Nouvo rekombinasyon viris Maladi Newcastle ki baze sou vaksen ovo kontoune iminite matènèl pou bay pwoteksyon konplè kont defi premye pati 1.

Résumé:

Maladi Newcastle (ND) se youn nan maladi bèt volay ki pi enpòtan ekonomikman. Malgre efò entansif ak pwogram vaksinasyon aktyèl yo, maladi sa a toujou rive atravè lemond, sa ki lakòz mòtalite enpòtan menm nan bann bèt vaksen yo. Sa a te pasyèlman atribiye a yon diferans nan iminite pandan peryòd la apre kouve akòz prezans nan antikò matènèl ki gen enpak negatif sou replikasyon an nan vaksen vivan yo souvan itilize yo. Vaksen in ovo gen plizyè avantaj epi yo prezante yon opòtinite pou adrese pwoblèm sa a.

Aktyèlman anplwaye nan vaksen ovo ND yo se vaksen recombinant èpès kodenn (HVT) ki vektè ki eksprime antijèn viris maladi Newcastle (NDV). Malgre ke li pwouve efikas, vaksen sa yo gen kèk limit, tankou iminojenisite reta ak enkapasite pou administre yon dezyèm vaksen HVT apre kouve. Itilizasyon vaksen ND vivan pou vaksen in-ovo kounye a pa aplikab, paske sa yo asosye ak gwo mòtalite anbriyon. Nan etid sa a, yo te administre vaksen eksperimantal recombinant NDV-vectored ki gen yon sekans antisans nan interleukin avyè 4 (IL4R) ak zo rèl do yo nan ovo nan diferan dòz nan 18-ze komèsyal ki gen yon jou ki gen gwo tit antikò matènèl. Zwazo ki kale yo te defye ak NDV virulan nan 2 semèn ki gen laj. Yo te evalye sivivan apre defi, siviv viris defi, ak repons iminitè umoral yo te evalye nan plizyè moman. Zwazo ki te pran vaksen NDV recombinant (rNDV) te redwi anpil mòtalite apre kouve yo konpare ak vaksen sovaj LaSota.

Tout vaksen rNDV yo te kapab penetre iminite matènèl ak pwovoke yon repons iminitè iminitè bonè bonè. Anplis de sa, vaksen rNDV yo te pwoteje kont maladi klinik yo ak siyifikativman diminye viris koule apre defi NDV virulan byen bonè nan de semèn apre kouve. Tit antikò emoaglutinasyon-anpèchman apre defi nan gwoup vaksen yo te rete konparab ak tit yo anvan defi, sa ki sijere kapasite vaksen yo etidye yo pou anpeche replikasyon efikas nan viris defi a. Siviv apre kouve apre vaksen ak vaksen rNDV-IL4R yo te depann de dòz la, ak yon ogmantasyon nan siviv kòm dòz la diminye. Siviv amelyore sa a ak done depandans dòz yo sijere ke roman atténué nan vaksen ovo ki baze sou rNDV ki ka antre iminite matènèl pou pwovoke yon repons iminitè solid osi bonè ke 14 jou apre kouve, sa ki lakòz pwoteksyon segondè oswa total kont defi virulans, montre. pwomès kòm yon kontribitè nan kontwòl maladi Newcastle.

Anplis vaksen moun, moun ka pran tou manje ak sipleman. Cistanche gen yon varyete sibstans chimik, tankou polisakarid, estewoyid, alkaloid, flavonoid, elatriye sibstans sa yo gen yon wòl enpòtan nan reglemante sistèm iminitè a. Pami yo, polisakarid ka ankouraje aktivasyon ak pwopagasyon selil iminitè yo ak ogmante iminite kò a; estewoyid ka kontwole fonksyon selil iminitè yo ak amelyore repons iminitè a; alkaloid ak flavonoid ka reziste oksidasyon, anti-enflamatwa, anti-bakteri, ak plis amelyore iminite. Se poutèt sa, Cistanche gen yon efè regilasyon iminitè enpòtan epi yo ka itilize kòm manje sante ak medikaman pou amelyore iminite.

Klike sou benefis sante nan cistanche

1. Entwodiksyon

Maladi Newcastle (ND), yon maladi bèt volay devaste ki ka rive nan 100 pousan mòtalite nan zwazo nayif, ki te koze pa tansyon virulan viris maladi Newcastle (NDV) [1]. Espès viris sa a dènyèman chanje non Avian orthoavulavirus 1, se yon manm nan fanmi Paramyxoviridae [2,3]. Viris maladi Newcastle yo gen yon kodaj genòm RNA ki pa gen yon sèl-segman, ki pa segman, ki gen sans negatif pou omwen sis pwoteyin estriktirèl (30—nukleoprotein [NP]—fosfoprotein [P]—pwoteyin matris [M]—pwoteyin fizyon [F]— hemagglutinin-neuraminidase [HN]—ak gwo RNA-polymerase [L]—50) epi ki gen youn nan twa gwosè genòm (15,186, 15,192, ak 15,198 nukleotid) [4,5]. Maladi Newcastle konsidere kòm twazyèm maladi bèt volay ki pi enpòtan atravè lemond [6] epi li rete andemik nan anpil peyi atravè Azi, Lafrik ak Amerik yo [7].

Kontwòl ND gen ladann biosekirite strik pou anpeche entwodiksyon NDV virulan (vNDV) sou fèm bèt volay [8,9] ak bon administrasyon vaksen yo [10]. Sepandan, plizyè epidemi ND ki fèt atravè lemond [11] montre ke vaksen aktyèl yo ak pwosedi vaksinasyon yo pa totalman efikas. Anplis vaksen konvansyonèl yo vivan ak inaktive, plizyè konsèp pou vaksen ND yo te eksplore nan de dènye deseni yo, ki gen ladan vektè, konplèks antijèn-antikò, patikil ki sanble ak viris, ak vaksen reseptè ligand ki tankou toll, pami lòt moun [1, 8,9]. Plizyè vaksen avyè, ki fèt pou ko-eksprime sitokin imunostimulatwa, yo te sijere tou pou amelyore iminite pwoteksyon [12]. Yon lòt apwòch ki te eksplore se itilizasyon vaksen antijenik. Malgre ke tout NDV yo konsidere kòm manm nan yon sèl serotip [3,13], gen varyasyon antijenik ant tansyon [14]. Etid anvan yo ak poul ki gen laj diferan yo te demontre ke poul ki te pran vaksen ak tansyon ki te antigenikman matche ak viris defi a te koule anpil mwens kantite vNDV defi a pase kantite poul ki te pran vaksen ak vaksen eterològ [15-17]. Pou remake, antikò matènèl anti-NDV transfere pasif, byenke pwoteje poul pandan premye semèn yo enpòtan nan lavi yo, entèfere ak devlopman iminite lame apre vaksinasyon an [18].

Vaksen an ovo se yon apwòch ki bay plizyè avantaj—pa egzanp, rediksyon pri enpòtan, normalisation, aplikasyon vaksen an mas, vaksen otomatik nan kouve a, livrezon inifòm vaksen an nan chak ze, epi pa gen estrès pou zwazo yo [19–21]— epi li se yon metòd vaksinasyon atire pou endistri bèt volay [22]. Ant 80 pousan ak 90 pousan nan poul broiler yo grandi nan peyi Etazini an kounye a pran ovo-vaksen de a twa jou anvan kouve [23,24], ak automatisation nan pwosesis la pèmèt pou jiska 70,000 ze. pran vaksen pou chak èdtan [23].

Globalman, metòd administrasyon vaksen sa a ap travay nan 26 sou 30 peyi ki mennen nan pwodiksyon bèt volay nan mond lan [23]. Gen kèk vaksen in-ovo kont ND ki disponib kounye a, men yo tout pwodwi lè l sèvi avèk vektè ki pa NDV. Fowlpox virus (FPV) vaksen ki baze sou vektè ki eksprime pwoteyin NDV F ak HN aplike nan ovo yo te montre pwoteje bèt volay kont yon defi ak vNDV [25,26].

Sepandan, recombinant vaksen FPV-ND yo pa lajman itilize akòz entèferans iminitè nan vaksen FPV anvan oswa ekspoze (FPV se souvan prezan nan anviwònman an) ak mank de optimize pou aplikasyon atravè metòd mas [9]. Vektè ki pi lajman itilize pou ND recombinant nan pwodiksyon vaksen ovo se Meleagrid alphaherpesvirus 1, souvan ke yo rekonèt kòm èpèsvirus kodenn (HVT) oswa yon serotip 3 viris maladi Marek [12,23]. Nan peyi Etazini sèlman, 8.2 milya dòz vaksen recombinant HVT (rHVT)-ND yo te pwodwi an 2018 konpare ak 3.6 milya dòz vaksen ND konvansyonèl yo [27].

Anplis de avantaj ki genyen pou yo itilize nan ovo, vaksen rHVT ki eksprime pwoteyin NDV pwovoke iminite fò ak alontèm apre yon sèl aplikasyon [28]. Anplis de sa, prezans antikò ki soti nan matènèl anti-NDV afekte yo tanporèman [8]. Sepandan, vaksen rHVT-ND yo gen kèk limit, tankou iminite reta, ak yon vaksen HVT anvan parèt refractory nan itilizasyon vaksen rapèl HVT nan menm zwazo yo [9,29]. Vaksen HV yo asosye ak selil yo epi yo oblije estoke ak transpòte nan nitwojèn likid, ki se yon limit sou itilizasyon yo nan anpil peyi.

Pwospektiv pou nouvo vaksen ovo ap grandi [23]. Yo te eksplore diferan vektè pou wout administrasyon an nan ovo, e yo te rapòte rezilta pwomèt ak vaksen adenoviris imen ki pa replike [30] ak alfaviris [31]. Malgre ke pa te gen okenn pwogrè nan itilizasyon komèsyal woutin, yo te fè efò tou pou devlopman nan vaksen ovo ki pa HVT NDV-vectored [32-35]. Anplwaye vaksen ND vivan nan ovo se yon defi. Pandan ke vaksen ND vivan, tankou LaSota, B1, Clone 30, ak Ulster, pou nonmen kèk, bay yon repons iminitè solid epi yo souvan itilize pou vaksinasyon poul nan yon jou, yo asosye ak gwo mòtalite anbriyon lè administre nan 18 jou nan nasyon anbriyon. Yo te rapòte mòtalite jiska 100 pousan lè l sèvi avèk viris ki ba-virulan ak 80 pousan lè l sèvi avèk viris vivan jenetikman atenye apre itilizasyon in-ovo, e pa gen okenn vaksen ND vivan yo itilize kounye a pou metòd sa a nan administrasyon vaksen [36,37] .

Yon nouvo vaksen eksperimantal recombinant NDV (rNDV)-vectored ki gen yon foure interleukin 4 avyè antisans (IL4), yo te rele ZJ1 * l-IL4R, te dènyèman montre yo dwe yon kandida pwomèt nan vaksen ovo apre evalyasyon nan espesifik-patojèn-gratis (SPF). ) ze poul anbriyon (ECE) [38]. Etid sa a te vize pou evalye plis aplikab vaksen NDV-vectored recombinant sa a ak zo rèl do recombinant li (sit klivaj atenue soti nan viris sovaj) ak yon viris recombinant LaSota-IL4R pou vaksen in-ovo nan 18-jou. ze komèsyal ki gen gwo tit antikò matènèl. Vaksen ki disponib nan komès LaSota ak rHVT-ND yo te enkli kòm kontwòl. Anplis de sa, etid sa a te vize evalye efikasite pwoteksyon vaksen yo etidye kont defi bonè ak vNDV. Isit la, kapasite vaksen recombinant sa yo pou simonte iminite matènèl avèk efikasite, menm nan dòz ki ba, epi pwovoke yon repons iminitè fò. Vaksen rNDV eksperimantal yo te demontre 100 pousan pwoteksyon apre defi bonè ak vNDV.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Viris

Zwa virulent/China/ZJ1/2000 (ZJ1, nimewo asansyon GenBank AF431744) NDV, manm sub-genotip VII.1.1 (ansyen VIId), te itilize kòm yon viris defi nan etid sa a. Yon viris recombinant ZJ1 (vèsyon atenue nan ZJ1) ak yon sit klivaj ki ba virulan (ZJ1 * L) ki te deja pwodwi nan laboratwa nou an atravè jenetik ranvèse [39] te itilize kòm yon zo rèl do pou kreye vaksen recombinant ZJ1 * L ak kòm yon vaksen. viris. Souch vaksen ki ba virulan LaSota (LS) te itilize kòm yon kontwòl vaksen ak kòm yon zo rèl do pou jenere yon vaksen recombinant LS-IL4R. Tout viris yo te jwenn nan depo Sidès Poultry Research Laboratory (SEPRL) nan United States National Poultry Research Center (USNPRC), US Department of Agriculture (USDA). Anplis de sa, yo te itilize yon vaksen rHVT-ND ki disponib nan komès (insert jèn fizyon) tou kòm yon kontwòl.

Vaksen eksperimantal recombinant NDV yo itilize nan etid sa a te kreye lè l sèvi avèk jenetik ranvèse, jan sa te dekri deja [38,39]. Yon ti tan, yo te klonaj sekans kodaj avyè IL4 nan zo rèl do ZJ1 * L ak LS nan oryantasyon ranvèse (IL4R) ant jèn P ak M yo, ki te jenere de viris vivan atenue recombinant - sètadi, ZJ1 * L-IL4R ak LS- IL4R (nimewo asansyon GenBank MM680659 ak MM680665, respektivman). Yo te sove viris recombinant yo lè l sèvi avèk modifye vaksin viris Ankara ki eksprime T7 polymerase (MVA/T7), swivan pwotokòl ki te pibliye deja [38-41]. Yo bay yon reprezantasyon chematik nan konstriksyon yo nan Figi Siplemantè S1A. Pou rezon travay sa a, tèm "vaksen DV" yo itilize apre a refere a ZJ1*L, ZJ1*L-IL4R, ak LS-IL4R.

Aksyon k ap travay nan tout NDV yo te pwopaje nan {{0}} nan 11-ze poul anbriyon SPF ki gen yon jou (ECE) [42]. Yo te dilye estòk viral yo itilize pou bay ze nan etid sa a nan bouyon perfusion kè sèvo (BHI) (BD Biosciences, MD, USA), ki gen 200 µg/mL gentamicin, 2{{22} }00 U/mL penisilin, ak 4 µg/mL anfoterisin B, nan twa tit diferan sib, 105.5/0.1 mL, 104.5/0.1 mL, ak 103.5/0.1 mL dòz anbriyon enfektye (EID50), eksepte LS. , ki te dilye nan 105.5/0.1 mL ak 104.5/0.1 mL EID50. Titre aksyon dilye vaksen vivan yo te konfime pa titrasyon tounen nan 9- a 11-SPF ECE ki gen yon jou apre pwosedi estanda, jan yo mansyone pi wo a. Vaksen rHVT-ND te dilye dirèkteman lè l sèvi avèk sikwoz fosfat glutamat albumin diluant pou vaksen rHVT ki dekri nan Sant USDA pou Pwotokòl Tès Biyolojik Veterinè [43].

2.2. Ze

Yo te bay de san swasant-de ze komèsyal (ki pa SPF) ki soti nan twoupo kouch Hy-Line Rockside W-36 (Mansfield, GA, USA) pou eksperyans sa a. Yo te pran vaksen an regilyèman avèk vaksen LaSota. ELISA te teste iminite bann mouton yo regilyèman, e byenke rezilta sa yo pa kapab tradwi dirèkteman nan tit anpèchman hemaglutination (HI), nivo mwayèn antikò anti-NDV nan bann paran yo te trè wo (sa vle di, 15,534 ak yon limit pou pozitif). echantiyon 1159). Sous SPF ECEs (42 ze) se te twoupo SEPRL SPF White Leghorn. Tout ze yo te enkube nan yon tanperati 37.5 ◦C ak 55-60 pousan imidite relatif pou 18 jou.

2.3. Vaksinasyon

Ze komèsyal (n {{{{10}}}}) ak SPF (n=42), nan 18 jou anbriyon (DOE), yo te separe an 14 gwoup ak 21 ze nan chak. gwoup (eksepte gwoup kontwòl BHI ak Hatch, ki te gen 26 ze chak). Sèvi ak 1 mL, 24 G × 1/2 sereng, yo te bay chak ze nan kavite alantoyik ak 0.1 mL vaksen dilye oswa BHI, eksepte pou gwoup kontwòl Hatch la, kote ze yo pa te manipile nan tout. Te gen trèz gwoup ze vaksinen, separe an sèt eksperimantal ak sis gwoup kontwòl. Sèt gwoup eksperimantal yo te jan sa a: ZJ1 * L-IL4R 104.5, ZJ1 * L-IL4R 105.5, LS-IL4R 103.5, LS-IL4R 104.5, LS-IL4R 105.5, ZJ1 * L 104.5, ak ZJ1 * L 104.5, ak chak 10515. dòz respektif EID50 nan inoculum pou chak 0.1 mL jan sa endike nan non gwoup la. Anplis de sa, sis gwoup kontwòl yo te kreye. De gwoup kontwòl ze komèsyal yo te vaksinen jan sa dekri anwo a ak BHI ak rHVT-ND, respektivman. De gwoup kontwòl ze komèsyal yo te inokule jan sa dekri pi wo a ak LS 104.5 ak LS 105.5 EID50 dòz inoculum pou chak 0.1 mL. De gwoup kontwòl ze SPF yo te vaksinen ak ZJ1 * L 103.5 ak ZJ1 * L-IL4R 103.5. Yon reprezantasyon chema nan konsepsyon etid la bay nan Figi Siplemantè S1B, C.

Apre inokulasyon, ze yo te mete andedan Turbofan Hova-Bator Incubators (GQF Manufacturing Company Inc., GA, USA) ki answit yo te mete yo nan izolatè nan yon etablisman nivo 2 biosekirite bèt (ABSL-2). Enkibatè yo te regle ak tèmostat pou kenbe yon tanperati konstan 37.5 ◦C ak imidite relatif ant 55 pousan ak 60 pousan.

2.4. Kouve, echantiyonaj, mòtalite

Apre yo te kouve yo nan 21 DOE, ti poul yo te loje nan izolasyon presyon negatif (ABSL-2) epi yo te bay manje ak dlo ak aksè ad libitum. Yo te sakrifye senk poul ki pa SPF ki soti nan gwoup kontwòl Hatch ak gwoup BHI yo epi yo te senyen imedyatman apre kouve yo pou etabli tit debaz antikò anti-NDV HI matènèl yo. Tout poul yo te peze nan 1, 8, ak 13 jou apre kouve (DPH). Yo te kolekte prelèvman oropharyngeal ak kloakal nan BHI nan chak zwazo nan 2 ak 4 DPH. Siy klinik ak mòtalite yo te anrejistre de fwa chak jou pandan peryòd apre eklozyon an, epi yo te kolekte echantiyon san nan 13 DPH.

2.5. Defi

Douz zwazo nan chak gwoup (eksepte LS 1{{10}}5.5, kote tout zwazo te mouri pa 6 DPH) yo te transfere nan etablisman ABSL-3E nan 13 DPH. Zwazo yo te mete nan izole presyon negatif epi yo te pèmèt yo aklimate pou 24 èdtan anvan defi a. Tout zwazo yo te defye nan 14 DPH ak virulan ZJ1 NDV nan 106 EID50 / 0.1 mL pa wout la oculo-nazal. Zwazo yo te obsève chak jou pou siy klinik ak mòtalite. Yo te kolekte prelèvman oropharyngeal ak kloakal nan chak zwazo nan 2 ak 4 jou apre defi (DPC). Tout zwazo ki te siviv yo te peze ak senyen nan 14 DPC epi yo te euthanized pa dislokasyon nan matris apre anestezi ak 0.2 mL ketamin / xylazine solisyon (66 mg / mL ketamin ak 6.6 mg / mL xylazine) te administre nan miskilè ak yon 25- kalib.

2.6. An tan reyèl RT-PCR

RNA yo te extrait nan tout mwayen prelèvman lè l sèvi avèk MagMAX 96 AI/ND viral RNA izole twous (Ambion, Inc. Austin, TX, USA) ak yon processeur patikil mayetik KingFisher (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) swiv enstriksyon manifakti a. , ak modifikasyon an retire inhibitor ki dekri pa Das et al. [44]. Yo te fè RT-PCR an tan reyèl (rRT-PCR) pou deteksyon NDV ki vize jèn matris la (M) lè l sèvi avèk AgPath-ID yon sèl etap RT-PCR Twous (Ambion) ak ABI 750{{31 }} Sistèm PCR rapid an tan reyèl (Applied Biosystems, Waltham, MA, USA) ki itilize primè ak sonde Wise et al te dekri deja. [45]. Kondisyon tès yo te transkripsyon ranvèse pou 10 min nan 45 ◦C; inisyal denaturasyon pou 10 min nan 95 ◦C; 40 sik denaturasyon pou 10seg a 94 ◦C, rkwit primè pou 30 s a 56 ◦C, ak elongasyon primè pou 10 sec a 72 ◦C. Volim reyaksyon total 25 µL pou chak echantiyon te fèt ak dlo klas molekilè— 2.5 µL; 2X tanpon-12.5 µL; Jadendanfan pi devan-0.25 µL (20pmol/µL); Jadendanfan ranvèse-0.25 µL (20 pmol/µL); sonde-0.50 µL (6pmol/µL); 25X melanj anzim-1.0 µL; ak modèl RNA— 8.0 µL. Pou quantifikasyon viris, yo te etabli yon koub estanda pou chak viris, ak RNA extrait nan menm stock titrasyon viris yo te itilize pou inokulasyon ze yo (pou echantiyon yo prelèvman yo kolekte apre kouve) oswa viris la defi (pou echantiyon yo prelèvman yo kolekte apre yo fin kale). -defi).

Yo rapòte rezilta yo kòm EID50/mL. Kalkile limit deteksyon ki pi ba nan tès yo te ant 101.7 ak 101.9 EID50/mL. Li enpòtan pou sonje ke rRTPCR detekte asid nikleyik viral e ke valè yo estime yo pa nesesèman reprezante viris enfektye yo. Valè EID50/mL yo pa vize pou prezante enfeksyon epi yo itilize pou bay mwayen pou konparezon relatif gaye viral ant gwoup yo. Malgre itilizasyon pwotokòl ekstraksyon asid nikleyik pou retire inibitè, gwo volim modèl RNA yo ka afekte kalkil ki soti nan koub estanda a. Nan nòt, yo te itilize menm kantite modèl RNA nan tout reyaksyon, e potansyèl inhibiteurs rezidi yo ta afekte tout rezilta egalman.

2.7. HI Essay

Yo te itilize tès anpèchman hemaglutination (HI) pou evalye prezans ak tit antikò nan echantiyon serom yo kolekte pandan tout eksperyans la. Apre pwosedi estanda [46], yo te itilize viris la kòm kolòn vètebral pou chak vaksen kòm yon antijèn pou chak gwoup respektif sera (ZJ1*L pou tout gwoup ZJ1 ak LS pou tout gwoup LS). Pou echantiyon serik yo kolekte apre defi, yo te itilize viris ZJ1 virulan kòm yon antijèn nan tès HI la. Tit yo te kalkile kòm resipwòk dènye dilusyon serik HI-pozitif la, epi echantiyon ki gen tit HI nan log2 3 ak anba yo te konsidere kòm negatif.

2.8. Analiz estatistik

Yo te itilize lojisyèl Prism v.7.03 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA) pou analize done yo, epi yo te idantifye outliers avèk tès ROUT la. Yo te fè tès nòmal D'Agostino-Pearson pou estime si valè yo nan chak gwoup soti nan yon distribisyon Gaussian. Dapre distribisyon nòmal la, yo te itilize tès ki pa parametrik Kruskal– Wallis ak apre tès Dunn pou plizyè konparezon ant gwoup yo. Pou rezon estatistik, tout echantiyon prelèvman ki pa detekte viris yo te bay yon valè nimerik 1 log anba limit deteksyon pou chak viris. Yo te analize koub siviv yo lè l sèvi avèk tès Log-rank (Mantel-Cox). Siyifikasyon estatistik te fikse nan yon p-valè <0.05.

3. Rezilta yo

3.1. Hatchability, Post-Hatch Survie, ak pwa kò

Siviv apre kouve pou tout gwoup ki kale nan ze komèsyal yo montre kòm koub siviv nan Figi 1 (separe nan Figi 1A, ak B pou klè ak pou evite konjesyon nan grafik yo). Yon graf konbine disponib nan Figi Siplemantè S2. Gwoup kontwòl Hatch la (ki pa inokule) te enkli nan konsepsyon an pou asire ke pa te gen okenn hatchability nòmal oswa mòtalite apre kouve ki pa te gen rapò ak inokulasyon nan ze yo.

Kòm espere, trè ba (rHVT-ND) a pa gen okenn (Hatch ak BHI) mòtalite apre kale te obsève nan twa nan gwoup kontwòl yo. Kontrèman, gwoup kontwòl LS yo te gen 57.1 pousan ak 0 pousan siviv lè yo te itilize 104.5 ak 105.5 dòz yo, respektivman, ki te deja rapòte pou vaksen konvansyonèl ND vivan. De ze pa t kale nan gwoup LS-IL4R 105.5 ak yon ze pa t kale nan gwoup LS 104.5. Yo te obsève mòtalite varyab nan lòt gwoup yo depann sou vaksen an ak dòz vaksen an. ZJ1 * L-IL4R 104.5 ak 105.5 gwoup yo te gen 90.5 pousan ak 71.4 pousan siviv, respektivman, ak siviv ki anrejistre nan ZJ1 * L 104.5 ak 105.5 gwoup yo te 80.9 pousan ak 76.2 pousan, respektivman, men diferans yo te 1A. pa estatistik enpòtan. Siviv nan gwoup LS-IL4R 103.5 la te 95.2 pousan. Pousantaj siviv yo obsève nan gwoup LS-IL4R 104.5 ak 105.5 yo te 85.7 pousan ak 66.7 pousan, respektivman (Figi 1B).

Pa te gen okenn diferans enpòtan nan siviv ant gwoup vaksen eksperimantal ZJ1 * L, ZJ1 * L-IL4R, ak LS-IL4R ak gwoup kontwòl Hatch, BHI, ak rHVT-ND, men pousantaj siviv nan gwoup kontwòl sa yo te nimerikman pi wo. , ak yon korelasyon negatif ant dòz vaksen an ak siviv apre kouve yo obsève (siviv ogmante kòm dòz vaksen an diminye). Gwoup kontwòl LS 1{{10}}5.5 la te gen diferans enpòtan nan siviv konpare ak gwoup eksperimantal yo (valè p ant 0.0001 ak 0.02). Gwoup kontwòl LS 104.5 la, byenke estatistik pa diferan, te gen to siviv anpil pi ba konpare ak gwoup eksperimantal yo ak menm dòz la. De gwoup kontwòl LS yo te gen diferans enpòtan nan siviv konpare ak gwoup kontwòl Hatch, BHI, ak rHVT-ND (valè p ant 0.0001 ak 0.04). Siy klinik yo pa te obsève nan okenn nan gwoup yo apre kale. Nan gwoup kote mòtalite apre eklozyon te prezan, zwazo yo te jwenn mouri sou chèk chak jou.

Tout zwazo yo te peze nan jou 1, 8, ak jou 13 apre kouve (Tablo 1). Nan 1 DPH, pwa kò an mwayèn pou chak zwazo nan pifò gwoup yo te ant 38.5 ak 42.6 gram (g). Te gen diferans enpòtan pwa kò sèlman ant rHVT-ND ak ZJ1*L-IL4R 104.5 gwoup ki soti nan yon bò ak ZJ1*L 104.5 ak kontwòl LS 1{{4{{42} }}}4.5 nan yon lòt (zwazo ki nan de premye gwoup yo te peze plis pase zwazo ki nan gwoup kontwòl la) (valè p ant 0.{0001 ak 0.017, respektivman). Nan 8 DPH, de gwoup ZJ1 * L yo ak LS-IL4R 104.5, gwoup LS-IL4R 105.5, ak gwoup LS kontwòl (pwa mwayèn 50-63 g) te gen pwa kò siyifikativman pi ba konpare ak zwazo ki soti nan Hatch la, BHI, ak gwoup kontwòl rHVT-ND (pwa mwayèn 77-82 g) (valè p ant 0.0001 ak 0.03). Menm gwoup yo ki te siyifikativman diferan de kontwòl yo nan 8 DPH (eksepte LS-IL4R 104.5) te gen siyifikativman pi ba pwa kò pase gwoup kontwòl Hatch, BHI, ak rHVT-ND nan 13 DPH tou (valè p ant 0.0001 ak 0.01). Zwazo ki soti nan gwoup kontwòl SPF inokule yo pa te enkli nan konparezon sa a, kòm ze SPF (ak zwazo yo kale nan yo) yo tradisyonèlman pi piti ak pi lejè pase ze komèsyal yo.

Figi 1. Siviv poul apre kouve apre inokulasyon ze komèsyal nan 18 jou nan nasyon anbriyon ak vaksen eksperimantal nan ovo NDV. Hy-Line Rockside W-36 ze yo te vaksinen ak viris recombinant ak LaSota. Twa gwoup kontwòl yo te vaksinen ak vaksen BHI oswa rHVT-ND, oswa yo pa inokule (gwoup kontwòl Hatch). Yo te kontwole zwazo yo pandan 13 jou apre kouve yo. Koub yo siviv yo prezante nan de figi: (A) gwoup kontwòl ak gwoup ZJ1 * L ak (B) gwoup kontwòl ak gwoup LS-IL4R. Diferan lèt sipèskripsyon endike diferans estatistik enpòtan ant gwoup yo (valè p < 0.05). Abreviyasyon gwoup yo: HATCH—ze pa vaksinen; BHI—ze yo bay vaksen ak BHI; rHVT-ND—ze yo bay vaksen recombinant HVT; ZJ1*L—ze yo te vaksinen ak viris recombinant ZJ1*L ki gen kote klivaj yo te modifye pou yo ka ba virulans; ZJ1*L-IL4R—ze yo te vaksinen ak ZJ1*L ki ba rekombinan ak jèn interleukin-4 ki mete nan oryantasyon ranvèse; LS—ze yo vaksinen ak souch LaSota; LS-IL4R—ze yo te vaksinen ak viris LaSota recombinant ak jèn interleukin-4 ki mete nan oryantasyon ranvèse. Dòz viris ze yo te resevwa nan chak gwoup reprezante kòm yon nimewo apre non gwoup la nan EID50/pa ze.

Tablo 1. Pwa mwayen (ak devyasyon estanda) poul nan 1, 8, ak 13 jou apre kouve apre inokulasyon ze komèsyal nan 18 jou nan nasyon anbriyon ak eksperimantal nan vaksen ovo ak nan 14 jou apre defi ak maladi Newcastle virulan viris.

3.2. Koule viris vaksen yo apre vaksinasyon an, jan rRT-PCR montre sa

Nan 2 DPH, pa te gen okenn diferans enpòtan nan gaye viral nan mitan gwoup vaksen yo. (Figi 2A). Menm jan an tou, nan 4 DPH, diferans ki genyen ant gwoup yo pa t 'estatistik enpòtan. (Figi 2B). Yo pa detekte okenn gaye viral nan okenn nan zwazo kontwòl Hatch ak BHI yo.

Figi 2. Vaksen an vle di poul te kale nan ze komèsyal yo te vaksinen nan 18 jou peyi anbriyon ak vaksen eksperimantal nan ovo. Chak pwen done reprezante yon zwazo ak tit NDV yo detekte nan prelèvman orofarinj (OP) ak kloakal (CL) nan diferan jou apre eklozyon (DPH). Koule yo prezante separeman pou 2 jou apre kale (A) ak 4 jou apre kale (B). Ba yo reprezante devyasyon estanda nan mwayen an. Tout prelèvman ki pa te detekte viris la te bay yon valè nimerik 1 log anba limit deteksyon pou chak viris respektif yo. Limit la nan deteksyon nan rRT-PCR prezante kòm yon liy pwentiye orizontal (se limit ki pi ba a itilize). Abreviyasyon gwoup yo: HATCH—ze pa vaksinen; BHI—ze yo bay vaksen ak BHI; rHVT-ND—ze yo bay vaksen recombinant HVT; ZJ1*L—ze yo te vaksinen ak viris recombinant ZJ1*L ki gen kote klivaj yo te modifye pou yo ka ba virulans; ZJ1*L-IL4R—ze yo te vaksinen ak ZJ1*L ki ba rekombinan ak jèn interleukin-4 ki mete nan oryantasyon ranvèse; LS—ze yo vaksinen ak souch LaSota; LS-IL4R—ze yo te vaksinen ak viris LaSota recombinant ak jèn interleukin-4 yo mete nan oryantasyon ranvèse. Dòz viris ze yo te resevwa nan chak gwoup reprezante kòm yon nimewo apre non gwoup la nan EID50/pa ze.

3.3. Repons Iminitè Umoral Post-Hatch

Analiz echantiyon serik yo kolekte nan 13 DPH (ba ki ranpli ak bann dyagonal) pa tès HI (detekte antikò emoaglutinasyon nan NDV) montre nan Figi 3. Pou etabli tit la nan antikò HI matènèl anti-NDV transfere pasif nan ze komèsyal yo, dis. poul te senyen imedyatman apre yo te kale (0 DPH). Titres HI yo nan kouve yo varye ant log2 5 ak log2 8, ak yon mwayèn log2 7.17 (Figi 3, liy wouj pwentiye orizontal). Antikò yo nan 13 DPH nan gwoup Hatch, BHI, ak rHVT-ND (mwayèn log2 4.7) se antikò matènèl rezidyèl yo, paske gwoup sa yo pa te pran vaksen oswa vaksen rHVT-ND, ki fè sa. pa pwovoke antikò HI pou NDV. Titer antikò nan gwoup ZJ1 * L, ZJ1 * L-IL4R ak LS 104.5 yo te siyifikativman pi wo konpare ak gwoup kontwòl Hatch, BHI, ak rHVT-ND. Pa gen diferans enpòtan ant diferan gwoup dòz vaksen yo ak menm zo rèl do a te obsève. Gwoup LS-IL4R yo te gen pi ba tit HI apre vaksinasyon an konpare ak gwoup ZJ1 * L-IL4R ak ZJ1 * L, byenke diferans sa yo pa t estatistik enpòtan. Nòt, byenke nimerikman yon ti kras pi wo, tit yo HI apre vaksinasyon nan zwazo yo nan tout gwoup LS-IL4R yo pa t 'siyifikativman diferan de tit yo mezire nan zwazo kontwòl ki pa vaksinen yo.

Figi 3. Titer antikò HI anvan ak apre defi (ak devyasyon estanda) soti nan poul kale nan ze komèsyal yo vaksinen nan 18 jou nan nasyon anbriyon ak vaksen eksperimantal nan ovo ak defi bonè ak viris maladi Newcastle virulan nan 14 jou apre kouve. Ba dyagonal ki ranpli ak bann yo reprezante tit yo anvan defi nan 13 jou apre kouve. Ba ki ranpli solid yo reprezante tit apre defi yo nan 14 jou apre defi. Diferans estatistik enpòtan ant diferan gwoup yo prezante ak lèt ​​miniskil anlè chak gwoup (valè p<0.05). The level of maternal antibodies on the day of hatch (0 DPH) is presented as a horizontal dotted line. Group abbreviations: HATCH—eggs not inoculated; BHI—eggs inoculated with BHI; rHVT-ND—eggs inoculated with recombinant HVT vaccine; ZJ1*L—eggs inoculated with the recombinant ZJ1*L virus whose cleavage site was modified to be of low virulence; ZJ1*L-IL4R—eggs inoculated with the recombinant low virulent ZJ1*L with the interleukin-4 gene inserted in reverse orientation; LS—eggs inoculated with the LaSota strain; LS-IL4R—eggs inoculated with the recombinant LaSota virus with the interleukin-4 gene inserted in reverse orientation. The virus dose that the eggs in each group received is represented as a number after the group name in EID50/per egg.

3.4. Siy klinik ak siviv apre defi bonè ak CDV

Nan gwoup kontwòl yo, premye siy klinik yo te obsève yo te nan gwoup Hatch ak BHI nan 3 DPC. Twa zwazo nan gwoup Hatch la ak yon zwazo nan gwoup BHI te fatige pou respire. Nan 4 DPC, plim volan ak tranbleman tèt yo te wè nan gwoup BHI ak kale, ak nan 5 DPC nan gwoup rHVT-ND; an dènye gwoup la, ataksya ak torticollis grav yo te anrejistre tou nan de zwazo. Zwazo yo nan gwoup kontwòl Hatch la te prezante letaji nan 5 DPC, ak de zwazo nan gwoup BHI te montre paralizi. Yo te obsève letaji ak paralizi nan gwoup rHVT-ND nan 6 ak 7 DPC. Yo te obsève opistotono, torticollis, ak respirasyon difisil nan gwoup kontwòl Hatch ak BHI ki te kòmanse nan 9 DPC. Nan gwoup rHVT-ND, torticollis te obsève osi bonè ke 5 DPC, travay pou respire ak ataksya te kòmanse nan 6 DPC, ak opisthotonos te kòmanse nan 13 DPC. Pa 14 DPC, tout zwazo eksepte de Hatch, yon sèl BHI, ak de rHVT-ND zwazo (83.3 pousan, 91.6 pousan, ak 83.3 pousan morbidite, respektivman) swa te mouri oswa devlope siy klinik prensipalman newolojik tankou ataksya, opistotonus, torticolis, tranbleman. , ak paralize. Zwazo ki te montre siy klinik grav, ki te sispann manje oswa bwè, oswa ki te rete kouche, yo te elimine epi rapòte kòm mouri nan jou kap vini an pou kalkil tan siviv. Pa gen okenn siy klinik yo te obsève nan nenpòt nan gwoup ZJ1 * L ak ZJ1 * L-IL4R yo. Yo te obsève ti siy klinik opistotono oswa torticollis nan yon sèl zwazo (8.4 pousan morbidite) nan chak gwoup LS-IL4R ak gwoup LS 104.5 nan 14 DPC.

Siviv apre defi ak virulan ZJ1 NDV la montre kòm koub siviv nan Figi 4. Pandan tout gwoup vaksen yo te resevwa vaksen recombinant ak LS te montre 100 pousan siviv, zwazo yo nan gwoup Hatch, BHI, ak rHVT-ND te gen 58.3 pousan, 58.3 pousan, ak 66.6 pousan siviv, respektivman. Siviv apre defi nan gwoup kontwòl Hatch ak BHI yo te siyifikativman pi ba konpare ak gwoup vaksen eksperimantal yo. Men, byenke pwa kò zwazo ki nan gwoup inokulasyon yo te varye apre kouve yo konpare ak kontwòl Hatch, BHI, ak rHVT-ND, tout zwazo ki te pran vaksen rNDV yo (282-328 g) te depase pwa kò moun ki pa te pran vaksen yo. kontwole zwazo apre defi (255–266 g) (Tablo 1). Sepandan, pa gen okenn diferans enpòtan nan pwa kò yo te obsève ant nenpòt nan gwoup yo etidye.

Figi 4. Siviv poul apre inokulasyon ze komèsyal nan 18 jou nan nasyon anbriyon ak eksperimantal nan vaksen ovo ak defi bonè ak virulan viris maladi Newcastle nan 14 jou apre-ekclosyon. Zwazo yo te kontwole pou 14 jou apre defi. Diferan lèt sipèskripsyon endike diferans estatistik enpòtan ant gwoup yo (valè p < 0.05). Abreviyasyon gwoup yo: HATCH—ze pa vaksinen; BHI—ze yo bay vaksen ak BHI; rHVT-ND—ze yo bay vaksen recombinant HVT; ZJ1*L—ze yo te vaksinen ak viris recombinant ZJ1*L ki gen kote klivaj yo te modifye pou yo ka ba virulans; ZJ1*L-IL4R—ze yo te vaksinen ak ZJ1*L ki ba rekombinan ak jèn interleukin-4 ki mete nan oryantasyon ranvèse; LS—ze yo vaksinen ak souch LaSota; LS-IL4R—ze yo te vaksinen ak viris LaSota recombinant ak jèn interleukin-4 ki mete nan oryantasyon ranvèse. Dòz viris ze yo te resevwa nan chak gwoup reprezante kòm yon nimewo apre non gwoup la nan EID50/pa ze.

3.5. Koule apre defi jan rRT-PCR demontre

Nan 2 DPC, zwazo ki nan gwoup kontwòl Hatch, BHI, ak rHVT-ND lage gwo tit viral (1{{20}}5.3-5.7 EID50/mL) atravè wout oral la, pandan tout gwoup vaksen yo. te gen pi ba pase 104 EID50 / mL vle di tit koule (Figi 5A). Rezilta yo pou gaye viral nan kloak la te pi ba pase limit la deteksyon nan tès la nan tout gwoup yo. Nan 2 DPC, zwazo ki nan tout gwoup ZJ1 * L ak ZJ1 * L-IL4R ak sa yo ki nan gwoup LS-IL4R 105.5 yo te detekte siyifikativman mwens RNA viral atravè wout oral la konpare ak gwoup kontwòl Hatch, BHI, ak rHVT-ND. (valè p varye ant 0.001 ak 0.02). Nan 4 DPC, koule nan wout oral la nan gwoup Hatch, BHI, ak rHVT-ND yo te wo (106.2-6.9 EID50 / mL) (Figi 5B).

Kontrèman, yo te obsève mwens koule nan tout gwoup vaksen yo nan 4 DPC konpare ak 2 DPC, ak pi gwo tit vle di 102.9 EID50/mL nan gwoup ZJ1*L 104.5 la ak tit ki pi ba nan 101.5 EID50/mL nan ZJ1*. l-IL4R 104.5 gwoup (viral RNA pa te detekte nan kèk zwazo). Tout gwoup vaksen rNDV eksperimantal koule anpil mwens viris atravè wout oral la konpare ak gwoup kontwòl Hatch, BHI, ak rHVT-ND (valè p soti nan<0.0001 to 0.03). No significant differences in oral shedding were observed among the experimental rNDV vaccine groups. The birds in the rNDV vaccine groups shed significantly less virus through the cloacal route compared with the Hatch, BHI, and rHVT-ND control groups (p values from <0.0001 to 0.007). The differences in the titers were not significant among the experimental rNDV vaccine groups and the LS control group.

Figi 5. Mwayèn apre defi viris koule soti nan poul apre inokulasyon nan ze komèsyal nan 18 jou nan nasyon anbriyon ak eksperimantal nan vaksen ovo ak defi bonè ak virulan viris maladi Newcastle nan 14 jou apre-kouve. Chak pwen done reprezante tit NDV yo detekte nan prelèvman oropharyngeal (OP) ak kloakal (CL) nan diferan jou apre defi (DPC). Koule yo prezante separeman pou 2 jou apre defi (A) ak 4 jou apre defi (B). Ba yo reprezante devyasyon estanda nan mwayen an. Tout prelèvman kote viris la pa te detekte yo te bay yon valè nimerik 1 log anba limit deteksyon an. Limit deteksyon rRT-PCR prezante kòm yon liy pwentiye orizontal.

Diferans estatistik enpòtan ant diferan gwoup yo prezante ak lèt ​​miniskil anlè chak gwoup (valè p < 0.05). Abreviyasyon gwoup yo: HATCH—ze pa vaksinen; BHI—ze yo bay vaksen ak BHI; rHVT-ND—ze yo bay vaksen recombinant HVT; ZJ1*L—ze yo te vaksinen ak viris recombinant ZJ1*L ki gen kote klivaj yo te modifye pou yo ka ba virulans; ZJ1*L-IL4R—ze yo te vaksinen ak ZJ1*L ki ba rekombinan ak jèn interleukin-4 ki mete nan oryantasyon ranvèse; LS—ze yo vaksinen ak souch LaSota; LS-IL4R—ze yo te vaksinen ak viris LaSota recombinant ak jèn interleukin-4 ki mete nan oryantasyon ranvèse. Dòz viris ze yo te resevwa nan chak gwoup reprezante kòm yon nimewo apre non gwoup la nan EID50/pa ze.

3.6. Seroloji apre defi

Tout zwazo nan gwoup kontwòl Hatch, BHI, ak rHVT-ND yo te montre ogmante (plis pase doub) tit HI-antikò nan 14 DPC (pi wo pase log2 10) konpare ak tit yo anvan defi nan 13 DPH (log{). {6}}.7). Diferans ki genyen nan tit yo nan twa gwoup sa yo anvan ak apre defi yo te enpòtan (p-valè<0.0001) (Figure 3, solid bars). In contrast, the post-challenge HI titers in all experimental rNDV vaccine groups and the LS control group did not change significantly compared with the pre-challenge titers of the same groups. In all groups, the differences between pre-and post-challenge antibody titers were within a log (except LS-ILR4 103.5, in which the difference was log2 1.8).

3.7. Gwoup kontwòl SPF vaksinen

Sivivan nan gwoup kontwòl SPF yo apre kouve te 66.7 pousan nan gwoup la vaksinen ak ZJ1 * L 103.5 ak 57.1 pousan nan gwoup la vaksinen ak ZJ1 * L-IL4R 103.5 (figi siplemantè S3A). Yo te detekte koule viral aktif nan zwazo ki nan gwoup kontwòl SPF yo atravè tou de wout, ak pi wo tit yo detekte nan echantiyon prelèvman orofarinj yo (al gade Figi Siplemantè S3B). Tit HI apre vaksinasyon zwazo kontwòl SPF yo te bay vaksen yo te pi wo pase tit yo nan gwoup kontwòl Hatch, BHI, ak rHVT-ND epi yo te rive nan valè mwayèn log2 7.08 ak log2 7. 58 nan 13 DPH nan gwoup ZJ1 * L-IL4R 103.5 ak ZJ1 * L-IL4R 103.5, respektivman (gade Figi Siplemantè S3C). Pa gen okenn siy klinik apre defi oswa mòtalite yo te obsève nan de gwoup kontwòl SPF inokulasyon yo (al gade Figi Siplemantè S3D pou koub siviv). Zwazo ki soti nan gwoup kontwòl SPF yo te bay vaksinasyon siyifikativman mwens viris atravè wout oral la nan 2 DPC ak 4 DPC konpare ak gwoup kontwòl yo (valè p soti nan<0.0001 to 0.009) (see Supplementary Figure S3E). The post-challenge antibody titers in both inoculated SPF control groups did not change significantly compared with the pre-challenge titers of the same groups (see Supplementary Figure S3C).

For more information:1950477648nn@gmail.com