Pati 1 Efè prevantif nan glikozid feniletanòl ki soti nan Cistanche Tubulosa sou fibwoz epatik serom albumin ki pwovoke nan rat

Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com

Résumé

Background:Cistanche tubulosa se yon medikaman tradisyonèl Chinwa èrbal ki lajman itilize pou reglemante iminite.Phenyl etanòl glikozid soti nan cistanche(CPhGs) ki soti nan plant sa a se materyèl prensipalman efikas. Objektif etid sa a se te evalye efè prevantif ak terapetik CPhG yo sou fibwoz epatik BSA pwovoke nan rat ak mekanis molekilè ki gen rapò ak selil stellate epatik yo. Biejiarangan (BJRG), yon lòt medikaman tradisyonèl Chinwa èrbal, te itilize kòm yon kontwòl pozitif. Metòd: Nan eksperyans in vivo, 75 rat SD yo te owaza divize an 6 gwoup: nòmal (trete dlo distile), modèl (trete BSA), dwòg pozitif (trete BSA plis BJRG 60{{29} } mg/kg/jou), ak BSA-trete plis CPhGs (125, 250, ak 500 mg/kg/jou) gwoup. Endis fwa ak larat, nivo serik aspartate aminotransferaz (AST), alanin aminotransferaz (ALT), asid hexadecenoic (HA), laminin (LN), tip III prokolagen (PCIII), tip IV kolagen an (IV-C), idroksiprolin ( Hyp), ak transfòmasyon faktè kwasans 1 (TGF- 1) yo te mezire nan fwa rat. Yo te evalye klas istopatolojik pou fibwoz fwa pou chak gwoup lè l sèvi avèk H&E ak tach trikrom Masson la. Ekspresyon TGF- 1, kolagen I (Col-I), ak kolagen III (Col-III) te detèmine pa yon metòd tach imunohistochimik. Efè sa yo te evalye plis nan vitro lè yo detèmine nivo ekspresyon NF-κB p65 ak Col-I pa analiz PCR an tan reyèl. Ekspresyon pwoteyin Col-I te egzamine tou pa Western blotting. Rezilta: Tout gwoup dòz (125, 250, ak 500 mg/kg/jou) nan CPhG yo siyifikativman redwi endèks fwa ak larat, diminye ALT, AST, HA, LN, PCIII, nivo serik IV-C, Kontni TGF- 1 (P <0.01, p=""><0.01, ak="" p=""><0.01), ak="" kontni="" hyp.="" cphgs="" tou="" ansibleman="" soulaje="" anfle="" nan="" selil="" fwa="" yo="" ak="" efektivman="" anpeche="" necrosis="" epatosit="" ak="" enfiltrasyon="" selil="" enflamatwa.="" rezilta="" imunohistochimik="" yo="" te="" montre="" ke="" cphgs="" siyifikativman="" redwi="" ekspresyon="" tgf="" -="" 1="" (p=""><0.01, p=""><0.01, ak="" p=""><0.01), col-i,="" ak="" col-iii.="" efè="" in="" vitro="" nan="" cphgs="" (100,="" 75,="" 50,="" ak="" 25="" ug="" ml)="" sou="" hsc-t6="" te="" montre="" ke="" cphgs="" siyifikativman="" redwi="" ekspresyon="" mrna="" nan="" nf-κb="" p65="" ak="" col-i,="" ak="" cphgs="" tou="" downregulated="" ekspresyon="" pwoteyin="" col-i.="" konklizyon:="" cphg="" yo="" gen="" yon="" efè="" siyifikatif="" anti-epatik="" fibwoz,="" epi="" yo="" ka="" itilize="" kòm="" ajan="" epatoprotective="" pou="" tretman="" fibwoz="">

Mo kle: Fibwoz epatik, Cistanche tubulosa, Phenylethanol glycoside, Chemokine BSA, Prevansyon ak terapi.

Background

Fibwoz epatik se yon repons gerizon blesi nan blesi grav nan fwa ki rive nan patojèn nan epatit kwonik pwovoke pa plizyè faktè. Faktè sa yo se enfeksyon viral, abi alkòl, kolestaz, ak maladi metabolik ak otoiminitè [1-3]. Akimilasyon pwogresif matris ekstraselilè (ECM) ak diminye renovasyon deranje achitekti nòmal fwa a, sa ki lakòz fibwoz epatik [4]. Fibwoz epatik se kritik nan maladi fwa kwonik epi li souvan devlope nan siwoz irevokabl ak kanserojèn. Kounye a, pa gen okenn metòd oswa dwòg efikas pou tretman fibwoz epatik. Se poutèt sa, li ijan pou jwenn yon dwòg anti-epatik fibwoz ki pral bese pwogresyon nan blesi fwa nan fibwoz ak kansè.Cistanche tubulosaW (nan fanmi Orobanchaceae) se yon plant parazit ki lajman grandi nan rejyon sid Xinjiang nan peyi Lachin [5]. Anjeneral, moun yo sèvi ak li pou dinamize ren yo, nouri san an, detann entesten an, ak retade senesans. Li ofisyèlman nan lis famakope Chinwa [6]. C. tubulosa gen yon varyete de eleman aktif. Men sa yo enkliPhenyl etanòl glikozid soti nan cistanche(CPhGs), iridoid, ak polisakarid. Kòm youn nan anpil eleman aktif nanC. tubulosa, CPhG yo te montre efè antioksidan konvenk, anti-fatig, neuroprotective, ak anti-enflamatwa nan tou de etid in vivo ak nan vitro [7]. Nan dènye ane yo, yo te rapòte ke CPhGs(Phenyl etanòl glikozid soti nan cistanche) gen efè epatoprotective. Mekanis potansyèl ki kache efè sa yo se scavenging nan radikal gratis, pwoteksyon nan manbràn epatik, imunoregulasyon, anpèchman nan apoptoz, anpèchman nan ekspresyon HBsAg ak HBeAg, ak anpèchman nan replikasyon ADN HBV ak lòt moun [8-11]. Sepandan, kèk etid nan literati a adrese efè a fibwoz anti-epatik nan grafik. Se poutèt sa, etid sa a te vize mennen ankèt sou efè a fibwoz anti-epatik nan GPhCs lè l sèvi avèk yon modèl nan albumin serik bovine (BSA) pwovoke fibwoz epatik nan rat. Mekanis molekilè ki gen rapò yo te envestige nan selil HSC-T6.

Metòd

Pwodwi chimik ak reyaktif

Yon twous Hydroxyproline (Idroliz alkalin) (Lot: 20140616) te achte nan men Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (Lachin). Rat TGF- 1 sandwich ELISA twous (Lot: 238240615) yo te achte nan men Lianke Biotech Co, Ltd (Lachin). Lapen Anti-Collagen I antikò (Lot: 140619), Lapen Anti-Collagen III antikò (Lot: 980788 W), ak lapen Anti-TGF- 1 antikò (Lot: 140619) te bay Beijing Biosynthesis Biotechnology Co., LTD (Lachin). Anvlope ak serom mouton nòmal (likid k ap travay) (Lot: WP141214), PV-6000 (Lot: WK141225), ak twous DAB (Lot: K136621D) yo te achte nan men Zhongshan Golden Bridge Biotech Co., Ltd. (Lachin) . Deteksyon antikò prensipal yo te fèt lè l sèvi avèk 2. Solisyon Antikò (Alk-Phos. Konjige, Anti-lapen) ak 2. Solisyon Antikò (Alk-Phos. Konjige, Anti-sourit) (anpil: 272387) te achte nan men Invitrogen Company (USA). ). Albumin serik bovin (BSA) (Lot: SLBG8239V) te achte nan men Sigma (USA). Anvan w itilize, BSA te prepare nan 18 g/L nan saline nòmal, bakteri yo retire pa filtraj, epi BSA estoke nan 4 degre. Adjuvant enkonplè Freund ki gen 1 g lipid nan cheve mouton (Lot: AF0220LA14, Shanghai Yuan ye Bio-Teknoloji co, Ltd (Lachin,) te melanje ak 2 g parafine likid (Lot: 20130815, Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd (Lachin,), esterilize nan yon otoklav vapè, epi estoke nan 4 degre. Yo te jwenn dwòg pozitif BJRG la kòm tablèt Biejiarangan nan Inner Mongolia Furui Medical Science Co., Ltd. (Lachin). Yo te prepare aksyon dwòg BJRG lè yo fonn. Tablèt BJRG nan dlo distile nan yon konsantrasyon 600 mg / kg.

Materyèl plant yo

C. tubulosa(Fanmi Orobanchaceae) te achte nan rejyon Minfeng nan Xinjiang nan Lachin. Materyèl la te otantifye pa chèchè Jun Zhao, laboratwa kle pou medsin uyghur, Enstiti Materia Medica nan Xinjiang. Espesimèn bon yo te depoze nan Enstiti a nan Materia Medica nan Xinjiang.

Preparasyon CPhGs(Phenyl etanòl glikozid soti nan cistanche)

Seche ak tranche rizom nanC. tubulosa(6.0 kg) yo te youn apre lòt ekstrè anba rflu twa fwa ak 70 pousan etanòl, epi yo te retire sòlvan an bay ekstrè etanòl la. Ekstrè etanòl yo te pirifye lè l sèvi avèk AB-8 résine pou jwenn glikozid fenil etanòl (CPhGs). Solisyon Stock nan CPhG yo itilize pou diferan gwoup dòz nan etid bèt (500 mg / kg, 250 mg / kg, ak 125 mg / kg, respektivman) yo te fonn nan 0.5 pousan (5 g / L) karboksimetil seluloz (sèl sodyòm).

Kantifikasyon CPhGs(Phenyl etanòl glikozid soti nan cistanche)

Sa ki nan de eleman (echinacoside ak acteoside) nan CPhG yo te detèmine pa HPLC lè l sèvi avèk yon metòd deja rapòte (Zhang et al. 2004) [12]. Yo te fè HPLC lè l sèvi avèk yon Shimadzu LC-10Yon HPLC ekipe ak yon detektè UV. Kolòn HPLC a se te yon kolòn Phenomenex Gemini ODS (250 × 4.6 mm, 5 μm). Faz mobil izokratik la konsiste de metanol-acetonitrile -1 pousan asid acetic (15:10:75, v/v/v). Elisyon te pou 40 min epi to koule a te kenbe nan 0.6 mL / min. Tanperati kolòn nan te kenbe konstan nan 30 degre. Deteksyon UV te nan 334 nm.

Bèt ak liy selil HSC-T6

[Klas SPF] an sante granmoun gason Sprague-Dawley (SD) rat (180-220 g) te achte nan Xinjiang Medical University Animal Center, Lisans No .: SCXK (Nouvo) 2011-0004. Rat yo te manje manje espesifik san patojèn (SPF). Tout pwosedi ki gen rapò ak eksperyans bèt yo te apwouve pa Komite Etik bèt nan Premye Lopital Afilye nan Xinjiang Medical University. Rat yo te loje nan kalòj anba kondisyon anviwònman kontwole (25 degre ak yon sik limyè / fè nwa 12 h) epi yo te gen aksè gratis nan manje estanda granules rat ak dlo tiyo. Rat yo te aklimate anvan tretman an. Yon liy selil epatik imòtalize rat, HSC-T6, te jwenn nan Wuhan Procell Gene Biotechnology Co., LTD. (Wuhan, Lachin). Selil HSC-T6 yo te kiltive nan Dulbecco's Modified Eagle's Medium (High Glucose) (DMEM, Beijing, Lachin) complétée ak 10 pousan serom fetis bovine (Gibco, Amerik di Sid), 100 IU / ml penisilin, ak 100 ug / ml streptomycin (Beijing). , Lachin) nan yon enkibatè imidite nan 37 degre ak 5 pousan CO2.

BSA-pwovoke blesi fwa ak tretman

Swasannkenz rat SD yo te owaza divize an sis gwoup: Nòmal (dlo distile-trete), modèl (BSAtreated), dwòg pozitif (BSA-trete plis BJRG 600 mg/kg/jou), ak BSA-trete plis CPhGs.(Phenyl etanòl glikozid soti nan cistanche)(125, 250, 5{{20}}0 mg/kg/jou) gwoup. BSA-trete plis CPhGs (125, 250, 500 mg/kg/jou) gwoup yo te gen 13 rat nan chak gwoup, ak lòt gwoup la te gen 12 rat nan chak gwoup. Modèl BSA-induit blesi fwa a divize an sansibilizasyon prensipal ki te swiv pa yon atak iminolojik) [13]. Eksepte pou gwoup nòmal la, lòt gwoup yo te administre plizyè piki lar ak 0.5 ml (9 mg/ml) adjuvant enkonplè BSA Freund nan jou 1, jou 15, jou 22, jou 29, ak jou 36 pou sansibilizasyon prensipal. Sèt jou apre senkyèm piki a, yo te jwenn san nan plèks venn retin nan rat epi yo teste pou anti-kò albumin serom. Antikò BSA nan serom rat te detekte pa yon metòd difizyon doub agar. Piki atak la te fèt pa administre 0.4 ml BSA nan saline nòmal te nan venn caudal nan BSA antikò-pozitif rat de fwa pa semèn pou dis fwa. Konsantrasyon yo ak tan nan piki yo te 5.00, 5.50, 6.00, 6.50, 7.00, 7.50, 8.50, 9.00, 9.50 ak 10.00 g/L nan jou 46, jou 50, jou 53, jou 57, jou 60, jou 64, jou 67, jou 71, jou 74 ak jou 78, respektivman. Nan gwoup nòmal la, saline nòmal yo te itilize pou piki iminolojik prensipal (sansiblite) ak segondè (atak) olye pou yo BSA, ak lòt kondisyon yo te menm jan ak sa yo ki nan gwoup modèl la. Gwoup nòmal la te administre oralman dlo distile ak yon dòz 10 ml / kg / jou. Gwoup modèl la te administre oralman 10 ml/kg/jou 0.5 pousan CMC-Na solisyon. Gwoup dwòg pozitif la te administre oralman 600 mg / kg / jou BJRG. BSA-trete plis CPhG yo (125,

250, ak 500 mg / kg / jou) gwoup yo te administre oralman 125, 250, ak 500 mg / kg / jou CPhGs(Phenyl etanòl glikozid soti nan cistanche), respektivman. Rat dòz chak jou kontinye pandan de semèn apre dènye piki a. Apre peryòd eksperimantal la, rat yo te fè jèn pou 12 èdtan anvan 10 pousan idrat chloral ak Lè sa a, imedyatman euthanize. Echantiyon serom yo te kolekte nan chak rat epi imedyatman itilize. Fwa yo te rekòlte pou de rezon: (1) prezèvasyon nan nitwojèn likid pou twous Hyp ak (2) fikse nan fòmaldeyid 10 pousan pou egzamen histolojik ak imunohistochimik. Tout dire etid yo sou bèt yo te 93 jou.

Endis fwa ak larat

Fwa a ak larat yo te diseke pa laparotomi epi lave ak 4 degre salin nòmal. Apre absòbe dlo depase ak papye filtre, yo te peze fwa a ak larat pou kalkile endis korespondan yo: Pwa ògàn relatif=mas ògàn (g)/mas kò endividyèl (g) × 100 pousan [14].

Eksperyans selilè

Selil HSC-T6 yo te plake nan yon plak 96-byen. Okòmansman, selil yo te kiltive ak DMEM ki gen 10 pousan FBS pou 48 èdtan. Lè sa a, mwayen an te ranplase ak DMEM san FBS pou mouri grangou selil yo pou 12 èdtan. Lè sa a, selil yo te kiltive ak DMEM ki te genyen 5.0 ng/mL TGF - 1 (san FBS) pou 24 èdtan. Finalman, diferan konsantrasyon nan CPhGs(Phenyl etanòl glikozid soti nan cistanche)(100ug/ml, 50ug/ml, ak 25ug/ml), acteoside (6 ug/ml, 3 ug/ml, ak 1.5 ug/ml), ak echinacoside (500ug/ml, 250ug/ml, ak 125ug/ml) yo te pote soti nan plak la nan kat fwa ak enkubasyon pou 48 èdtan.

Analiz PCR an tan reyèl

Nivo ekspresyon mRNA NF-κB, p65, ak kolagen I te detèmine pa PCR an tan reyèl. Pou detèmine ekspresyon mRNA nan selil HSC-T6, selil yo (4 × 105 selil) yo te simen nan plak sis-pou ak 3 mL DMEM ak 10 pousan FBS epi yo te enkube lannwit lan nan 37 degre ak 5 pousan CO2, apre sa medya kilti selil yo. yo te chanje an DMEM san serom. Apre sa, CPhGs(Phenyl etanòl glikozid soti nan cistanche)(100 ug/ml, 50 ug/ml, ak 25 ug/ml), acteoside (6 ug/ml, 3 ug/ml, ak 1.5 ug/ml), ak echinacoside (500 ug/ml). , 250 ug/ml, ak 125 ug/ml) yo te ajoute nan pwi yo. Apre 48 èdtan nan enkubasyon ak CPhGs oswa konpozisyon monomerik, RNA total yo te ekstrè lè l sèvi avèk TRIzol reyaktif (Invitrogen, USA) ak ajite kouray ak klowofòm pou 15 s. Apre li fin chita nan tanperati chanm pou 3 minit, lisat la te santrifuje nan 12,000 × g pou 15 min nan 4 degre. RNA nan faz akeuz te presipite ak izopropanol, epi faz akeuz anwo a te transfere nan yon nouvo tib mikrosantrifij. RNA te presipite lè w ajoute etanòl 0.75 pousan, apre sa tib mikrosantrifij la ak santrifuje nan 12,000 × g nan 4 degre pou pa plis pase 5 min. Yo te retire supernatant la epi yo te cheche RNA a nan tanperati chanm pou 5-10 minit. Ansanm espesifik primè (Sangon, Shanghai, Lachin) ki te itilize pou anplifikasyon rat-aktin [GenBank: NM_031144.3], Kolagen I [GenBank: NM_ 053304.1], ak NF -κB p65 [GenBank: NM_199267.2] jèn yo te fèt lè l sèvi avèk Batch Primer 3. Premye (fw) ak ranvèse (rv) yo te jan sa a: Kolagen I (fw: GGA GAG AGC ATG ACC GAT GG). , rv: GGG ACT TCT TGA GGT TGC CA), NF-κB p65 (fw: CAT ACG CTG ACC CTA GCC TG, rv: TTT CTT CAA TCC GGT GGC GA), -actin (fw: TAA GGC CAA CCG TGA AAA GAT). G, rv: AGA GGC ATA CAG GGA CAA CAC A). Rezilta yo te nòmalize nan mRNA nan jèn nan menaj -aktin kòm yon kontwòl entèn epi yo prezante kòm nivo mRNA relatif. Reyaksyon yo te fèt ak 8 μL iQ SYBR Green Supermix, 1 μL 10 pM pè Jadendanfan, 8.5 μL dlo distile, ak 2.5 μL cDNA. Chak reyaksyon chèn polymerase te fèt nan kondisyon sa yo: 95 degre pou 3 minit, Lè sa a, 40 sik nan 10 s nan 95 degre, 30 s nan 55 degre, ak 10 s nan 55 degre - 95 degre pou ekstansyon, ki te swiv pa yon sèl mezi fluoresans. . Rezilta final yo te dekri ak valè relatif yo (2-ΔΔCt). Sistèm deteksyon PCR an tan reyèl iQ5 te fè kalkil ak analiz.

Analiz Western blot

Kolagen I (Abcam, Cambridge, UK, Art No: ab34710) nivo ekspresyon pwoteyin yo te detèmine pa Western blotting [ak -actin (Lot: 60008-1-lg; Proteintech, Lachin) kòm yon kontwòl antretyen. Ekstrè selil antye yo te prepare lè l sèvi avèk tès Radioimmunoprecipitation (RIPA) (Thermo Scientific, USA) tanpon ak 1 pousan bwason Halt inhibitor proteaz (Thermo Scientific, USA) ak 1 pousan cocktèl Halt inhibitor fosfataz (Thermo Scientific, USA). Konsantrasyon pwoteyin lan te mezire ak quantifiée pa metòd Bradford [18]. Pwoteyin (10-50 ug) te separe sou yon 10 pousan jèl SDS-PAGE epi transfere nan manbràn PVDF (Millipore, USA). Manbràn yo te bloke pou 1 èdtan nan tanperati chanm ak 5 pousan BSA, ak antikò prensipal yo (Anti-Colla gen I antikò, 1:200 dilution oswa sourit mAb nan -aktin, 1:5000 dilution) yo te enkube nan 4 degre lannwit lan. Alk-Phos ki koresponn lan. antikò segondè konjige yo te enkube nan tanperati chanm. Finalman, manbràn yo te lave twa fwa ak 1 × Tris-HCl saline ak 0.1 pousan Tween 20, ak siyal yo te tcheke ak vizyalize pa GEL DOC XR Imaging System (Bio-Rad). Analiz Densitometrik te fèt sou pwoteyin ki enterese yo ak nòmalize nan -aktin pa lojisyèl GEL DOC Image Studio (Bio-Rad). -aktin te itilize kòm kontwòl entèn la.

Analiz estatistik

Yo te aplike tès nòmal Shapiro-Wilk ak tès omojèn divèjans Levene pou verifye nòmalite ak You et al. DARU Journal of Pharmaceutical Sciences (2015) 23:52 Paj 4 nan 13omojèn nan divèjans. Analiz de divèjans (ANOVA) ki te swiv pa tès post hoc Tukey a te itilize pou idantifye diferans estatistik ki pa omojèn, done nòmalman distribye. Yo te itilize tès Kruskal-Wallis ki pa parametrik pou analize done ki pa nòmalman distribiye oswa omojèn. Rezilta yo te eksprime kòm mwayen ± SD. Yo te fikse siyifikasyon nan P < 0.05.="" tout="" done="" yo="" te="" analize="" pa="" lojisyèl="" spss="" 16.0="" (xinjiang="" medical="">

Rezilta yo

Detèminasyon kantite CPhGs

CPhG nan C. tubulosa gen de glikozid alkòl fenilethyl, echinacoside, ak acteoside, epi analiz HPLC (figi 1) detèmine kontni yo nan CPhG yo se 42.71 ± 0.42 pousan ak 14.27 ± {{7. }}.18 pousan , respektivman.

Endis fwa ak larat

Kòm yo te montre Tablo 1, endis fwa ak larat gwoup modèl la te ogmante anpil [P <0.01, p=""><0.05]. endis="" fwa="" ak="" larat="" nan="" dwòg="" pozitif="" bjrg="" ak="" cphg="" nan="" diferan="" gwoup="" dòz="" yo="" te="" siyifikativman="" redwi="" konpare="" ak="" gwoup="" modèl="" [pliver="0.004," pliver="0.003," pliver="0." 004,="" pliver="0.005;" pspleen="0.017," pspleen="0.027," pspleen="0.024," pspleen="0.070," respektivman].="" endis="" fwa="" ak="" larat="" yo="" te="" pi="" ba="" pase="" gwoup="" modèl="">

Efè CPhG yo sou ALT, aktivite AST, ak makè fibwoz fwa

Nan etid la prezan, nivo serik anzim epatik AST ak ALT yo te ogmante siyifikativman nan gwoup modèl la, ki reflete domaj epatoselilè nan rat fibwoz fwa BSAinduced. Sepandan, eksperyans yo.

te montre ke tretman ak BJRG (600 mg/kg) ak CPhGs (125, 250, ak 5{{10}}0 mg/kg) siyifikativman redwi AST [PAST <0.0{{{60}}1, past=""><0.001, past=""><0.001, past=""><0.001 ,="" respektivman]="" ak="" alt="" [palt="0.117," palt="0.139," palt="0.189," palt="0.255," respektivman]="" nivo="" nan="" rat="" fibwoz="" epatik.="" .="" (tablo="" 2).="" nivo="" ha,="" ln,="" pc="" ak="" iv-c="" nan="" rat="" modèl="" yo="" te="" ogmante="" siyifikativman="" [pha=""><0.001, pln=""><0.001, ppciii="0.002," piv-c=""><0.001, respektivman].="" konpare="" ak="" gwoup="" modèl="" la,="" nivo="" ha="" [pha="0.009," pha="0.007," pha="0.009," pha="0.023," respektivman],="" ln="" [pln="0.011," p="" ln="0.004," p="" ln="0.026," p="" ln="0.069," respektivman],="" pc="" iii="" [p="" pciii="" {{="" {47}}.006,="" p="" pciii="0.067," p="" pciii="0.136," p="" pciii="0.296," respektivman],="" ak="" iv-c="" [p="" iv-c="">< 0.001,="" p="" iv-c=""><0.001, p="" iv-c=""><0.001, p="" iv-c=""><0.001, respektivman]="" nan="" rat="" yo="" te="" siyifikativman="" diminye="" pa="" bjrg="" (600="" mg="" kg)="" ak="" cphgs="" nan="" diferan="" gwoup="" dòz="" (125,="" 250,="" ak="" 500="" mg/kg)="" (tablo="" 3).="" kontni="" hyp="" ak="" tgf-="" 1="" kontni="" kolagen="" an="" te="" detekte="" tou="" lè="" yo="" mezire="" nivo="" hyp="" nan="" tisi="" fwa="" a.="" jan="" yo="" montre="" nan="" tablo="" 4,="" hyp="" an="">nivo nan gwoup modèl la te siyifikativman pi wo pase gwoup nòmal la, men li te siyifikativman diminye nan gwoup BJRG ak diferan gwoup dòz CPhG yo. Konsantrasyon epatik TGF{{0}} gwoup modèl la nan rat yo te ogmante anpil [P <0.001]. konpare="" ak="" gwoup="" modèl="" la,="" nivo="" tgf-="" 1="" nan="" dwòg="" pozitif="" la="" ak="" diferan="" gwoup="" dòz="" cphg="" yo="" te="" siyifikativman="" diminye="" [p="" tgf-="" 1=""><0.001, p="" tgf-="" 1="">< 0.001,="" p="" tgf="" -="" 1="">< 0.001,="" ptgf="" {-="" 1="">< 0.001,="" respektivman].="" rezilta="" yo="" rezime="" nan="" tablo="">

Egzamen istopatolojik

Obsèvasyon nan seksyon tisi fwa nòmal ki tache ak H&E ak trikrom Masson montre lobule epatik diferan ak sinusoid epatik. Estrikti tisi fwa a nan rat modèl yo te dezòdone, ak tisi fwa a ak sinusoid epatik yo te ranplase pa yon gwo kantite tisi konjonktif. Sepandan, plis nòmal cytoarchitecture ak mwens tisi konjonktif yo te detekte nan gwoup tretman an pase sa yo ki nan gwoup modèl la.

H&E tach

Nan gwoup nòmal la, yo te obsève entegrite estriktirèl lobule epatik san zòn pòtal nòmal ak sinusoid epatik yo. Kòd epatik yo te ranje nan yon mòd lòd, ak nwayo a wonn ak klè. Nwayo yo sitiye nan sant selil la, ak sitoplasm abondan. Se sèlman zòn pòtal la ki gen yon ti kantite tisi fib (figi 2a). Nan gwoup modèl la, estrikti lobular la te domaje anpil. Selil fwa yo te montre yon ti kras koripsyon dlo, sitou koripsyon balon ak / oswa koripsyon gra. Yo te obsève fòmasyon nan enfiltrasyon selil enflamatwa, anpil ipèrplasi tisi fib, fòmasyon nan yon gwo kantite septum fib, fann lobule, ak siyifikatif pwopagasyon selil fwa yo. Obsèvasyon sa yo konfime siksè nan etablisman an nan rat iminitè blesi modèl bèt nan fibwoz epatik (figi 2b). Konpare ak gwoup modèl la, te gen yon rediksyon nan enfiltrasyon selil enflamatwa nan diferan CPhG yo. Epitou obsève yo te mwens nekwoz ak koripsyon gra nan selil fwa kòm byen ke soulajman fibwoz. CPhGs siyifikativman bese patoloji nan fibwoz epatik BSA-pwovoke nan rat, soulaje anfle nan selil fwa yo, ak efektivman anpeche necrosis epatosit ak enfiltrasyon selil enflamatwa, sijere ke CPhGs fè egzèsis yon efè pwoteksyon sou fibwoz epatik BSA-induit rat. (figi 2c–f). Tach trikrom Masson nan gwoup nòmal la, tisi fwa a te nòmal. Zòn pòtal epatik la te montre yon ti kantite fib kolagen an ble, ak tisi fwa a te nòmalman estriktire (figi 3a). Konpare ak tisi fwa a nan gwoup nòmal la, tisi fib pwopagasyon pa feyè santral la ak elaji nan parenchyma fwa a. Fib Kolagen pwolonje ak lye ak

anvlope tout lobil la ak antoure venn santral la. Efè sa yo, ansanm ak fibwoz epatosit, domaj estriktirèl lobular, fibwoz periportal, ak fòmasyon pseudolobule (Fig. 3b) bay prèv ke modèl la te etabli. Konpare ak gwoup modèl la, fib kolagen an nan gwoup kontwòl dwòg pozitif yo te lejèman pwolonje deyò nan zòn pòtal periferik la (figi 3c). Konpare ak gwoup modèl la, fib kolagen an nan diferan gwoup dòz CPhG yo te siyifikativman redwi, pwopagasyon fib te anpeche, ak pwopagasyon tisi fib nan parenchyma fwa a siyifikativman redwi. Rezilta sa yo sigjere ke CPhGs pwoteje rat soti nan BSA-induit fibwoz epatik (Fig. 3d-f).

Tach imunohistochimik

Sa ki enpòtan, ekspresyon kolagen an tip I ak kolagen an tip III jwe wòl esansyèl nan devlopman fibwoz epatik, ak jenerasyon yo ak depo nan tisi fwa a ta ka sèvi kòm yon detèminan enpòtan nan efikasite nan fibwoz anti-epatik. Rezilta yo rezime nan Tablo 5

Kolagen tip I

Gwoup nòmal la te eksprime kalite kolagen an I sitou nan veso sangen yo ak zòn pòtal la. Gwoup modèl la trè eksprime kolagen tip I vaskilè fibwoz nan zòn pòtal yo. Nan espas Disse, yo te obsève tach kolagen an tip I tach oswa kòm yon distribisyon patch. Kolagen anvlope septa fib pou fòme pseudolobule. Nan eksperyans sa yo, yo te fòme mwens septa fib pou BJRJ (600 mg/kg) ak diferan gwoup dòz CPhGs (125, 250, ak 500 mg/kg) [PCol I=0.002, PCol I {{ 6}}.001, PCol I=0.023, ak P Col I=0.044, respektivman]. Rezilta semiquantitative yo te revele ke ekspresyon kalite kolagen an I yo te siyifikativman pi ba konpare ak gwoup modèl la (figi 4).

Kolagen tip III

Kolagen tip III te fèb eksprime nan gwoup nòmal la, ak zòn periferik ki antoure pòtal la ak venn epatik parèt yon ti kantite amann jòn olye pou yo fib kontinyèl (figi 5a). Nan gwoup modèl la, fib kolagen an ekspoze kòd lajè ak epè, ki endike ekspresyon fò, sitou ki sitiye nan pòtal la ak zòn tisi fib (figi 5b). Fib kolagen BJRJ (600 mg / kg) ak diferan gwoup dòz CPhGs (125, 250, ak 500 mg / kg) yo te filaman ak distribye nan venn santral la ak zòn pòtal yo. Konpare ak gwoup modèl la, fib kolagen an te siyifikativman redwi, tach te pal ak mens, ak tach imunohistochimik te fèb pozitif (figi 5c-f). Rezilta semi-kantitatif sa yo montre ke selil yo eksprime pozitivman nan gwoup dòz pozitif ak diferan [PCol III=0.015, PCol III=0.001, PCol III=0.010, ak P Col III=0.037, respektivman] te diferan de sa yo nan gwoup modèl la.

TGF- 1

Te gen ti ekspresyon TGIF{{0}} nan selil fwa nòmal rat yo. Ekspresyon te limite a yon ti kantite selil entèrstisyèl (figi 6a). Nan gwoup modèl la, ekspresyon TGF- 1 te lajman distribiye nan zòn pòtal la, espas fib, selil epatik stellate, selil enflamatwa, miray sinusoidal la ak sitoplasm. Yon zòn pòtal patikilye montre yon ekspresyon fòtman pozitif ak tach mawon-jòn (figi 6b). Te gen yon ti kantite ekspresyon nan zòn pòtal la ak septa fib BJRJ (600 mg / kg) ak diferan gwoup dòz CPhGs (125, 250, ak 500 mg / kg). Kantite tach pozitif nan gwoup sa yo te siyifikativman redwi konpare ak gwoup modèl la. Tach nan selil entèrstisyèl yo nan septa fib yo ak sitoplasm nan selil enflamatwa te diminye (figi 6c-f). Rezilta semi-kantitatif revele ke BJRJ ak diferan gwoup dòz CPhGs [P TGF- 1=0.001, P TGF- 1 <0.001, p="" tgf-="" 1="0.009," ptgf-="" 1="0" .004,="" respektivman]="" te="" siyifikatif="" konpare="" ak="" gwoup="" modèl="" la.="" kòm="" mansyone="" pi="" bonè="" nan="" atik="" la,="" tgf-="" 1="" se="" yon="" sitokin="" enpòtan="" nan="" fizyopatoloji="">

fibwoz, estimile pwodiksyon an nan matris ekstraselilè [19]. Nou te montre ke nivo TGF- 1 te ogmante nan gwoup modèl la nan yon fason ki konsistan avèk gravite fibwoz fwa a. Nivo ekspresyon TGF- 1 nan fwa a te konsistan avèk nivo serik TGF- 1 yo. Sa a endike ke CPhG yo ka siyifikativman redwi fibwoz fwa akòz ekspresyon TGF - 1 lè yo patisipe nan sentèz ak degradasyon ECM. Ekspresyon kolagen tip I, kolagen tip III, ak TGF- 1 ka detekte pwosesis patolojik fibwoz epatik la. Nivo ekspresyon yo nan gwoup tretman yo te siyifikativman diminye ak ilistre ke CPhG yo ka amelyore aktivite kolagenaz, kenbe ekilib dinamik nan sentèz ECM fwa ak degradasyon, konsa retade ak anpeche fòmasyon nan fibwoz fwa.