Pati 1: Konpoze byoaktif soti nan Ephedra Fragilis: Optimizasyon Ekstraksyon, Karakterizasyon Chimik, Aktivite Antioksidan ak AntiGlycation

Pou plis enfòmasyon. kontaktetina.xiang@wecistanche.com

Résumé: Yo te itilize metodoloji sifas repons (RSM) ak yon konsepsyon Box-Behnken (BBD) pou optimize ekstraksyon konpoze bioaktif nan Ephedra fragilis. Rezilta yo sijere ke ekstraksyon ak 61.93 pousan etanòl nan 44.43 degre pou 15.84 h te pi bon solisyon pou konbinezon sa a nan varyab. Ekstrè etanòl brit (CEE) yo te jwenn nan kondisyon ekstraksyon pi gwo yo te sekans fraksyon ak solvang pou ogmante polarite. Kontni total de phenolic (TP) ak total flavonoid (TF) osi byen ke aantioksidanak aktivite antiglycation yo te mezire. Pwofil anprent fitochimik fraksyon ak aktivite ki pi wo a te karakterize lè l sèvi avèk RP-HPLC. Fraksyon etil acetate (EAF) te gen pi gwo kontni TP ak TF epi li te montre aktivite antioksidan ak antiglisasyon ki pi pisan. Rezilta analiz korelasyon Pearson yo te montre ke kontni TP ak TF yo te trè siyifikativman korelasyon ak aktivite antioksidan ak antiglikasyon. Totalman, yo te idantifye sis konpoze nan EAF nan E. fragilis, ki gen ladan kat asid fenolik ak de flavonoid. Anplis de sa, analiz debakadè molekilè te montre tou koneksyon posib ant konpoze bioaktif idantifye ak mekanis aksyon yo. Rezilta nou yo sijere nouvo prèv sou aktivite antioksidan ak antiglycation nan E. fragilis konpoze byoaktif ki ka aplike nan tretman ak prevansyon nan aje ak konplikasyon ki asosye ak glikasyon.

Mo kle: Ephedra fragilis; metodoloji sifas repons; Box-Behnken konsepsyon; konpoze bioaktif; RP-HPLC; aktivite antioksidan ak antiglikasyon

Klike la a pou aprann plis pwodwi

1. Entwodiksyon

Ekspozisyon kontinyèl nan agresè ki soti nan divès sous ka mennen nan yon ogmantasyon nanradikal gratispwodiksyon nan kò imen an, depase kapasite li nan kontwole yo, epi, sou tan, kontribye nan devlopman plizyè maladi estrès oksidatif ki asosye ki gen ladan aje ak dyabèt[1]. Pakonsekan,antioksidansipleman ka ede kenbe yon sistèm byolojik optimal lè li retire twòp konsantrasyon radikal gratis [2]. Li te demontre ke radikal gratis patisipe nan pwosesis la glikasyon. Glycation, yon reyaksyon espontane nonenzymatic ant gwoup amine ki disponib nan résidus asid amine nan pwoteyin ak sik diminye, rive nan yon pi wo limit anba aje ak ipèglisemi, sa ki lakòz avanse pwodwi fen glikasyon (AGEs) pwodiksyon ak akimilasyon 3]. Akote de li entèfere ak pwoteyin ak chanje fonksyonalite yo, AGEs kapab tou

angaje ak reseptè a pou AGEs (RAGE), yon reseptè sifas milti-ligand-selil 45 KDa ki fè pati superfanmi imunoglobulin [4], epi aktive plizyè chemen siyal intraselilè en akonpaye pa yon ogmantasyon nan pwodiksyon radikal gratis ki kontribye nan konplikasyon patolojik ki gen rapò. nan dyabèt [5].

Li byen etabli ke antioksidan ak molekil scavenger radikal yo se bon pwoteksyon kont pwosesis sa yo [6]. Itilizasyon plant medsin nan prevansyon ak kontrebalans maladi ki asosye ak estrès oksidatif se yon ansyen tradisyon medikal. Dènyèman, anpil etid te demontre ke metabolit segondè tankou tanen, asid fenolik, ak flavonoid ki gen doub antioksidan ak potansyèl antiglikasyon yo pi efikas nan trete dyabèt melitus [7]. Se poutèt sa, idantifye nouvo sous fitochimik ki efektivman elimine radikal gratis epi redwi glikasyon ki pa anzimatik se yon gwo enterè.

Ephedra fragilis se yon manm nan genus Ephedra (fanmi Ephedracea) ki gen plis pase 60 espès k ap grandi nan kondisyon dezè ak semiarid nan tou de emisfè atravè sis kontinan [8]. Pou plis pase 5000 ane, anpil espès nan genus Ephedra yo te souvan itilize nan medikaman tradisyonèl Chinwa (TCM) pou tretman plizyè maladi; te gen plizyè etid ki rapòte plizyè benefis sante yo tankou anti-enflamatwa [9, anti-pwogrese, anti-angiogenic, [10], antimikwòb, antiproliferative, pro-apoptotic [11], neuroprotective [12], epatoprotective, ak anti. -oksidan pwopriyete [13]. Flavonoid, alkaloid, asid fenolik, ak lòt konpoze nan plant Ephedra yo te konsidere kòm eleman prensipal yo phytochemical pou pwopriyete famasi sa yo [14]. Nan endistri pharmaceutique, chromatografi likid segondè-pèfòmans ranvèse-faz (RP-HPLC) lajman itilize kòm yon metòd analyse pou detekte ak idantifye konpoze chimik ki baze sou diferan pwopriyete idrofob yo, byenke kèk etid yo dekri nan literati a pou analiz chimik nan. espès Ephedra.

Pwosesis ekstraksyon konpoze bioaktif sa yo ki soti nan diferan sous plant se premye etap enpòtan ki enplike nan analiz kalitatif ak quantitative yo [15]. Diferan faktè viz. metòd ekstraksyon, kalite sòlvan ak konsantrasyon, tanperati, tan, ak lòt moun ka siyifikativman enfliyanse konpozisyon an ak pousantaj ekstraksyon nan konpoze sa yo [16]. Se poutèt sa, optimize pwosesis ekstraksyon yo oblije bay yon kontni segondè nan konpoze plant aktif. Orijinèlman te devlope nan ane 1950 yo pa Box ak Wilson, metodoloji sifas repons (RSM) se jodi a zouti ki pi souvan itilize pou fè, amelyore, ak optimize pwosesis sa yo kote faktè endepandan gen yon efè konbine sou repons ou vle a. Youn nan konsepsyon chèchè yo chwazi pi souvan nan RSM se konsepsyon Box-Behnken (BBD) paske li bezwen yon esè limite epi, kidonk, reprezante yon altènatif ki evite eksperyans alontèm epi diminye depans [17-19].

Jiska dat, pa gen okenn etid ki disponib nan literati konsènan optimize ekstraksyon E. fragilis konpoze byoaktif. Se poutèt sa, etid sa a te vize pou optimize ekstraksyon nan total fenolik (TP) ak flavonoid (TF) sa ki soti nan E.fragilis pa aplike yon BBD. Ekstrè etanòl brit (CEE) ki te jwenn nan kondisyon ekstraksyon pi gwo yo te sekans fraksyon ak solvang pou ogmante polarite, epi yo te envestige aktivite antioksidan ak antiglisasyon yo lè l sèvi avèk diferan tès in vitro. Finalman, nou te fè analiz silico pou plis konprann mekanis ki konpoze bioaktif nan EAE, jan yo idantifye pa ranvèse faz segondè-pèfòmans likid chromatografi (RP-HPLC), mare nan BSA ak RAGE kòm pwoteyin sib.

2. Rezilta ak Diskisyon

2.1. Fitting modèl yo

RSM with a BBD was applied to investigate the effect of ethanol concentration (%, Xj), temperature(°C, X2), and time (h, X3)on the extraction yield of TP and TF from E. fragilis. The results of 15 trials after the BBD are given in Table 1. Analysis of variance(ANOVA)(Table 2) indicates that the models were significant as evidenced by F and p-values. The coefficient of multiple determinations (R')of the models were 0.9935 and 0.9939 for TP and TF, respectively, suggesting that only 0.65 and 0.61%of the total variations are not explained by the models. A comparable value of adjusted R2 to R2 represents an excellent statistical model. As given in Table 2, the adjusted R2(0.9818 and 0.983 for TP and TF contents, respectively) is close to R2, which means that the insignificant terms were not included in the models. Moreover, predicted R2(0.9012 and 0.9338 for TP and TF contents, respectively) is in reasonable agreement with adjusted R2 and confirms that the models are highly significant. The"fitness" of the models was also confirmed using the lack of fit test The insignificant p-value for lack of fit (p >{{0}}.05) pou de repons endike konvnab modèl yo pou prediksyon egzat varyasyon rezilta yo [20]. Yon bon presizyon dekri kòm yon rapò siyal-a-bri ki pi gran pase 4, ki konsidere kòm dezirab [21]. Valè yo nan presizyon adekwat yo se 29.4772 ak 28.729 pou kontni TP ak TF, respektivman, demontre yon siyal adekwa. Ansanm, pi piti valè koyefisyan varyasyon (CV pousan) (1.52 ak 0.4246 pousan pou TP ak TF kontni, respektivman) endike pi bon presizyon ak fyab nan valè eksperimantal. Pou chak faktè repons, enfliyans faktè ekstraksyon XI (konsantrasyon etanòl), X2 (tanperati ekstraksyon), ak X3 (tan ekstraksyon) yo te ak anpil atansyon egzamine (Tablo 2). Siyifikasyon chak koyefisyan yo te teste lè l sèvi avèk F ak p-valè, konsidere ke yon pi gwo valè F ak yon pi piti valè p toujou mennen nan korespondans pi enpòtan ant divès varyab endepandan [22]. Ansanm, rezilta sa yo endike ke modèl yo te repwodiktif epi yo te apwopriye pou optimize.

2.2. Efè varyab ekstraksyon sou kontni TP

Jan yo bay nan Tablo 2, rezilta ANOVA yo te montre siyifikatif lineyè (X, ak X2), kwadratik (Xj, X5, ak X), ak entèaktif (X1X, ak X2X3) efè sou kontni TP. Pami sa yo, kontni TP depann sitou sou X, X3 nan p<0.001 followed="" by="" x1="" and="" x1x,="" at=""><0.01. the="" following="" second-order="" polynomial="" equation="" could="" be="" used="" to="" express="" the="" relationship="" between="" tp="" content="" and="">

Valè mank de anfòm pa te enpòtan (F-valè =11.02, p-valè=0.0843), ki endike ke modèl la byen ekipe ak bon prediksyon (R{ {9}}.9935; Adj R2=0.9818)(Tablo 2).

Entèraksyon ki genyen ant konsantrasyon etanòl ak tanperati ekstraksyon (XjX2) pwodui yon gwo siyifikatif (p<0.01)effect on="" tp="" content="" (table2).="" as="" ethanol="" concentration="" (x1)="" and="" extraction="" temperature="" (x)increase="" in="" the="" range="" of="" 40-61.80%="" and="" 25-44.30°c="" respectively,="" the="" tp="" content="" increases="" rapidly.="" however,="" beyond="" 61.80%and="" 44.30°c,="" tp="" content="" decreases="" slightly(figure="" 1a).="" however,="" the="" interaction="" of="" the="" extraction="" temperature="" and="" extraction="" time="" (x2x3)showed="" a="" highly=""><0.001) effect="" on="" tp="" content="" (table="" 2).="" as="" shown="" in="" figure="" 1b,="" tp="" content="" slightly="" improved="" with="" increasing="" extraction="" temperature="" (x2)and="" extraction="" time="" (x3)up="" to="" 44.37℃c="" and="" 15.77="" h,="" respectively,="" but="" diminished="" slowly="">

Efè sa yo ta ka akòz lefèt ke konpoze fenolik yo se molekil polè ki natirèlman rive ak glikozid, ki fè yo pi idrosolubl nan dlo [23]. Kòm ekstraksyon nan konpoze fenolik yo depann fòtman sou polarite a sòlvan, yon melanj dlo-alkòl pi efikas nan ekstraksyon li pase alkòl pou kont li [20]. Konsènan prensip "tankou-dissoud-tankou", yon diminisyon nan konsantrasyon etanòl la mennen nan yon ogmantasyon nan polarite nan sòlvan, ki ede fonn TP [15]. Men, yon gwo konsantrasyon etanòl ka enfliyanse pousantaj ekstraksyon pa anpeche yap divòse nan konpoze fenolik. Menm jan an tou, yon ogmantasyon nan tanperati ekstraksyon amelyore rekiperasyon sib konpoze fenolik pa ralantisman tisi yo, febli entegrite miray selil la, amelyore transfè mas ak pénétration sòlvan nan matris plant la, ak ogmante tou de solubilite ak to difizyon; sepandan, tanperati ki twò wo pou yon tan ekstraksyon pwolonje ka ogmante chans pou yo degradasyon [23]. Anplis de sa, yo te jwenn yon peryòd ekstraksyon ki kapab pwolonje oksijèn ak limyè ekspoze, ki finalman amelyore risk pou fòmasyon radikal gratis ki ka retire pa konpoze fenolik [23]. Se poutèt sa, yon tan ekstraksyon pwolonje pa t itil pou maksimize sede ekstraksyon an [24].

2.3.Efè varyab ekstraksyon sou kontni TF

Kòm evidan nan Table2, efè lineyè X ak X3; efè kwadratik X, ak X; ak efè a entèraksyon nan X1X2 ak XjXg demontre efè enpòtan sou kontni TF. Pami tout faktè enpòtan, TF depann sitou sou X3,X,X,X, ak X1X2 nan p.<0.001 followed="" by="" x="" andx1x3="" at=""><0.01. the="" fitted="" second-order="" polynomial="" of="" tf="" content="" is="" as="">

Valè ki pa enpòtan nan mank de anfòm (F-valè=1.13; p-valè=0.5024) sigjere ke modèl yo pwopoze a ekipe ak enfliyans nan espasyal nan varyab yo nan repons lan ak bon. prediksyon (R2=0.9939; Adj R{2= 0.9830) (Tablo 2).

Divès graf sifas repons 3D yo te pwodwi pou kontni TF epi yo montre nan Figi 1D-F. Efè a entèraksyon nan konsantrasyon etanòl ak tanperati ekstraksyon (X1X2) te montre yon siyifikatif (p<0.001) effect="" on="" tf="" content.="" from="" figure="" 1d,="" tf="" content="" increased="" at="" first="" and="" then="" decreased="" quickly="" with="" the="" rise="" of="" the="" two="" parameters,="" and="" a="" maximum="" tf="" content="" was="" achieved="" when="" ethanol="" concentration="" (xj)="" and="" extraction="" temperature="" (xo)were="" 61.89%="" and="" 44.23°c,="" respectively.="" this="" phenomenon="" is="" similar="" to="" tp,="" which="" might="" also="" be="" attributed="" to="" the="" fact="" that="" a="" rise="" in="" the="" extraction="" temperature,="" the="" solubility,="" extraction="" rate,="" and="" diffusion="" rate="" increase,="" which="" ultimately="" helps="" tf="" to="" dissolve="" insolvent="">

Menm jan an tou, entèraksyon ki genyen ant konsantrasyon etanòl ak tan ekstraksyon (XIX3) te montre yon korelasyon menm jan an (Figi 1F). Sede ekstraksyon TF piti piti ogmante ak ogmante konsantrasyon etanòl (Xj) ak tan ekstraksyon (X3). Toupre pwen mitan an nan konplo repons lan (61.89 pousan ak 15.81 h pou X ak X3, respektivman), sede TF rive nan pi wo li yo, men diminye tou dousman apre sa. Gen plis chans pou fenomèn sa a akòz dezyèm lwa Fick a nan prensip difizyon ki revele ke ekilib final la ant konsantrasyon solisyon an nan matris solid la ak sòlvan yo pral reyalize apre yon dire patikilye, ki mennen nan yon ralantisman nan pwodiksyon an ekstraksyon nan konpoze sib [26] .

2.4. Validasyon nan Kondisyon Optimize

Objektif optimize a se te detèmine kondisyon ekstraksyon ki ta bay an menm tan pi wo kontni TP ak TF. Yo te itilize lojisyèl ekspè konsepsyon pou fè optimize. BBD te pwopoze pi bon konsantrasyon etanòl, tanperati ekstraksyon, ak tan yo dwe 61.93 pousan, 44.43 degre, ak 15.84h, respektivman, pou fè ekstraksyon E. fragilis byoaktif konpoze. Nan pwen sa a pi bon, sa ki prevwa TP ak TF yo te 15.335 mg GAE / g dw ak 2.972 mg OE / g dw, respektivman (Table3). Validasyon nan kapasite nan prediksyon nan modèl yo te fèt eksperimantal nan kondisyon yo pi bon yo jwenn nan RSM. Eksperyans yo te fèt an triple nan kondisyon yo jwenn yo, ak sa ki an mwayèn TP ak TF yo te 14.98±0.29GAE/g DW ak 2.92±0.09 QE/g dw, respektivman. Valè eksperimantal nan repons envestige yo te konparab ak nan liy ak sa yo nan valè prevwa, ki konfime ke modèl yo te ase yo reflete optimize a espere.

2.5. Ekstraksyon Sede ak analiz fitochimik

Tablo 4 te montre pwodiksyon an ekstraksyon nan E.fragilis CEE ak fraksyon li yo. Rezilta nou yo te montre ke pwodiksyon ekstraksyon nan fraksyon diferan diferan anpil de 0.78 a 10.6 pousan (w/wo). Jan yo montre nan Tablo 4, CEE(1{{14} }.6 pousan ) te gen pi gwo pousantaj pwodiksyon an, ki te swiv pa WF (2.73 pousan ), WBF (2.0 4 pousan ), DMF (0.64 pousan ), ak EAF (0.93 pousan ), tandiske HF (0.78 pousan ) )te gen pousantaj ki pi ba a.

Kontni TP nan E. fragilis CEE ak fraksyon li yo te detèmine atravè yon ekwasyon regresyon koub kalibrasyon (y {{0}}.009x-0.{{ 25}}154; R2=0.9973) ak eksprime an miligram ekivalan asid galik (GAE) pou chak gram pwa sèk (Tablo 4). Anjeneral, EAF te gen pi gwo kontni TP (32.78±0.49 mg GAE/g DW) ki te swiv youn apre lòt pa WBF, DMF, ak CEE (25.02±1.01,19.21±0.22 ak 14.98±0.29 mg GAE/g). DW), tandiske, WF ak HF prezante kontni ki pi ba yo (10.47±0.71 ak 8.14±0.17 mg GAE/g DW, respektivman). Kontni TF nan E. fragilis CEE ak fraksyon li yo te evalye pa tès kolorimetri klori aliminyòm lè l sèvi avèkquercetinas a standard (y=0.0295x+0.0361; R2=0.9986)(Table 4). Similar to the TP content, the same results were observed in the TF content with the highest and lowest content being detected in the EAF(10.50 ± 0.11 mg OE/g of DW)and HF(1.65± 0.13 mg OE/g of DW), respectively. The TF content is arranged as the following sequence: EAF>WBF>DMF> CEE>WF>HF. Enteresan, sa ki nan TP ak TF nan EAF yo te 2.18 ak 3.59-pliye pi wo pase sa yo ki nan CEE a, sijere ke acetate etil ka sòlvan ki apwopriye a konsantre plis disponib fenolik ak flavonoid konpoze pandan fraksyon nan CEE. Done nou yo konsènan kontni TP ak TF yo konsistan avèk sa yo ki nan Yao et al. [27] ki rapòte ke EAF yo te jwenn nan plant medsin Pyrola asarifolia te gen nivo ki pi wo nan fenolik ak flavonoid konpare ak lòt fraksyon yo (etè petwòl, n-butanol, ak dlo).Nan etid yo, Bhardwaj et al. [28] te rapòte tou rezilta ki sanble lè w ap itilize plizyè solvang ak ogmante polarite (n-hexane, chloroform, ethyl acetate, ak n-butanol) nan divize yon plant medsin Codonopsis clematidea. Dapre otè sa yo, EAF a gen pi gwo kontni TP ak TF ki te swiv pa n-butanol, klowofòm ak hexane yo. Varyasyon enpòtan sa a nan pwodiksyon ekstraksyon, konpozisyon, ak pite nan konpoze fenolik ant fraksyon yo se pwobableman akòz diferans ki genyen nan polarite nan konstitiyan yo te jwenn nan materyèl plant yo, estrikti chimik yo, degre polimerizasyon yo, ak entèraksyon youn ak lòt [29]. ].

2.6. Aktivite antioksidan in vitro

2.6.1.DPPH"Aktivite dechaj

DPPH" se youn pami kèk radikal gratis ki estab ki lajman itilize pou mennen ankèt sou potansyèl antioksidan ekstrè plant [30]. Potansyèl scavenger yon ekstrè a souvan asosye ak kapasite li pou elimine radikal gratis ki estab, ki se akòz kapasite li bay idwojèn. .

Kapasite scavenging nan CEE / fraksyon kòm byen ke VC nan dòz diferan sou DPPH * radikal gratis te etidye. Figi 2A montre ke tout fraksyon yo te montre evidan aktivite DPPH·scavenging nan yon fason ki depann de dòz nan yon seri de 0.1 a 1 mg/mL. Nan yon dòz 1mg/mL, 64.32,44.1{{22} },67.24,86.63,80.95,51.37,and99.62 pousan nan DPPH"radikal yo te trempe pa CEE, HE, DMF, EAF, WBF, WF ak VC, respektivman. EAF (0.116±{{30}}.015 mg/mL) te montre IC5 ki pi ba a0 pou DPPH scaveng-ing" nan mitan tout fraksyon. WBF (0.175 ± 0.03 mg/mL), CEE (0.23 ± 0.065 mg/mL), ak DMF (0.297). ±0.044 mg/mL).WFand ​​HF te montre comparativement pi wo valè IC50 (0.964±0.178 ak 1.245±0.105 mg/mL), respektivman.

Observed differentials in the scavenging activities of the fractions against the DPPH*radical may be assigned to the structural characteristics and the number of phenolic compounds present in each fraction. Similar results were observed in the medicinal plant Liquidambar formosana Hance leaf since the EAF was more effective than the other fractions (dichloromethane, n-butanol, and water fractions)[31]. As a standard molecule, ascorbic acid (VC) displayed the lowest IC50 value (0.039 ±0.009 mg/mL) in comparison to all fractions. The scavenging potential is in decreasing order of VC>EAF> WBF>DMF >CEE>WF>HF.

Valè IC50 pou DPPH radikal scavenging te siyifikativman pozitif ki gen rapò ak tou de kontni TP (r=0.963;p<0.01) and="" tf="" content(r=""><0.01)as presented="" in="" table="" 5.="" therefore,="" the="" discovered="" antioxidant="" activity="" suggested="" that="" eaf="" can="" be="" a="" source="" of="" numerous="" natural="" compounds="" with="" antioxidant="" properties="" that="" can="" act="" as="" hydrogen="" donors="" to="" terminate="" the="" process="" of="" oxidation="" by="" converting="" the="" free="" radicals="" to="" their="" stable="">

2.6.2.ABTS· plis Aktivite Scavenging

Yo itilize anpil tès ABTS kòm yon endèks pou enfòme ak mennen ankèt sou kapasite antioksidan konpoze pi bon kalite ak ekstrè natirèl [32,33]. Fenèt koulè ble/vèt ABTS* chromophore nan 734 nan prezans ekstrè plant ka endike yon aktivite antioksidan.

Jan yo montre nan Figi 2B, koub scavang CEE/fraksyon sou ABTS* plis montre yon tandans anlè pandan konsantrasyon an ogmante. Nan 1 mg/mL, pousantaj dechaje nan CEE, HF, DMF, WBF, EAF, WF, ak VC yo te 80.31,40.54,88.76, 9{{2{ {22}}}}.11,82.97, 67.36, ak 94.90 pousan, respektivman. Pami tout fraksyon, valè minimòm ICs0 yo te montre pa EAF(0.11{{3{0}}±0.014 mg/ mL) kontinye pa DMF (0.196±0.{023 mg/mL),WBF ({0.277±0.031 mg/mL), CEE(0.429 ± 0.039 mg/mL), ak WF (0.654± 0.043 mg/mL), tandiske HF parèt pi wo valè ICs0 (1.314± 0.104 mg/mL). Ansanm, rezilta sa a te an akò ak Kaewseejan ak Siriamornpun [29]. Konparezon ak kapasite inhibition VC(0.025±0.005 mg/mL) te montre ke aktivite scavenging nan CEE ak fraksyon li yo te yon ti kras fèb.

Jan yo prezante nan Tablo 5, yon korelasyon trè siyifikatif nan scavenging radikal ABTS ak kontni TP (r=0.921;p<0.01), and="" a="" significant="" correlation="" with="" tf="" content="" (r=""><0.05), were="" shown.="" this="" finding="" confirms="" the="" results="" obtained="" for="" the="" dpph*scavenging="" assay,="" proving="" the="" capacity="" of="" eaf="" to="" scavenge="" free="">

2.6.3. Aktivite pou netwaye H2O2

Kòm yon kontribitè prensipal nan estrès oksidatif, H2O2 difize fasilman atravè selil atravè manbràn nan kòm yon molekil mesaje [34]. Ansanm, H2O2 li menm pa danjere [35], men li ka reyaji ak Fe2 atravè reyaksyon Fenton epi li bay yon gwo reyaktif radikal idroksil (OH*)[36]. Kidonk, li se pi domaje nan ROS a biomolekil. Se poutèt sa, li nesesè pou evalye kapasite CCE ak divès fraksyon li yo pou retire H2O2.

Scavenging activities of CEE/fractions, as well as standard antioxidants, were presented in Figure 2C. Notably, all extracts showed a strong scavenging activity on HO, which increased with the increase of sample doses ranging from 0.1 to 1 mg/mL. Moreover, the H2O2 scavenging potential decreased in the order of EAF> WBF>DMF>CEE>WF>HF, ak korespondan kapasite scavenging nan 1.0 mg / mL yo te 84.56,75.24, 67.17,56.18, 50.19, ak 34.95 pousan, respektivman, ki te pi ba anpil pase sa yo ki nan VC (98.03 pousan).

Pami tout fraksyon, EAF te montre pi ba valè IC50 (ICs0= 0.098±0.013 mg/mL), epi li te siyifikativman pi wo pase sa ki nan VC (0.024±0.006 mg/mL). Sa a ka akòz prezans nan konpoze segondè fenolik ak flavonoid nan EAF a, ki lajman li te ye yo jwe yon wòl enpòtan kòm antioksidan nan sistèm byolojik. Nan etid resan nou an, nou te demontre kapasite EAF ki soti nan E.fragilis pou pwoteje Tetrahymena pyriformis kont domaj oksidatif H2O2-pwovoke [37].

Analiz done nou an te montre ke, menm jan pou rezilta DPPH" ak ABTS* plis, yo te note yon gwo korelasyon pozitif nan valè ICs0 pou scavenging H2O2 ak tou de kontni TP (r=0.926; p.<0.01) and="" tf="" content="" (r=""><0.01)(table 5).="" in="" their="" study,="" sroka="" and="" cisowski="" [38]="" reported="" also="" a="" positive="" correlation="" between="" phenolic="" compounds="" with="" ho2-scavenging="" ability.="" according="" to="" these="" authors,="" the="" ho2-scavenging="" depended="" strongly="" on="" the="" number,="" positions,="" and="" the="" model="" of="" substitution="" of="" oh="" bonded="" to="" the="" aromatic="" ring="" of="" phenolic="">

2.6.4. Diminye pouvwa

Pouvwa rediksyon yon ekstrè aji kòm yon endikatè nan aktivite potansyèl antioksidan li [39, A40]. Potansyèl antioksidan estime pa kapasite antioksidan pou diminye fè (Fe3) nan klori ferrik fèr (Fe2 plis). Anjeneral, pwopriyete rediksyon yo atribiye a prezans nan ekstrè plant nan rediksyon, ki rekonèt yo fè aksyon yo lè yo kase chèn radikal lib la lè yo bay yon atòm idwojèn [41].

Figi 2D montre koub dòz-repons pou rediksyon pouvwa ekstrè E. fragilis. Li konnen ke pi wo absòbe a nan 700 nm, se pi gwo kapasite nan rediksyon. Nan etid aktyèl la, CEE ak senk fraksyon li yo te montre konsiderab rediksyon pouvwa nan yon fason ki depann de konsantrasyon.

EAF la te montre aktivite antioksidan maksimòm (EC{{0}}.136± 0.{{{10}}13 mg/mL) an konparezon ak VC(EC{{4 }}.083± 0.005 mg/mL).Sa a te byen swiv pa WBF (EC50=0.180 ± 0.028 mg/mL), DMF. (EC50=0.319 ± 0.031 mg/mL), CEE (EC50=0.334±0.029mg/mL), ak WF (EC{50=0.398±0.064 mg/mL) .HF trailed dèyè ki montre minimòm diminye aktivite pouvwa (EC5s0 =0.626±0.068 mg/mL) konpare ak lòt fraksyon. Konklizyon sa yo sijere ke EAF ka genyen divès kalite konpozisyon endividyèl ki gen yon aktivite efikas ak pisan rediksyon pouvwa. Syantis yo te jwenn ke ekstrè acetate etil ta ka sèvi kòm antioksidan fò [42].

Yo te obsève korelasyon pozitif ant rediksyon pouvwa ak tou de kontni TP ak TF (r=0.975; p<0.01 and="" r="0.987;"><0.01; respectively).these="" correlations="" confirmed="" the="" contribution="" of="" phenolic="" compounds="" in="" the="" reducing="" power="">

2.6.5. Phosphomolybdenum Essay

TAC nan CEE a ak fraksyon li yo ak VC yo te evalye lè l sèvi avèk fosfo-molybdène tès la ak eksprime kòm ECs0, ki se konsantrasyon an bay 0.5 nan absòbe. Metòd la te baze sou rediksyon Mo (VI) a Mo (V) pa ekstrè yo fòme yon konplèks fosfat vèt / Mo (V) nan pH asid ak absòpsyon maksimòm nan 695 nm [43].

As shown in Figure 2E, the total antioxidant capacity of CCE/fractions and VC correlated well with increasing concentrations in the range of 0.1 to 1 mg/mL.Of the CEE fractions, the ECs0 values ranged from 0.159±0.019 to 0.604±0.073 mg/mL, with a descending order of EAF>WBF> DMF> CEE >WF>HF(p<0.05), which="" indicates="" that="" eaf="" and="" hf="" had="" the="" highest="" and="" lowest="" antioxidant="" activity,="" respectively.="" this="" activity="" could="" be="" due="" to="" the="" presence="" in="" eaf="" of="" various="" phenolic="" compounds="" that="" might="" possess="" antioxidant="" activity.="" vc,="" which="" is="" the="" positive="" control,="" displayed="" the="" lowest="" ec5o="" value="" (0.095±="" 0.008="" mg/ml)="" in="" comparison="" to="" all="">

Yo te obsève yon korelasyon trè enpòtan ant aktivite antioksidan total ak tou de kontni TP ak kontni TF (r=0.978 pou tou de;p<0.01) and="" is="" shown="" as="" presented="" in="">

2.6.6. -Karotèn-Linoleate Modèl Sistèm

Nan modèl asid -karotèn-linoleik la, molekil -karotèn ki trè enstore yo sibi dekolorasyon rapid akòz radikal gratis linoleate ki te pwodwi pa oksidasyon asid linoleik [44]. Sipleman ak antioksidan ta ka minimize oksidasyon -karotèn pa netralize radikal gratis linoleat, e konsa anpeche blanchi -karotèn [45].

Antioxidant activity of CCE/fractions and BHT, as measured by the β-carotene-linoleate model, are shown in Figure 2F. All tested extracts showed concentration-dependent scavenging activity. The EAF, which contained the highest amount of phenolics and flavonoids contents, showed a significant effect in inhibiting β-carotene bleaching, reaching 74.75%at a concentration of 1mg/mL. WBF, CCE, DMF, HF, and WF inhibited the oxidation of β-carotene by 51.61,58.12,50.09,41.39, and 31.66% respectively, at the same concentration. Overall, decreasing antioxidant activity was depicted as EAF> WBF> CEE>DMF>HF>WF.

EAF la te montre valè minimòm IC50(IC{50=0.127 ± 0.{{10}}42 mg/mL) an konparezon ak BHT (ICs {{ {5}}.049 ± 0.0{01 mg/mL). WBF. CCE. DME. NOU. ak HF te montre konparativman pi wo ICs0 valè de 0.5±0.111 mg/mL, 0.998 ± 0.101 mg/mL, 1.073± 0.084 mg/mL, 1.402±0.058 mg/mL, ak 2.209±0.081 mg/mL, respektivman.

Yo te obsève yon korelasyon siyifikatif nan yon fason pozitif ant karotèn oksidasyon scavenging ak tou de kontni TP (r= 0.850;p<0.05) and="" tf="" content="" (r=""><0.05)(table 5).="" this="" result="" suggests="" that="" eaf="" may="" contain="" some="" antioxidants="" that="" can="" inhibit="" the="" formation="" of="" hydroperoxide="" and="" stop="" the="" radical-chain="" reaction="">

The involvement of reactive oxygen species (ROS) in several pathological situations has been growing recently. Bioactive compounds are gaining interest thanks to their potent antioxidant activity, but their complexity imposes the development of many methods to evaluate the antioxidant activity and the effectiveness of these chemical compounds. Thus, in this study, CEE and its fractions have been investigated for their antioxidant potential using six assays: DPPH, ABTS, H>O, RP, TAC, ak -karotèn. Pakonsekan, nou te montre ke aktivite antioksidan ki pisan nan CEE ak fraksyon li yo te montre pi wo aktivite scavenging, e sa ka fòtman akòz konpozisyon yo soti nan asid fenolik ak flavonoid tankou asid galik, rutin, ak quercetin.