Metòd pou idantifye engredyan chimik aktif nan Cistanche

Kontakte:joanna.jia@wecistanche.com

Idantifikasyon konpozan chimik Cistanche Deserticola ak sistèm X500R QTOF

Li Yuejie, Cheng Haiyan, Liu Ting, Li Lijun, Jin Wenhai SCIEX, Azi Pasifik Aplikasyon Sipò Sant (Shanghai), Lachin

Entwodiksyon

Cistanche deserticolate premye anrejistre nan "Shen Nong Materia Medica"; li rele tou "Dayun," "Rousong Rong," ak "Zong rong." Kòm yon medikaman tradisyonèl èrbal, li gen pwopriyete yo nan nouri Yang nan ren, amelyore sikilasyon san, aji kòm yon laksatif, eksitasyon iminitè, ak lòt efè [1]. An 1983, savan Japonè H. Kobayashi ak lòt moun te kòmanse etidye konpozisyon chimik la.Cistanche Deserticola[2], e depi lè sa a li te vin tounen yon sijè popilè nan rechèch medikaman Chinwa ki te pwodwi gwo enterè tou de domestik ak aletranje sou 30 dènye ane yo.Cistanche Deserticolafè pati klas la nan plant ki gen fenolikglikozid, iridoids, ak yoglikozid, ak lignans ak yoglikozid.

Quadrupole time-of-flight (QTOF) mas spèktrometri se yon zouti sansib ak espesifik pou idantifikasyon konpozan medikaman Chinwa ki te piti piti vin endispansab nan rechèch. Teknoloji sa a te simonte defi teknik tradisyonèl yo ak analiz retrospektiv nan piki sèl ki pèmèt ekstraksyon nan done enpòtan ak akizisyon ki pi konplè nan enfòmasyon echantiyon. Sèvi ak mas egzak ak done wo rezolisyon TOF-MS ak TOF-MS/MS pèmèt pou analiz kalitatif similtane, trè espesifik vize ak ki pa vize. Sepandan, konpleksite operasyon enstriman an ak itilizasyon lojisyèl te limite anpil pwopagasyon ak devlopman teknoloji sa a. Isit la nou prezante yon nouvo sistèm QTOF ki sèvi ak yon revolisyonè nouvo chemen N-tip jeyometri ki baze sou TOF, lojisyèl entwisyon, ak teknik egzat pwa molekilè ki pi fasil pou itilize nan idantifikasyon konpozan medikaman Chinwa.

Avantaj ki genyen nan metòd sa a se jan sa a:

1. X500R a sèvi ak dirab, endistri apwouve Turbo VTM ion sous la ak lè rido gaz koòdone konsepsyon, ki gen yon karakteristik anti-kontaminasyon fò;

2. SCIEX OS Software gen fonksyon entegre akizisyon, pwosesis, ak rapò sou yon platfòm sèl; koòdone a se entwisyon, fasil metrize, e li gen yon koreksyon oto-ajiste yon sèl-touche asire ke analis ki gen nenpòt degre nan ekspètiz ka jwenn bon jan kalite segondè, done serye;

3. Sèvi ak SCIEX OS lojisyèl pou trete done pou idantifye konpozan medikaman Chinwa yo senp epi pèmèt rapid ekstraksyon enfòmasyon itil, kidonk;

4. Li sòti rezilta idantifikasyon ki pi egzak ak serye nan bibliyotèk medikaman Chinwa ki gen MS / MS spectre;

5. Gwo rezolisyon MS/MS baz done medikaman Chinwa yo baze sou "Chinese pharmacopeia" Pati 1 TCM engredyan aktif; ki gen ladan referans eleman nan farmakope a ak engredyan aktif nan remèd fèy yo, gen prèske 900 konpoze.

cistanche deserticola amelyore efikasite

Pwosesis eksperimantal

1. Sèvi ak mòd TOF-MS-IDA MS/MS, enjekte yon echantiyon epi an menm tan jwenn iyon precurseur prensipal ak espèk segondè korespondan;

2. Sèvi ak SCIEX OS Software vize tès depistaj, konfimasyon nan konpoze sib, ak spectre segondè ansanm ak yon tès depistaj nan estanda medikaman Chinwa ak metòd matche ka ogmante presizyon ak pwodiktivite travay.

3. Flux travay idantifikasyon SCIEX OS Software a ki pa vize itilize rechèch bibliyotèk ak rechèch konplè enkoni nan ChemSpider pou verifye rezilta yo, asire yo idantifye plis eleman ak yon workflow ki pi senp.

Echantiyon ak metòd pre-pwosesis

Egzanp sous:

Achte nan famasi Shanghai nan fòm tranche

Pre-pwosesis metòd:

1. Tranch yo te kraze yo fòme poud;

2. 0.9mg te peze epi plonje nan 3mL metanol pou 40min;

3. Echantiyon an soti nan etap 2) te ultrasonicated 1 h;

4. Santrifugasyon ak retire supernatant pou itilize kòm echantiyon te fèt.

Kondisyon chromatografi likid (LC).

Kolòn chromatografik: XSelect HSS T3, 2.1 * 150mm, 3.5µm;

Faz mobil: elisyon gradyan yo te itilize

Faz mobil: A se 0.1 pousan dlo asid fòmik-2mM NH4FA

B se 95 pousan acetonitrile-5 pousan dlo-2mM NH4FA

Pousantaj koule: 0.5mL/min

Tanperati kolòn: 40ºC

Kantite moun ki mete: 5µL

Metòd mas Spectrometry:

Metòd analiz: TOF MS-IDA-15 MS/MS tès depistaj kalitatif

ESI paramèt sous ion:

Air rido gaz CUR: 35psi; IS vòltaj: 5500V/-4500V

Tanperati sous: 600ºC

Atomize gaz GAS1: 55psi; Oksilyè gaz GAS2: 60psi

Rechèch mòd enstriman:

Yon sèl-touch (chwazi MS Tcheke sou pi ba dwat la), totalman otomatik TOF-MS ak TOF-MS/MS koreksyon mòd asire ke analis nan nenpòt nivo ekspètiz ka jwenn egzat, fyab, done repwodiktif.

BPC mòd iyon pozitif ak negatif:

Pwosedi Idantifikasyon konpoze

1. Workflow idantifikasyon eleman vize

1.1: rechèch fòmil molekilè

Se sèlman non konpoze chimik la ak fòmil molekilè obligatwa; sa yo ka antre dirèkteman oswa enpòte lè l sèvi avèk kopi ak keratin fonksyon Excel yo kreye yon metòd pwosesis

Yon fwa ke yon tablo rezilta yo kreye, rezilta quantitative ak kalitatif ka wè nan menm fenèt la. Yo itilize yon sistèm endikatè wouj/vèt pou endike presizyon mas, tan retansyon, kalite izotòp, ak konfyans nan idantifikasyon pa matche baz done.

Lojisyèl SCIEX OS pèmèt itilizatè yo filtre rezilta yo epi montre sèlman konpoze sa yo ki satisfè kritè akseptasyon yo epi ki tonbe nan entèval konfyans itilizatè a defini. Li ka byen vit jwenn rezilta vize nan baz done gwo.

Baz done TCM nan MS/MS spectre pèmèt pou matche segondè epi li bay rezilta plis serye (koulè gri nan baz done a endike done MS/MS)

Literati a gen non ak fòmil molekilè fenolikglikozidengredyan aktif. Sèvi ak pwosesis ki anwo a pou idantifikasyon konpozan sib yo, li te detèmine ke echantiyon an gen 39 kalite glikozid fenolik:

Anplis fenolik laglikozideleman aktif, Cistanche tou gen yon gwo kantite konpoze tankou iridoid, glikozid, ak lignans. Rezilta idantifikasyon yo se jan sa a:

Lis idantifikasyon iridoid, glikozid ak lignan yo:

1.2: Rechèch baz done:

53 konpoze yo te jwenn nan idantifikasyon matche nan baz done a TCM: 43 iyon pozitif, 22 iyon negatif, ak 12 repete, ki nan lis anba a. Anplis fenolik aktifglikozid, iridoid, glikozid, ak lignans, Cistanche genyen tou

2. analiz eleman ki pa vize

Ou ka fè idantifikasyon eleman ki pa vize ak fonksyon rechèch ChemSpider ki entegre pou detèmine klasifikasyon ak kalite enkoni yo. Pou idantifikasyon eleman ki pa vize, tou senpleman chwazi mòd "ki pa vize" ak rechèch fòmil molekilè a ap devlope yon metòd pwosesis. Flux travay la se jan sa a:

Pou enkoni konplè, rezilta rechèch fòmil molekilè yo montre nan yon fenèt navigatè pik nan pati ki pi ba nan spectre mas TOF MS; ak rechèch baz done ChemSpider, rezilta yo ki nan lis pa priyorite, epi enfòmasyon estriktirèl yo jwenn nan ChemSpider yo otomatikman konpare ak spectre MS/MS yo jwenn, bay fidbak segondè pou idantifikasyon rapid.

Rezime

1. Rapid akizisyon done wo-rezolisyon; yon sèl piki bay done segondè rezolisyon TOF MS ak MS/MS, ak 39 konpozan aktif glikozid fenolik ki idantifye ak 16 iridoid, lignan, ak glikozid;

2. Yon baz done TCM nan spectre segondè bay plis enfòmasyon matche, ak lojisyèl an otomatikman bay yon nòt matche ak baz done. Sèvi ak nòt la, yon moun ka fasil, byen vit, ak byen idantifye eleman medikaman Chinwa;

3. Aparèy la se senp epi li gen yon koreksyon oto-ajiste yon sèl-touche asire ke analis ki gen nenpòt degre nan ekspètiz ka jwenn bon jan kalite segondè, done serye;

4. Nouvo vèsyon lojisyèl SCIEX OS la entegre akizisyon done, pwosesis (kantitatif ak kalitatif), ekspozisyon, rapò, ak jesyon baz done. Li rezoud difikilte ke anpil itilizatè yo fè fas ak yon koòdone entwisyon ak fasil-a-itilize;

5. Tou de travay tès depistaj yo vize ak ki pa vize yo senp, ak gid metòd entegre la ede itilizatè yo avèk presizyon ak rapidman kreye metòd.

Referans

1. ISBN 978-7-5067-7337-9, PRC pharmacopeia [S]. Beijing: Komisyon Nasyonal famakope, 2015

2. Lei, Song Zhihong, Tu Pengfei; Rechèch pwogrè nan konpozisyon chimik plant nan genus Cistanche, "Chinese Herbal Medicine," Volim 34, No 5, Me 2003, 473-476.