Fixatif Karnovsky a anpeche zafè parèt kòm vakilasyon ki sòti nan pwosesis tisi nan ren yo trete ak oligonukleotid antisans Ⅰ

Résumé: Oligonukleotid antisans(ASO) terapi yo te idantifye kòm yon nouvo modalite tretman poumaladi intractable. Nanren trete ak ASO, vakuol, san konte granules basophilic, yo souvan obsève nan tubul proximal yo. Gen kèk rapò ki dekri ke vakuol sa yo gen anpil chans yo dwe yon fenomèn segondè ki soti nanekstraksyon nan ASO yopandan pwosesis tisi yo. Nan etid sa a, nou te konpare mòfoloji ren apre fixation ak fixative Karnovsky a oswa 4% paraformaldehyde fosfat tanpon (PFA) ak sa yo ki nan 10% solisyon net-tanpon fòmaldeyid (NBF). Yo te egzamine rat Sprague-Dawley fi, ki te trete nan venn kat fwa ak 50 mg/kg asid nikleyik fèmen ki gen oligonukleotid antisans (LNA-ASOs) pou 1 oswa 2 semèn. Mikwoskopik, vakuol ak granules basophilic nan tubul proximal yo te obsève nan ren yo fiks ak NBF. Granules basofil yo endike akimilasyon ASO yo. Anplis, kèk nan vakuoles yo tou te genyen ti granules basophilic, sijere ke vacuoles yo te gen rapò ak akimilasyon ASOs. Malgre ke yo te obsève vacuolation modere nan tubul proximal yo, majorite nan epitheli vacuolated yo te negatif pou molekil aksidan ren -1 sou tach imunohistochimik. Vacuoles nan tubul proximal yo pa te obsève nan echantiyon ki sibi fiksasyon Karnovsky a, byenke granules basophilic yo te obsève. Nan echantiyon ki sibi fiksasyon PFA, vakuol ak granules basofil yo te obsève nan tubul proximal yo, menm jan ak sa yo ki nan echantiyon ki sibi fiksasyon NBF. An jeneral, rezilta nou yo te demontre posiblite pou ègzajere vakuolasyon akòz zafè pandan pwosesis tisi lè w ap itilize fiksasyon NBF konvansyonèl yo. Se fixative Karnovsky a konsidere kòm yon altènatif itil pou fè distenksyon ant vakuol atifisyèl ak nefrotoksisite vre. (DOI: 10.1293/tox.2021-0007; J Toxicol Pathol 2021; 34: 367–371)

Mo kle:oligonukleotid antisans, zafè,fiksatif Karnovsky a, vakuolation, granules basophilic, ren

Sipleman Cistanche Sipleman Sipò Fonksyon ren PhGs75% Ech 30% Lwa 12%

Dènyèman, terapi antisans oligonukleotid (ASO) yo te etabli kòm nouvo modalités pou tretman maladi intractable1, 2. ASO yo se oligodeoxynucleotides kout, sentetik, yon sèl-bloke ki mare nan asid ribonukleik ak siprime ekspresyon jèn3.

Toksikolojik, ASO-induit toksisite yo klase nan ibridizasyon-depandan toksisite, ki gen rapò ak sekans ASO a, ak ibridizasyon-endepandan toksisite, ki gen rapò ak modifikasyon chimik. Twa mekanis prensipal yo pwovoke toksisite ibridizasyon-endepandan yo: 1) akimilasyon ASO, 2) efè pro-enflamatwa, ak 3) efè obligatwa aptamerik4. Akimilasyon ASO yo obsève prensipalman nan fwa ak ren, ak akimilasyon twòp mennen nan malfonksyònman ògàn sa yo5. Se efè pro-enflamatwa pwovoke pa eksitasyon nan sistèm iminitè natirèl la atravè lyezon ak reseptè Toll-tankou nan rat ak makak oswa aktivasyon nan chemen an konpleman altènatif atravè anpèchman nan faktè H pa ASOs nan makak6. Efè a aptamerik obligatwa pwovoke deklanchman plakèt ak agrégasyon / tronbositopeni mare reseptè a plakèt-espesifik. Anplis, aptamerik obligatwa nan pwoteyin entraselilè nan epatosit konsidere kòm youn nan kòz yo nan epatotoksisite8-10. Pou detekte toksisite sa yo, chèchè yo te devlope plizyè tès ki pa klinik; pami sa yo, egzamen istopatolojik se youn nan tès ki pi sansib pou detekte akimilasyon ASO.

Istopatolojikman, akimilasyon ASO yo souvan obsève kòm granules basophilic nan sitoplasm selil Kupffer nan fwa a oswa tubul proximal nan ren yo. Akimilasyon enpòtan nan granules basophilic korelasyon ak yon ogmantasyon ensidans oswa severite nan chanjman dejeneratif, souvan obsève kòm vakyolasyon oswa koripsyon / nekwoz nan epitelyal la proximal tubulaires nan ren yo4. Granules basophilic pou kont yo pa konsidere kòm toksikolojik enpòtan11; Se poutèt sa, diferansyasyon nan akimilasyon granul basofil soti nan chanjman dejeneratif enpòtan pou evalye toksisite ki gen rapò ak ASO.

Vacuoles, ki souvan obsève nan tubul proximal nan ren makak cynomolgus trete ak ASO, gen materyèl basophilic ak montre menm distribisyon jeneral nan selil yo kòm granules basophilic11, 12. Kèk rapò te sijere ke pwosesis la fikse ka enfliyanse la. aparans nan akimilasyon ASO nan lòj la phagolysosomal5, 11. Anplis de sa, Henry et al. ak Engelhardt te dekri ke vakuoles nan tubul proximal yo gen anpil chans yo dwe yon fenomèn segondè ki soti nan ekstraksyon nan ASO yo pandan pwosesis paske vacuoles yo absan nan ren paraformaldehyde / glutaralde hyde perfusion-fixed ren5, 11. Vacuoles nan tubul proximal yo nan makak trete. ak mipomersen yo te espekile parèt pandan pwosesis la fixation13.

Kidonk, byenke vakyolasyon akòz tretman ASO ka yon zafè nan kèk ka, ipotèz sa a pa te klèman pwouve, epi pa gen okenn rapò ki te idantifye metòd fiksasyon apwopriye pou evalyasyon toksikolojik. An konsekans, nan etid sa a, nou konpare mòfoloji ren apre fiksasyon ak fiksatif Karnovsky oswa 4% paraformaldehyde fosfat tanpon (PFA) ak sa yo ki nan 10% solisyon net-tanpon fòmaldeyid (NBF). Anplis de sa, nou te demontre itilite fiksatif Karnovsky a kòm yon fiksasyon altènatif pou anpeche vakuolasyon ki sòti nan artefact.

Rat Sprague-Dawley fi ki gen kat semèn te achte nan men Charles River Laboratories Japan Inc. (Kanagawa, Japon) epi yo te aklimate ak kondisyon laboratwa. Bèt yo te kenbe nan kondisyon kontwole (12-èdtan sik limyè/fè nwa, tanperati 23 ± 2 degre, imidite relatif 50 ± 25%) epi yo te pèmèt aksè gratis nan yon rejim komèsyal estanda (otoklave CR-LPF; Oriental Yeast Co., Ltd., Tokyo, Japon) ak dlo tiyo. Ven bèt yo te atribye nan kat gwoup sa yo (avèk senk bèt chak): 1-semèn gwoup trete saline (Kontwòl- 1W), 2-semèn gwoup trete saline (Kontwòl{ {14}}W), 1-semèn ki fèmen asid nikleyik ki gen gwoup trete oligonukleotid antisans (LNA-ASO) (ASO-1W), ak 2-semenn gwoup trete LNA ASO (ASO-2W). Bèt yo te gen 5 semèn nan moman inisyasyon 50 mg/kg LNA-ASO administrasyon an. Yo te administre LNA-ASO nan venn kat fwa an total selon rejim sa a: jou 1, 4, 8, ak 11 nan gwoup ASO-2W; ak jou 1, 2, 3, ak 4 nan gwoup ASO-1W. Bèt ki nan gwoup Kontwol-1W ak ASO-1W yo te sakrifye nan 7 jou. Bèt ki nan gwoup Control-2W ak ASO-2W yo te sakrifye nan jounen an. 14. Nan chak necropsy tèminal, yo te ranmase echantiyon san pou patoloji klinik nan venn kava nan vant anba anestezi gwo twou san fon ak isoflurane. Apre pran echantiyon san, yo te elimine tout rat pa exsanguination pa imedyatman koupe aorta nan vant. Sifas kò ekstèn lan, kavite thoracic ak nan vant, ak viscera yo te egzamine macroscopically, epi ren gòch yo te retire epi trete pou egzamen mikwoskopik. Tout pwosedi yo te fèt an akò ak Règ pou Manje ak Depo nan bèt eksperimantal ak eksperyans bèt nan Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation.

Echantiyon serom yo te jwenn nan santrifuge echantiyon san yo nan 4 degre. Yo te fè analiz byochimik serik lè l sèvi avèk yon enstriman TBA-2000FR (Canon Medical Systems Corporation, Tochigi, Japon) pou evalye nivo nitwojèn ure nan san (BUN) ak nivo kreyatinin (CRE).

Yo te fikse ren yo lè l sèvi avèk twa solisyon fikse jan sa a: Apre yo fin divize ren an transversalman an twa segman, yo te fikse pòsyon mitan an ki gen ladan basen ren an nan 10% NBF pou 5 jou; pòsyon kranyal la te fiks nan fixative Karnovsky a (Muto Pure Chemicals Co., Ltd., Tokyo, Japon); ak pòsyon caudal la te fikse nan 4% PFA pou 17 èdtan nan 4 degre ak Lè sa a, mete nan 10% NBF pou 24 èdtan. Chak echantiyon fiks te dezidrate ak entegre nan parafine. Seksyon tisi yo te prepare pou ematoksilin ak eozin (H&E) tach. Yo te fè tach imunohistochimik lè l sèvi avèk antikò ki vize molekil blesi ren -1 (KIM-1; R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA; dilution 1:300) ak pwoteyin manbràn lizozomal ki asosye 2 (LAMP{{ 13}}; Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA; dilusyon 1:1000) apre rekipere antijèn (tanpon citrate, pH 6.0, chofe pou 10 min oswa chofe anba presyon pou 20 min). Histofine Senp Stain Rat MAX PO (Nichirei Biosciences Inc., Tokyo, Japon) te itilize kòm antikò segondè.

Sèvis Sipò Wecistanche:

Imèl:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Achte pou plis detay espesifikasyon:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-boutik