Sistèm Laccase-Mediator ki itilize yon medyatè natirèl kòm yon ajan blanchiman pou dekolorizasyon Melanin Pati 1

Résumé: Nan etid sa a, yo te devlope yon sistèm laccase-medyatè (LMS) lè l sèvi avèk yon medyatè natirèl kòm yon ajan blanchiman pou dekolorizasyon melanin. Sèt medyatè natirèl yo te itilize pou ranplase medyatè sentetik ak siksè simonte potansyèl redox ki ba nan lakaz ak aksè limite nan melanin nan sit la aktif nan lakaz. Aktivite dekolorizasyon melanin nan lakaz ki soti nan Trametes versicolor (lacT) ak Myceliophthora thermophila (lacM) te siyifikativman amelyore lè l sèvi avèk medyatè natirèl ki gen ladan acetosyringone, syringaldehyde, ak acetovanillone, ki te montre sitotoksisite ki ba. Gwoup methoxy ak ketonn medyatè natirèl yo jwe yon wòl enpòtan nan dekolorasyon melanin. Konstan espesifik lacT ak lacM pou dekolorizasyon melanin yo te ogmante pa 247 ak 334, respektivman, lè yo te itilize acetosyringone kòm yon medyatè. LMS lè l sèvi avèk dantèl ak acetosyringone ta ka tou dekolorize melanin prezan nan fim nan idrojèl seluloz, ki imite kondisyon an po. Anplis de sa, LMS te kapab dekolorize non sèlman sentetik eumelanin analog prepare pa oksidasyon nan tirozin, men tou melanin natirèl ki te pwodwi pa selil melanom.

Dapre etid ki enpòtan,sistanchse yon zèb komen ke yo rekonèt kòm "zèb mirak ki pwolonje lavi". Eleman prensipal li sekistano, ki gen plizyè efè tankouantioksidan, anti-enflamatwa, epipwomosyon fonksyon iminitè. Mekanis ki genyen ant cistanche akblanchiman pomanti nan efè a antioksidan nan cistancheglikozid. Melaninnan po moun se pwodwi pa oksidasyon nan tirozin katalize patirozinaz, ak reyaksyon an oksidasyon mande pou patisipasyon nan oksijèn, kidonk radikal yo san oksijèn nan kò a vin yon faktè enpòtan ki afekte pwodiksyon melanin. Cistanche genyenkistano, ki se yon antioksidan ak ka diminye jenerasyon an nan radikal gratis nan kò a, konsaanpeche pwodiksyon melanin.

Klike Sou Rou Cong Rong Benefis Pou Blanchiman

Pou plis enfòmasyon:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

1. Entwodiksyon

Lakaz (EC 1.10.3.2, benzenediol: dioxygen oxidoreductases) se pwoteyin multicopper ki katalize oksidasyon divès konpoze fenolik ak ki pa fenolik atravè yon mekanis reyaksyon radikal katalize pa rediksyon oksijèn molekilè [1,2]. Lakaz yo te itilize kòm byokatalisè pou pwosesis biodegradasyon, tankou bioremediation nan koloran [3,4], pharmaceutique [5,6], èbisid [7], ak delignification [8-10]. Lakaz yo te itilize tou pou katalize polymérisation précurseurs koloran ak konpoze òganik [11]. An patikilye, pwopriyete atire yo, tankou espesifik substra ki ba, itilizasyon oksijèn kòm aseptè elèktron final la, jenerasyon dlo kòm yon pa pwodwi, epi pa gen okenn demann (oswa pa gen pwodiksyon) nan oksijene, fè yo enteresan nan biotechnologie ak jaden anviwònman [1,11,12].

Kat iyon kwiv nan sit aktif la patisipe nan aktivite katalitik lakaz. "Blue" kòb kwiv mete (sit T1) oksidize substra a, ak grap kwiv trinikleyè (T2/T3) resevwa elektwon ki soti nan sit T1 pou diminye oksijèn molekilè a [1,12,13]. An patikilye, potansyèl redox nan sit T1 Cu a konsidere kòm yon faktè enpòtan nan detèmine kapasite katalitik lakaz [14]. Lakaz yo genyen yon potansyèl redox relativman ba (0.4–0.8 V) konpare ak peroksidaz ligninolytic (plis pase 1 V) tankou peroksidaz manganèz ak peroksidaz lignin. Lakaz pa ka dirèkteman oksidasyon substrats ki pa fenolik ak yon potansyèl redox pi wo a 1.3 V [13,14]. Se poutèt sa, simonte limit yo nan lakaz, sistèm lakaz-medyatè (LMS) lè l sèvi avèk ti konpoze molekilè, tankou 2,20 -azinobis (3- ethylbenzthiazoline-6-sulfonat) (ABTS), { {24}}hydroxy benzotriazole (HOBt), asid violuric (VLA), N-hydroxy phtalimide (HPI), N-hydroxy acetanilide (NHA), ak TEMPO, ki aji kòm medyatè redox, yo te sijere [15-17].

Medyatè sa yo pèmèt oksidasyon konpoze ankonbran atravè diferan wout oksidasyon. Sistèm laccase-ABTS la okside substrats pa jenere yon radikal ABTS kasyonik atravè yon mekanis transfè elèktron (ET). LMS ak HOBt, VLA, HPI, oswa NHA pwodui radikal nitroksil atravè mekanis transfè atòm idwojèn (HAT) [1,12,17]. Anplis de sa, medyatè tankou TEMPO ak analogue li yo reyaji atravè chemen iyonik pou jenere iyon oxoammonium [1,12,18]. Itilizasyon medyatè sa yo ka oksidasyon yon pakèt konpoze nan divès aplikasyon, tankou degradasyon lank [3,4], degradasyon dwòg [5,6], ak degradasyon lignin [8-10]. Men, aplikasyon medyatè sentetik nan domèn endistriyèl yo limite akòz toksisite potansyèl yo, gwo pri, ak efè inactivation anzim yo. Dènyèman, molekil fenolik ki sòti nan lignin kòm medyatè natirèl (egzanp, syringaldehyde, acetosyringone, vanilin, acetovanillone, methyl vanillate, asid ferulic, asid sinapik, asid p-koumarik, elatriye) yo te etidye pou ranplase medyatè sentetik [1,12] . Avantaj ki genyen nan medyatè natirèl yo se pri ki ba ak toksisite ki ba paske yo jwenn yo nan sous natirèl ak renouvlab [19].

Melanin se yon gwoup pigman natirèl ki te pwodwi pa melanogenesis atravè polimerizasyon oksidatif nan tirozin pa melanosit. Melanin natirèl ka klase nan senk kategori eumelanin, feomelanin, tout melanin, feomelanin, ak neuromelanin [20]. Dènyèman, yo te etidye plizyè aplikasyon medikal ak elektwochimik lè l sèvi avèk melanin oswa précurseur melanin [20,21]. Koulè po imen an sitou detèmine pa prezans melanin. Nan endistri kosmetik, depigmantasyon dirèk melanin lè l sèvi avèk anzim yo te pwopoze pou devlopman ajan blanchi po yo. Plizyè peroksidaz yo te etidye dekolorize melanin. Woo et al. te montre ke melanin sentetik ka dirèkteman dekolorize pa peroksidaz lignin soti nan P. chrysosporium [22]. Gwoup Keneko ak Mohorciˇc te rapòte tou dekolorizasyon anzimatik melanin pa peroksidaz Manganèz izole nan fongis (Sporotrichum pruinose ak Phlebia radiata) [23,24]. Kim et al. rapòte ke melanj anzim brit ki gen peroksidaz Manganèz, peroksidaz lignin, ak lakaz te montre aktivite depigmantasyon melanin [25]. Lè peroksidaz dekolorize melanin, yo mande oksijene idwojèn (H2O2) kòm yon kofaktè ki ka irite po a. Kidonk, pou diminye itilizasyon H2O2, glikoz oksidaz oswa lakaz te prezante nan sistèm konbinezon anzim [26,27]. Lakaz yo ka dekolorize melanin san yo pa itilize oksijene idwojèn. Khammuang ak Sarnthima rapòte ke lakaz ki soti nan Lentinus polycarpous Lév te montre aktivite dekolorasyon melanin lè l sèvi avèk ABTS, vanilin, ak asid vanilik kòm medyatè [28].

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Materyèl

2.2. Melanin dekolorasyon pa LMS

Solisyon melanin satire (1.4 mg/mL) te prepare pa yap divòse 3 mg melanin sentetik nan 1.3 mL 10 mM NaOH. Solisyon an te santrifuje nan 8500 rpm pou 5 min pou retire melanin ki pa disous, epi supernatant la te dilye ak 0.1 M tanpon fosfat asid asid (pH 3, 4, 5, 5.5, 6, oswa 7) epi yo itilize kòm yon solisyon substra pou LMS. Konsantrasyon melanin nan solisyon substra a te 63 µg/mL ak espektrofotometrik konfime nan 475 nm. 0.8 mL nan solisyon substrate melanin te melanje ak 0.1 mL solisyon medyatè (0-1 mM) nan yon tib Eppendorf 1.5 mL. Reyaksyon dekolorasyon melanin lan te kòmanse lè w ajoute 0.1 mL solisyon lakaz (15.8 µg (0.6 U) lacT oswa 19.2 µg (1.8 U) lacM) nan yon melanj melanin ak medyatè a nan 25 ◦C nan yon beny dlo souke nan 120 rpm. . Apre reyaksyon an, yo te santrifuje melanj reyaksyon an, epi yo te mezire absorbans supernatant la nan 475 nm. Yo te kalkile pwodiksyon an dekolorizasyon (pousan) lè l sèvi avèk ekwasyon sa a:

Dekolorizasyon (pousan) {{0}} (A0 − At)/A0 × 100, (1)

2.3. Etid sinetik dekolorizasyon Melanin pa LMS

2.4. Sitotoksisite nan medyatè natirèl

Liy selil B16F10 melanom (Kore di Selilè Bank, Seoul, Kore) te itilize pou detèmine sitotoksisite medyatè natirèl pou LMS. Yo te fè yon tès net wouj (NR) pou mezire sitotoksisite medyatè yo [29]. NR mezire viabilite nan lizozòm selil vivan. Selil melanom ki gen yon konsantrasyon 3 × 104 selil yo te distribye nan chak pi nan yon plak 96-byen. Apre 24 èdtan nan kiltivasyon, selil yo te trete ak medyatè natirèl (1, 2, 5, 10, 22, ak 46 mM). Apre kiltivasyon adisyonèl pou 2 jou, selil yo te trete ak 50 µg/mL solisyon NR ki fonn nan DMEM ak enkubasyon pou 3 èdtan. Apre yo fin retire supernatant la atravè aspirasyon, yo te itilize yon solisyon NR desorb (1 pousan asid acetic glacial, 49 pousan etanòl, ak 50 pousan dlo distile) pou fè ekstraksyon koulè. Apre pwosesis ekstraksyon an, yo te mezire chanjman nan absorpsyon nan 540 nm.

2.5. Preparasyon ak dekolorizasyon Melanin / Seluloz Hydrogel Film

Pou mezire aktivite dekolorizasyon LMS pou fim melanin / seluloz la, yo te koupe fim idwojèl la nan yon fèy 1 × 2 cm. Fim idwojèl la te benyen nan 4 mL 0.1 M tanpon asid asid fosfat (pH 5.5); answit, yo te ajoute 0.5 mL 1 mM asetosyringone ak 0.5 mL solisyon dantèl (2.5 U) nan tanpon an. Reyaksyon de-kolorasyon an te fèt nan yon beny dlo ak souke nan 120 pm ak 25 ◦C pou 3 èdtan. Apre reyaksyon an, yo te lave fim nan ak dlo distile epi yo tache ak bò enteryè kivèt la pou mezire chanjman nan spectre yo nan ranje 400-800 nm lè l sèvi avèk yon espektrofotomèt UV/Vis. Reyaksyon kontwòl san lacM oswa medyatè yo te fèt tou nan menm kondisyon yo. Liberasyon melanin nan fim nan oswa chanjman koulè nan fim nan melanin / seluloz pa te detekte anba kondisyon reyaksyon yo. Anplis de sa, chanjman nan paramèt koulè (L *, a *, ak b * valè) nan fim nan melanin / seluloz apre reyaksyon an dekolorizasyon pa LMS te anrejistre tou lè l sèvi avèk yon kolorimètr (KONICA MI NOLTA, Tokyo, Japon). Valè ∆L (diferans limyè metrik), ∆E (diferans koulè total), YI (endèks jòn), ak WI (endèks blanch) yo te jwenn nan ekwasyon sa yo [30–32]:

2.6. Preparasyon nan Melanin Natirèl

Melanin natirèl yo te jwenn nan selil melanom B16F10. Selil yo te trete ak alfa-melanocyte-stimulan òmòn yo pwodwi melanin. Apre 4 jou nan enkubasyon, selil yo te kaptire lè l sèvi avèk trypsin-EDTA ak sonike pou 10 min. Sipènatant la te jwenn nan santrifujasyon nan 8000 rpm pou 10 min ak Lè sa a, ajiste a pH 1.5 lè l sèvi avèk 6 M HCl. Solisyon an te bouyi a 100 ◦C pou 4 èdtan pou idrolize fraksyon pwoteyin rezidyèl yo. Solisyon an ki gen melanin natirèl yo te lave ak asetòn, ki te swiv pa klowofòm ak etanòl, epi answit lave ak dlo deyonize pou elimine résidus, tankou selil, konpozan medya, ak fraksyon pwoteyin [33,34]. Tout pwosesis lave yo te fèt plis pase de fwa. Finalman, melanin natirèl yo te jwenn pa friz-seche epi yo itilize kòm yon substra pou LMS.

3. Rezilta ak Diskisyon

3.1. Efè medyatè yo sou dekolorizasyon Melanin pa LMS

Efè medyatè divès kalite sou reyaksyon an dekolorizasyon melanin pa LMS te envestige lè l sèvi avèk de lakaz soti nan T. versicolor (lacT) ak M. thermophila (lacM) (Figi 1).Lè lacT yo te itilize san yon medyatè pou dekolorizasyon melanin, sede a dekolorizasyon te sèlman 1 pousan apre 5 èdtan nan reyaksyon. Lè HOBt te itilize kòm yon medyatè pou lacT, yo te sede dekolorizasyon an yon ti kras ogmante a 2 pousan apre 5 èdtan nan reyaksyon. Itilizasyon divès kalite medyatè sentetik, tankou HOBt, ABTS, VLA, ak TEMPO, nan oksidasyon lakaz-katalize nan konpoze fenolik oswa ki pa fenolik ogmante siyifikativman to reyaksyon yo [10,15]. Lè aksè nan konpoze sib nan sit la aktif nan lakaz limite pa antrav esterik yo, radikal medyatè ki fòme pa lakaz yo ka oksidize konpoze sib yo avèk efikasite pa transfè elèktron oswa mekanis transfè atòm idwojèn [12]. HOBt se youn nan medyatè sentetik ki pi souvan itilize nan LMS akòz gwo potansyèl redox li (1.1 V) [6]. Sepandan, HOBt se pa yon bon engredyan kosmetik paske nan toksisite potansyèl selil li yo ak kapasite nan inaktive lakaz. Kidonk, nou te chwazi sèt medyatè natirèl, acetosyringone, syringaldehyde, p-coumaric asid, vanilin, asid vanilik, alkòl vanilyl, ak asetovanillone, pou reyaksyon dekolorizasyon melanin pa LMS. Enteresan, tout medyatè natirèl yo aji kòm medyatè pi efikas pase HOBt pou dekolorizasyon melanin pa mank. Lè yo te itilize acetosyringone, syringaldehyde, ak asid p-koumarik, pwodiksyon dekolorizasyon yo te 28 pousan, 22 pousan, ak 18 pousan, respektivman, apre 5 èdtan nan reyaksyon. Rezilta sa yo demontre itilite medyatè natirèl pou reyaksyon dekolorizasyon melanin pa LMS. Medyatè yo nan LMS yo soksid nan radikal medyatè pa lakaz, ak radikal medyatè yo pwovoke oksidasyon ak dekolorizasyon melanin. Lè mank yo te itilize san yon medyatè pou melanin dekolorizasyon pandan yon tan reyaksyon ase, ki te kapab rive nan eta a ekilib, sede a dekolorizasyon te 7 pousan apre 24 èdtan nan reyaksyon. Medyatè natirèl yo, eksepte asid vanilik, aji kòm medyatè pi efikas pase HOBt pou dekolorizasyon melanin pa lacT apre 24 èdtan nan reyaksyon. Sede a dekolorizasyon apre 24 èdtan reyaksyon lè l sèvi avèk asid vanilik kòm yon medyatè te pi ba pase sa apre 5 èdtan nan reyaksyon. Sa a ka koze pa estabilite ki ba nan fòm nan radikal oksidize nan asid vanilik. Lè yo te itilize acetosyringone, syringaldehyde, ak asetovanillone, pwodiksyon dekolorizasyon yo te 34 pousan, 30 pousan, ak 31 pousan, respektivman, apre yon reyaksyon 24 èdtan. Asid p-Coumaric te pi efikas nan amelyore pousantaj reyaksyon inisyal la pase acetovanillone, pandan y ap acetovanillone pwovoke yon pi wo sede dekolorizasyon nan eta a ekilib pase asid p-coumaric.

Efè medyatè a sou reyaksyon dekolorizasyon LMS lè l sèvi avèk lacM te tou trè menm jan ak sa ki te jwenn pa LMS lè l sèvi avèk lacT. Lè dantèl yo te itilize san yon medyatè pou dekolorizasyon melanin, sede a dekolorizasyon te sèlman 2 pousan apre 5 èdtan nan reyaksyon. HOBt kòm yon medyatè pou lacM pa t 'amelyore sede a dekolorizasyon pandan reyaksyon an 5 h. Tout medyatè natirèl yo, eksepte asid p-koumarik ak vanilin, te aji kòm medyatè efikas nan dekolorizasyon melanin pa lacM. Lè yo te itilize acetosyringone ak syringaldehyde, pwodiksyon dekolorizasyon yo te 25 pousan ak 22 pousan, respektivman, apre 5 èdtan nan reyaksyon. Asid p-Coumaric ak vanilin te itilize kòm medyatè efikas pou chak, men yo pa t 'kapab efikasite amelyore pousantaj dekolorizasyon nan LMS lè l sèvi avèk dantèl. Sa a ka koze pa espesifik substra ki pi ba nan lacM pou asid p-koumarik ak vanilin. Dekolorizasyon pwodiksyon an apre 24 èdtan nan reyaksyon nan lacM ak asid p-koumarik ak vanilin te sanble ak sa yo jwenn pa lacT. Sa a endike ke fòm yo oksidize nan asid p-koumarik ak vanilin ka efikasman dekolorize melanin, byenke to oksidasyon yo pa lacM te pi ba anpil pase sa ki pa lacT. Lè yo te itilize lacM san yon medyatè pou dekolorizasyon melanin pandan yon tan reyaksyon ase, pwodiksyon an dekolorizasyon te 5 pousan apre 24 èdtan nan reyaksyon. Medyatè natirèl yo, eksepte asid vanilik, tou aji kòm medyatè pi efikas pase HOBt pou dekolorizasyon melanin pa lacM apre 24 èdtan nan reyaksyon. Lè yo te itilize acetosyringone, syringaldehyde, ak asetovanillone kòm medyatè pou lacM, pwodiksyon dekolorizasyon yo te 34 pousan, 28 pousan, ak 31 pousan, respektivman, apre 24 èdtan nan reyaksyon. Lè yo te itilize asid vanilik kòm yon medyatè pou tou de lacT ak lacM, li te montre pwodiksyon an dekolorizasyon ki pi ba. Sa a ka koze pa estabilite ki ba nan fòm nan radikal oksidize nan asid vanilik. Khammuang ak Sarnthima rapòte ke vanilin ak asid vanilik ta ka itilize kòm medyatè pou dekolorizasyon melanin lè l sèvi avèk lakaz soti nan Lentinus polycarpous [28]. Sepandan, yo te montre aktivite dekolorizasyon pi ba anpil pou melanin pase acetosyringone lè yo te itilize kòm medyatè pou lacT ak dantèl.

Rezilta sa yo endike ke medyatè natirèl yo pi efikas pou dekolorasyon melanin pa LMS pase HOBt. HOBt te konsidere kòm yon medyatè sentetik efikas pou laccase akòz gwo potansyèl redox li yo ak wòl katalitik gwoup N OH HOBt [5]. Efikasite medyatè yo pou oksid substrats sib yo trè depann sou kapasite pou fòme radikal ki estab ak antrav esterik ki te koze pa substituents alkyl ankonbran olye ke potansyèl redox medyatè yo [19,35]. Yo te detèmine estabilite ki ba nan entèmedyè oksidize HOBt atravè voltametri silik [6]. Se poutèt sa, pwodiksyon an dekolorizasyon ki ba pa LMS lè l sèvi avèk HOBt ka koze pa estabilite ki ba nan HOBt nan kondisyon sa yo reyaksyon nan lakaz. Malgre ke potansyèl redox nan syringaldehyde te pi ba pase sa yo ki nan HOBt, syringaldehyde te montre relativman pi wo estabilite pase HOBt [6].

Jan yo montre nan Figi 2, medyatè natirèl yo itilize nan travay sa a gen divès kalite substituant (egzanp, hydroxyl, metoxy, carboxyl, ketone, oswa aldehyde) nan diferan pozisyon sou bag la benzèn [12,19]. Medyatè ki gen de gwoup metoksid (acetosyringone ak syringaldehyde) te montre pi gwo pousantaj dekolorizasyon pase sa yo ki gen yon gwoup metoksid. Pousantaj dekolorizasyon asid p-koumarik ki pa gen okenn gwoup methoxy te depann sou kalite lakaz la. Asid p-coumaric ak lacT te montre yon pousantaj dekolorizasyon ki pi wo pase sa yo ki gen yon gwoup metoksid, pandan y ap asid p-coumaric ak lacM te montre pousantaj dekolorizasyon ki pi ba nan reyaksyon 5 h. Fillat et al. te montre tou rezilta menm jan an pou dekolorizasyon lank flexographic pa lakaz chanpiyon ak medyatè natirèl [36]. Medyatè fenolik natirèl yo (acetosyringone, sereng methyl, ak syringaldehyde) ak de substituent metoxy nan bag la te soksid pa laccase pi vit pase asid p-coumaric ki pa gen okenn gwoup methoxy. Sa a endike ke gwoup methoxy jwe yon wòl pi enpòtan kòm donatè elèktron pase kosyon an doub nan chèn lateral la nan asid p-koumarik. Lè yo te konpare medyatè yo ak yon gwoup methoxy, pwodiksyon an dekolorizasyon ogmante nan lòd sa a: asetovanillone > vanilin > alkòl vanilyl > asid vanilik. Acetovanillone, ki gen yon gwoup ketonn, te montre yon pi gwo pousantaj dekolorizasyon ak sede pase medyatè yo ak aldehyde, hydroxyl, ak gwoup carboxyle. Acetosyringone ak yon gwoup ketonn tou te montre yon pi gwo pousantaj dekolorizasyon ak sede pase syringaldehyde ak yon gwoup aldehyde.

Nan eksperyans sa yo, yo te chwazi acetosyringone, syringaldehyde, ak asetovanillone, ki te montre gwo kapasite dekolorizasyon melanin, kòm medyatè pou LMS pou dekolorize melanin. Efè medyatè a sou reyaksyon dekolorizasyon LMS te envestige sou tan (Figi S1). Reyaksyon dekolorizasyon lè l sèvi avèk lacT ak acetosyringone, syringaldehyde, ak asetovanillone te lakòz 21 pousan, 18 pousan, ak 1 pousan pwodiksyon dekolorasyon apre 1 èdtan nan reyaksyon, respektivman. Reyaksyon dekolorizasyon an lè l sèvi avèk lacM ak acetosyringone ak syringaldehyde te lakòz 19 pousan ak 18 pousan pwodiksyon dekolorizasyon apre 1 èdtan nan reyaksyon, respektivman. Tou de lakaz yo te montre pwofil reyaksyon menm jan an lè yo te itilize menm medyatè a. Acetosyringone ak syringaldehyde siyifikativman amelyore to a dekolorizasyon pandan premye reyaksyon an. Rezilta sa yo montre ke acetosyringone ak syringaldehyde ki gen gwoup dimethoxy yo te pi efikas nan amelyore pousantaj inisyal dekolorizasyon pa LMS pase acetovanillone ki gen yon gwoup methoxy. Fillat et al. te rapòte tou ke gwoup methoxy nan estrikti bag medyatè yo aji kòm akseleratè pou oksidasyon substrats [36]. Nan lòt men an, pwodiksyon an dekolorizasyon apre 24 èdtan nan reyaksyon acetovanillone te sanble ak sa ki pa syringaldehyde, byenke acetovanillone modere amelyore to reyaksyon an.

Pou plis enfòmasyon: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501