Pati 1: Akteoside reprime Microglia M1 polarizasyon atravè chemen siyal NF-κB entèdi ak rekiperasyon fonksyon mitokondri ki te medyatè AMPK
Mar 06, 2022
Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com
Résumé:
Background:Maladi alzayme a (AD)se kalite demans ki pi souvan. Pandan keacteoside soti nan zèb cistanche(ACT), yon konpoze izole de Cistanchetubulosa, posede pwopriyete neuroprotective. Sepandan, mekanis ki kache nan reglemante polarizasyon microglia rete mal defini.Metòd:Isit la, modèl AD AlCl3-pwovoke nan lav zèb yo te aplike pou dekouvwi efikasite terapetik ACT. Selil BV-2 yo te itilize pou demontre wòl ACT sou polarizasyon microglia. RNA- Sequence, HPLC-Q-TOF-MS, Western blot, ak molekilè debakadè yo te konbine pou konfime mekanis li yo.Rezilta:ACT te siyifikativman amelyore diskinezi eksperimantal ak maladi sistèm nève nan zebra¦sh. Imedyatman, li siprime polarizasyon M1 ak monte nan fenotip M2 nan selil BV-2 LPS-induit. Premyèman, nou te demontre ke ACT te gen yon gwo enpak transcriptomik, ki te enplike règleman sou wout siyal kle yo nan enflamasyon, biosentèz arjinin, osi byen ke pantotenat ak biosentèz CoA, ki gen rapò ak fonksyon mitokondri. ACT(acteoside soti nan zèb cistanche) tretman redwi polarizasyon microglia M1 pa anpeche chemen siyal NF-κB la. Epi HPLC-Q-TOF-MS te konfime plis wout metabolik yo. Anplis de sa, ACT te rektifye twòp ROS pou retabli fonksyon mitokondri yo atravè AMPK-medyatè PGC-1 ak UCP-2 regilasyon, ki konsistan avèk chanjman metabolik yo. Entrigan, ACT ka dirèkteman mare ak tou de NF-κB ak AMPK, jan evidans molekilè debakadè.Konklizyon:Rechèch la bay yon mekanis enfuzif nan ACT ak ilistre yon nouvo pèspektiv ki baze sou malfonksyònman mitokondriyo revele koneksyon ki genyen ant metabolis ak polarizasyon microglia.
Background:
alzaymemaladi a(AD) se yon maladi neurodegenerative komen akonpaye pa mantal andikap ak diskinezi [1]. Li karakterize pa pèt newòn grav, plak senil, ak tangles neuro¦brillary[2]. Patojèn nan AD gen plizyè dimansyon epi li lye ak neuroenflamasyon. Neuroin§ammation kondwi pa aktivasyon nan selil glial, ki gen rapò ak devlopman AD [3, 4]. Pandan pwogresyon ak vin pi grav nan neuroenflamasyon, mikroglia yo konsidere kòm faktè kle. Microglia yo se selil iminitè prensipal yo nan sistèm nève santral la. Li asosye byen ak yon kaskad nan pwosesis, ki gen devlopman nan sèvo, kenbe yon anviwònman net, osi byen ke reponn a aksidan ak reparasyon[1]. Anplis, microglia ka ankouraje nan yon fenotip M1 ak ekspresyon de cytokin pro-enflamatwa ogmante lè maladi neuroenflamasyon ki gen rapò ak maladi tankou AD rive [5]. Etid yo montre tou ke polarizasyon nan fenotip M1 souvan akonpaye pa maladi metabolik [6], sa ki lakòz dezekilib metabolis enèji ak malfonksyònman mitokondriyo [7]. Chanjman negatif sa yo sòti nan neurodegeneration, menm AD.
acteoside soti nan zèb cistanche(ACT), yon glikozid phenylethanoid, se prensipalman sòti nan Cistanchetubulosa. Ogmante prèv sijere ke ACT posede anpil aktivite famasi, ki gen ladan efè neuroprotective [8], anti-enflamatwa [9], ak efè antioksidan [10]. Patikilyèman, yo te rapòte ACT amelyore aprantisaj ak memwa, osi byen ke amelyore metabolis enèji nan rat streptozotocin-induit [11]. Li sigjere tou pou anpeche lanmò selil newòn apoptotik ak domaj mitokondriyo nan sourit eksperimantal ansefalomyélit otoiminitè [12]. Sepandan, mwens etid yo te konsantre sou efè ACT sou polarizasyon microglia M1/M2. Espesyalman, divès kalite mekanis, tankou reparasyon nan fonksyon mitokondri ak règleman nan metabolis selil, pa te fèt. Anplis de sa, mekanis ACT kontribye nan polarizasyon microglia M1/M2 rete enkonu.
Rapò sa a te vize pou mennen ankèt sou efikasite terapetik ACT ak mekanis molekilè ACT nan AD. Isit la, ACT te montre yon efè neropwoteksyon siyifikatif nan lav zebra¦sh AlCl3-pwovoke. Anplis de sa, ACT efektivman anpeche polarizasyon M1 ak ankouraje fenotip M2 nan selil BV -2 LPS-induit. RNA-Sekans (RNA-Seq) entegre ak metòd metabolomik yo pi byen konprann mekanis ki kache nan ACT nan reglemante polarizasyon microglia. Crosstalk ant metabolis ak polarizasyon microglia an tèm de fonksyon mitokondriyo yo te envestige. Etid sa a pral bay nouvo respè pou plis envestigasyon ACT kòm yon potansyèl ajan terapetik pou trete AD.
Metòd:
Bèt ak gwoupman modèl:
Sovaj-tip zebra¦sh (AB souch, 4 mwa fin vye granmoun) yo te chwazi nan etid sa a (Nanjing Qi Wu Biotechnology Co., Ltd.). Yo te kenbe anba yon sik limyè / fènwa 14/10 h nan 28 degre, swiv metòd anvan an [13]. Angrè natirèl ak anbriyon ki devlope nòmalman yo te pwodwi ak kiltive nan 3 jou apre fètilizasyon (dpf) nan yon enkibatè ekleraj. Tout eksperyans zebra¦sh yo te fèt anba sipèvizyon Komite Etik Animal nan University Pharmaceutical Lachin.
Zebra¦sh lav yo te divize an sis gwoup epi yo te trete soti nan 3 dpf a 7 dpf: gwoup kontwòl, gwoup modèl, gwoup modèl plis donepezil hydrochloride (DPZ), modèl plis gwoup ACT. Gwoup kontwòl la te kenbe nan mwayen an ak 0.2 pousan DMSO ak gwoup modèl la te trete ak 150 μM AlCl3 (pH 5.8). Modèl la plis gwoup DPZ te ko-trete ak AlCl3 ak 8 μM DPZ. Modèl la plis gwoup ACT yo te ko-trete ak AlCl3 ak konsantrasyon diferan nan ACT (200, 100, 50 μM). ACT(acteoside soti nan zèb cistanche)(HPLC pite pi gran pase oswa egal a 98 pousan) te jwenn nan Baoji Herbest Bio-Tech Co, Ltd (Baoji, Lachin). AlCl3·6H2O ak DPZ te achte nan men Shanghai Aladdin Bio-Chem Teknoloji co, LTD. (Shanghai, Lachin).
Analiz konpòtman
Mouvman lav Zebra¦sh yo te anrejistre ak yon analizè konpòtman ViewPoint (Zebralab 2018, ViewPoint Life Sciences Co., Ltd.) nan 28 degre. Brie§y, paramèt konpòtman yo, ak pwosesis rezilta yo te konsistan avèk metòd nou te etabli pi bonè[13]. Isit la, vitès mwayèn (AS), chanjman vitès (ΔS), pousantaj rekiperasyon diskinezi (DRR), ak efikasite repons (RE, pousan) yo te chwazi pou evalye rekiperasyon diskinezi nan zebra¦sh.
Apre tretman ki soti nan 3 dpf a 7 dpf, yo te kolekte lav zebra¦sh pou mezire aktivite AChE ak Chat. Ki baze sou pwotokòl manifakti a, yo te detekte aktivite a pa twous tès imunosorban anzim ki lye (ELISA) (MLBIO biotechnology Co Ltd, Shanghai, Lachin). Ak konsantrasyon pwoteyin diferan echantiyon yo te detèmine pa metòd BCA.
Selil BV-2 yo te simen nan yon 6-byen plat separeman (n=6/gwoup). Apre tretman an, yo te retire mwayen an, epi selil yo te lave twa fwa ak PBS frèt. Lè sa a, imedyatman ekspoze a azòt likid siprime metabolis selil yo. Selil yo te rekòlte ak frèt 80 pousan metanol (1 mL/byen) epi yo te transfere sispansyon an nan yon tib Eppendorf 2 mL. Pou fasilite presipitasyon pwoteyin, toubiyon ak kouray pou 1 minit epi santrifuje a 13,000 rpm pou 15 min nan 4 degre. Sispansyon selil la te transfere nan yon nouvo tib Eppendorf 2 mL epi sèk anba yon kouran nitwojèn epi estoke nan -80 degre jiskaske analiz. Te rezidi a sèk rekonstitye nan 150 μL nan pre-refwadi 25 pousan acetonitrile. Yo nan lòd yo asire estabilite ak presizyon nan analiz la sekans, volim egal (10 μL) nan chak echantiyon selil yo te konbine kòm echantiyon kontwòl kalite (QC). Pandan deteksyon metabolit yo, yo te enjekte echantiyon sa yo apre chak sis echantiyon selil yo pou konfime estabilite yo. Yo te enjekte yon aliquot 1 μL pou HPLC-Q-TOF-MS.
Yo te fè analiz HPLC-Q-TOF-MS sou sistèm HPLC Agilent 1290 ki konekte ak espektwomèt mas Agilent 6530 Quadrupole Time-of-Flight (Q-TOF) (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). Separasyon an te fèt sou yon kolòn ACQUITY UPLC BEH C18 (2.1 × 100 mm, 1.7 μm). Faz mobil la te konpoze de 0.1 pousan asid fòmik-dlo (v / v; A) ak asetonitrile (B).
Yo te fikse to koule a nan {{0}}.4 mL/min ak kondisyon elisyon gradyan optimal sa a: 0 a 2 min, 5 pousan B; 2 a 20 min, 5 pousan a 95 pousan B (mòd ion pozitif); 0 a 2 min, 5 pousan B; 2 a 20 min, 5 pousan a 95 pousan B (mòd ion negatif). Paramèt operasyon yo nan espektwomèt mas la te fikse jan sa a: tanperati gaz, 320 degre; seche gaz, 10 L / min; nebilizè, 35 psi; VCap, 4000 V; fragman, 120 V.
Done kri yo te opere anba MassHunter Workstation Software vèsyon B.07.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). Done kri yo te pre-trete pa platfòm XCMS la. Analiz konpozan prensipal yo (PCA) ak analiz diskriminan pasyèl pi piti kare (PLS-DA) nan done nòmalize yo te fèt ak MetaboAnalyst (https://www.metaboanalyst.ca). Konbine ak literati, metabolit yo diferans (VIP> 1, T-tès P< 0.05)="" were="" identi¦ed="" on="" hmdb="" (https://hmdb.ca).="" finally,="" pathway="" analysis="" was="" conducted="" with="">
