Pati 3 Etid yo montre ke otofaji jwe yon wòl enpòtan nan règleman an nan depo selilè LD.

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

REZIME

Prèv émergentes endike ke depo inatandi ti gout lipid (LD) ak peroksidasyon ka akselere estrès òganèl epi li jwe yon wòl enpòtan nan patojèn nan maladi neurodegenerative (NDDs). Nan etid anvan nou an, nou te konfime ke kaempferol (Ka), yon flavonoid natirèl ti molekil, te montre efè neuroprotective sou sourit ak maladi Parkinson (PD) ki te pwovoke LPS. Anplis de sa, etid anvan yo te montre ke otofaji jwe yon wòl enpòtan nan règleman an nan depo selilè LD. Nan etid aktyèl la, nou te montre ke Ka pwoteje kont TH plis pèt newòn ak defisi konpòtman nan sourit PD MPTP / p-induit, akonpaye pa estrès oksidatif lipid redwi nan substantia nigra pars compacta (SNpc). Nan selil newòn kiltive yo, Ka te montre yon seri konsantrasyon relativman an sekirite epi li te siyifikativman siprime akimilasyon LD ak apoptoz selilè pwovoke pa MPP plis. Pli lwen etid endike ke efè pwoteksyon Ka a te depann sou otofaji, espesyalman lipofaji. Kritikman, Ka ankouraje otofaji medyatè degradasyon LD nan lizozòm, ki Lè sa a, soulaje depozisyon lipid ak peroksidasyon ak domaj mitokondriyo ki kapab lakòz, kidonk diminye lanmò newòn. Anplis de sa, AAV-shAtg5-medyatè Atg5 knockdown aboli efè neropwotektif Ka kont oksidasyon lipid nan sourit PD.Cistanche pou amelyore memwaTravay sa a demontre ke Ka anpeche koripsyon newòn dopaminèrjik nan PD atravè anpèchman nan domaj mitokondriyo peroksidasyon lipid-medyatè pa fè pwomosyon lèv-otofaji epi li bay yon potansyèl nouvo estrateji terapetik pou PD ak NDD ki gen rapò.

Tanpri klike la a pou w konnen plis

Entwodiksyon

Maladi Parkinson la (PD) se yon maladi neurodegenerative komen (NDD) ki patolojikman karakterize pa pèt pwogresif newòn dopaminergic (DA) nan substantia nigra pars compacta (SNpc)[1]. Malgre ke etyoloji egzak la ak kou natirèl maladi sa a poko klarifye nèt, anpil pwosesis ak malfonksyònman sistèm nan nivo, ki gen ladan fonksyon mitokondriyo, omeyostaz dopamine, neroenflamasyon, ak otofaji, yo te enplike nan patojèn nan PD [1, 2]. Dènye rapò te revele ke lipotoksisite ki gen rapò ak ti gout lipid (LD) ta ka patisipe nan patoloji PD [3,4].LD yo se òganèl trè dinamik ki sòti nan manbràn retikul endoplasmik (ER) epi nòmalman sèvi kòm sit intraselilè nan depo net lipid [5. ].Dènyèman te montre yo jwe yon wòl pi laj pase depo asid gra (FA) epi patisipe nan anpil maladi. (cistanche para que serve) Pou egzanp, selil myeloid, ki gen ladan makrofaj, lekosit, ak eozinofil, fòme LD an repons a enflamasyon ak estrès,cistanche nan Chinwaak LD yo se sit pwodiksyon ak depo sitokin enflamatwa epi yo plis patisipe nan prezantasyon antijèn ak clearance patojèn [6]. Sa ki enpòtan, nan ateroskleroz, selil kim LD ki rich yo te demontre yo dwe danjere nan tout etap maladi a [7].

Cistanche ka amelyore iminite

Sepandan, LD yo pa te etidye anpil nan sistèm nève santral la (CNS), ak kèk papye rapòte prezans histolojik nan LD nan tisi nan sèvo imen [8,9]. Menm si sa, LD yo ka gen fonksyon enpòtan nan sèvo a, kòm etid resan konfime ke LDs total nan glia akselere neurodegeneration nan yon modèl Drosophila [10]. Yo te rapòte dènyèman ke nan sourit, lwil oliv wouj O-pozitif selil ki chaje lipid, ki gen ladan newòn, glial fibrillary asid protein (GFAP)t astrosit, ak ionize kalsyòm-obligatwa molekil adaptè -1 (IBA{{7} }) t microglia, yo prezan nan anpil rejyon nan sèvo epi yo montre yo patisipe nan pwosesis ki asosye ak laj [11]. Travay anvan nou an te demontre tou ogmante akimilasyon LD nan sèvo a nan yon modèl sourit PD [12]. Ansanm, etid sa yo sijere ke LD yo ka patisipe nan patojèn nan PD, osi byen ke lòt NDDs.

Nòmalman, LDs entraselilè yo degrade nan lizozòm epi yo delivre FAs nan mitokondri pou konsomasyon yo kòm yon sous enèji altènatif pandan peryòd rediksyon eleman nitritif [13]. Sepandan, newòn yo gen yon kapasite ki ba pou konsomasyon mitokondriyo FA pou pwodiksyon enèji [14]. Karakteristik sa a fè newòn yo patikilyèman sansib nan akimilasyon LD ak peroksidasyon. Anplis de sa, akimilasyon nan LDs amelyore pousantaj oksidasyon FA a epi li enpoze presyon ki pèsistan sou chèn transpò elèktron mitokondriyo a, ki ogmante pwodiksyon espès oksijèn reyaktif (ROS) pa konplèks chèn transpò elektwon I ak III [15] pou anplifye estrès oksidatif. Surcharge lipid tou mennen nan pwodiksyon ROS pa sous ekstramitokondriyo tankou nikotinamid adenine dinucleotide fosfat (NADPH) oksidaz ak lòt anzim oksidatif. Konbine ak ekspresyon nan diminye nan anzim antioksidan ak kapasite ki ba pou konsomasyon FA nan newòn, akimilasyon LD medyatè estrès oksidatif epi li ka mennen plis nan domaj mitokondriyo, malfonksyònman lizozomal, otofaji ki defektye, ak aktivasyon an nan repons enflamatwa [16,17]. Sòf si LD yo akimile yo ka anpeche oswa retire, newòn trè aktif sibi fizyoloji, ki bay monte nan neurodegeneration [17]. (cistanche penis) Prèv endike ke pwosesis katabolik lizozom ki te medyatè yo rele otofaji jwe yon wòl esansyèl nan kenbe omeyostazi LD selilè nan tisi miltip [17,18]. An detay,kwasans penis cistancheLD yo ka selektivman sekrete nan autophagosomes epi delivre nan lizozòm pou degradasyon pa lipas asid lizozomal, yon pwosesis ke yo rekonèt kòm lipofaji [19]. Se poutèt sa, vize LD yo ak chemen yo retire otofaj yo ta ka reprezante yon apwòch roman nan jere neurodegeneration.

Etid la nan pwodwi natirèl ak ajan dyetetik kòm sous pou tretman potansyèl NDD ak estrateji te genyen yon enterè menmen nan dènye ane yo [20]. Kaempferol (Ka) se yon ti molekil polifenolik natirèl ki ka jwenn nan yon kantite remèd fèy Chinwa ak sous dyetetik [21]. Yo te rapòte ke Ka fè egzèsis efè anti-bakteri, anti-aje, ak imunomodulatwa, osi byen ke aktivite antioksidan ak neuroprotective [20,22,23]. Précédemment, Ka yo te rapòte yo anpeche enflamasyon nan selil microglial BV2 nan vitro [24] ak ogmante rezistans nan newòn DA nan neroenflamasyon nan vivo [25]. Sepandan, efè Kaon LDs nan PD poko te envestige.

Bay enpòtans LD yo ak koneksyon entim ant LDs, mitokondri, ak otofaji [16], ki tout patisipe nan PD, nou ipotèz ke Ka anpeche peroksidasyon LD ak anpeche DA neurodegeneration nan PD. Nan etid la prezan, nou demontre ke Ka siyifikativman pwoteje kont neurodegeneration nan yon modèl murin PD pa anpeche akimilasyon LD. (Cistanche poud) Plis etid revele ke Ka deklanche otofaji ak redwi akimilasyon nan LDs oksidize pou soulaje malfonksyònman mitokondriyo ak mitokondriyo ROS (mtROS) pwodiksyon, kidonk anpeche lanmò apoptotik newòn.cistanche propiedadesKonklizyon yo jwenn nan etid sa a ka ede dirije desizyon klinik konsènan itilizasyon molekil natirèl Ka a nan NDD tankou PD.

2. Materyèl ak metòd

2.1. Bèt eksperimantal

Sourit C57BL/6J (gason, 4-mwa fin vye granmoun) yo te jwenn nan Nanjing Medical University Animal Core (Nanjing).cistanche tubulosa benefisSourit yo te kenbe ak elve nan Sant Resous Animal nan Fakilte Medsin, Nanjing Medical University, ak nan etablisman bèt nan Nanjing Drum Tower Hospital. Sourit yo lib pou jwenn manje ak dlo nan yon chanm ki gen yon tanperati anbyen 22 degre ±2 degre ak yon sik limyè/fè nwa nan 12:12 h. Tout pwosedi bèt yo te fèt an akò strik ak gid Gid Enstiti Nasyonal Sante pou swen ak itilizasyon bèt laboratwa yo.

2.2.Reyaktif

MPTP(M0896),3-MA(M9281),penicillin-streptomycin (V900929), sodium pentobarbital, and probenecid were purchased from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Kaempferol (HPLC>95%) for in vivo treatment was purchased from Nanjing Jingzhu Biotechnology Co., Ltd (Nanjing, China), kaempferol (HPLC>99.0 pousan ,96,353) pou eksperyans nan vitro yo te jwenn nan Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). BODIPY 493/503 (D3922), BODIPY 581/591 C11 (D3861), ak DHE (D11347) yo te achte nan men Thermo Fisher Scientific. Pou eksperyans bèt, Ka te fonn nan yon solisyon 10 pousan DMSO nan 16 pousan SBE- -CD nan saline esteril. Pou eksperyans selil, Ka te prepare nan DMSO (Sigma-Aldrich) ak PBS (konsantrasyon final DMSO se 0.01 pousan), pH 7.4.

2.3. Endiksyon ak tretman metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) - pwovoke PD modèl sourit

Pou evalye efè Ka nan modèl PD MPTP/p-toksisite, sourit (gason, ki gen laj 4-5 mwa) yo te owaza divize an gwoup trete saline, gwoup trete MPTP, MPTP plis gwoup trete Ka. , ak Ka pou kont li trete gwoup. Nan gwoup MPTP-trete, sourit yo te resevwa MPTP kwonik administrasyon ak yon pwotokòl ki sanble ak sa ki dekri deja [26]: MPTP te fonn nan saline epi yo te enjekte anba lar nan 25 mg / kg ki te swiv pa 250 mg / kg probenecid (fonn nan sulfoksid dimethyl) piki intraperitoneally (ip) nan entèval 1 èdtan chak 3.5 jou sou yon peryòd de 5 semèn. (rasin cistanche) Sourit kontwòl yo te resevwa piki saline ak probenecid. Nan gwoup la MPTP plis Ka-trete, sourit yo te resevwa Ka (50 mg / kg, yon sèl piki / jou pandan eksperyans, Jingzhu Biotechnologie, Nanjing, Lachin) intraperitoneally (ip) chak jou 3 d anvan tretman ak MPTP ak plis pase 5 MPTP la. semèn piki. Yon semèn apre dènye piki MPTP, sourit yo te sibi tès konpòtman avèg pou gwoup yo. Apre, tout sourit yo te anestezi ak 40 mg / kg sodyòm pentobarbital ak sakrifye pou deteksyon pwoteyin nan sèvo ak imuno-istochimi oswa analiz qPCR.

2.4. Operasyon estereyotaksik in vivo ak tretman eksperimantal

Operasyon estereotaksik anba anestezi pentobarbital sodyòm (4 0 mg / kg, ip) te fèt jan sa dekri [25]. Sourit Atg5 ak kontwòl shRNA te transfekte ak vektè anbalaj (AAV-U6-CMV-she-NA-EGFP) pou jenere AAV. Pou mikro-enjeksyon, sourit anestezi yo mete nan yon aparèy estereyotaksik. Yo te enjekte ak 1 μL AV la pa elektwòd vè ki vize DG (AP:-0.3mm; ML: ±0.13mm; DV:{-0.45mm) nan yon vitès. nan 0.25 μL / min. Lè sa a, zegwi a te kenbe pou yon lòt 2-min 2 semèn apre mikro-enjeksyon viris, sourit yo te sibi MPTP-induit PD modèl kondiksyon ak (oswa) tretman Ka.

Atg5 shRNA te jwenn nan Hanbio Biotechnology (Shanghai, Lachin) Co., Ltd. Pou silans Atg5 la, yo te montre primè yo nan Tablo Siplemantè 1.

2.5. Analiz konpòtman

Yon semèn apre piki final la nan MPTP oswa saline, tès la rotarod ak tès poto yo te fèt jan sa dekri anvan [27]. Pou tès rotarod la, sourit yo te aklimate ak rotarod la nan de esè (6 min ak yon vitès akselere 12-20 rpm) pou chak jou pandan 2 jou youn apre lòt anvan yo kòmanse eksperyans la. Lè sa a, sourit yo te teste nan 20 rpm pou 300 s pou lòt 3 jou youn apre lòt. Latansi a tonbe te anrejistre lè l sèvi avèk Rotarod Analiz System (Jiliang, Shanghai, Lachin). Pou tès poto a, sourit yo te mete tèt anlè sou tèt yon poto an bwa vètikal (ki graj sifas, wotè 50 cm, dyamèt 1 cm). Tout sourit yo te abitye ak aparèy la 2 jou anvan tès la ak Lè sa a, teste twa fwa sou twazyèm jou a. Tan total la (T-total, jiskaske sourit la rive nan etaj la ak kat grif li yo) ak tan an vire (T-vire, pou sourit la vire tèt nèt anba) yo te anrejistre. Eksperyans lan te avèg pou gwoup sourit pou chak tès konpòtman ak tès la te fèt twa fwa.

2.6. Koleksyon echantiyon nan sèvo

Apre dènye tès konpòtman yo, sourit yo te anestezi ak pentobarbital sodyòm (40 mg / kg, ip). Pou qPCR, Western blotting, ak segondè-pèfòmans likid chromatografi (HPLC) analiz, tout sèvo yo te rapidman ekstrè soti nan bèt yo Lè sa a, midbrain ak tisi striatum yo te byen vit diseke, pre-jele pa nitwojèn likid. Tout echantiyon yo te estoke nan -80 degre jiskaske analiz yo.

Pou analiz imunohistochimik, sourit yo te perfused trans-cardially ak 4 pousan paraformaldehyde (PFA). Sèvo yo te ekstrè, post-fiks, dezidrate, entegre nan OCT (Tissue-Tek), ak seksyon seri nan sèvo yo te kriseksyone （30 μm pou chak tranch） atravè chak strat antye ak mitan sèvo lè l sèvi avèk yon mikrotom konjelasyon (Leica CM1950, Nussloch, Almay). ). Tout seksyon yo te kolekte nan sis seri separe epi yo te estoke tranch nan sèvo nan 50 pousan gliserin epi yo te jele nan -20 degre jiskaske analiz.

Pou TEM, sourit yo te melanje ak 2.5 pousan glutaraldehyde ak 2 pousan paraformaldehyde jan sa dekri 【12】. Yon ti pòsyon （<1 mm³）="" of="" the="" mesencephalon="" was="" carefully="" sectioned="" and="" incubated="" in="" the="" same="" fixative="" for="" 2="" h="" at="" 4="" ℃.="" specimens="" were="" postfixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide,="" stained="" in="" aqueous="" uranyl="" acetate,="" and="" then="" dehydrated="" and="" embedded="" in="" epoxy="" resin.="" ultrathin="" sections="" were="" stained="" using="" lead="" citrate="" and="" examined="" with="" a="" transmission="" electron="" microscope(jem-1010,="" tokyo,="">

2.6. Analiz imunohistochimik

Tranch sèvo yo te rense nan PBS ki te swiv pa 3 pousan H2O2 pou 10 min answit enkubasyon ak 0.3 pousan Triton X-100 nan PBS konplete ak 5 pousan BSA pou 1 h. Apre sa, glisad yo te enkube ak antikò prensipal yo nan 4 degre lannwit lan nan PBS ki gen 5 pousan BSA nan 4 degre lannwit lan, Lè sa a, lave ak enkubate nan antikò segondè pou 1 èdtan nan tanperati chanm, ki te swiv pa enkubasyon ak diaminobenzidine (DAB) oswa aliye nan. DAPI (Life Technologies, Cat P36931) kòm tach imunofluoresan pou 5 min. Pou Nissl tach, glisad yo te fizyone nan kresyl vyolèt (CV) solisyon (0.1 g kresyl vyolèt, 99 ml H20 ak 1 pousan asid acetic 1 ml) pou 30 min nan tanperati chanm Lè sa a, dezidrate ak alkòl ak ksilèn. Yo te obsève imaj epi yo te pran foto anba yon mikwoskòp Olympus BX52 (Olympus America Inc., Melville, NY, Etazini). Kantite total newòn TH-pozitif ak Nissl-pozitif nan SNpc la te jwenn serolojik lè w itilize metòd fraksyonè optik ak lojisyèl MicroBrightField Stereo-Investigator (MicroBrightField, Williston, VT, USA).

2.7.High-pèfòmans likid chromatography (HPLC) analiz

Echantiyon striatal sourit yo te omojènize ak {{0}}.1 M asid pèklorik (1 mg tisi nan 10{0μL asid perklorik) ak 0.1 mM EDTA, trete pa ultrasons, ak santrifuje a 20,000 rpm pou 30 min jan yo rapòte [27]. Lè sa a, likid supernatant yo te kolekte pou mezire. Faz mobil lan se yon solisyon melanje ki fòme ak 90 mM fosfat sodyòm monobazik, 1.7mM 1-oktan asid sulfonik, 50mM sitrat, 50uM EDTA, 10 pousan acetonitrile ak yon pousantaj koule 0.2 ml/min. An paralèl, pou kalkil koub estanda quantitative, solisyon estanda stock pou dopamine ak dihydroxy-phenyl asid acetic (DOPAC) (Sigma-Aldrich, USA) yo te prepare nan 0.1 M HClO4. Yo te enjekte yon kantite 10 ul nan surnatant prepare oswa solisyon estanda. nan faz mobil lan epi teste pa detektè elektwochimik ESA Coulochem III (Coulochem III, Thermo Fisher Scientific). Yo te mezire echantiyon ak pik yo te kantite. Konsantrasyon monoamin yo te quantifye lè yo konpare ak estanda a lè l sèvi avèk lojisyèl ClarityChrom (Knauer, Almay) ak Lè sa a sa ki nan strat la te konvèti dapre rapò a dilution. Yo te montre koub estanda DA ak DOPAC nan Figi Siplemantè 1a ak b.

2.8. Kilti selil ak tretman

Kilti newòn prensipal mesencephalic yo te fèt jan sa dekri anvan [12].An brèf, tisi mesencephalic sourit C57BL/6 nan jou anbriyon 14/15 (E14/15) yo te retire ak anpil atansyon, mekanikman disosye pou retire manbràn yo ak gwo veso sangen yo, epi answit diseke. Apre sa, yo te dijere ak tripsin-EDTA (Amresco, Solon, OH, USA) epi yo te filtre yo atravè yon filtè 100-um pou jwenn yon sispansyon yon sèl selil. Apre sa, selil yo te plake sou poly-L-lysine-pre-kouvwi plak 12-/{24-byen nan 2.5 × 10 selil degre / ml ki gen mwayen Neurobasal (Cat 21103049, GibcoTM). , Thermo Fisher Scientific, Rockford, USA) complétée ak B27 (2 pousan v:v, Cat 1750404,GibcoTM) ak penisilin / streptomycin (0.5 pousan v:v). Kilti yo te kenbe nan yon chanm imidite (37 degre, 5 pousan CO2 enkibatè). Yo te chanje mwayen kilti a chak 3 jou epi selil yo ka itilize nan 7-10 jou.

Liy selilè: Liy selil SH-SY5Y yo te kiltive nan 10 pousan FBS ak 1 pousan penisilin/streptomycin nan yon enkibatè imidite a 37 degre ak 5 pousan CO2. Nan eksperyans yo, selil SH-SY5Y yo te trete ak MPP plis （200 μM） oswa diferan dòz Ka (0,3,30,60,100,300,600uM) pou 24h.Ka (3,10, 30,60μM,3h) primed-SH- Selil SY5Y yo te ankouraje ak MPPt (400 μM) pou 24 èdtan Ka (30μM, 3h) avèk (oswa san) 3-MA (3mM, 1h) oswa -tokoferol (50μM, 1 h, Sigma-Ald83) ）Primed-SH-SH5Y selil yo te ankouraje ak MPPT (200μM) pou 24 èdtan.

2.9. Vitabilite selil CCK8 tès

Selil Counting Kit-8 (CCK-8 Kit, Selleck, Houston, TX, USA) te detekte vibilite selil ki chanje tretman Ka a. An brèf, selil SHSY5Y yo te simen nan yon 96- byen plak ak Lè sa a, trete ak konsantrasyon diferan nan Ka (3,30,60,100,300,600,600 uM) pou 24h. Lè sa a, yo te ajoute 10ul reyaktif CCK-8 nan chak pi pou 4 èdtan. Finalman, yo te detekte absorbans pa Multiskan Spectrum (Thermo Fisher Scientific) nan 450 nm.

2.10. tès ATP

Nivo ATP selilè yo te detekte pa yon ATP Bioluminescence Assay Twous (Beyotime Biotechnology Co., Lachin) dapre enstriksyon manifakti a. Apre tretman an, selil yo te lysed ak santrifuje nan 12, 000 rpm pou 5 min nan 4 degre ak supernatant yo te kolekte. Solisyon k ap travay （100μL） te ajoute nan 20μL echantiyon nan plak la 96-byen, epi yo te mezire luminesans la imedyatman sou yon lektè microplate otomatik. Mezi ki soti nan tout echantiyon yo te nòmalize nan konsantrasyon pwoteyin.

2.11.Na plis -K plis -ATPase tès

Pou mezi Nat-K plis -ATPase (A070-2-2, Jiancheng, Nanjing, Lachin), selil yo te sonike ak santrifuje nan 600 rpm pou 10 minit pou jwenn supernatant. Solisyon reyaksyon deteksyon Nat-Kt-ATPase yo te ajoute ak enkubasyon dapre enstriksyon manifakti a. Lè sa a, absòbe a nan 660 nm te detekte. Mezi tout echantiyon yo te nòmalize nan konsantrasyon pwoteyin.

2.12. Western blotting analiz

Selil oswa tisi nan sèvo yo te lysed nan tanpon RIPA a (50 mM Tris (pH 7.4),cistanche คือ150 mM NaCl, 1 pousan NP-40 (FNN0021, Thermo), 0.5 pousan deoksikolat sodyòm (D6750, Sigma), 0.1 pousan SDS (74255, Sigma) ak pwoteaz. ak inhibiteurs fosfataz (Roche, Shanghai, Lachin). Konsantrasyon pwoteyin yo te detèmine ak Micro BCA Kit la (Beyotime, Shanghai, Lachin). Yon 30-pwoteyin chak echantiyon te separe pa SDS-PAGE lè l sèvi avèk jèl poliakrilamid TGX (Bio-Rad, Hercules, Kalifòni, USA) epi answit transfere nan manbràn polyvinylidene difluoride (PVDF) (Millipore, Bedford, MA). Apre bloke, manbràn PVDF yo te enkube ak divès kalite antikò prensipal espesifik nan TBST nan 4 degre lannwit lan, Lè sa a, lave ak enkubasyon nan korespondan antikò segondè konjige peroksidaz refor (HRP) pou 1 èdtan nan tanperati chanm. Gwoup imunoreactive yo te vizyalize ak detekte pa chemiluminescence améliorée (ECL) plis reyaktif deteksyon (Pierce, Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL) ak analize lè l sèvi avèk sistèm nan D ImageQuantTM LAS 4000 (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, USA).

2.13.An tan reyèl quantitative(Q)-ak ranvèse transcription (RT)-PCR

RNA total te extrait nan tisi sèvo ak selil kiltive lè l sèvi avèk Trizol reyaktif (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Transkripsyon ranvèse te fèt lè l sèvi avèk twous reyaktif TAKARA PrimeScript RT (TaKaRa, Japon). Realtime qPCR te pote soti lè l sèvi avèk SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems) nan yon enstriman StepOnePlus (Applied Bio-systems). Jadendanfan yo te achte ak valide pa Jeneral la (Shanghai, Lachin). Jadendanfan yo itilize pou qPCR yo te montre nan Tablo Siplemantè 2.

Atik sa a soti nan Redox Biology 41 (2021) 101911