Aks Hepcidin/ferroportin nan ren kontwole reabsòpsyon fè epi li detèmine mayitid ren ak Surcharge fè sistemik.

Kontakte: emily.li@wecistanche.com

Goran Mohammad1, Athena Matakidou2, Peter A. Robbins1, ak Samira Lakhal-Littleton1

MO KLE:ferroportin; emokromatoz; èpcidin; fè; Surcharge fè;rentubules

Ferroportin (FPN) se sèl pwoteyin ekspòtasyon fè nan mamifè li te ye. Li medyatè lage fè nan sikilasyon an soti nan enterocytes duodnal ak macrophages reticuloendothelial las, sit respektif nan absòpsyon fè ak resiklaj.1,2 FPN-medyatè lage fè se antagonize pa òmòn hepcidin, ke yo rele tou hepcidin antimicrobienne peptide (HAMP). Pwodui prensipalman nan fwa a, hepcidin mare ak pwovoke entèrnalizasyon nan FPN, kidonk limite lage fè nan sikilasyon an ak disponiblite li nan tisi periferik.3,4 Kidonk, aks HAMP / FPN la opere nan sit absòpsyon ak resiklaj pou kontwole sistèm nan. omeyostazi fè.

Ren a se sit la nan reabsòpsyon fè. Tou de fè ki pa lye ak transferin ak transferin ka travèse nan fifiltrate glomerulè a.5 Se vas majorite nan fè sa a pran tounen nan epiteli a tubulaires. Plizyè transpòtè yo te enplike nan reuptake sa a, ki gen ladan konplèks reseptè megalin-cubilin multiligand, reseptè transferrin 1, transpòtè metal divalan 1, transpòtè zenk ZIP8, ak transpòtè zenk ZIP14.5–10.

Yon fwa nan larenepiteli, se fè reabsòbe nan sikilasyon an. FPN abondan nanrenepi li te enplike nan reabsorption fè.11–14 Sepandan, li rete enkoni si FPN ren tou sijè a règleman pa HAMP andojèn nan kondisyon fizyolojik nòmal, epi si se konsa, si règleman sa a enpòtan pou omeyostazi sistemik ak / oswa ren fè.

Pou adrese kesyon sa yo, nou te pwodwi yon modèl sourit roman ak yon induciblerentibil– espesifik knock-in nan fpnC326Y, ki kode yon pwoteyin FPNC326Y ki reziste HAMP. Anplis de sa, konfime wòl FPN ki te deja rapòte nan reabsòpsyon fè, nou menm tou nou te pwodwi yon modèl sourit ak yon inductible.rentibil– efase espesifik nan jèn nan fpn. Rezilta nou yo demontre ke HAMP andojèn dirèkteman kontwole absòpsyon fè FPN-medyatè e ke règleman sa a enpòtan pou tou de.renak omeyostazi sistemik fè, patikilyèman nan anviwònman an nan disponiblite depase fè.

Etid sa a se premye moun ki itilize sourit ki genyen pèt ren espesifik nan reyaksyon HAMP pou detèmine fòmèlman.enpòtansnan larenHAMP/FPN aks. Li bay nouvo Sur nan wòl nan reabsòpsyon fè nan detèmine degre nan ren ak ekstrarenal surcharge fè nan anviwònman an nan emokromatoz.

METÒD

Sourit

Tout pwosedi bèt yo te konfòme ak Lwa 1986 sou Lwa 1986 sou Biwo Kay UK a epi yo te apwouve pa Komite Revizyon Etik Divizyon Syans Medikal University of Oxford.

Alèl kondisyonèl fpnflfl ak fpnC326Yflfl yo te pwodwi jan sa dekri anvan an.15,16

Sourit ki gen transjèn Pax8.CreERT2þ te yon kado nan men Doktè Athena Matakidou, Rechèch Kansè UK Cambridge Institute, University of Cambridge. Sourit sa yo te pwodwi jan sa dekri anvan an.17 Tout sourit yo te sou yon background C57BL/6.

Rejim

Sòf si yo di otreman, bèt yo te bay yon rejim alimantè estanda manje wonjè ki gen 200 pati pou chak milyon (ppm) fè. Nan eksperyans manipilasyon fè, sourit yo te bay yon rejim ki chaje ak fè (5000-ppm fè; Teklad TD.140464) oswa yon rejim alimantè ki matche ak kontwòl (200- ppm fè; Teklad TD.08713) soti nan sevraj pou 3. mwa.

Kantite fè ak endis fè 

Nivo serik fè ak ferritin yo te detèmine lè l sèvi avèk sistèm ABXPentra (Horiba Medical). Mikwokuvèt emoglobin HemoCue Hb 201 te detèmine valè emoglobin yo. Nivo erythroferrone serom yo te mezire pa tès imunosorban ki lye ak anzim (Intrinsic Lifesciences). Detèminasyon total fè elemantè nan tisi yo te fèt pa espektrometri mas plasma endiktif makonnen, jan sa dekri deja.15,16,18 Kalibrasyon te reyalize lè l sèvi avèk pwosesis adisyon estanda, kote Spikes nan 0 ng/g, 0.5 ng/ g, 1 ng/g, 10 ng/g, 20 ng/g, ak 100 ng/g fè yo te ajoute nan replike nan yon echantiyon chwazi. Yon estanda fè ekstèn (High Purity Standards ICP-MS-68-Yon solisyon) te dilye epi mezire pou konfime validite kalibrasyon an. Rodyòm tou te pike sou chak vid, estanda, ak echantiyon kòm yon estanda entèn nan yon konsantrasyon nan 1 ng / g. Pou kantite fè pipi, yo te kolekte pipi nan sourit sou yon peryòd de 24 èdtan, epi yo sijè a espektometri mas endiktif makonnen plasma. Nivo kreyatinin nan menm echantiyon yo te mezire lè l sèvi avèk yon twous tès kreyatinin kolorimetrik (Abcam; ab65340), ak valè fè yo te nòmalize nan konsantrasyon kreyatinin.

Imunohistochimi 

Imunostaining fliyoresan yo te fèt nan seksyon tisi ki fikse nan fòmalin, ki entegre parafifin, lè l sèvi avèk antikò FPN (Novus Biologicals; NBP1-21502) nan 1:100 ak antikò Pro-Hepcidin (AA 39-59) nan 1:50. (Antikò sou entènèt; ABIN350367). Espesifik FPN ak antikò hepcidin yo te konfime lè l sèvi avèk Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ bèt ak Hamp–/– bèt kòm kontwòl negatif, respektivman (Figi Siplemantè S1). Makè segman ren yo te idantifye ak antikò akwaporin-1 nan 1:200 (Biotechne; NB{600- 749), akwaporin-2 antikò nan 1:200 (Biotechne; NBP1-70378), oswa antikò kalbindin nan 1:100 (Abcam; ab82812). Antikò segondè yo te anti-lapen IgG Alexa Fluor-488 (Abcam; ab150073), antibourik IgG Cy3 (Abcam; ab6949), ak anti-sourit IgG Alexa568 (Abcam; ab175473). Yo te imajine glisad yo lè l sèvi avèk yon mikwoskòp FV1000 Olympus.

cistanche ka pwotejerenfonksyon

Western blotting

Yo te jele tisi yo nan nitwojèn likid, yo te kraze yo, epi answit yo te lysed avèk RIPA Lysis Buffer System (Santa Cruz; sc-24948), dapre enstriksyon manifakti a. Lysates tisi yo te otorize pa santrifujasyon nan 15 000 g pou 10 minit nan 4 C. Konsantrasyon pwoteyin nan lisat yo te mezire pa BCA Pwoteyin Assay (Pierce; 23225) ak nòmalize nan menm konsantrasyon an pou chak pakèt. Lè sa a, Lysates yo te dilye nan nonreducing Laemmli sodyòm dodecyl sulfat echantiyon tanpon ak chofe nan 95 C pou 5 minit. Pwoteyin (30-50 mg) te chaje sou Mini-PROTEAN TGX Gels (Biorad; 4561096). Apre elektwoforèz, pwoteyin yo te transfere sou manbràn polyvinylidene diflfluoride lè l sèvi avèk sistèm BioRad Translotter la, ak manbràn yo te bloke pou inèdtan nan bloke tanpon ki gen 5 pousan albumin serom bovin. Lè sa a, manbràn yo te tache lannwit lan nan 4 C ak antikò poliklonal anti-sourit FPN lapen (NBP1-21502; Novus Biologicals) nan 1:1000 oswa antikò peroksidaz refor konjige anti-b-aktin (Proteintech; HRP{{18} }) nan 1:5000. Yo te devlope tach lè l sèvi avèk twous deteksyon premye ECL (RPN2232; VWR International). Entansite siyal yo te kwantifye pa ImageJ, ak rapò ki genyen ant FPN ak siyal b-aktin yo te kalkile pou pwodwi entansite nòmalize.

Diaminobenzidine (DAB)-enhanced Perls tach

Seksyon tisi ki fikse ak fòmalin, ki entegre parafifin yo te deparafifize lè l sèvi avèk ksilèn, ak Lè sa a, reyidrate nan etanòl. Lè sa a, glisad yo te tache pou 1 èdtan ak 1 pousan ferricyanide potasyòm nan 0.1 mol/L tanpon HCl. Aktivite peroksidaz andojèn yo te etenn, ak Lè sa a, glisad yo te tache ak substra chromogen DAB ak counterstained ak ematoksilin. Yo te vizyalize lè l sèvi avèk yon mikwoskòp estanda klere-fifield.

Reyaksyon chèn polymerase Quantitative

Ekspresyon jèn yo te mezire lè l sèvi avèk Applied Biosystems TaqMangene sond espresyon ekspresyon pou Hamp ak bactin jèn nan kay (Life Technologies). Valè sik papòt (CT) pou jèn enterè a te premye nòmalize lè w retire valè CT pou b-aktin pou jwenn yon valè DCT. Valè DCT echantiyon tès yo te plis nòmalize nan mwayèn valè DCT pou echantiyon kontwòl yo pou jwenn valè DDCT. Lè sa a, nivo ekspresyon jèn relatif yo te kalkile kòm 2-DDCT.

Estatistik

Valè yo montre kòm SEM vle di. Yo te fè konparezon pè lè l sèvi avèk tès t Student la. Konparezon miltip yo te trase lè l sèvi avèk analiz divèjans. Tès pòs hoc yo itilize koreksyon Bonferroni.

Figi 1|Aks hepcidin/ferroportin (FPN) nan tubul ren kontwole reabsòpsyon fè epi li enpòtan pou omeyostazi fè ren.nan sourit fi. (a)Imaj reprezantan nan tach imunoflfluoresan pou FPN, akwaporin 1 (AQP1), akwaporin 2 (AQP2), ak Calbindin (CalD) nan ren sourit sovaj. Ba¼ 200 mm, agrandisman orijinal 10. Fen panèl, ba¼ 25mm, agrandisman orijinal 60. (b) Western blot pou FPN nanrennan fi ak gason FpnC326Yflfl/flfl,Pax8.CreER T2 þ sourit ak FpnC326Y flfl/flfl kontwole nan 1 semèn apre tretman tamoksifèn. Kantite entansite siyal yo montre nan panèl anba a. (c) Western blot pou FPN nan ren fi ak gason sourit Fpnflfl/ flfl, Pax8.CreERT2þ ak kontwòl Fpnflfl/flfl nan 1 semèn apre tretman tamoksifèn. Kantite entansite siyal yo montre nan panèl anba a. (d) Nivo fè ren nan fi ak gason FpnC326Y^flfl/^flfl,Pax8.CreERT2þ sourit ak FpnC326Yflfl/flfl kontwole nan 1 semèn, 1 mwa, 3 mwa, ak 6 mwa apre tretman tamoksifèn. (e) Imaj reprezantatif nan tach Perls fè diaminobenzidine (DAB) amelyore nan rejyon kortik ren bèt korespondan yo nan 3 mwa apre endiksyon tamoksifèn. Ba ¼ 200 mm, agrandisman orijinal 10. (f) Nivo fè ren nan sourit fi ak gason Fpnflfl/flfl,Pax8.CreERT2þ ak kontwòl Fpnflfl/flfl nan 1 semèn, 1 mwa, 3 mwa, ak 6 mwa apre endiksyon tamoksifèn. (g) Imaj reprezantan nan DAB-enhanced Perls tach fè nan rejyon an cortical ren nan bèt korespondan nan 3 mwa apre endiksyon tamoksifèn. (Kontinye)

Figi 1 |(Kontinye) Ba ¼ 200 mm, agrandisman orijinal 10. (h) Nivo serik fè nan fi ak gason FpnC326Yflfl/flfl, sourit Pax8.CreERT2þ ak kontwòl FpnC326Yflfl/flfl nan 1 semèn, 1 mwa, 3 mwa, ak 6 mwa apre tretman tamoksifèn. (i) Nivo serik fè nan sourit fi ak gason Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ ak kontwòl Fpnflfl/flfl nan 1 semèn, 1 mwa, 3 mwa, ak 6 mwa apre endiksyon tamoksifèn. Valè yo montre kòm SEM vle di. *P <0.05, **p=""><0.01, ak="" ****p=""><0.0001. b-lwa,="" b-aktin;="" kont,="" kontwòl;="" dapi,="" 40="" ,6-diamidino-2-fenilindol;="" ppm,="" pati="" pou="" chak="" milyon.="" pou="" optimize="" gade="" imaj="" sa="" a,="" tanpri="" gade="" vèsyon="" sou="" entènèt="" atik="" sa="" a="" nan="">

REZILTA

Aks hepcidin/FPN nan tubul ren kontwole reabsòpsyon fè epi li enpòtan pou omeyostazi fè ren nan sourit fi.

Premye nou te chèche etabli sit egzak ekspresyon FPN nanren. Pou sa ka fèt, nou te mete ren sourit pou FPN ak makè segman-espesifik akwaporin 1 (yon makè proximal tubul convoluted ak mens branch descendant nan Henley), akwaporin 2 (yon makè nan kolekte kanal ak konekte tubul), ak calbindin (yon makè). nan tib distal konplike ak kortik ki konekte ak kolekte kanal). Nou te jwenn ke FPN fòtman eksprime nan cortical a, colocalizing ak akwaporin 1 nan proximal tubul convoluted yo. Te gen kèk FPN nan medulla enteryè a, colocalizing ak akwaporin 2 nan kanal yo kolekte medulè. Pa te gen okenn kolokizasyon FPN ak calbindin (Figi 1a; pi gwo panèl yo montre nan Figi Siplemantè S2). Rezilta sa yo konfime ke FPN pi abondan nan rejyon kortik la nan tib proximal konplike.

Pou detèmine si ren FPN reglemante pa HAMP, nou te itilize sourit ki gen yon transjèn knock-in Pax8.CreERT2þ, ki kondwi ekspresyon tamoksifèn-induzibl nan recombinase Cre a anba kontwòl pwomotè jèn pax8 pak8 nan tibil proximal ak distal ak nan collecting ducts.17 Nou travèse sourit Pax8.CreERT2þ ak moun ki gen yon alèl knock-in flfloxed kondisyonèl FpnC326Y, ki kode yon FPN ki reziste hepcidin. Anplis de sa, epi konfime wòl FPN nan ren yo rapòte deja nan reabsòpsyon fè, nou janbe lòt sourit Pax8.CreERT2þ ak sourit ki gen alèl Fpnflfl/flfl. Yon semèn apre tretman tamoksifèn pou pwovoke transjèn Pax8.CreERT2, nivo FPN nan ren yo te ogmante nan sourit fi ak gason FpnC326Yflfl/ flfl, Pax8.CreERT2þ parapò ak kontwòl FpnC326Yflfl/flfl (Figi 1b), ki montre ke FPN ren se sijè a règleman FPN. andojèn HAMP nan kondisyon nòmal fizyolojik, epi anplis konfime efikasite transjèn Pax8.CreERT2þ la. Kontrèman, nivo FPN ren yo te redwi nan sourit fi ak gason Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ parapò ak kontwòl Fpnflfl/flfl, plis konfime efikasite transjèn Pax8.CreERT2þ (Figi 1c). Espesifik transjèn Pax8.CreERT2þ sa a te konfime tou pa prezans alèl la sipresyon (DFpn) nanrenmen se pa nan fwa a oswa nan larat nan sourit Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ (Figi Siplemantè S2A).

Apre sa, nou mete deyò pou detèmine si aks HAMP/FPN nan ren kontwole reabsòpsyon fè. Pou sa, nou mezire nivo fè nan ren ak serik nan 1 semèn, 1 mwa, 3 mwa, ak 6 mwa apre tretman tamoksifèn. Nou te jwenn ke ren fè

kontni te pi ba nan fi FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ pase nan fi kontwòl FpnC326Yflfl/flfl nan tout pwen tan (Figi 1d). Kontni fè nan ren nan gason pa t diferan selon jenotip (Figi 1d). DAB-enhanced tach Perl a fè tou konfime rediksyon nan nivo fè nan tib proximal nan FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ fi (Figi 1e; pi gwo panèl yo montre nan Figi Siplemantè S2). Kontrèman, nou te jwenn ke kontni an fè nan ren te pi wo nan fi Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ pase nan fi kontwòl Fpnflfl/flfl soti nan 1 mwa ivè (Figi 1f). Kontni fè nan ren nan gason pa t diferan selon jenotip (Figi 1f). DAB-enhanced Perls tach fè tou konfime akimilasyon fè nan tib proximal nan Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ fi (Figi 1g; pi gwo panèl yo montre nan Figi Siplemantè S2).

Nivo serik fè yo te ogmante tanporèman nan tou de gason ak fi sourit FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ parapò ak kontwòl FpnC326Yflfl/flfl nan pwen tan 1-mwa (Figi 1h). Kontrèman, nivo serik fè yo te diminye nan fi Fpnflfl/ flfl, Pax8.CreERT2þ parapò ak fi kontwòl Fpnflfl/flfl nan pwen tan 1-mwa a, tandiske yo te rete konparab nan gason ki gen diferan jenotip nan tout pwen (Figi 1i). ). Retablisman nivo serik fè nan sa yo wè nan bèt kontwòl yo nan laj 3 mwa pa t 'kapab dwe atribiye a restorasyon nan nivo nòmal FPN ren. Vreman vre, chanjman Pax8.CreERT2þ ki te pwovoke nan nivo FPN ren yo te toujou kenbe nan 3 mwa apre tretman tamoksifèn (Figi Siplemantè S2B ak C). Diminye kontni fè ren ak ogmante nivo fè serik nan FpnC326Yflfl/ flfl ,Pax8.CreERT2þ fi demontre ke reabsorpsyon fè ki depann de FPN nan tubul proximal se sijè a règleman pa HAMP nan kondisyon fizyolojik nòmal. Ogmantasyon kontni fè ren ak diminye nivo fè serik nan Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ fi konfime rezilta anvan yo ke FPN ren kontribye nan reabsòpsyon fè. Anplis de sa, nan kondisyon nòmal fizyolojik, kontwòl reabsòpsyon fè pa aks ren HAMP / FPN parèt pi enpòtan nan fi pase nan gason, omwen nan souch C57BL / 6 la.

Cistanche ka amelyore fonksyon ren

Aks HAMP/FPN nan ren kontribye nan, men li pa esansyèl pou, omeyostazi nòmal fè sistemik nan kondisyon disponiblite nòmal fè.

Apre sa, nou te deside detèmine kontribisyon ren HAMP/FPN aks nan omeyostazi sistemik fè. Nou te jwenn ke FpnC326Yflfl/flfl ,Pax8.CreERT2þ fi te gen yon ogmantasyon tanporè nan ferritin serik (Figi 2a), kontni fè fwa (Figi 2b), ak kontni fè larat (Figi 2c) nan pwen an 1-mwa lè. konpare ak fi kontwòl FpnC326Yflfl/flfl. Nivo emoglobin yo te rete konparab ak kontwòl yo nan tout pwen (Figi 2d). Okenn nan paramèt sa yo pa t diferan ant gason FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ ak kontwòl FpnC326Yflfl/flfl yo (Figi 2a–d). Nivo Erythroferrone pa t diferan selon jenotip (figi siplemantè 3A). Okontrè, nou te jwenn ke Fpnflfl/ flfl ,Pax8.CreERT2þ fi yo gen pi ba nivo ferritin serik nan 1- ak 3-mwa pwen tan yo (Figi 2e), pi ba kontni fè fwa nan 3- ak 6-mwa pwen tan (Figi 2f), ak pi ba kontni an fè larat nan 1- ak {3-mwa pwen tan yo (Figi 2g), lè yo konpare ak fi kontwòl Fpnflfl/flfl. Yo te gen tou yon rediksyon tanporè ak modere nan nivo emoglobin nan pwen tan 3-mwa a (Figi 2h). Okenn nan paramèt sa yo pa t diferan ant gason Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ ak kontwòl Fpnflfl/flfl yo (Figi 2e–h). Nivo Erythroferrone yo pa te chanje tou dapre jenotip (figi siplemantè 3B). Ansanm, done sa yo demontre ke, nan kondisyon fizyolojik nòmal, aks HAMP/FPN nan ren kontribye nan nivo fè sistemik men nan tèt li se pa esansyèl pou antretyen omeyostazi nòmal fè sistemik.

Figi 2|Aks ren hepcidin antimikwòb peptide/ferroportin (FPN) kontribye nan, men li pa esansyèl pou, sistèm nòmal.omeyostazi fè nan kondisyon disponiblite nòmal fè. (a–d)Endèks fè sistemik nan fi ak gason FpnC326Yflfl/flfl, sourit Pax8.CreERT2þ ak FpnC326Yflfl/flfl kontwole nan 1 semèn, 1 mwa, 3 mwa, ak 6 mwa apre tretman tamoksifèn, ki gen ladan (a) ferritin serom, (b) kontni fè fwa. , (c) kontni fè larat, ak (d) emoglobin. (e–h) Endis fè sistemik nan sourit fi ak gason Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ ak kontwòl Fpnflfl/flfl nan 1 semèn, 1 mwa, 3 mwa, ak 6 mwa apre endiksyon tamoksifèn, ki gen ladan (e) ferritin serom, ( f) kontni fè fwa, (g) kontni fè larat, ak (h) emoglobin. Valè yo montre kòm SEM vle di. *P < 0.05,="" **p="">< 0.01,="" ak="" ***p="">< 0.001.="" ppm,="" pati="" pou="" chak="">

Figi 3|Aks ren hepcidin antimicrobial peptide (HAMP)/ferroportin (FPN) detèmine grandè surcharge ren ak sistemik fè nan kondisyon ki disponib nan depase fè. (a–f)Ekstrarenal fè endèks nan fi ak gason FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ sourit ak FpnC326Yflfl/flfl kontwòl bay swa yon rejim alimantè kontwòl (200 pati pou chak milyon [ppm]) oswa yon rejim ki chaje fè (5000 ppm) pou 3 mwa. (Kontinye)

Figi 3 |(Kontinye) Endèks yo enkli (a) serik fè, (b) serik ferritin, (c) kontni fè larat, (d) kontni fè kè, (e) kontni fè nan poumon, ak (f) kontni fè fwa. (g) Kontni fè nan ren nan sourit fi ak gason FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ ak FpnC326Yflfl/flfl kontwòl yo bay swa yon rejim alimantè kontwòl (200 ppm) oswa yonfè-chajerejim (5000 ppm) pou 3 mwa. (h,i) Imaj reprezantatif nan diaminobenzidine (DAB) - amelyore tach Perls fè nan fwa ak rejyon an kritik ren nan bèt korespondan. Ba ¼ 200 mm, agrandisman orijinal 10. (j) Ekspresyon relatif jèn hamp nan fwa bèt korespondan yo. Valè yo montre kòm SEM vle di. *P <0.05, **p=""><0.01, ***p=""><0.001, ****p=""><0.0001, *****p=""><0.00001, ak="" ******p=""><0.000001. pou="" optimize="" gade="" imaj="" sa="" a,="" tanpri="" gade="" vèsyon="" an="" entènèt="" atik="" sa="" a="" nan="">

Aks HAMP/FPN nan ren yo detèmine grandè surcharge ren ak sistemik fè nan kondisyon ki genyen twòp fè disponib. 

Apre sa, nou te deside detèmine wòl aks HAMP/FPN nan ren nan anviwònman surcharge fè. Pou sa, FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ bèt ak FpnC326Yflfl/flfl kontwòl yo te pwovoke ak tamoksifèn epi yo te bay swa yon rejim chow kontwòl, ki gen 200 ppm fè, oswa yon rejim ki chaje ak fè, ki gen 5000 ppm fè pou 3 mwa. . Nou te jwenn ke pwovizyon rejim alimantè ki chaje ak fè ogmante fè serik, ferritin serom, ak kontni fè tisi nan gason ak fi nan tou de jenotip. Sepandan, FpnC326Yflfl/ flfl ,Pax8.CreERT2þ bèt yo te gen pi gwo ogmantasyon nan serik fè (Figi 3a), serik ferritin (Figi 3b), ak kontni fè nan larat la (Figi 3c), kè (Figi 3d), poumon (Figi 3e) , ak fwa (Figi 3f) pase kontwòl FpnC326Yflfl/flfl. Kontrèman, yo te gen yon ogmantasyon pi ba nan kontni fè ren (Figi 3g). Diferans ki genyen ant jenotip nan degre chaj fè nan tib proximal ak nan fwa a te parèt tou nan DAB-enhanced Perls tach fè (Figi 3h ak i; pi gwo panno yo montre nan Figi Siplemantè S4). Nan liy ak pi gwo surcharge sistemik fè, FpnC326Yflfl/flfl, bèt Pax8.CreERT2þ tou te gen pi gwo ogmantasyon nan ekspresyon jèn fwa hamp konpare ak kontwòl FpnC326Yflfl/flfl (Figi 3j). Nivo Emoglo bin pa te afekte pa ni rejim alimantè oswa jenotip, epi ki konsistan avèk sa a, nivo erythroferrone serom tou te rete san okenn chanjman (Figi Siplemantè 4A ak B). Konklizyon sa yo demontre ke, nan kondisyon ki gen plis disponiblite fè, kontwòl reabsòpsyon fè pa aks ren HAMP/FPN diminye surcharge sistemik fè pandan y ap ogmante surcharge ren fè.

Aks HAMP/FPN nan ren detèmine modèl surcharge fè tisi nan emokromatoz 

Apre sa, nou te deside eksplore wòl aks HAMP/FPN nan ren nan yon kontèks emokromatoz éréditèr, yon kondisyon jenetik surcharge fè ki te koze pa defo nan pwodiksyon hepcidin oswa reyaksyon hepcidin.19 Pou sa, nou te itilize sourit ki te pwodwi nan-. kay ki gen yon eterozigot omniprésente knock-in nan alèl la fpnC326Y (Fpnwt/C326Y). Nou te deja demontre ke sourit sa yo devlope fenotip fè-surcharge karakteristik nan emokromatoz éréditèr.15,18 Nou konpare modèl la nan tisi.Surcharge fènan sourit sa yo ak sa yo wè nan sourit sovaj yo te manje yon rejim ki chaje ak fè soti nan sevraj pou 3 mwa. Tou de sourit Fpnwt/C326Y ak sourit sovaj ki te manje yon rejim ki chaje ak fè.

ogmante kontni fè nan fwa a, kè, ak nan poumon konpare ak kontwòl respektif yo (Figi 4a ak b). Kontni fè nan ren nan Fpnwt / C326Ymice te nòmal nan 3 mwa ki gen laj (Figi 4a) epi sèlman ogmante pa 32 pousan parapò ak kontwòl nan 6 mwa ki gen laj (Siplemantè Figi 5A). Kontrèman, bèt sovaj ki te bay yon rejim ki chaje ak fè te gen yon ogmantasyon 260 pousan nan kontni an fè nan ren konpare ak moun ki te sou yon rejim nòmal (Figi 4b). Diferans relatif nan surcharge fè ren ak fwa ant 2 modèl yo te parèt tou nan tach fè DABenhanced Perls (Figi 4c ak d; pi gwo panno yo montre nan Figi Siplemantè S5). Gwosè a nan surcharge ekstrarenal fè te konparab ant 2 modèl yo, tandiske grandè a nan surcharge ren te konsiderableman pi wo nan bèt sovaj ki bay yon rejim ironloaded pase nan sourit Fpnwt / C326Y (Figi 4e). FPN te ogmante nan cortical la nan tou de sourit Fpnwt / C326Y ak sourit sovaj yo bay yon rejim ki chaje fè (Figi 4f ak g; yo montre pi gwo panno nan Figi Siplemantè S5). Egzamen pi pre sit la nan ekspresyon FPN nan tubul proximal revele ke li te parèt yo lokalize intracellularly osi byen ke manbràn basolateral la nan sourit Fpnwt / C326Y. Kontrèman, FPN te parèt lokalize prensipalman nan sitoplasm la, manbràn apical, ak etonan nwayo a nan sourit bay yon rejim ki chaje fè (Figi 4f ak g, panno ki pi ba yo). Modèl lokalizasyon FPN ki soti nan pwovizyon rejim alimantè ki chaje ak fè te konfime plis lè l sèvi avèk Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ bèt kòm kontwòl negatif (Figi Siplemantè S5B). Obsèvasyon sa yo, ansanm ak konklizyon anvan an ke FpnC326Yflfl/flfl ,Pax8.CreERT2þ bèt yo gen pi ba chaj fè nan ren pase kontwòl apre dispozisyon yonfè-chajerejim alimantè, demontre ke pèt aksyon HAMP sou ren FPN pwoteje arensoti nan chaj fè nan anviwònman an nan emokromatoz éréditèr.

DISKISYON

Konklizyon ki pi enpòtan nan etid prezan an se ke andojèn HAMP kontwole reabsòpsyon fè FPN-medyatè. Etid anvan yo te rapòte règleman FPN pa ekzojèn HAMP nan selil ren kiltive yo, ak yon relasyon envès ant HAMP ak nivo FPN nanrenapre oklizyon inilateral ureter.12,13 Sepandan, sa a se premye demonstrasyon ke règleman sa yo opere nan vivo nan kondisyon fizyolojik nòmal, ak nan yon fason ki afekte omeyostazi ren ak sistemik fè. Yon fòs patikilye nan etid sa a se itilize nan sourit roman, ki te pwodwi nan kay la, pòb yon pèt ren-espesifik nan repons HAMP. Apwòch sa a pèmèt etid aks HAMP/FPN nan ren san efè konfonn nan omeyostazi fè sistemik ki chanje, otreman yo wè nan modèl bèt omniprésente.

Figi 4|Ren hepcidin antimicrobial peptide/ferroportin (FPN) detèmine modèl surcharge fè tisi nan emokromatoz. (a)Nivo fè nan ren, fwa, kè, ak poumon bèt Fpnwt/C326Y ak kontwòl Fpnwt/wt nan laj 3 mwa. (b) Nivo fè nan laren, fwa, kè, ak poumon nan bèt sovaj yo te bay swa yon rejim alimantè kontwòl (200 pati pou chak milyon [ppm]) oswa yon rejim ki chaje ak fè (5{{4{{ 42}}}}00 ppm) nan sevraj pou 3 mwa. (c) Imaj reprezantatif nan tach fè Perls diaminobenzidine (DAB) amelyore nan cortical ren ak fwa bèt Fpnwt/C326Y ak kontwòl Fpnwt/wt nan laj 3 mwa. Bar ¼ 200 mm, agrandisman orijinal 10. (d) Imaj reprezantatif DAB-enhanced Perls tach fè nan korèks la ren ak fwa nan bèt sovaj yo bay swa yon rejim chow kontwòl (200 ppm) oswa yon rejim ki chaje fè (5000 ppm) soti nan sevraj pou 3 mwa. Ba ¼ 200 mm, agrandisman orijinal 10. (e) Konparezon degre chaj fè tisi ant bèt Fpnwt/C326Y ak bèt sovaj ki te manje yon rejim ki chaje ak fè. Valè yo montre pou chak bèt nòmalize ak mwayèn gwoup kontwòl respektif la. (f) Imaj reprezantatif nan tach imunoflfluoresan FPN nan cortical ren bèt Fpnwt/C326Y ak kontwòl Fpnwt/wt nan 3 mwa ki gen laj. Panèl anlè, ba ¼ 200 mm, agrandisman orijinal 10. Panèl anba a, ba ¼ 25 mm, agrandisman orijinal 60. (g) Imaj reprezantatif nan FPN tach imunoflfluoresan nan cortical ren bèt sovaj bay swa yon rejim alimantè kontwòl (200). ppm) oswa yon rejim ki chaje ak fè (5000 ppm) soti nan sevraj pou 3 mwa. Panèl anlè, ba ¼ 200 mm, agrandisman orijinal 10. Panèl anba, ba ¼ 25 mm, agrandisman orijinal 60. Yo montre valè yo kòm SEM vle di. *P <0.05, **p=""><0.01, ***p=""><0.001, ak="" ****p=""><0.0001. pou="" optimize="" gade="" imaj="" sa="" a,="" tanpri="" gade="" vèsyon="" sou="" entènèt="" atik="" sa="" a="" nan="">

Dezyèm konklizyon enpòtan etid la se ke HAMP/FPN nan ren detèmine grandè surcharge fè tou de ren ak sistemik (Figi 5). Vreman vre, pèt reyaksyon HAMP nan tubul ren yo ogmante grandè fwa, larat, kè, ak surcharge fè nan poumon, pandan y ap diminye grandè surcharge fè ren apre dispozisyon yon rejim ki chaje ak fè. Konfòm ak sa a, yo te wè pi gwo surcharge fè nan ren apre dispozisyon yon rejim ki chaje ak fè pou bèt sovaj (nan ki aks HAMP/FPN nan ren yo entak) pase nan sourit emokromatoz (nan ki aks HAMP/FPN nan ren se tou). deranje) (abstract grafik). Konklizyon sa a ka eksplike obsèvasyon klinik larense pa souvan afekte nan pasyan ki gen emokromatoz éréditèr.19

Figi 5|Wòl nan aks ren hepcidin antimikwòb peptide (HAMP)/ferroportin (FPN) nan anviwònman an nan surcharge fè.Pwovizyon pou rejim ki chaje ak fè ogmante disponiblite serik fè ak nivo fè nan fifiltrate glomerulè a ​​ak ogmante pwodiksyon ak divilgasyon hepcidin (HAMP) nan fwa a. Ogmantasyon HAMP serom inibit reabsòpsyon fè pa bloke FPN nan tubul ren. Anpèchman nan reabsòpsyon fè lakòz retansyon fè ren pandan y ap diminye disponiblite sistemik fè ak kidonk diminye surcharge fè fwa. Nan sourit FpnC3326Yflfl/flfl,Pax8.CreERT2þ, pèt repons HAMP nan tubul ren yo lakòz reabsòpsyon fè san regleman. Sa a, nan vire, anpeche retansyon fè ren pandan y ap ogmante disponiblite sistemik fè epi imedyatman ogmante surcharge fè fwa.

Malgre ke tou de emokromatoz ak surcharge fè dyetetik ogmante FPN nan tubul ren yo, yo te parèt pou rezilta nan diferan modèl lokalizasyon nan konpatiman apical, intraselilè, oswa basolateral yo. Obsèvasyon menm jan yo te fè nan duodenum rat la, kote yo te jwenn gavaj fè pou chanje distribisyon relatif FPN ant konpatiman sa yo nan enterocytes duodnal.20 Youn nan entèpretasyon rezilta sa yo se ke nan anviwònman an nan surcharge fè dyetetik, ogmante tradiksyon FPN (medyatè pa). Pwoteyin regilasyon fè) ta aji pou kenbe gwo pwodiksyon FPN an jeneral nan selil tubulaires ren yo, tandiske ogmante HAMP nan serik ta diminye pwopòsyon FPN ki ka lokalize nan manbràn basolateral la. Sa a soti nan entèpretasyon sa a ke divèjans ki genyen ant rapò anvan yo sou lokalizasyon FPN nan tubul proximal te kapab reflete diferans ki genyen nan kontni an fè tubulaires ren ak nan nivo hepcidin serik ant modèl bèt yo itilize nan etid diferan.5,11-14,21 Altènativman, divèjans sa a te kapab reflete yon degre reyaktivite ki pa espesifik ki te rapòte anvan an relasyon ak antikò komèsyal FPN, ki gen ladan youn nan yo te itilize nan etid la prezan. nan eskresyon fè urin nan sourit ki chaje ak fè (figi siplemantè 5C). Yon lòt obsèvasyon enteresan an se ke kèk FPN parèt lokalize nan nwayo a nan tubul ren nan sourit fè-chaje. Obsèvasyon menm jan an te fè lòt moun nan makwofaj ki chaje ak fè ak nan fwa rat la. Dènye etid la te jwenn FPN nikleyè patisipe nan retansyon fè nikleyè kòm yon pati nan repons faz egi a.22,23 Etid detaye sou lokalizasyon subselilè FPN nan diferan eta fè ak nan diferan patoloji yo bezwen pou plis avanse konpreyansyon nou sou wòl la. nan FPN nan ren an.

Règleman ak fonksyon HAMP ren yo pa konprann tou. Nou te jwenn ke ekspresyon jèn hamp la nan ren an te ogmante nan bèt sovaj apre dispozisyon rejim alimantè fè-chaje (figi siplemantè 5E), men li te rete san okenn chanjman nan sourit emokromatoz (figi siplemantè 5D), ak nan moun ki ebèje tib ren- pèt espesifik nan FPN oswa tubul ren-pèt espesifik nan repons HAMP (figi siplemantè S5F ak G). Rezilta sa yo pa sipòte nosyon ke ekspresyon jèn ren hamp reglemante lokalman pa nivo fè ren yo. An tèm de fonksyon HAMP ren, yon etid anvan nan yon modèl oklizyon inilateral uretè sijere ke li patisipe nan kontwole FPN ren. Nou te jwenn ke HAMP ren (detekte lè l sèvi avèk yon antikò kont pro-HAMP peptide) colocalized ak calbindin (yon makè nan tib distal konvolusyon ak kanal kolekte kortik ak kanal konekte) (figi siplemantè S5H). Nan lòt men an, ekspresyon FPN pa colocalize ak kalbindin, menm nan sourit ki genyen pèt ren espesifik nan repons HAMP (Figi 1a ak Figi Siplemantè S5I). Rezilta sa yo pa konsistan avèk yon wòl otokrin pou HAMP ren nan règleman FPN ren. Sepandan, HAMP ren ka patisipe nan règleman parakrin nan FPN ren. Nan lavni an, li ta enteresan yo etidye fonksyon yo parakrin nan HAMP ren, ak quantifier kontribisyon relatif yo nan HAMP ren ak epatik nan kontwòl la nan reabsòpsyon fè.

Yon lòt obsèvasyon enteresan ki soti nan etid prezan an se ke, nan kondisyon disponiblite nòmal fè, aks HAMP/FPN nan ren pa esansyèl pou antretyen omeyostazi nòmal fè sistemik epi li pi enpòtan pou reglemante nivo fè nan ren, omwen nan sourit fi yo. souch C57BL/6 la. Vreman vre, byenke chanjman yo obsève nan nivo fè ren ki te lakòz pèt FPN oswa nan repons HAMP nan tubul ren yo te pèsistan, chanjman nan endèks fè sistemik yo te pasajè nan lanati. Nati pasajè efè sistemik yo sijere mekanis konpansatwa patisipasyon yo. Youn nan posib mekanis konpansasyon se modulation nan absòpsyon fè dyetetik pa HAMP epatik. Vreman vre, nou te jwenn ke nan sourit ki genyen pèt espesifik ren nan reyaksyon HAMP, ekspresyon jèn hamp epatik yo te ogmante apre ogmantasyon nan nivo fè serik nan pwen tan 1-mwa a epi li te rete ogmante nan pwen tan pita yo. Okontrè, ekspresyon jèn hamp epatik yo te siprime nan sourit ki genyen pèt ren espesifik nan FPN apre diminisyon nan nivo fè serik nan 1- pwen tan an mwa epi li te rete siprime nan pwen tan pita (figi siplemantè S6A ak B). Anplis de sa, ogmante ekspresyon jèn hamp epatik nan fifirst anviwònman an te akonpaye pa diminye nivo FPN nan zantray, tandiske diminye ekspresyon jèn epatik hamp nan dezyèm anviwònman an te akonpaye pa pi wo FPN zantray (figi siplemantè S6C ak D). Rezilta sa yo endike ke aksyon HAMP epatik sou absòpsyon fè dyetetik se yon mekanis konpansatwa aktif ki enplike nan kenbe omeyostazi nòmal fè sistemik nan fè fas a reabsòpsyon fè ren pèrturbe.

Cistanche ka repare fonksyon ren

Nòmalman, nan kondisyon nòmal disponiblite fè, aks ren HAMP/FPN parèt pi enpòtan nan sourit fi pase nan sourit gason, omwen nan souch C57BL/6 la. Obsèvasyon sa a pa t 'kapab atribiye a diferans ki genyen ant gason ak fi nan aktivite a nan transjèn Pax8.CreERT2þ la. Dimòfis seksyèl nan nivo ak modèl transpòtè yo ansanm nefwon an te rapòte deja nan souch sourit sa a.24 Konfòm ak sa a, nou te jwenn pi wo ekspresyon debaz FPN nanrennan fi pase nan ren yo nan littermates gason (Figi Siplemantè S2D). Yon etid anvan yo te itilize yon diferan transjèn Cre recombinase, kondwi pa yon pwomotè Nestin ki aktif pou efase fpn nan tout nefwon an, te rapòte tou yon ogmantasyon nan nivo fè ren ak yon diminisyon nan magazen fè serom ak fwa. Sepandan, etid sa a te fèt nan yon souch sourit diferan (129/SvEvTac) epi li pa t analize fenotip la dapre sèks oswa kou tan.14

emokromatoz ak lòt maladi fè.

DIVILAJ

Tout otè yo te deklare pa gen okenn enterè konpetisyon.

REKONÈS

SL-L te resevwa yon Fondasyon Kè Britanik Entèmedyè Syans Debaz Postdoktoral Fellowship (FS/12/63/29895). GM te finanse pa yonKidney Research UK pwojèsibvansyon (RP_020_20160303) bay SL-L.

KONTRIBYON OTÉ

SL-L vin ansent etid. SL-L ak GM fè eksperyans. SL-L analize ak entèprete rezilta yo. SL-L te ekri maniskri. AM kontribye materyèl. PAR fè kòmantè sou maniskri a.

MATERYÈL siplemantè

Fichye siplemantè (PDF)

Figi S1. Konfimasyon espesifik FPN ak HAMP antikò. (A) Imaj reprezantatif nan tach imunoflfluoresan FPN nan cortical ren bèt Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ ak kontwòl Fpnflfl/flfl nan laj 3 mwa. Panno anwo yo, ba ¼ 200 mm, agrandisman orijinal 10. Panno ki pi ba yo, ba ¼ 25 mm, agrandisman orijinal 60. (B) Imaj reprezantatif nan tach imunoffluoresan HAMP nan cortical ren Hamp–/– bèt ak kontwòl kalite sovaj nan 3. mwa ki gen laj. Panno anwo yo, ba ¼ 200 mm, agrandisman orijinal 10. Panno ki pi ba yo, ba ¼ 25 mm, agrandisman orijinal 60.

Figi S2. Konfimasyon aktivite Pax8.CreERT2þ ak spesifik. (A) Jenotip sou Fpnflfl/flfl ak Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ sourit lè l sèvi avèk ADN jenomik ki sòti nan fwa, larat, akrennan 1 semèn apre endiksyon tamoksifèn. (B) Western blot pou FPN nanrennan fi ak gason FpnC326Yflfl/flfl ,Pax8.CreERT2þ sourit ak kontwòl FpnC326Y nan 3 mwa apre tretman tamoksifèn. Kantite entansite siyal yo montre nan panèl anba a. (C) Western blot pou FPN nan ren fi ak gason Fpnflfl/flfl, sourit Pax8.CreERT2þ ak kontwòl Fpnflfl/flfl nan 3 mwa apre tretman tamoksifèn. Kantite entansite siyal yo montre nan panèl anba a. (D) Western blot pou FPN nan ren sovaj fi ak gason littermates nan 3 mwa ki gen laj. Kantite entansite siyal yo montre nan panèl anba a. (E–G) Pi gwo vèsyon panno nan Figi 1a, g, ak e, respektivman. Valè yo montre kòm SEM vle di. *P < 0.05,="" ***p=""><>

Figi S3. Nivo erythroferrone serom yo pa chanje nan sourit FpnC326Yflfl/flfl Pax8.CreERT2þ ak Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2. (A) Nivo erythroferrone serom nan fi ak gason FpnC326Yflfl/flfl, sourit Pax8.CreERT2þ ak FpnC326Yflfl/flfl kontwole nan 1 semèn, 1 mwa, 3 mwa, ak 6 mwa apre tretman tamoksifèn. (B) Nivo erythroferrone serom nan sourit fi ak gason Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ ak kontwòl Fpnflfl/flfl nan 1 semèn, 1 mwa, 3 mwa, ak 6 mwa apre endiksyon tamoksifèn. Valè yo montre kòm SEM vle di.

Figi S4. Nivo emoglobin ak erythroferrone serom pa chanje nan FpnC326Yflfl/flfl ,Pax8.CreERT2þ nouri yon rejim ki chaje ak fè. (A) Nivo emoglobin nan sourit fi ak gason FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ ak FpnC326Yflfl/flfl kontwole yo te manje swa yon rejim kontwòl (ki gen 200 ppm fè) oswa yon rejim ki chaje ak fè (ki gen 5000 ppm pou 500 mwa) . (B) Nivo erythroferrone serom nan fi ak gason FpnC326Yflfl/ flfl, Pax8.CreERT2þ sourit ak FpnC326Yflfl/flfl kontwòl yo manje swa yon rejim kontwòl (ki gen 200 ppm fè) oswa yonfè-chaje rejim alimantè(ki gen 5000 ppm fè) soti nan sevraj pou 3 mwa. Valè yo montre kòm SEM vle di. (C, D) Pi gwo vèsyon panno nan Figi 3h ak i, respektivman.

Figi S5. Manyen fè ren ak ekspresyon ren hamp nan diferan modèl sourit yo. (A) Nivo fè nan ren nan bèt Fpnwt/C326Y ak kontwòl Fpnwt/wt nan laj 6 mwa. (B) Imaj reprezantatif FPN ak AQP1 tach imunoflfluoresan nan cortical ren bèt Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2þ ak kontwòl Fpnflfl/flfl yo te manje yon rejim ki chaje ak fè ki gen 5000 ppm soti nan sevraj pou 3 mwa. Ba ¼ 25 mm, agrandisman orijinal 60. (C) Nivo fè pipi (nòmalize nan kreyatinin urin) nan bèt sovaj ki te manje yon rejim ki chaje ak fè ki gen 5000 ppm fè oswa yon rejim kontwòl ki gen 200 ppm fè soti nan sevraj pou 3 mwa. (D) Ekspresyon jèn hamp nan ren nan bèt Fpnwt/C326Y ak kontwòl Fpnwt/wt nan 3 mwa ki gen laj. (E) Ekspresyon jèn ren ren nan bèt sovaj ki te manje yon rejim ki chaje ak fè ki gen 5000 ppm fè oswa yon rejim kontwòl ki gen 200 ppm fè soti nan sevraj pou 3 mwa. (F) Ekspresyon jèn ren hamp nan fi ak gason sourit FpnC326Yflflflfl, Pax8.CreERT2þ ak kontwòl FpnC326Yflflflfl nan 1 semèn, 1 mwa, 3 mwa, ak 6 mwa apre tretman tamoksifèn. (G) Ekspresyon jèn ren hamp nan sourit fi ak gason Fpnflflflfl, Pax8.CreERT2þ ak kontwòl Fpnflfl/flfl nan 1 semèn, 1 mwa, 3 mwa, ak 6 mwa apre endiksyon tamoksifèn. (H) Imaj reprezantan HAMP ak tach imunofluoresan CalD nan cortical ren bèt sovaj nan laj 3 mwa. Ba ¼ 25 mm, agrandisman orijinal 60. (I) Imaj reprezantatif FPN ak CalD tach imunoflfluoresan nan cortical ren bèt FpnC326Yflfl/ flfl ,Pax8.CreERT2þ nan laj 1 mwa. Ba ¼ 25 mm, agrandisman orijinal 60. (J–M) Pi gwo vèsyon panno nan Figi 4c, d, f, ak g, respektivman. Valè yo montre kòm SEM vle di. *P <>

Figi S6. Ekspresyon jèn hamp fwa ak nivo FPN nan zantray yo chanje nan sourit ki gen knockout espesifik nan tubul ren nan fpn ak nan sourit ki gen knock-in espesifik nan tubul ren nan fpnC326Y. (A) ekspresyon relatif nan mRNA hamp nan fwa fi FpnC326Yflfl/flfl, sourit Pax8.CreERT2þ ak kontwòl FpnC326Yflfl/flfl nan 1 semèn, 1 mwa, 3 mwa, ak 6 mwa apre tretman tamoksifèn. (B) Ekspresyon relatif nan mRNA hamp nan fwa sourit fi Fpnflflflfl, Pax8.CreERT2þ ak kontwòl Fpnflfl/flfl nan 1 semèn, 1 mwa, 3 mwa, ak 6 mwa apre tretman tamoksifèn. (C) Imaj reprezantatif nan imunostaining FPN nan zantray sourit fi FpnC326Y flflflfl, Pax8.CreERT2þ ak FpnC326Yflfl/flfl kontwole 1 mwa apre tretman tamoksifèn. Ba ¼ 200 mm, agrandisman orijinal10. (D) Imaj reprezantatif nan imunostaining FPN nan zantray sourit fi Fpnflflflfl, Pax8.CreERT2þ ak Fpnflfl/flfl kontwole 1 mwa apre tretman tamoksifèn. Ba ¼ 200 mm, agrandisman orijinal 10. Yo montre valè yo kòm SEM mwayen. *P <0.05, **p=""><0.01, ak=""><>

Cistanche ka soulaje enfeksyon nan ren

REFERANS

1. Donovan A, Lima CA, Pinkus JL, et al. Fer ekspòtatè ferroportin/slc40a1 esansyèl pou fè omeyostazi. Selil Metab. 2005;1:191–200.

2. Ganz T. Cellular fè: ferroportin se sèl fason pou sòti. Selil Metab. 2005;1:155–157.

3. Nemeth E, Tuttle MS, Powelson J, et al. Hepcidin kontwole efflux fè selilè pa obligatwa nan ferroportin ak pwovoke entèrnalizasyon li yo. Syans. 2004;306:2090–2093.

4. Qiao B, Sugianto P, Fung E, et al. Endositoz Hepcidin-induit nan ferroportin depann sou ubiquitination ferroportin. Selil Metab. 2012;15:918–924.

5. Wareing M, Ferguson CJ, Green R, et al. In vivo karakterizasyon nan transpò ren fè nan rat la anestezi. J Physiol. 2000;524:581–586.

6. Christensen I, Birn H, Tanpèt T, et al. Reseptè endocytic nan tubul proximal ren yo. Fizyoloji. 2012;27:223–236.

7. Zhang D, Meyron-Holtz E, Rouault T. Renal fè metabolis: transferrin fè livrezon ak wòl nan pwoteyin fè regilasyon. J Am Soc Nephrol. 2007;18:401–406.

8. Canonne-Hergaux F, Gruenheid S, Ponka P, Gros P. lokalizasyon selilè ak subcellular nan transpòtè an fè Nramp2 nan fwontyè a bwòs entesten ak règleman pa fè dyetetik. San. 1999;93: 4406–4417.

9. Wang C, Jenkitkasemwong S, Duarte S, et al. ZIP8 se yon transpòtè fè ak zenk ki gen ekspresyon selil-sifas kontwole pa chaj fè selilè. J Biol Chem. 2012;287:34032–34043.

10. Martines A, Masereeuw R, Tjalsma H, et al. Iron metabolis nan patojèn nan aksidan nan ren fè-induit. Nat Rev Nephrol. 2013;9:385–398.

11. Wolff N, Liu W, Fenton R, et al. Ferroportin 1 eksprime basolateralman nan selil tubul proximal ren rat ak depase fè ogmante trafik manbràn li yo. J Cell Mol Med. 2011;15:209–219.

12. Pan S, Qian ZM, Cui S, et al. Hepcidin lokal ogmante surcharge fè intraselilè atravè degradasyon ferroportin nan ren an. Biochem Biophys Res Commun. 2020;522:322–327.

13. Moulouel B, Houamel D, Delaby C, et al. Hepcidin kontwole manyen fè intrarenal nan nefwon distal la. Kidney Int. 2013;84:756–766.

14. Wang X, Zheng X, Zhang J, et al. Fonksyon fizyolojik nan ferroportin nan règleman an nan resiklaj ren fè ak ischemic aksidan ren egi. Am J Physiol Renal Physiol. 2018;315:F1042–F1057.

15. Lakhal-Littleton S, Wolna M, Chung YJ, et al. Yon wòl esansyèl selil otonòm pou hepcidin nan omeyostazi fè kadyak. Elife. 2016;5: e19804.

16. Lakhal-Littleton S, Wolna M, Carr CA, et al. Feroportin kadyak kontwole omeyostazi fè selilè epi li enpòtan pou fonksyon kadyak. Proc Natl Acad Sci US A. 2015;112:3164–3169.

17. Espana-Agusti J, Zou X, Wong K, et al. Jenerasyon ak karakterizasyon yon liy transjenik Pax8-CreERT2 ak yon liy knock-in Slc22a6-CreERT2 pou manipilasyon jenetik endivizib ak espesifik nan selil epitelyal tubulaires ren yo. PLoS Youn. 2016;11:e0148055.

18. Lakhal-Littleton S, Crosby A, Frize M, et al. Defisi an fè intraselilè nan selil nan misk lis atè poumon yo pwovoke tansyon wo nan atè nan poumon nan sourit. Proc Natl Acad Sci US A. 2019;116:13122– 13130.

19. Camaschella C. Konprann omeyostazi fè atravè analiz jenetik emokromatoz ak maladi ki gen rapò. San. 2005;106: 3710–3717.

20. Núñez MT, Tapia V, Rojas A, et al. Ekipman an fè detèmine distribisyon apical/bazolateral manbràn transpòtè fè entesten DMT1 ak ferroportin 1. Am J Physiol Cell Physiol. 2010;298:C477–C485.

21. Veuthey T, D'Anna MC, Roque ME. Wòl ren an nan omeyostazi fè: ekspresyon ren nan prohepcdin, ferroportin, ak DMT1 nan sourit anemik. Am J Physiol Renal Physiol. 2008;295:F1213–F1221.

22. Naz N, Malik I, Sheikh N, et al. Ferroportin-1 se yon "nikleyè"-negatif pwoteyin faz egi nan fwa rat: yon konparezon ak lòt pwoteyin fè-transpò. Lab Invest. 2012;92:842–856.

23. Aydemir F, Jenkitkasemwong S, Gulec S, Knutson MD. Chajman fè ogmante ferroportin etewojèn nikleyè RNA ak nivo mRNA nan makrofaj murin J774. J Nutr. 2009;139:434–438.

24. Veiras LC, Girardi ACC, Curry J, et al. Modèl dimòfik seksyèl nan transpòtè ren ak omeyostaz elektwolit. J Am Soc Nephrol. 2017;28: 3504–3517.