Nouvo anti-aje Benzoquinone dérivés de Onosma Bracteatum miray pati 2
May 17, 2022
Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon
2.3. Aktivite anti-aje nan souch ledven K6001
Aktivite anti-aje nan benzoquinones izole (1-5) yo te evalye lè l sèvi avèk yon sistèm bioassay ledven repwodiksyon lavi K6001. Resveratrol (Res), yon sibstans ki byen koni anti-aje, yo te itilize kòm yon kontwòl pozitif yo tcheke fyab nan sistèm nan byoassay. Konsantrasyon ki pi efikas Res se te 10 μM nan sistèm bioassay ledven repwodiksyon lavi, jan yo te rapòte nan piblikasyon anvan nou yo 【4-6】.cistanche herbaJan yo montre nan Figi 4, allomicrophyllone (1) nan 3 μM, ehretiquinone (2) ak ehretiquinone C (4) nan 1 ak 3 μM, ak ehretiquinone D (5) nan 1 μM, te montre yon ogmantasyon siyifikatif nan lavi replika a. K6001 souch ledven, pandan y ap ehretiquinone B (3) te inaktif. Rezilta sa a endike potansyèl anti-aje benzoquinones (1, 2, 4, ak 5) izole nan O. bracteatum.
3. Diskisyon
Nan kontèks aje mondyal la, rechèch ak devlopman dwòg anti-aje pou amelyore kalite lavi moun ki gen laj epi redwi prévalence maladi ki gen rapò ak laj yo, se yon gwo enpòtans.kwasans penis cistancheEtid sa a rapòte izòlman, estrikti elisid, aktivite byolojik, ak etid kout SAR nan dérivés benzoquinone anti-aje soti nan O.bracteatum1.
Tanpri klike la a pou w konnen plis
Nan etid sa a, de li te ye (1 ak 2) ak twa roman (3-5) dérivés benzoquinone yo te izole nan yon echantiyon kouch etil acetate nan O.bracteatum anba pedagojik la nan yon byoassay k6001 ledven replikasyon lavi. Estrikti nouvo benzoquinones (3-5) yo te elucide pa analiz spectroscopic vaste. Benzoquinones, allomicrophyllone (1), ak ehretiquinone (2) li te ye yo te pirifye epi idantifye lè yo konpare done espektroskopik ak sa yo rapòte nan literati a [17-19]. Précédemment, tou de konpoze yo te rapòte yo gen aktivite anti-alèji ak anti-enflamatwa, respektivman [17,19]. Dapre sa nou konnen, pa gen okenn etid ki gen rapò ak anti-aje rapòte pou konpoze sa yo. Konpoze izole sa yo te pataje menm eskèlèt benzoquinone ak diferans yo te nan modifikasyon yo nan pozisyon C-11 ak C-11.
Cistanche ka anti-aje
Evalyasyon aktivite byolojik yo te fèt pou etid relasyon estrikti-aktivite.benefis cistanche salsaRezilta yo nan Figi 4 endike ke izole allomicrophyllone (1), ehretiquinone (2), ak ehretiquinones CD (4-5) siyifikativman pwolonje lavi replikatif nan ledven. Sepandan, ehretiquinone B (3) ki te posede menm skelèt benzoquinone men diferan modifikasyon yo te inaktif. Dapre etid relasyon estrikti-aktivite (SAR) nan konpoze izole sa yo, nou konkli ke prezans gwoup methyl ak ègzometilèn nan C-9' enpòtan pou aktivite anti-aje tankou nan ehretiquinone (2) ak ehretiquinone C. (4). Modifikasyon an tankou idwoksilasyon gwoup C-11/methyl la tankou nan ehretiquinone B (3) te lakòz pèt aktivite a. Anplis de sa, yon konparezon nan ehretiquinone (2) ak ehretiquinone C (4) ak pi bon aktivite pase sa yo ki nan allomicrophyllone (1) ak ehretiquinone D (5) te montre ke prezans nan gwoup la ekzomethylene nan C-9 'te jwe yon bagay enpòtan. wòl nan aktivite anti-aje pou molekil sa yo. Ehretiquinone C(4) te montre pi bon aktivite anti-aje pase sa yo ki nan resveratrol paske valè a lavi vle di nan 4 nan 1 uMis te konparab ak resveratrol nan 10 uM ki te montre menm valè a.cistanche tubulosa dosage redditSe poutèt sa, ehretiquinone C (4) ka konsidere kòm yon konpoze plon pwomèt, ak mekanis anti-aje li yo nan aksyon yo ta dwe plis entans etidye. Anplis de sa, rezilta sa yo bay enfòmasyon enpòtan estriktirèl pou konsepsyon ak sentèz nouvo dwòg anti-aje. Etid sa a pral fè yon kontribisyon nan prevansyon ak tretman maladi ki gen rapò ak laj. Rezilta yo tou sijere ke O.bracteatum rich ak engredyan anti-aje ka itilize kòm medikaman oswa kòm yon sipleman manje.
4. Materyèl ak Metòd
4.1.Jeneral
Yo te itilize yon polarimèt dijital JASCO P{{0}} pou mezi wotasyon optik. Preparasyon segondè-pèfòmans likid chromatography (HPLC) ak yon sistèm ekipe ak ELITE P-230 ponp ak yon detektè UV te itilize. Gwo rezolisyon spectre mas (HR-ESI-TOF-MS) yo te jwenn ak yon Agilent Technologies 6224A mas egzat TOF LC/MS sistèm. Yo te obsève spectre NMR ak espektromèt Bruker AVII-500 ak chanjman chimik NMR inδ（ppm) yo te fè referans ak pik sòlvan bc 77.0 ak 6H7.26 pou CDCl. Kwomatografi kolòn te fèt lè l sèvi avèk jèl silica (200-300 may, Yantai Chemical Industry Research Institute, Yantai, Lachin) oswa ranvèse faz C18 (Octadecylsilyl, ODS) jèl silica (Cosmosil 75C{18-OPN, Nacalai Tesque, Kyoto, Japon).
4.2. Materyèl Plant
Materyèl plant la te achte nan Mansehra, Khyber Pakhtunkhwa, Pakistan, epi idantifye kòm Onosma bracteatum Wall pa Dr Zafar Ulah Zafar, Pwofesè Asosye, Enstiti pou Biyoloji Pi ak Aplike, Bahauddin Zakariya University, Multan, Pakistan. Te echantiyon an bon (20170220) nan plant la depoze nan Enstiti a nan Materia Medica, Zhejiang University.
4.3. Ekstraksyon1 ak Izolasyon1
Materyèl plant sèk (1.5 kg) te tè an poud ak ekstrè ak metanol (CH3OH) pou 3 jou ansanm ak souke kontinyèl nan tanperati chanm. Ekstrè brit yo te jwenn (12 0 g) te divize ant etilacetat (EtOAc) ak dlo (H,O). Yo te chromatographed echantiyon kouch etilasetat aktif la (30 g) sou yon kolòn louvri jèl silica. epi elite ak n-hexane/CH,Cl(100:0,80:20, 50:50,0:100) ak CH,Cl/CH3OH (98:2,95: 5,90:10 ak 0:100).Sis fraksyon yo te jwenn. Fraction4 (8g) ki te eliye ak CH,Cl,/CH3OH (95:5, 90:10) te plis trete pa kolòn ODSopen. CH3OH/H,O(40:60,50:50,55:45,60:40,70:30,90:10 ak 100:0) te itilize kòm sòlvan. Nan sèt fraksyon yo (Fr.{{46} }Fr.7) jwenn, Fr.2-Fr.4, yo te separe pi lwen jan sa a:
Fr.4 (500 mg) te separe pa kolòn louvri jèl silica ak eluye ak CH2Cl2/CH3OH (100:0, 99:1,98:2,97:3,95:5). ,90:10 ak 0:100).Nèf echantiyon (Fr.4-1-Fr.4-9) yo te jwenn. Sample Fr.4-3 te pirifye plis pa HPLC【C30- UG-5（φ10× 250 mm, Nomura Chemical）, faz mobil∶ asetonitrile (CH3CN)/H2O (40:60), to koule: 3 mL/min, ak detektè: 210nm] ak pwodui konpoze (1) (65 mg, tR =21.2 min).
Fr.3(113 mg) te separe lè l sèvi avèk ODS kolòn louvri ak eluye ak CH;OH/H2O (40:60, 45:55,50:50,55:45,60:40,80: 20 ak 100:0). Yo te jwenn dis fraksyon (Fr.3-1-Fr.3-10), epi HPLC【C30-UG{ te pirifye Fr.3-7. {21}}（φ10×250 mm, Nomura Chimik), faz mobil∶metanòl (CH3OH)/HO (68:32), to koule: 3 mL/min, ak detektè: 210nm] ak pwodui konpoze (2) (20) mg, IR =20.3 min).
Fr.2(450 mg) te sibi kolòn louvri jèl silica epi elite ak CH2Cl2:CH3OH (100:0, 99:1,98: 2,97:3,95:5,90:1{{105}},0:100).Nèf fraksyon (Fr.2-1-Fr.{{20}}) yo te jwenn, epi Fr.{2-4(2{0 mg) yo te sibi ODS chromatografi kolòn louvri ak CH3OH/H2O(30:70, 32:68,35:65,40:6{0 ak 100∶O）, ak senkyèm fraksyon （ 6.5 mg）te pirifye pa HPLC 【C30-UG{-5（φ10×250 mm, Nomura Chimik), faz mobil: acetonitrile (CH3CN)/H,O (35:65), to koule: 3 mL/min, ak detektè: 210 nm] bay konpoze (3) (3.5 mg, t=31.0). Fr.2-5(70 mg) te separe pa ODS kolòn louvri lè l sèvi avèk CH3OH/H2O (25:75,27:73,30:70, 32:68,34:66,36:64,40:60 ak 100:0) epi setyèm fraksyon （11 mg） te pirifye pa HPLC 【C30-UG{-5（φ10×250 mm, Nomura Chimik), faz mobil∶acetonitrile (CH,CN)/HO (32:68), to koule:3 mL/min, ak detektè: 210 nm] bay konpoze (4)(2.1 mg, tg=43.3).Fr.2-8(75 mg). )te separe pa kolòn ODS louvri lè l sèvi avèk CH3OH/H2O (20:80, 22:78.24:76.25:75.26:74,30:Z0.35:65.40:60 ak 100:0) epi setyèm fraksyon (10 mg) te pirifye. pa HPLC 【C30-UG{-5 （φ10 × 250 mm, Nomura Chimik), faz mobil∶ asetonitrile (CH3CN) / H2O (30:70), to koule: 3 mL / min, ak detektè : 210 nml pou vield konpoze (5)(4.3 mg, tn=22.3). Allomicrophyllone (1). Jòn poud; [ ]6 plis 0.02 (c 0.57, CHCl3); High-rezolisyon ESI-TOF-MS m/z 389.1359, kalkile pou C2H22O5Na （M plis Na） plis 389.1359;'H RMN （500 MHz, CDC13μ{{≤14μm） }}.83 （1H,dI=10.5 Hz,H{-5^),6.61(1H,d,J{=8.6 Hz,H{-6), 6.56(1H,d, J=2.8Hz,H{-3),6.51(1H, dd, J=2.8, 8.6Hz,H{-5),6.51 (1H,d, J=10.5 Hz, H{-6'),5.76(1H, d,J=15.9 Hz,H{-8'),5.67 (1H, d, J=15.9 Hz, H{-7),5.65(1H,d,J{=7.1Hz,H-8),3.77(1H, d,J=7.1Hz,H-7),2.73(1H,d, J=19.2Hz,Hb{-10),2.50 (1H,d,J{ {206}}.2 Hz, Ha-10), 1.69 (3H,s, H-11), 1.22 (6H,s, H{-10' & H-11 ');13CNMR(125 MHz,CDCl3):6c=195.8(C-1'),193.1(C-4'),150.0(C-4), 145.0(C-1),143.3(C-8'),139.4(C-5'),138.6(C-6'),131.8(C{{245} }), 127.7(C-2), 122.5(C-8),122.0(C-7'),117.6(C-6),114.9(C{{260 }}),114.4(C-3),80.7(C-3'),71.0(C-9),54.9(C-2'),39.1(C-2'), {275}}), 36.2(C-10),29.8(C-10'),29.8(C-11'),22.6(C-11).Estrikti a re te idantifye nan konparezon MS, 'H NMR ak 13C NMR spectre kòm byen ke wotasyon espesifik ak literati [17,18]. Ehretiquinone (2). Poud wouj; [] 16 plis 1.01 (c 0.12, CH3OH); segondè-rezolisyon ESI-TOF-MS m/z 371.1254, kalkile pou C2.H20OANa （M plis Na） plis 371.1252;lH NMR（500MHz, CDCl3）∶δμ{=6.83 (1H,{{d,) 312}}.5Hz,H-5'),6.62(1H,d, J=8.6Hz,H-6),6.58(1H,d,J=2 .2 Hz,H-3),6.53(1H,m,H-5), 6.52(1H,d, J=10.5 Hz,H-6') ,6.25(1H,d,J=16.0Hz,H-8),5.65(1H,d,J=6.2Hz,H-8),5.50(1H ,d, J=16.0Hz,H{-7),5.04(1H,s,Hb-10),4.97(1H,s,Ha{-10'),3.83 (1H,d, J=6.2Hz,H-7),2.78(1H,d, I=19.1Hz,Hb{-10),2.52(1H,d ,J=19.1 Hz,Ha{-10),1.73(3H,s,H-11'),1.70(3H,s,H{-11);13CNMR ( 125MHz,CDCl):6c=195.4(C-1),193.2(C-4),150.0(C{-4),145.1(C{-1 ),140.8 (C{-9), 139.2 (C{-5), 138.8 (C{-6'), 137.5 (C{-8'), 131.9 (C{{418 }}), 127.7 (C{-2), 124.1 (C{-7'), 122.7 (C{-8), 119.3 (C{-10'), 117.6 (C{-8) {433}}),114.9 (C{-5),114.4(C{-3),80.7(C{-3'),55.3(C{-2'),39.4( C-7),36.3(C-10),22.7(C{-11),18.3(C{-11).Estrikti a te idantifye atravè konparezon. nan MS,'H NMR ak 13C NMR spectre osi byen ke wotasyon espesifik ak literati [19].
Ehretiquinone B (3).Wouj poud; [ |6 plis 0.99(c 0.31, CH3OH); segondè-rezolisyon ESI-TOF-MS m/z 387.1208, kalkile pou C22H20OsNa (M plis Na) plis 387.1203; Done pou 1H NMR ak 13C NMR yo dekri nan Tablo 1 ak 2 respektivman.
Ehretiquinone C (4). poud wouj; [ ] 16 plis 0.37 (c 0.12, CH,OH); segondè rezolisyon ESI-TOF-MS m/z 387.1174, kalkile pou C2H20O; Na (M plis Na) plis 387.1174; Done pou 1H NMR ak 13C NMR yo dekri nan Tablo 1 ak 2 respektivman.
Ehretiquinone D (5). Jòn poud; [ l5 plis 0.51(c 0.41, CHCl3); segondè rezolisyon ESI-TOF-MS m/z 405.1300, kalkile pou C2, H, O, Na (M plis Na) plis 405.1300; Done pou HNMR ak 13CNMR yo dekri nan Tablo 1 ak 2 respektivman.
4.4. Viv AsSay/
Metòd bioassay yo itilize pou etid anti-aje yo te deja dekri [4]. Souch ledven K6001 te kiltive sou yon mwayen YPGalactose oswa YPGlucose. Yo te prepare mwayen YPGalactose ak 3 pousan galaktoz, 2 pousan hipolypepton ak 1 pousan ekstrè ledven pandan y ap mwayen YPGlucose, ki te genyen 2 pousan glikoz olye pou yo galaktoz.cistanche แอ ม เว ย์Pou prepare plak agar, yo te ajoute 2 pousan agar nan mwayen an. Pou evalye echantiyon yo atravè bioassay, souch ledven K6001 la te vaksinen ak enkube pou 24 èdtan nan medyòm galaktoz peptone ledven an ansanm ak souke. Apre 24 èdtan, yo te santrifuje mwayen ki gen souch ledven an. Granules ledven ki te lakòz yo te lave ak solisyon tanpon fosfat (PBS) twa fwa epi dilye. Apre dilution, selil yo te kalkile ak yon emocytometer, ak anviwon 4000 selil yo te vaksinen sou plak agar ki gen echantiyon ak divès kalite konsantrasyon. Lè sa a, plak yo te mete nan yon enkibatè a 28 degre pou 2 jou. Selil ledven yo nan plak agar yo te obsève anba yon mikwoskòp apre 48 èdtan. Yo te chwazi yon total de 40 mikrokoloni nan chak plak owaza, epi kantite selil pitit fi yo te konte ak analize.
4.5. Analiz estatistik
Diferans enpòtan ant gwoup yo te detèmine pa yon sèl-fason ANOVA ak tès konparezon miltip Dunnett la. GraphPad Prism 5. Yo te itilize lojisyèl 0. Ap valè de<0.05 was="" considered="" statistically="">
5. Konklizyon
Twa nouvo ak de li te ye benzoquinones yo te izole ak karakterize nan O. bracteatum anba gidans la nan K6001 ledven repwodiksyon an vi. Estrikti nouvo benzokinon yo (3-5) te elisid pa analiz espektroskopik, ak sa yo konnen yo (1-2) yo te idantifye lè yo konpare done yo espektroskopik ak sa yo ki nan literati a. Tout benzoquinones izole yo te evalye pou aktivite kont moun ki aje pa ledven repwodiksyon lavi vi e 1,2,4 ak 5exhibited siyifikatif aktivite anti-aje.konbyen cistanche pou pranEhretiquinone C (4) te montre aktivite ki pi pwomèt anti-aje epi li ka konsa konsidere kòm yon konpoze plon potansyèl. Mekanis anti-aje li yo ta dwe plis etidye.
Materyèl siplemantè:Spectre 1D ak 2D NMR yo disponib sou entènèt nan http://www.mdpi.com/1420-3049/24/7/1428/s1.
Kontribisyon otè:UF te fè etid chimik la epi li te ekri maniskri a. YP te fè tès repwodiksyon lavi yo. DDpatisipe nan idantifikasyon konpoze yo. JQ te fèt ak sipèvize etid sa a epi revize maniskri a.
Finansman:Travay sa a te sipòte finansyèman pa Pwogram nasyonal kle R&D Lachin [No.2017YFE0117200] ak NSFC [Grant Nos.21661140001,21877098, and 21572204].
Rekonesans:Nou rekonesan anvè Michael Breitenbach nan Salzburg University, Otrich pou kado S. cerevisiae ledven K6001 souch la. UF rekonèt tou sipò pou etid doktora nan Komisyon Edikasyon siperyè Pakistan.
Konfli enterè:Otè yo pa deklare okenn konfli enterè.
Atik sa a soti nan Molecules 2019, 24, 1428; doi:10.3390/molecules24071428 www.mdpi.com/journal/molecules
