Mennen ankèt sou mekanis a pa ki Cistanche Deserticola trete maladi alzayme a lè l sèvi avèk rezo famasi ak validasyon eksperimantal

[Rezime]

 

Objektif: yo eksplorePotansyèl mekanis nan cistanche deserticola sou maladi alzayme a (AD)paRezo farmakolojiak eksperyans bèt.

Metòd:PrediCistanche ak alzayme a ki gen rapò ak objektif objektif lè l sèvi avèk rezo famasi; 40 gason 7- Mwa-fin vye granmoun sourit SAMP8 yo te divize owaza nan yon gwoup kontwòl modèl (ki gen konpòtman egzanplè), yon ba-dòz (L-GCS), yon medyòm-dòz (M-GCS), ak yon gwo-dòz (H-GCS) gwoup tretman, ak 10 gason anti-aje sourit SAMR1 nan laj la menm yo te itilize kòm SAMR kontwòl la. Apre 30 d nan administrasyon intragastric nan GCs, labirent la dlo Morris ak Y eksperyans labirent yo te itilize yo teste kapasite yo aprantisaj ak memwa nan chak gwoup nan sourit yo. Nissl tach te itilize yo obsève nimewo a ak mòfoloji nan newòn nan rejyon an CA1 ipokanp nan sourit yo. Yo te itilize tach imunohistochimik ak eksperyans Western blot pou detekte ekspresyon PI3K, P-Akt, ak P-tau nan ipokanp sourit yo. Rezilta: 8 konpozan efikas ki gen ladan verbascoside yo te fè tès depistaj soti nan Cistenche deserticola, ak jèn yo debaz ki enplike nan tretman AD yo te AKT1, TNF, CASP3, elatriye wout yo siyal ki gen rapò ak tretman AD pa dezè cistenche enkli PI3K-AKT, chemen TNF, ak chemen laj-raj. Eksperyans Animal te montre ke konpare ak gwoup modèl la, latency a chape ak distans total nan Morris Dlo labirent Navigasyon tès la siyifikativman diminye (P<0.05), and the number of platform crossings significantly increased (P<0.05) in the spatial exploration test of the GCs group. In the immunohistochemical staining and Western blot experiments, the ratio of PI3K and P-Akt/Akt in the GCs group significantly increased (P<0.05), while the expression of P-Tau/Tau significantly decreased (P<0.05). Conclusion: GCs may improve the learning and cognitive abilities of SAMP8 mice by regulating the PI3K-AkT signaling pathway and regulating the expression of P-Tau protein.

[Mo kle]Rezo famasi;Maladi alzayme a; Cistenche dezètikola; SAMP8 sourit; Apopto

 

 

 

High-bon jan kalite Cistanche Sipleman èrbal

 

1 Materyèl ak Metòd

1.1 Materyèl

1.1.1 baz done ak tribin analiz

Baz done prensipal yo ak tribin analiz yo itilize nan etid sa a (Tab 1).

 

Tab 1 ki enpòtan tribin analyse ak baz done yo itilize nan etid sa a

Non	Sit entènèt	Vèsyon
Tradisyonèl Chinwa Sistèm Medsin baz done farmakoloji (TCMSP)	https://www.tcmsp-e.com/	2.3
Uniprot	https://www.uniprot.org/
PubChem	https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/
Venny	https://bioinfo.cis.cornell.edu/tools/venn/
GeneCards	https://www.genecards.org/
Baz done NCBI	https://www.ncbi.nlm.nih.gov/
Omim	https://omim.org/
Baz done fisèl	https://cytoscape.org/	11
Lojisyèl cytoscape	https://cytoscape.org/	3.8.0 - 3.9.1
Metascape	https://metascape.org/

 

1.1.2 Bèt eksperimantal yo

Bèt eksperimantal yo te itilize nan eksperyans sa a yo te gason SPF-klas senescence-akselere sourit ki gen tandans 8 (SAMP8) sourit, ki te leve soti vivan nan 2 mwa fin vye granmoun a 7 mwa ak enkli nan eksperyans lan. Tout bèt yo te leve soti vivan nan sal la bèt SPF-klas nan Sant lan Eksperyans Animal nan Baotou Medikal Kolèj nan Inner Mongolia University of Syans ak Teknoloji [Syxk (Meng) 2018-0001], ak yon tanperati a (24. 0 ± 1. Yo te bay ase manje ak dlo pou bwè, ak sourit yo te lib yo manje ak bwè. Sik la limyè/nwa te 12 h/12h asire nòmal ritm lan sirkadyèn nan sourit yo. Tout operasyon bèt ak pwotokòl eksperimantal ki enplike nan eksperyans sa a yo te pote soti nan akò ak pwotokòl la ki te apwouve pa eksperimantal Komite a Etik Animal nan Baotou Medical College (Baoyi Etik 2018 No 011).

1.1.3 Reyaktif prensipal yo ak enstriman yo

High-efikasite RIPA lysis tanpon (R0010), ECL plis ultra-sansib solisyon luminesan (PE0010), tanpon elèktroforèz (T1070), transfere tanpon (D1060), pwoteyin loading tanpon (P1015), elatriye yo te tout achte nan men Beijing Solebao; Twous imunohistochimik (PV -9000) te achte nan men Beijing Zhongshan Jinqiao; Twous deteksyon BCA Pwoteyin (23227) te achte nan men Thermo Syantifik, USA. Phosphoinositide 3- kinaz (PI3K) antikò, pwoteyin kinaz B pwoteyin kinaz B (AKT) antikò (AF0016), P -Akt Antibody (AF6261) yo te tout achte nan men Wuhan Qinke Biological Center CO. Kabrit anti-lapen segondè antikò (SA 00001-2) te achte nan men Proteintech, USA.
Parafine slicer (Leica, Almay), mikwoskòp optik (Leica, Almay), Open Field Tès Chanm (Shanghai Xinruan), Morris Dlo labirent -80 ultra-Low Frijidè Tanperati (Thermo Fisher, USA), elèktroforèz, Ltogings) Shaker (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd), pwoteyin jèl sistèm D '(Shanghai Tanon Teknoloji), ak Microplate Reader (Thermo Fisher, USA).

 

1.2 Metòd

1.2.1 Rezo farmakoloji analiz

1.2.1.1 tès depistaj nan engredyan aktif ak pwen sib nan Cistanche Deserticola

Depistaj nan pwen sib nan Cistenche Deserticola: Tout engredyan chimik aktif yo te fouye nan baz done a TCMSP (https://www.tcmsp-e.com) ak cistanche dezè a kòm mo kle a, ak oral yo (OB) ki pi gran pase oswa egal oswa { konpoze yo kolekte; Platfòm ADME SWIS yo te itilize pou konplete engredyan chimik yo pa jwenn nan platfòm TCMSP a ak yon absòpsyon gastwoentestinal (GI absòpsyon) nòt nan "segondè" ak dwòg nan omwen 2 "wi" kòm estanda a, ak ansanm ak engredyan yo komen nan cistanche yo te jwenn pa jwenn pa gen okenn rechèch yo nan pa jwenn yo nan rechèch yo te jwenn nan engredyan yo komen pou jwenn nan pa jwenn yo nan pa jwenn yo nan engredyan yo nan engredyan yo nan CISTANCHE DETRECEDE KOLEKE.
(https://www.uniprot.org) [10].

 

1.2.1.2 Akizisyon nan objektif maladi anons

Sèvi ak "maladi alzayme a" kòm tèm rechèch la, rechèch pou objektif maladi nan OMIM, GeneCards, ak baz done NCBI.

 

1.2.1.3 Venn Dyagram Kreyasyon ak Pwoteyin-Pwoteyin Rezo Entèaksyon (PPI) Konstriksyon

Antre objektif dwòg ak objektif maladi sou sit entènèt la dyagram Venny, kreye yon dyagram Venn, ak jwenn entèseksyon an nan objektif. Enpòte baz done a fisèl yo konstwi yon rezo entèraksyon pwoteyin, mete espès yo byolojik nan "homo sapiens", ak jwenn yon pwoteyin entèraksyon rezo dyagram. Sèvi ak lojisyèl Cytoscape pou filtre objektif debaz ki baze sou degre, fermeture, ak valè ant objektif yo, epi sèvi ak analize ploge nan pou trase graf la.

1.2.1.4 Ale ak analiz KEGG

Sèvi ak platfòm la sou entènèt David ak Metascape sou entènèt platfòm fè GO ak KEGG anrichisman analiz sou pi wo-mansyone objektif yo ki gen rapò ak nwayo, ak ekran atik yo ak P mwens pase oswa egal a 0. 05. Dyagram yo ti wonn nan GO ak analiz anrichisman KEGG yo te trase lè l sèvi avèk platfòm la sou entènèt platfòm mikwo-enfòmasyon.

 

1.2.2 Gwoupman Animal eksperimantal ak Preparasyon Modèl

40 SAMP8 sourit yo te divize owaza nan gwoup la modèl, ki ba-dòz Cistenche dezè gwoup la (L-GCS), medyòm-dòz Cistanche dezè gwoup la (M-GCS), ak segondè-dòz Cistanche Deserticola Group la (H-GCS), ak 10 sourit nan chak gwoup; 10 sourit SAMR1 nan menm sèks la ak pwa yo te itilize kòm gwoup la kontwòl SAMR1. Gwoup la L-GCS, gwoup la M-GCS, ak gwoup la H-GCS yo te gavaged ak GCS nan yon dòz 25 mg/(kg · d), 50 mg/
(kg · d), ak 100 mg/(kg · d), respektivman. Gwoup la SAMR1 ak gwoup la modèl yo te bay dòz la menm nan saline nòmal, ak tout gwoup yo te gavaged pou 30 jou youn apre lòt.

 

1.2.3 Eksperyans konpòtman

1.2.3.1 Morris Eksperyans labirent dlo

Kote Navigasyon Eksperyans: Sou 24th a 30 jou nan administrasyon GCS, yo te eksperyans nan navigasyon kote te pote soti nan premye 1 a 5 jou yo. Te labirent nan dlo divize an kat kadran, ak platfòm la te mete yo nan kadran an twazyèm, yon ti kras pi wo pase sifas dlo a pa 2 cm. Te sourit la mete nan dlo a ak tèt li fè fas a miray la nan pisin lan, epi li te obsève si li te kapab jwenn platfòm la nan 60 segonn yo espesifye epi rete sou platfòm la pou 2 a 3 segonn. Frekans fòmasyon an pou chak sourit te kat fwa nan yon jounen, ak pwen an kòmanse nan chak fwa te yon kadran diferan. Entèval nan tan ant chak de fòmasyon pa ta dwe mwens pase 15 minit. Si sourit la pa t 'jwenn platfòm la nan 60 segonn, li te gide yo rete sou platfòm la pou 3 a 5 segonn. Pandan eksperyans lan, yo te anrejistre latansi chape ak longè chemen chak gwoup sourit yo; Apre 6-7 jou, yo te itilize yon eksperyans eksplorasyon espasyal: yo te retire platfòm nan twazyèm kadran an, epi sourit yo te kòmanse eksperyans eksplorasyon an nan premye kadran an. Tan an eksplorasyon te 60 s, ak nimewo a nan travèse platfòm ak pousantaj nan tan nan kadran an sib nan chak gwoup nan sourit yo te anrejistre.

 

1.2.3.2 y-labirent eksperyans

Y-labirent la konsiste de twa bra nan menm gwosè a ak fòm: bra inisyal la, bra a roman, ak lòt bra yo. Anvan eksperyans lan, yo te antre nan bra a roman bloke, sa ki pèmèt sourit yo lib eksplore rès de bra yo pou 10 min. 1 h Apre eksplorasyon an, yo te antre nan bra a roman louvri, epi yo te sourit la mete nan kòmansman an nan bra inisyal la. Tan an sourit la eksplore bra a roman nan 5 min te anrejistre, ak kantite fwa yo te sourit la avèk siksè antre nan ak soti nan bra a roman kalkile. Yo te kalkile to altènativ espontane sourit la [to altènativ (%)=kantite altènativ siksè/(kantite total antre bra -2) × 100%] [14].

 

1.2.4 Nissl tach

Apre 30 jou nan administrasyon dwòg, sourit yo te anestezi ak perfused ak saline nan kè an. Apre yo te san an te vide, sourit yo te mouri ak tisi nan sèvo te pran. Te tisi nan sèvo nan sourit yo fiks pa imèsyon nan 4% paraformaldeyid pou 24-48 H, dezidrate ak alkòl alkòl gradyan, transparan ak ksilèn, ak entegre nan parafine. Epesè a tranch te 5 μm. Woutin dewaxing nan dlo, metilèn tach ble, diferansyasyon, etanòl dezidratasyon, ksilèn transparan, ak sele résine. Yo te obsève mòfoloji ak kantite newòn nan rejyon CA1 nan ipokanp sourit la anba yon mikwoskòp nan 200 fwa.

1.2.5 tach imunohistochimik

Brain tissue sections were routinely dewaxed to water, placed in sodium citrate antigen repair solution and heated by high-pressure microwave, rinsed with PBS buffer for 5 min×3 times, added endogenous peroxidase blocker, rinsed with PBS for 5 min×3 times, incubated with primary antibody, and incubated at 4 degree overnight. Nan denmen, rense ak PBS tanpon pou 5 min × 3 fwa, Lè sa a, te ajoute solisyon amelyorasyon reyaksyon, lave ankò ak PBS pou 5 min × 3 fwa, enkubasyon ak antikò segondè nan 37 degre pou 20 min, rense ak PBS pou 5 min × 3 fwa, Lè sa a, DAB tache solisyon te itilize pou devlopman koulè, ematoksil counterslins, yo te fè, yo te fè yon ti tan, lè sa a, yo te itilize yo, yo te itilize yo, yo te itilize yo, yo te itilize yo, yo te itilize yo, yo te itilize yo, yo te itilize yo, yo te itilize yo, yo te itilize yo. Transparentize ak ksilèn.

 

1.2.6 Western blot

Te yon pati nan tisi ipokanp sourit ajoute nan pwoteyin ripa lysis tanpon, konplètman tè ak yon baton fanm k'ap pile, omojeneize pa ultrason nan yon beny glas, epi kite sou glas pou 30 min. Lè sa a, sèvi ak yon ultracentrifuge ba-tanperati a santrifijez nan 12, 000 r/min pou 15 min, pran supènant la, epi sèvi ak metòd la BCA detèmine konsantrasyon pwoteyin li yo. Pran 20 ug nan pwoteyin epi ajoute li nan tanpon an loading pwoteyin, denature li nan 100 degre pou 5 min, enstale pre-configuré jèl la konsantre ak jèl separasyon nan tank la elèktroforèz, ak fè 80 V konstan elèktroforèz vòltaj pou 60 min apre loading, ak Lè sa a, ajiste li nan 120 elèktroforèz V konstan vòltaj pou 8 min. Lè sa a, sèvi ak 300 mA konstan aktyèl ak transfere manbràn lan pou 130 min. Blòk ak lèt ​​ekreme nan tanperati chanm pou 2 h, delye antikò prensipal la nan 1: 1 500 fwa, enkubate li nan yon frijidè nan 4 degre lannwit lan, lave manbràn lan, ak enkubate antikò a segondè nan tanperati chanm pou 2 h. Apre devlope ak yon sistèm analiz D ', analize valè a gri nan chak gwoup nan Gwoup Mizik.

 

1.2.7 Analiz estatistik

Tout done yo te eksprime kòm vle di ± devyasyon estanda (x  s), ak SPSS 25. 0 ak graphpad prism9.5 lojisyèl yo te itilize pou analiz done ak grafik. Tès SNK-Q te itilize pou konparezon pè, ak yon sèl-fason Anona te itilize pou konparezon echantiyon miltip. P<0.05 indicated statistically significant differences.