Izolasyon yon ekstrè ki soti nan mikwo-òganis senbyotik koray mou Salinispora Arenicola ki fè egzèsis sitopwoteksyon ak efè anti-aje Pati 1

Résumé: Selil yo te devlope yon sistèm trè entegre responsab pou estabilite proteome, sètadi rezo proteostaz la (PN). Kòm pèt nan proteostaz se yon karakteristik nan aje ak maladi ki gen rapò ak laj, aktivasyon an nan modil PN ka pwolonje span sante a. Isit la, nou prezante done sou byoaktivite yon ekstrè (SA223-S2BM) pirifye nan souch Salinispora arenicola TM223-S2 ki te izole nan koray mou Scleronephthya lewinsohni; koray sa a te ranmase nan yon pwofondè de 65 m soti nan ekosistèm lanmè Wouj mesophotic EAPC (sid Eilat, Izrayèl). Tretman selil imen ak modil pwoteostatik SA223-S2BM-aktive diminye chaj oksidatif ak konfere pwoteksyon kont estrès oksidatif ak jenotoksik. Anplis de sa, SA223-S2BM amelyore aktivite proteazom ak lisosomal-cathepsins nan mouch Drosophila epi li te montre efè pwoteksyon po jan sa pwouve pa anpèchman efikas nan anzim po ki gen rapò ak aje, elastaz, ak tirozinaz. Nou sijere ke ekstrè SA223-S2BM la konstitye yon sous pwomèt pou bay priyorite molekil ak pwopriyete anti-aje.

Glycoside nan cistanche ka ogmante tou aktivite SOD nan kè ak tisi fwa, ak siyifikativman redwi kontni an nan lipofuscin ak MDA nan chak tisi, efektivman scavenging divès kalite radikal oksijèn reyaktif (OH-, H₂O₂, elatriye) ak pwoteje kont domaj ADN ki te koze. pa OH-radikal. Cistanche phenylethanoid glikozid gen yon gwo kapasite scavenging nan radikal gratis, yon pi wo kapasite diminye pase vitamin C, amelyore aktivite a nan SOD nan sispansyon espèm, redwi kontni an nan MDA, epi yo gen yon sèten efè pwoteksyon sou fonksyon manbràn espèm. Cistanche polisakarid ka amelyore aktivite SOD ak GSH-Px nan eritrosit ak tisi nan poumon sourit eksperimantal senesan ki te koze pa D-galaktoz, osi byen ke diminye kontni an nan MDA ak kolagen an nan poumon ak plasma, ak ogmante kontni an nan elastin, gen yon bon efè scavenging sou DPPH, pwolonje tan an nan ipoksi nan sourit senesan, amelyore aktivite a nan SOD nan serom, ak retade koripsyon fizyolojik nan poumon nan sourit senesan eksperimantal Avèk koripsyon selilè mòfolojik, eksperyans yo te montre ke Cistanche gen bon kapasite antioksidan. epi li gen potansyèl pou yo dwe yon dwòg pou anpeche ak trete maladi po aje. An menm tan an, echinacoside nan Cistanche gen yon kapasite enpòtan pou elimine radikal gratis DPPH epi li gen kapasite pou elimine espès oksijèn reyaktif epi anpeche degradasyon kolagen an radikal gratis, epi tou li gen yon efè reparasyon bon sou domaj anyon radikal gratis timin.

Klike sou cistanches herba

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Mo kle: aje; repons antioksidan; mikwo-òganis maren; rezo proteostaz; Salinispora arenicola

1. Entwodiksyon

Aje karakterize pa yon bès ki depann de tan nan kapasite fonksyonèl ak rezistans estrès, osi byen ke pa ogmante mòtalite ak pousantaj morbidite [1]. Aje se pa sèlman yon pwosesis pasif, kòm li se reglemante pa evènman evolisyonè konsève molekilè ak siyal selilè [2,3]. Òganis yo toujou ap defye pa estresan entèn (ki gen rapò ak metabolik) ak ekstèn (rejim oswa anviwònman an), ki ka mennen nan akimilasyon gradyèl nan byomolekil domaje epi evantyèlman konpwomi omeyostazi selilè [4,5]. Pwoteyin yo patisipe nan tout fonksyon selilè esansyèl yo ak Se poutèt sa, omeyostaz proteome (proteostasis) se kritik pou fonksyonalite selilè ak siviv [6].

Se rezo proteostaz (PN) ki konsève entegrite Proteome, ki pwolonje nan tout konpatiman subselilè epi ki reglemante nan nivo selilè, tisi, ak òganis pou asire sante ak lonjevite òganis [7]. Soutni proteostaz mande pou selil yo kowòdone ak kontwole fonksyon sentèz, pliye, klasman, transpò, ak degradasyon tout polipèptid [8,9]. Fonksyon selilè sa yo sitou te pote soti nan twa gwo branch entèkonekte nan PN, sètadi rezo a nan chaperon molekilè, ubiquitin-proteasome-(UPP), ak otofaji-lyzosome-(ALP) chemen pwoteolitik [10,11].

Chaperones molekilè asire bon jan plisman pwoteyin ak antretyen konformasyon, epi yo tou kolabore ak chemen degradasyon yo [12]. UPP se sit prensipal la nan kontwòl kalite sentèz pwoteyin epi li patisipe nan resiklaj nan pwoteyin nòmal ki dire kout ak nan pwoteyin ki pa repare oswa depliye [6], pandan y ap ALP responsab pou rekonesans ak retire nan total pwoteyin ak òganèl domaje. [13]. Pèt nan proteostaz se yon karakteristik nan aje [14], osi byen ke yon gwo faktè risk pou anpil patoloji imen ki gen rapò ak laj, tankou kansè, dyabèt, maladi kadyovaskilè, ak maladi neurodegenerative [15]. Se poutèt sa, deklanchman PN konsidere kòm yon apwòch pwomèt pou retade aparisyon ak / oswa pwogresyon nan aje ak maladi ki gen rapò ak laj [16-18].

Aje po a karakterize pa chanjman estriktirèl ak fonksyonèl nan (pami lòt moun) eleman matris ekstraselilè, tankou elastin [19]. Elastase se anzim ki enplike nan degradasyon elastin, sa ki lakòz devlopman ondilasyon ak pèt elastisite [20]. Tirozinaz se yon anzim kle nan sentèz melanin, ki responsab pou pigmantasyon (pami lòt moun) po moun [21,22]. Sepandan, aktivasyon an twòp nan tirozinaz asosye ak maladi po plizyè, tankou ipèpigmantasyon ak melanom [22,23]. Se poutèt sa, elastase ak anpèchman tirozinaz konstitye yon apwòch enpòtan kont aje po.

Pwodwi natirèl (NPs) gen yon istwa long-byen dokimante, anvan nesans la nan syans modèn ak teknoloji, nan divès kilti-nan trete maladi imen [24-26]. Kidonk, NP yo ka sèvi kòm materyèl kòmanse trè rich ak echafodaj pou devlopman dwòg; vre, plis pase mwatye nan tout dwòg yo se swa NPs, NPs-derive, oswa NPs-enspire [27-29]. Mond maren an, ki gen plis divèsite biyolojik la, yo pa eksplore anpil e se poutèt sa ka pi gwo resous pou dekouvri nouvo NP [30]. Pami òganis ki ap viv nan anviwònman maren, koray mou yo pwomèt founisè NP byoaktif epi yo konnen yo òganize anpil mikwo-òganis divès [31,32].

Etandone reyalite sa yo, kounye a nou ap fè yon tès depistaj gwo-debi nan NP yo idantifye molekil byoaktif ki ka potansyèlman retade senesans selilè ak / oswa aje in vivo. Nan etid ki prezante a, nou te egzamine yon ekstrè metanolik, sètadi SA223-S2BM, souch Salinispora arenicola (S. arenicola) TM223-S2 nan aplike tès in vitro, osi byen ke selil ki baze sou. ak apwòch bio-gide nan vivo. S. arenicola TM223-S2 souch te izole nan koray mou Scleronephthya lewinsohni (S. Levinson) (okòmansman te rele Scleronephthya lewinsohni pa Verseveldt ak Benayahu, 1978), ki te jwenn dirab nan ekosistèm mesophotic Lanmè Wouj EAPC ( sid Eilat, Izrayèl) nan yon pwofondè de 65 m. Ekstrè metanolik SA223-S2BM la aktive mekanis sitopwotektif tou de nan selil imen ak Drosophila melanogaster (D. melanogaster) mouch ak egzèse nan vitro pwopriyete pwoteksyon po. Se poutèt sa, ekstrè SA223-S2BM a ta ka sous pou idantifikasyon posiblite molekil ak pwopriyete potansyèl sitopwotektif ak anti-aje.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Orijin ak izolasyon ekstrè SA223-S2BM

2.1.1. Koleksyon koray

Koray mou S. Levinson la te kolekte pa yon ROV H800 (ECA Robotics) ki te opere pa Sam Rothberg R/V nan Enstiti Entè-University pou Syans Marin nan Eilat (IUI). Nan plas, fotografi te pote soti nan yon ti limyè nwa ak blan kamera VS300 (ECA Robotics) ak kamera 1CAM Alpha HD (SubC Imaging). Echantiyon yo te jwenn pa bra ROV ki soti nan resif mesophotic nan Eilat, nan tèminal jet lwil oliv la (29◦300 47.0900 N, 34◦{350 56.7100 E), nan 65 m, sou 7 mas. 2017. Sit koleksyon an karakterize pa yon pant modere ak plak wòch ki antoure pa yon maren sab. Lè yo fin kolekte, materyèl la te jele imedyatman nan -80 ◦C. Yo te konsève yon echantiyon bon nan 70 pousan etanòl pou idantifikasyon taksonomik epi depoze nan Steinhardt Museum of Natural History, Tel Aviv University (SMNHTAU_Co{_37500).

2.1.2. Izolasyon souch ak Idantifikasyon

S. arenicola TM223-S2 te izole nan yon echantiyon 1 mL S. Levinson. Echantiyon koray mou yo te ranmase a te piye nan dlo lanmè esteril epi yo te chofe a 50 ◦C pou 1 èdtan. Sispansyon ki te lakòz yo te dilye seri, plake sou medyòm agar izolasyon selektif, epi enkubasyon nan 28 ◦C pou omwen 6 semèn. Yo te izole souch Salinispora a, epi yo te pirifye koloni an sou agar bouyon maren (MBA) (Difco, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) epi yo te konsève nan -20 ◦C nan yon solisyon gliserin 10 pousan.

2.1.3. Envestigasyon Filojeni

Yo te fè analiz filojenik lè l sèvi avèk yon fragman jèn 16S rRNA anplifye nan ADN jenomik S. arenicola TM223-S2. ADN jenomik souch TM223-S2 a te izole lè l sèvi avèk yon Twous DNeasy San ak Tisi (Qiagen), dapre enstriksyon manifakti a. Fragman 16S ribosomal RNA a te anplifye pa PCR lè l sèvi avèk primè 16S F 27, AGA GTT TGA TC(AC) TGG CTC AG (Tm: 56.3 ◦C), ak 16S R 1492, TAC GG(CT) TAC CTT GTT ACG ACT T ( Tm: 57.5 ◦C). Anplikon yo te sekans pa sekans Sanger ak sekans yo te aliyen kont baz done 16S ribosomal RNA nan pwojè Targeted Loci nan NCBI lè l sèvi avèk MUSCLE. Te aliyman an manyèlman enspekte, epi twou vid ki genyen yo te retire. Istwa evolisyonè a te dedwi lè yo itilize metòd maksimòm chans ak modèl Tamura-Nei [33] ak 1000 replike. Pyebwa inisyal la pou rechèch euristik la te jwenn otomatikman lè w aplike algorithm vwazen-join ak BioNJ nan yon matris distans pairwise yo estime lè l sèvi avèk apwòch maksimòm konpoze (MCL) ak Lè sa a, chwazi topoloji a ak yon valè chans siperyè. Analiz evolisyonè yo te fèt nan MEGA X vèsyon 10.1.7 [34].

2.1.4. Kondisyon Kiltivasyon

S. arenicola TM223-S2 espò yo te konsève nan -20 ◦C nan 10 pousan gliserin. Anvan kiltivasyon, souch la te reviv pou 15 jou sou yon plak Petri 15 cm ki gen MB (Difco, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) complétée ak 2 pousan Agar (Difco, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA). , USA). Dlo lanmè esteril (4 × 10 mL) te vide sou sifas plak la, epi yo te refè espò yo ak miselyòm nan plak la pa grate dou sifas la ak yon bistouri pou jenere inoculum la. Fèmantasyon nan eta likid (LSF) te fèt nan yon flacon Erlenmeyer 2 L pou 20 jou nan 28 ◦C ak 130 rpm ajitasyon. Rezin Amberlite XAD16 (30 g/L) (Amberlite XAD16HP N, Certis, Lenntech, Delfgauw, Netherlands) te ajoute anvan esterilizasyon pou pèmèt pyèj in situ metabolit mikwòb yo. Yo te itilize senk mililit inoculum pou bay 1 L sou MB ki gen 30 g résine Amberlite XAD16. Fèmantasyon nan eta agar makonnen ak ekstraksyon solid-faz (SPE) [35] te fèt sou mwayen MB (Difco, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) siplemantè ak 2 pousan Agar (Difco, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) plis pase 20 jou nan 28 ◦C. Esterilize Amberlite XAD16 (35 g) melanje ak 35 mL nan inoculum te gaye omojèn sou sifas 1 MB agar Petri plak (25 cm × 25 cm).

Pou LSF, résine XAD16 la te separe de kilti bouyon an atravè filtraj epi lave ak dlo anvan yo te eliye ak acetate etil (100 mL) ak Lè sa a, ak metanol (100 mL). Eluates yo te konsantre nan sechrès nan vacuo ak solubilize nan DMSO nan konsantrasyon 10 mg / mL. Ekstrè ki te lakòz, SA223-S2LAE (ekstrè lè l sèvi avèk acetate etil), yo te itilize pou evalyasyon byolojik.

Pou SPE, résine XAD16 la te refè pa ak anpil atansyon grate sifas plak agar la. Yo te lave résine a refè ak dlo pou elimine byomass la anvan yo te eliye ak acetate etil (100 mL) ak Lè sa a, ak metanol (100 mL). Eluates yo te konsantre nan sechrès nan vacuo ak solubilize nan DMSO nan konsantrasyon 10 mg / mL. Ekstrè ki te lakòz yo, SA223-S2BAE (ekstrè avèk acetate etil) ak SA223-S2BM (ekstrè lè l sèvi avèk metanol), yo te itilize pou evalyasyon byolojik.

2.2. Aktivite elastaz ak tirozinaz inhibition

Aktivite inhibition elastase ekstrè priyorite a te evalye lè l sèvi avèk elastase nan pankreyas kochon (PPE) kalite IV (Merck KGaA, Darmstadt, Almay) ak substra N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (Merck KGaA, Darmstadt, Almay), jan yo dekri deja [36]. Yo te detèmine kapasite ekstrè a pou anpeche aksyon katalitik tirosinaz nan oksidasyon L-DOPA nan dopachrome, jan yo te deja rapòte [37].

2.3. Liy Selilè, Kondisyon Kilti Selil, ak Vitabilite Selil

Human foreskin fibroblasts (BJ cells) were purchased from the American Tissue Culture Collection (ATCC), while human immortalized keratinocytes (HaCaT cells) were obtained from Elabscience, Inc. Both cell lines were cultured in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) supplemented with 10 percent (v/v) fetal bovine serum (FBS) and 1 percent (v/v) non-essential amino acids and were maintained in conditions of 5 percent CO2, 95 percent humidity and 37 ◦C. In all experimental procedures applied, cells were subcultured by using a trypsin/EDTA solution (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA). The effect of the SA223-S2BM extract on cell viability was estimated using the MTT assay, as previously reported [38]. Cell treatment with hydrogen peroxide (H2O2) and doxorubicin (DXR) was performed as described in figure legends; H2O2 and DXR were obtained from Merck KGaA (Darmstadt, Germany).

2.4. Liy Drosophila ak Esè lonjevite

Nan etid sa a, nou te itilize souch Drosophila w1118 ki te achte nan Bloomington Drosophila Stock Center (Bloomington, IN, USA). Mouch yo te kenbe nan 25 ◦C ak 60 pousan imidite sou yon limyè 12 h: sik fè nwa 12 h. Nan tout eksperyans prezante yo, yo te analize sèlman tisi somatik (tèt ak thorax) nan mouch, depi tisi repwodiktif montre règleman diferan nan mekanis pwoteostatik ak pousantaj aje konpare ak tisi somatik [39].

Lonjevite mouch yo te teste jan sa dekri anvan [40] lè l sèvi avèk mouch fi ak gason (egal kantite pou chak sèks) ki te kiltive nan flakon ki gen (oswa pa) ekstrè etidye a. Mouch yo te transfere nan flakon ak manje fre chak de jou ak lanmò yo te bay nòt chak jou. Pou koub siviv ak analiz estatistik, yo te itilize pwosedi Kaplan-Meier ak tès log-rank (Mantel-Cox); siyifikasyon yo te aksepte nan p <0.05.

2.5. Mezi espès oksijèn reyaktif (ROS)

Selil oswa tisi mouch yo te enkube ak koloran CM-H2DCFDA (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) nan yon konsantrasyon 10 µM nan PBS pou 30 minit nan fè nwa (37 ◦C ak 25 ◦C, respektivman). Apre retire koloran, selil oswa tisi mouch yo te enkube ak PBS pou 15 minit nan fè nwa (37 ◦C ak 25 ◦C, respektivman), lysed nan tanpon lysis [150 mM NaCl, 1 pousan (v/v) NP{{ 11}}, 50 mM Tris, pH 8.0] epi, answit santrifuje nan 14,000 g pou 15 min (4 ◦C). Apre sa, kontni pwoteyin yo te mezire ak tès Bradford (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA), epi yo te mezire fliyoresans pwodwi a nan yon lektè microplate Spark® multimode (Tecan Trading AG, Männedorf, Swis) nan eksitasyon. ak longèdonn emisyon nan 490 ak 540 nm, respektivman. Oksijene idwojèn (H2O2) te itilize kòm yon kontwòl pozitif, kòm li se lajman li te ye pou lakòz domaj oksidatif / estrès [41].

2.6. Ekstraksyon RNA, sentèz cDNA, ak analiz PCR an tan reyèl (Q-RT-PCR)

Total RNA te extrait de cellules itilize RNAiso plus (Takara Bio Inc., Shiga, Japon) Et quantifier ak yon BioSpec-nano spectrophotometer (Shimadzu Inc., Kyoto, Japon). Apre sa, 1 µg RNA te konvèti nan cDNA lè l sèvi avèk FastGene Scriptase II cDNA Twous (NIPPON Genetics, Düren, Almay). Pou fè analiz Quantitative Real-Time PCR, yo te itilize 5x HOT FIREPol® EvaGreen® qPCR Supermix (Solis BioDyne, Tartu, Estoni) ak PikoRealTM Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA). Jadendanfan espesifik pou jèn imen yo etidye yo te jan sa dekri anvan [42]. Jèn HMBS yo te itilize kòm yon normalizatè.

2.7. Immunoblotting analiz ak mezi nan Proteasome ak Cathepsins Aktivite

Etid imunoblotting yo te fèt jan sa dekri deja [43]. Antikò segondè primè ak refor peroksidaz konjige pou 1 èdtan nan tanperati chanm ak imunoblots yo te devlope lè l sèvi avèk yon twous reyaktif chemiluminescence amelyore (ClarityTM Western ECL Substrate, Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA). Kantite imunoblots te fèt pa eskanè densitometri ak lojisyèl ImageJ [44].

Aktivite anzimatik Proteasome ak kathepsin nan selil oswa tisi mouch yo te mezire nan yon sistèm fliyomèt VersaFluor™ (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA) lè l sèvi avèk Suc-LLVY-AMC (kimotripsin-tankou aktivite, CT-L) ak Z-FR-AMC fluoropeptides (Enzo Life Sciences, Inc., Farmingdale, NY, USA), respektivman, jan yo dekri deja [42,45,46]. 6-bromoindirubin-30 -oksim (6BIO) te itilize kòm yon kontwòl pozitif, kòm li konnen yo aktive UPP tou de nan selil imen ak mouch Drosophila [42,47]; Rapamycin dwòg la, te itilize kòm yon kontwòl pozitif pou ALP ak endiksyon cathepsin [48].

2.8. Antikò yo itilize

Antikò prensipal kont 5 (sc-55009) sousinite proteazòm, NQO1 (sc-16464), Beclin 1 (BECN1) (sc{-11427), Clusterin (CLU) (sc{{7} }), HSP27 (sc-13132), HSP70 (sc-59570), ak GAPDH (sc{-25778), osi byen ke antikò segondè ki konjige ak peroksidaz refor, yo te achte nan men Santa Cruz. Biotechnology, Inc. (Dallas, TX, USA). Antikò prensipal yo kont 53BP1 (4937), fosfo-Histone H2A.XSer139 (H2A.X) (9718) ak fosfò-p53Ser15 (9286) yo te jwenn nan Cell Signaling Technology, Inc. (Danvers, MA, USA). Antikò kont SQSTM1/p62 (BML-PW9860) te achte nan men Enzo Life Science, Inc. (Farmingdale, NY, USA).

2.9. Analiz estatistik

Eksperyans yo te fèt omwen an kopi. MS Excel te itilize pou analiz estatistik yo. Siyifikasyon estatistik yo te evalye lè l sèvi avèk T-tès Elèv la (t-tès). Pwen done yo koresponn ak mwayen eksperyans endepandan yo ak ba erè yo vle di devyasyon estanda a (SD); siyifikasyon nan p < 0.05 oswa p < 0.01 endike nan graf pa youn oubyen de asteris, respektivman.

3. Rezilta yo

3.1. Idantifikasyon Aktinomycete ki asosye ak Soft Coral S. Levinson

Souch mikwòb ki vize a te izole nan koray S. Levinson, ki se yon koray mou andemik nan Lanmè Wouj la. Koloni koray sa yo tipikman jwenn nan sit pwofon, tou de nan ekosistèm anwo resif koray mezofotik (30-60 m) ak nan ekosistèm resif koray mesophotic ki pi ba yo (60-105 m) [49]. Anplis, li se yon koray mou azooxanthellate ki jwenn kondisyon enèjik li yo pa manje filtre epi, kidonk, li jwenn nan abita ki ekspoze a kouran dlo fò.

Soti nan analiz filojenetik ki baze sou sekans rRNA 16S la, yo te jwenn izole TM223-S2 ki fè pati salinispora a (Figi 1).

Piske S. arenicola ka distenge ak S. Pacifica ak S. tropica baze sou sekans rRNA 16S [50], nou te nonmen izole sa a S. arenicola TM223-S2 ak yon nimewo aksè Genbank MW446171. Souch la te kiltive jan yo rapòte nan Seksyon Materyèl ak Metòd ak ekstrè respektivman pa acetate etil ak metanol. Preliminè envestigasyon byolojik te endike ekstrè ki soti nan kilti likid la, SA223-S2BAE, ak ekstrè acetate etil ki soti nan kilti solid la, SA223-S2LAE, pa t gen okenn aktivite byolojik enpòtan (Figi S1). Se poutèt sa, se sèlman ekstrè metanolik ki soti nan kilti solid ki asosye ak ekstraksyon solid-faz, SA223-S2BM, nan etid sa a.

3.2. Ekstrè SA223-S2BM la pa montre okenn toksisite nan selil imen yo epi li aktive eleman kle nan PN a.

Premyèman, nou egzamine efè SA223-S2BM sou rantabilite fibroblast BJ po nòmal yo ak keratinosit HaCaT ki imòtalize moun lè nou fè tès toksisite MTT la. Pou rezon sa a, selil yo te enkube pou 24 èdtan ak ogmantasyon konsantrasyon nan ekstrè a epi, jan yo montre nan Figi 2A1, A2, ekstrè a pa egzèse yon efè sitotoksik sou youn nan de liy selil yo egzamine nan konsantrasyon jiska 10 µg/mL. ; nan pi wo konsantrasyon (pi wo pase 10 µg/mL), ekstrè a diminye viabilite selil sitou nan selil HaCaT.

Lè sa a, nou etidye efè ekstrè a sou wout selilè, ki asire estabilite proteome selil la. Nou te obsève ke ekspoze a kout tèm (24 èdtan) nan fibroblast BJ nan ekstrè etidye a siyifikativman pwovoke ekspresyon jèn proteazòm PSMB7 la (nan yon konsantrasyon 10 µg/mL), pandan y ap nan paralèl, li te gen tandans ogmante ekspresyon nan. PSMB6 jèn nan menm konsantrasyon (Figi 2B1). Anplis de sa, ekstrè a pwovoke ekspresyon jèn nan proteasome 20S, PSMB6, ak nan jèn nan proteasome 19S, RPN11 nan yon konsantrasyon nan 1 µg / mL nan selil HaCaT (Figi 2B2). Anplis de sa, tretman nan fibroblast BJ ak ekstrè a pou 24 èdtan te mennen nan yon endiksyon modere nan nivo ekspresyon nan sousinite proteasome 20S 5 nan konsantrasyon nan 1 µg / mL (Figi 2C). Nan sipò konklizyon nou yo, ekspoze a ekstrè a siyifikativman ogmante aktivite proteazom chymotrypsin-tankou tou de nan fibroblast BJ ak keratinosit HaCaT apre 24 h enkubasyon (Figi 2D1, D2); rezilta yo diferan nan konsantrasyon yo egzamine nan ekstrè a nan mitan BJ ak HaCaT selil yo ka atribiye nan efè selil tip-espesifik.

Anplis de sa, analiz ekspresyon Q-RT-PCR te revele ke tretman nan fibroblast BJ ak ekstrè a pou 24 èdtan pwovoke nivo ekspresyon jèn ki gen rapò ak ALP, yo te rele CTSB, CTSL, CTSD, ak SQSTM1, nan yon konsantrasyon 10 µg/mL ( Figi 3A1). Pli lwen, nou te obsève ke ekspoze nan selil HaCaT nan ekstrè a pou 24 èdtan te mennen nan endiksyon nan nivo ekspresyon jèn ki enplike nan fonksyonalite ALP (CTSB, CTSL, CTSD, ak SQSTM1) (Figi 3A2).

Nan liy ak rezilta sa yo, nou te note ogmantasyon nan pwoteyin ki gen rapò ak otofaji BECN1 ak SQSTM1 / p62 apre ekspoze nan fibroblast BJ nan ekstrè a nan konsantrasyon nan 1 µg / mL (Figi 3B1); Ogmante nivo ekspresyon nan pwoteyin BECN1 ak SQSTM1/p62 yo te obsève tou nan keratinosit HaCaT nan tou de konsantrasyon etidye (Figi 3B2). An akò, nou te jwenn ke ekstrè a amelyore aktivite anzimatik lysosomal cathepsins nan tou de selil BJ ak HaCaT (Figi 3C1, C2); ankò, rezilta yo diferan nan konsantrasyon yo egzamine nan ekstrè a nan mitan BJ ak HaCaT selil yo ka atribiye nan efè selil kalite espesifik.

Anplis de sa, nou egzamine efè ekstrè a sou nivo ekspresyon kle molekilè chaperon yo. Kidonk, analiz imunoblotting te revele ke ekstrè a te pwovoke nivo ekspresyon molekilè chaperon CLU (nan tou de konsantrasyon etidye) nan selil BJ (Figi 3D1), osi byen ke nan HSP27 (1 µg/mL) ak HSP70 (nan tou de konsantrasyon etidye) nan selil HaCaT (Figi 3D2).

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】