san yo nan kò a vin yon faktè enpòtan ki afekte pwodiksyon melanin. Cistanche gen cistanoside, ki se yon antioksidan epi li ka diminye jenerasyon radikal gratis nan kò a, kidonk anpeche pwodiksyon melanin.
Klike sou kijan pou itilize Cistanche
Pou plis enfòmasyon:
david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
1. Entwodiksyon
Koulè po a detèmine pa emoglobin nan san an, pigman melanin nan kouch epidèm la, ak -karotèn nan tisi lar la. Pami yo, koulè po a sitou detèmine pa kantite ak distribisyon pigman melanin la [1]. Melanin se yon pigman sentèz soti nan melanozòm nan melanosit la ki prezan nan kouch fondamantal la. Li absòbe oswa gaye reyon iltravyolèt (UV) epi li gen fonksyon benefik pou siprime domaj nan selil po yo oswa tisi po yo. Sepandan, akimilasyon twòp nan melanin ka lakòz tach, tach, ak pigmantasyon. Li konnen yo lakòz ipèpigmantasyon [2,3].
Pigman Melanin se yon irite reprezantan ki lakòz aje ekzojèn. Li se pwodwi pa melanogenesis la nan melanosit ki te ekspoze a reyon UV epi li gen fonksyon an benefisye nan pwoteje po a kont reyon UV pa fè nwa koulè po a. Pigman melanin la konsiste de eumelanin (nwa) ak feomelanin (wouj-mawon) [4,5]. Melanin pwodui lè l sèvi avèk L-tirosin, yon kalite asid amine, kòm yon substra, ak nan L-DOPA (3,4-dihydroxyphenylalanine) ak plis oksidasyon nan DOPA-quinone pa anzim prensipal tirosinaz (TYR), pwoteyin ki gen rapò ak tirozinaz-1 (TYRP1), ak TYRP2. DOPA-quinone a plis soksid nan wouj-jòn feomelanin nan prezans gwoup sulfhydryl. DOPA-quinone a tou dekarboxylated, soksid, ak katalize nan eumelanin lè gwoup sulfhydryl yo apovri [4,5]. Tirozinaz anzim se anzim kle ki responsab pou pwodiksyon melanin, epi li konnen ke ekstrè reglis, ekstrè pye bwadchenn Japonè, arbutin, ak asid kojik, ki se materyèl blanchi reprezantan, anpeche aktivite anzim tirozinaz [6,7]. An patikilye, arbutin jwe yon wòl nan anpeche aktivite a nan tirozinaz pa reyaji konpetitif ak L-tirosin, ki se yon matyè premyè pou melanin, ak asid kojik mare nan sit la aktif nan tirosinaz la pa Cu2 plus. Yo konnen asid kojik ak arbutin gen gwo efè blanchiman, men efè segondè nan pwoblèm sekirite tankou iritasyon po yo te rapòte [8,9]. Anpil etid ap fèt pou dekouvri nouvo materyèl efikas tankou devlopman materyèl fonksyonèl ki sòti natirèl [8,9].
Cycloheterophyllin (C30H30O7), yon kalite prenylflavone, gen anpil anpil nan Artocarpus heterophyllus e li te rapòte ke gen fonksyon famasi ak byolojik ki gen ladan anti-enflamatwa, aktivite anti-plakèt, ak efikasite antioksidan [10-13]. Anplis de sa, li te rapòte ke li gen efè antioksidan ak anti-aje sou fibroblasts po imen pwovoke pa UV-A [14,15].
Kòm sa yo, li te rapòte ke cycloheterophyllin efikas nan divès maladi, men pa gen okenn rechèch sou efè pwodiksyon melanin pa cycloheterophyllin. Nan etid sa a, mwen egzamine efè cycloheterophyllin sou ekspresyon makè TYRP1, TYRP2, TYR, ak MITF nan selil B16F10, yon liy selil melanom ki sòti nan sourit, ki gen rapò ak mekanis pwodiksyon melanin.
2. Rezilta ak Diskisyon
Yo te fè tès CCK{{0}} pou detèmine sitotoksisite cycloheterophyllin nan liy selil B16F10 la. Yo te ajoute plizyè konsantrasyon cycloheterophyllin pou mezire viabilite selil (Figi 1). Lè yo trete ak yon konsantrasyon 20 µg/mL oswa plis, li te konfime ke pousantaj siviv selil B16F10 siyifikativman diminye konpare ak gwoup kontwòl la. Lè yo te ajoute cycloheterophyllin ak yon konsantrasyon 10 µg/mL, pousantaj siviv selil B16F10 te sanble ak gwoup kontwòl la. Pakonsekan cycloheterophyllin te ajoute nan konsantrasyon 10, 1, ak 0.1 µg / mL nan eksperyans adisyonèl.
Tirozinaz anzim reyaji ak L-tirozin pou pwodwi L-DOPA, ak L-DOPA finalman pwodui pigman melanin atravè DOPAquinone pa tirosinaz, ki se ke yo rekonèt kòm yon anzim kle ki kontwole melanogenesis [4,5]. Nan eksperyans sa a, yo te itilize asid kojik kòm yon kontwòl pozitif pou evalye degre anpèchman aktivite anzim tirozinaz. Degre anpèchman aktivite anzim tirozinaz te konfime pa tretman ak cycloheterophyllin nan konsantrasyon 10, 1, ak 0.1 µg/mL. Li te konfime ke aktivite anzim tirozinaz te inibit nan yon fason konsantrasyon-depandan pa cycloheterophyllin (Figi 2). Nan gwoup cycloheterophyllin-trete nan konsantrasyon 10, 1, ak 0.1 µg/mL, li te konfime ke efè inhibition nan anzim tirozinaz yo te 58.0, 27.4, ak 16.9 pousan, respektivman.
Reyon UV ankouraje keratinosit nan epidèm la pou pwovoke ekspresyon de - òmòn ki eksitan melanosit (-MSH), yon òmòn ki stimul melanosit, epi li sekrete deyò selil la, epi sekrete -MSH a stimul melanosit. Lè li lye ak reseptè melanokortin 1 a (MC1R), li pwovoke siyal ki gen rapò ak sentèz melanin nan selil la, sa ki lakòz pwodiksyon pigman melanin [5]. Nan eksperyans sa a, pou pwovoke pwodiksyon melanin nan selil B16F10, yo te itilize 200 nM -MSH pou pwovoke pwodiksyon melanin nan selil B16F10 [16]. An tan reyèl RT-PCR nan nivo ekspresyon TYRP1, TYRP2, TYR, ak jèn MITF, ki se makè ki ogmante pa -MSH tretman te detèmine, pa tretman cycloheterophyllin nan -MSH-trete selil B16F10. Selil B16F10 yo te trete ak cycloheterophyllin epi ekspresyon makè a te konfime atravè RT-PCR an tan reyèl. Kòm yon rezilta, li te konfime ke ekspresyon yo nan TYRP1, TYRP2, TYR, ak MITF yo te siyifikativman redwi nan gwoup la trete cycloheterophyllin konpare ak gwoup la -MSH-trete. Espesyalman, nan gwoup eksperimantal trete ak 10 µg/mL cycloheterophyllin, ekspresyon jèn TYRP1, TYRP2, TYR, ak MITF diminye pa 53.3, 26.6, 58, ak 34 pousan, respektivman (Figi 3). Nan gwoup eksperimantal trete ak 1 µg/mL cycloheterophyllin, li te konfime ke ekspresyon makè yo te siyifikativman redwi, epi ekspresyon jèn TYRP1 ak TYRP2 te diminye menm jan an nan gwoup cycloheterophyllin 0.1 µg/mL.
Apre yo fin konfime ke tretman cycloheterophyllin redwi nivo ekspresyon mRNA yon makè ki gen rapò ak melanogenesis, yo te konfime pousantaj pwodiksyon pigman melanin pou detèmine si pwodiksyon pigman melanin nan selil B16F10 yo te redwi anpil (Figi 4) . Liy selil B16F10 trete ak cycloheterophyllin nan konsantrasyon 10, 1, ak 0.1 µg/mL, respektivman, yo te rekòlte epi yo te konfime degre nan pwodiksyon melanin. Kòm yon rezilta, li te konfime ke pwodiksyon an nan pigman melanin te siyifikativman redwi pa cycloheterophyllin nan konsantrasyon nan 10 ak 1 µg / mL (Figi 4A). Anplis de sa, li te konfime ke pwodiksyon an nan pigman melanin nan kondisyon an cycloheterophyllin-trete te diminye konpare ak gwoup la kontwòl (Figi 4B). Lè yo te ajoute 10 ak 1 µg/mL cycloheterophyllin, to pwodiksyon melanin pigman diminye pa 44.6 ak 37.8 pousan, respektivman, ki te siyifikativman redwi konpare ak gwoup kontwòl la (Figi 4B). Rezilta sa yo gen tandans konsistan avèk rezilta eksperimantal RT-PCR an tan reyèl sou nivo ekspresyon mRNA makè ki asosye ak melanogenesis yo.
Antioksidan tankou asid ascorbic yo konnen yo dwe yon materyèl blanchi enpòtan ki inibit sentèz la nan pigman melanin pa diminye DOPAquinone, yon sibstans entèmedyè pandan pwosesis pwodiksyon eumelanin, nan L-DOPA [16,17]. Cycloheterophyllin te rapòte tou gen efè antioksidan [11,12]. Li montre ke cycloheterophyllin ka efikas nan blanchi efè antioksidan sa a. Kòm yon rezilta nan konfime efè a antioksidan nan vitro nan tès sa a DPPH radikal scavenging, li te konfime ke li gen yon efè antioksidan ki konparab ak sa ki nan asid ascorbic, yon kontwòl pozitif anba yon konsantrasyon segondè nan cycloheterophyllin (Figi 5). Nan lavni an, yo ta dwe fè plis rechèch sou efè antioksidatif cycloheterophyllin nan melanosit ak ekspresyon de anzim antioksidatif tankou katalaz, SOD1, SOD2, ak SOD3.
3. Materyèl ak Metòd
3.1. Materyèl eksperimantal ak kilti selil
Liy selilè B16F10 te achte nan men Bank Cell Line Kore di (Kore di), ak mwayen kilti selil la te 10 pousan serom fetal bovine (FBS, SFBU−0500, Equitech-bio, Kerrville, TX, USA) nan mwayen Eagle's Dulbecco modifye (DMEM). , LM 001–05, Welgene, Gyeongsan-si, Kore di), ak 1 pousan penisilin/streptomycin (Gibco, 15140-122, Waltham, MA, USA) te ajoute. Selil yo te kiltive nan yon enkibatè nan 37 ◦C ak 5 pousan CO2 [16]. Cycloheterophyllin ki te itilize nan eksperyans sa a te extrait de Artocarpus heterophyllus lè l sèvi avèk DMSO ak achte nan men ChemFaces Co. (CFN97748, Wuhan, Lachin, Pite pi gran pase oswa egal a 98 pousan).
3.2. Cell Viability Assay Cell
viabilite te evalye pa solisyon CCK-8 (twos konte selil; EZ-3000, EZ-Cytox, Seoul, DoGen). Liy selil B16F10 yo te simen nan yon mwayen kilti nan yon dansite 2 × 104 selil / 96 plak byen. Apre 24 èdtan cycloheterophyllin (CFN97748, Chemfaces) te ajoute. Liy selil B16F10 trete ak cycloheterophyllin te enkube pou 24 èdtan epi yo te ajoute solisyon CCK-8 pou 30 minit nan yon enkibatè 37 ◦C. Yo te mezire absorpsyon nan 450 nm lè l sèvi avèk yon lektè microplate (Epoch, Winooski, VT, USA, BioTek) ak viabilite selil yo te kalkile ki baze sou absòbe gwoup kontwòl la san selil [16].
3.3. Esè DPPH
3.4. Aktivite Tirozinaz Chanpiyon In Vitro
3.5. Quantitative an tan reyèl ranvèse transcription-polymerase chèn reyaksyon (Q-RT-PCR)
Yo te izole RNA total lè l sèvi avèk Trizol (15596018, Carlsbad, CA, USA, Thermo Fisher Scientific). Konsantrasyon RNA te detèmine spectrophotometrically (BioTek). Yo te transkri kat mikwogram RNA nan cDNA lè l sèvi avèk twous transkripsyon ranvèse ReverTra Ace® (Toyobo, FSQ101, Osaka, Japon). Transkripsyon ranvèse a te sispann lè w ajoute tanpon Tris-EDTA (pH 8.0) nan yon total de 200 µL solisyon cDNA. TaqMan® Gene Expression Assay yo te achte nan men Applied Biosystems. Q-RT-PCR yo te fè selon enstriksyon manifakti a. Yon ti tan, 20 µL melanj Q-PCR genyen 10 µL 2× TaqMan Universal Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA), 1 µL 20× Taqman espresyon ekspresyon (Applied Biosystems), ak 50 ng cDNA. Melanj Q-PCR te reyaji nan 95 ◦C pou 20 s ak 40 fwa reyaksyon monte bisiklèt (95 ◦C pou 1 s ak 60 ◦C pou 20 s) ak yon sistèm StepOnePlus (Applied Biosystems). Nimewo idantifikasyon jèn yo pou tès ekspresyon TaqMan yo itilize nan analiz Q-RT-PCR yo prezante nan Tablo 1. Yo te itilize GAPDH imen (Applied Biosystems) pou nòmalize varyasyon nan kantite cDNA ki soti nan diferan echantiyon.
3.6. Melanin Konkou Essay
Pou mezire kantite pigman melanin, metòd Hosoi a te pasyèlman modi-field [17]. Yo te bay yon total de 1 × 105 selil B16F10 nan yon plat kilti tisi 60 mm. Apre kiltive selil yo pou 24 èdtan, yo te ajoute 200 nM nan òmòn eksitan -melanocyte (-MSH; M4135, Sigma-Aldrich) ak cycloheterophyllin (10, 1, 0.1 µg/mL) pou 72 èdtan nan chak konsantrasyon. Apre yo fin retire mwayen kilti a, yo te ajoute 200 µL NaOH (1N; S8045, Sigma-Aldrich) solisyon epi enkube a 60 ◦C pou 2 èdtan pou fonn melanin. Yo te mezire absorbans la ak yon espektrofotomèt (405 nm, Epòk). Kòm yon kontwòl pozitif, yo te itilize 100 µg/mL arbutin (A4256, Sigma-Aldrich). Anpèchman nan pwodiksyon an nan pigman melanin te eksprime kòm yon pousantaj nan kantite melanin ki te pwodwi anba kondisyon yo tretman -MSH. Li te fè pa endepandan fè twa eksperyans endepandan.
3.7. Analiz estatistik
4. Konklizyon
UV rankontre nan lavi chak jou gen fonksyon benefisye tankou sentèz vitamin D ak esterilizasyon, men nan lòt aspè, li lakòz pèt elastisite po, ondilasyon, pigmantè, eritem, enflamasyon, elatriye, pa yon reyaksyon chèn nan espès oksijèn reyaktif [18, 19]. Anplis de sa, aje ekzojèn ki te koze pa faktè ekstèn tankou UV anpeche fonksyon an nan tisi nòmal ak rejenerasyon lè tisi a domaje akòz rediksyon an ak deteryorasyon nan selil yo konstitiyan nan kò a vivan [20,21].
Atravè etid sa a, li te posib konfime konsantrasyon apwopriye nan cycloheterophyllin pou trete selil B16F10 yo. Li te konfime ke konsantrasyon nan 10 µg/mL pa t 'afekte viabilite nan selil yo, jan yo montre nan Figi 1. Pa rezilta yo mezi nan efè a inhibition aktivite nan anzim nan tirosinaz, li te konfime ke konsantrasyon cycloheterophyllin nan 10, 1, ak 0.1 µg/mL siyifikativman redwi aktivite anzim tirozinaz la (Figi 2). Anplis de sa, li te konfime ke cycloheterophyllin siyifikativman redwi ekspresyon de makè (TYRP1, TYRP2, TYR, ak jèn MITF) konpare ak -MSH trete kondisyon (Figi 3). Anplis de sa, li te konfime ke cycloheterophyllin redwi kantite a nan sentèz melanin nan selil B16F10 (Figi 4). Ki baze sou rezilta sa yo, cycloheterophyllin montre potansyèl kòm yon nouvo kandida blanchiman.
Etid sa a se premye moun ki konfime efè inhibition cycloheterophyllin sou sentèz melanin ak sijere posiblite pou anpeche aje po ki te koze pa reyon UV. Anplis de sa, plis nan pwofondè efè li yo sou mekanis siyal selil B16F10 yo, sou sistèm siyal ki enplike nan blanchiman, ak sou divès kalite anzim antioksidan ki prezan nan melanosit yo sanble nesesè.
Referans
1. Bonaventure, J.; Domingues, MJ; Larue, L. Mekanis selilè ak molekilè ki kontwole migrasyon melanosit ak selil melanom. Pigman Cell Melanoma Res. 2013, 26, 316–325. [CrossRef] [PubMed]
2. Gilchrest, BA; Eller, MS DNA photodamage stimul melanogenesis ak lòt repons photoprotective. J. Investig. Dermatol. Symp. Pwosedi. 1999, 4, 35–40. [CrossRef] [PubMed]
3. Sugumaran, M. Konparatif byochimik eumelanogenesis ak wòl pwoteksyon fenoloksidaz ak melanin nan ensèk yo. Pigman selil Res. 2002, 15, 2–9. [CrossRef] [PubMed]
4. Ito, S.; Wakamatsu, K. Kantitatif analiz de eumelanin ak feomelanin nan moun, sourit, ak lòt bèt: Yon revizyon konparatif. Pigman selil Res. 2003, 16, 523–531. [CrossRef]
5. Yoon, YM; Bae, SH; An, SK; Choe, YB; Ahn, KJ; Yon, IS Efè Radyasyon Iltravyolèt sou Po a ak Po a Selil Siyal Pathways. Kor. J. Aesthet. Kosmetol. 2013, 11, 417–426.
6. Baek, YS; Ryu, YB; Curtis-Long, MJ; Ha, TJ; Rengasamy, R.; Yang, MS; Park, KH Tyrosinase efè inhibition nan 1,3- diphenyl propane soti nan Broussonetia Kozinski. Bioorg. Med. Chem. 2009, 17, 35–41. [CrossRef]
7. Kim, HJ; Seo, SH; Lee, BG; Lee, YS Idantifikasyon inhibiteurs tirozinaz nan Glycyrrhiza uralensis. Planta Med. 2005, 71, 785–787. [CrossRef]
8. Han, NK; Park, CM; Kwon, JC; Joung, MS; Choi, JW Whitening efè nan ekstrè Fagopyrum tataricum. J. Soc. Kosmetik. Sci. Kore di 2014, 40, 179–186.
9. Kim, BY; Park, SH; Park, BJ; Kim, JJ Whitening efè Androsace umbellate ekstrè. J. Soc. Kosmetik. Sci. Kore di 2015, 41, 21–26.
10. Lin, CN; Lu, CM; Lin, HC; Fang, SC; Shieh, BJ; Hsu, MF Novel konstitiyan antiplakèt soti nan plant moraze Formosan. J. Nat. Prod. 1996, 59, 834–838. [CrossRef]
11. Wang, JP; Raung, SL; Tsao, LT; Hsu, MF; Lin, CN Bloke nan pwoteyin kinaz C patisipe nan anpèchman pa cyclometersphyllin nan jenerasyon anion superoksid netrofil. Naunyn. Schmiedeberg Arch. Pharm. 1997, 355, 551–558. [CrossRef]
12. Ko, FN; Cheng, ZJ; Lin, CN; Teng, CM Scavenger ak pwopriyete antioksidan prenylflavones izole nan Artocarpus heterophyllus. Radik gratis. Biol. Med. 1998, 25, 160–168. [CrossRef]
13. Jantan, I.; Yasin, YH; Jamil, S.; Sirat, H.; Basar, N. Efè flavonoid prenyl ak chalcones izole nan espès Artocarpus sou agrégation plakèt nan san antye imen. J. Nat. Med. 2010, 64, 365–369. [CrossRef]
14. Huang, CH; Li, HJ; Wu, NL; Hsiao, CY; Lin, CN; Chang, HH; Hung, CF Efè Photoprotective nan Cycloheterophyllin kont domaj UVA-pwovoke ak estrès oksidatif nan Fibroblasts po imen. PLoS ONE 2016, 11, e0161767. [CrossRef]
15. Shim, JH Anti-aje efè cycloheterophyllin nan UVA-iradyasyon fibroblasts po. Kor. J. Pharmacogn. 2019, 50, 285–290.
16. Tomita, Y.; Seiji, M. Mekanis inaktivasyon tirozinaz nan melanom sourit. J. Dermatol. 1977, 4, 245–249. [CrossRef]
17. Panzella, L.; Ebato, A.; Napolitano, A.; Koike, K. Etap yo an reta nan melanogenesis: Eksplore aspè chimik yo ak opòtinite aplikasyon yo. Ent. J. Mol. Sci. 2018, 19, 1753. [CrossRef]
18. Talwar, HS; Griffiths, CE; Fisher, GJ; Hamilton, TA; Voorhees, JJ Diminye tip I ak tip III prokolagen nan po moun granmoun foto domaje. J. Envesti. Dermatol. 1995, 105, 285–290. [CrossRef]
19. Kim, J.; Lee, CW; Kim, EK; Lee, SJ; Park, NH; Kim, HS; Kim, HK; Char, K.; Jang, YP; Kim, JW Efè anpèchman nan ekstrè Gynura procumbens sou ekspresyon matris-metalloproteinase UV-B-induit nan fibroblasts po imen. J. Enthnopharmacol. 2011, 137, 427–433. [CrossRef]
20. Kirkwood, TB Konprann syans enpè aje. Cell 2005, 120, 437–447. [CrossRef]
21. Jones, DL; Rando, TA Emerging modèl, ak paradigm pou aje selil souch. Nat. Selil Biol. 2011, 13, 506–512. [CrossRef] [PubMed]
Pou plis enfòmasyon: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
