PATI Ⅱ: Metformin Prekondisyone ak Post-kondisyone Pou Redui Blesi Reperfusion Lschemia nan yon Modèl Perfusion machin Normotèrmik ren kochon ak rat ansyen Vivo.
Mar 26, 2022
Kontakte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Tobias M.Huink,Leonie H.Venemal,Rene A.Posma,Nynke J.de Vries, Andrie C.Westerkampl,& et al.
ENTWODIKSYON
Transplantasyon ren se tretman chwa pou pasyan ki gen maladi ren nan etap final la. Malerezman, demann pi wo pase disponiblite ògàn yo.2 Mank sa a te lakòz plis itilizasyon ògàn bon jan kalite ki pa pi bon nan don apre donatè lanmò sikilasyon (DCD). ki se lye nan siyifikativman pi wo ensidans nan fonksyon grèf reta, ki afekte tou de kout tèm ak alontèm rezilta.45 IRI se ki te koze pa andikap sikilasyon san an ak reoxygenation ki vin apre, ki rezilta nan jenerasyon an nan espès oksijèn reyaktif (ROS), inisye yon kaskad nan repons selilè prejidis.67 Gravite iskemi an korelasyon fòtman ak echèk grèf ren bonè apre transplantasyon ren ak kontribye nan ogmante morbidite. Se poutèt sa, ischemi cho (W) pandan rekipere ògàn ak enplantasyon, ak tan ischemi frèt pandan prezèvasyon, respektivman, ta dwe kenbe nan yon minimòm. Estrateji perfusion machin yo ka jwe yon wòl esansyèl nan diminye IRI lè yo bay oksijèn pandan faz ischemik nan don ògàn. Anplis de sa, li bay yon platfòm pou ajoute ajan pwoteksyon posib anvan repèfizyon (prekondisyone) oswa pandan repèfizyon (post-kondisyone) epi li se yon metòd apwopriye pou evalye fonksyon ren a kout tèm ak blesi.9-11
Biguanide lametforminse dwòg ki pi itilize oral antihyperglycemic pou trete pasyan ki gen dyabèt tip 2. Mekanis nan aksyon ak efè yo pleyotropic nanmetforminprensipalman rezilta nan anpèchman konplèks 1 nan chèn respiratwa mitokondriyo a.12-14 Se poutèt sa,metforminka diminye IRI pi lwen pase aksyon glikoz li yo epi li te pwopoze kòm yon ajan pwoteksyon ògàn pandan sikonstans kote IRI rive, tankou transplantasyon.15,16.
Objektif etid sa a se te evalye potansyèl efè benefik nan prekondisyone ak postkondisyone akmetforminsou IRI nan de diferan modèl izole ansyen vivo normothermic perfusion machin (NMP) lè l sèvi avèk ren rat ak porsin.
NURI REN:DRAGON ZÈB CISTANCHE
METÒD
Etid rat
Bèt.Yo te itilize rat gason Lewis ki te peze 270-300 g (Harlan Laboratories, Boxmeer, Netherlands). Komite Enstitisyonèl Swen ak Itilizasyon Animal nan University of Groningen apwouve pwotokòl etid la (DEC6708C). Bèt yo te resevwa swen dapre Lwa Olandè sou Eksperyans sou Animal, swiv Prensip Enstiti Nasyonal Sante nan Swen Animal Laboratwa.
Konsepsyon eksperimantal, rekipere ògàn, ak prezèvasyon.Yon total de 31 rat yo te divize an 6 gwoup (n=5-6 pou chak gwoup; Figi 1). Nan tout gwoup yo, yo te itilize 15 minit nan W ak 24 èdtan nan prezèvasyon frèt pou pwovoke blesi iskemik. Prekondisyone te fèt pa administre 300 mg / kgmetformin(1,1-dimethylbiguanide hydrochloride; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) fonn nan saline (0.9 pousan NaCl) oswa saline pou kont li nan gavaj oral 12 ak 2 èdtan anvan nefrektomi. Saline, 30 mg/Lmetforminoswa 300 mg/Lmetforminte ajoute nan perfusate la kòm ajan post-kondisyone. Konsantrasyon an nan 300 mg / kg pwa kò yo te chwazi, kòm dòz sa a lakòz serommetforminkonsantrasyon ki koresponn ak sa yo jwenn nan imen pandan antretyenmetforminterapi.17
Akizisyon ren yo te fèt ak ti chanjman nan pwosedi DCD, jan sa te dekri anvan an.18 Nan ti bout tan, rat yo te anestezi ak 2-5 pousan izofluran epi yo te fè laparotomi atravè yon ensizyon nan liy mitan. Antikoagulasyon, lè l sèvi avèk 500 IU eparin (Leo Pharma, Ballerup, Denmark), yo te administre atravè venn nan dorsal penile. Apre 15 minit nan WI, yo te fè nefrektomi nan ren gòch la. Atè ren ak urèt la te kanulated. Yo te lanse ren an in situ ak 10 mL saline (37 degre) ak 5 mL 4 degre University of Wisconsin (UW) Cold Storage Solution (Bridge to Life, Columbia, SC). Yon fwa yo retire, ren yo te lave ak 5 mL UW yon lòt fwa ankò epi estoke nan UW pou 24 èdtan nan 4 degre.
Perfusion machin Normothermic.Metòd NMP rat la te dekri anpil pi bonè.18 An brèf, yo te fè NMP pou 90 minit lè l sèvi avèk yon ponp roulo (Ismatec ISM404, Zürich, Swis). Presyon an perfusion te fikse nan 102 mmHg, kontwole nan atè ren an. Nan gwoup kontwòl la, likid la perfusion se 100 mL William's Medium E ki te konplete ak 30 mmol/L HEPES, 50 g/L albumin, ak 7 mmol/L kreyatinin (tout Sigma-Aldrich). Nan gwoup eksperimantal yo, swa 30 oswa 300 mg / Lmetforminte ajoute nan perfusate la. Likid perfusion a te oksijene ak 95 pousan oksijèn ak 5 pousan gaz kabonik ak yon koule 0.5 L/min. Tanperati likid la perfusion te kenbe nan 37 degre lè l sèvi avèk yon beny dlo ak echanjeur chalè (Julabo, Seelbach, Almay). Koule a te anrejistre chak 10 minit, lè l sèvi avèk yon Capteur koule kalibre (ME1PXN Inline, Transonic Systems, Ithaca, NY). Apre NMP, byopsi ren yo te plonje imedyatman nan fòmaldeyid 4 pousan oswa jele nan nitwojèn likid epi imedyatman estoke nan -80 degre.
Figi 1Reprezantasyon chematik nan gwoup eksperimantal yo. Gwoup yo genyen 5-7 ren. HMP, ipotèmik machin perfusion; NMP, perfusion machin normothermic; WIT, tan ischemi cho.
Etid kochon
Bèt.Yo te ranmase ren ki soti nan kochon fi Dutch Landrace nan yon abatwa. Bèt yo te etoudi ak exsanguinated selon pwosedi lokal lokal yo. Pandan ekssanguinasyon, yo te kolekte apeprè 1 L san nan yon veso ki gen 25,000 IU eparin san fraksyon (Leo Pharma). Paske materyèl dechè labatwa yo te itilize, pa gen okenn apwobasyon komite etik bèt yo te mande.
Konsepsyon eksperimantal, rekipere ògàn, ak prezèvasyon.Pou pwovoke blesi iskemik, yo te itilize 30 minit WI. Apre peryòd sa a, ren an te lave ak 180 ml saline nan 4 degre. Touswit apre flòch la, yo te pran yon byopsi kortik (Invivo, Best, Netherlands) epi estoke nan fòmaldeyid 4 pousan tanpon. Pou akomode transpò soti nan abatwa a nan laboratwa a ak kòm yon teknik prezèvasyon, atè ren yo te canulated epi ren yo te tache ak yon konfigirasyon pulsatile presyon kontwole ipotèmik machin perfusion (HMP) (Kidney Assist Transport; Organ Assist, Groningen, Netherlands). ). Yo te perfuze ren yo nan 4 degre lè l sèvi avèk 500 mL UW Machine Perfusion Solution pou 3 èdtan (Bridge to Life, London, UK) avèk oswa san adisyon a nan 2 mg.metformin, ak yon presyon atè mwayèn nan 25 mmHg. Yo te bay oksijèn (100 pousan) nan oksijènasyon an (Hilite LT1000; Medos Medizintechnik AG, Stolberg, Almay) ak yon pousantaj koule fiks de 0.1 L/min.
Perfusion machin Normothermic.Yo te refè ren yo lè l sèvi avèk yon konfigirasyon NMP ansyen vivo pou 4 èdtan ki te dekri deja. Nan etid nou an, ogmante dòzmetforminoswa saline yo te ajoute lè l sèvi avèk yon ponp perfusion. Nan ti bout tan, apre HMP, atè ren yo te canulated ak koule. Yo te canulated uretè a pou koleksyon pipi.Apre, yo te peze ren an, epi yo te pran yon byopsi epi estoke nan fòmaldeyid 4 pousan tanpon pou plis analiz.Apre sa, ren yo te mete nan yon ansyen sikwi NMP presyon-kontwole. NMP te fèt ak 500 mL leucosit apovri, (BioR 02 plis; Fresenius Kabi, Bad Homburg, Almay) otològ, oksijene (kabòdjèn, koule 0.5L/min) san pou 4 èdtan nan yon presyon atè vle di nan. 80 mmHg. Lòt konpoze ki ajoute nan likid la perfusion yo bay nan Tablo S1. Nan gwoup eksperimantal la,metforminfonn nan solisyon laktat Ringer a (20 mg/mL; Baxter, Utrecht, Netherlands) te enfuze lè l sèvi avèk yon ponp perfusion kontwole pa lojisyèl custommade nan ki pwofil perfusion yo ka defini (Alaris; CareFusion, Rolle, Swis). Chak 30 minit pandan NMP. , vitès perfusion la te ogmante selon yon orè prespesifye (Tablo S2).Orè sa a te baze sou done farmakokinetik imen ki endike kemetforminclearance se kat fwa pi wo pase clearance nan kreyatinin.19 Nan gwoup kontwòl la, ren yo te perfused san yo pa ajoute nanmetformin. Pou chak eksperyans, yo te anrejistre koule nan lè l sèvi avèk sond koule clampon (ME7PXL; Transonic Systems), ki te tache ak tib la tou pre atè ren an. Sond koule sa a te kalibre pou tib yo itilize a. Chak 15 minit pandan NMP, yo te kolekte pipi epi ranplase ak yon volim korespondan nan solisyon laktat Ringer a, ki te anrejistre tou. Tanperati likid la perfusion te kenbe nan 37 degre lè l sèvi avèk yon echanjeur chalè entegre, ki konekte nan yon beny dlo (Julabo). Yo te pran echantiyon san ak pipi apre 15 ak 60 minit ak chak èdtan apre pou analiz byochimik. Lè NMP te fini, byopsi yo te pran epi estoke nan fòmaldeyid tanpon 4 pousan, oswa jele epi estoke nan -80 degre pou plis analiz.
AMELIORE FONCTION REN CISTANCHE SUPPLEMENT
Tou de etid
Analiz byochimik.Perfusate ak echantiyon pipi yo te santrifuje (1,300 g pou 10 minit nan modèl rat la ak 1,000 g pou 12 minit nan modèl la kochon, respektivman, tou de nan 4 degre) ak supernatant la te estoke nan {{7} } degre. Lactate dehydrogenase (LDH), aspartate aminotransferase (ASAT), ak kreyatinin yo te detèmine nan perfusate, ak kreyatinin nan pipi, respektivman, pa Sant laboratwa nan University Medical Center Groningen lè l sèvi avèk estanda analiz byochimik. Kantite pwoteyin ki elimine nan pipi rat yo te mezire lè l sèvi avèk yon tès pwoteyin Pierce BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA), tandiske konsantrasyon total pwoteyin nan pipi porsin yo te mezire lè l sèvi avèk estanda analiz byochimik nan Sant laboratwa a.
Reyaksyon chèn polymerase quantitative an tan reyèl.Reyaksyon chèn polymerase an tan reyèl (PCR) te fèt dapre pwosedi estanda yo sou sistèm nan Tagman Applied Biosystems 7900HT RealTime PCR, jan sa dekri anvan. kodaj pou ET-1); endothelial nitrique sintaz oksid (eNOS); ak faktè Krüppel-like 2 (KLF-2), aktivasyon andotelyal (faktè Von Willebrand (wWF); molekil adhesion selil vaskilè 1 (VCAM). -1) ak IL-6), epi yo te fè pwoteyin chok chalè 70(HSP-70) ak seri primè ki nan lis nan Tablo S3. TRlzol (Life Technologies, Gaithersburg, MD). Yo te itilize cDNA ki te jwenn nan rat yo kòm yon referans entèn pandan PCR pou teste efikasite primè a. Yo te nòmalize ekspresyon jèn ak mwayen kontni mRNA -actin. Rezilta yo te eksprime kòm 2- △ACT, kote valè CT reprezante diferans ki genyen ant valè papòt sik yo.
Figi 2Perfusion ak paramèt fonksyon ren yo evalye pandan ak apre perfusion machin normothermic nan ren rat ak kochon. Clearance total kreyatinin nan ren rat (a) ak kochon (b). Pwodiksyon pipi total (c, d) ak pwoteyin total ki elimine nan pipi (e, f) nan ren rat ak porsin, respektivman. Done yo prezante kòm mwayen ± erè estanda nan mwayen an. Gwoup yo genyen 5-7 ren. *P < 0.05="" ak="" **p=""><>
Nòt mòfolojik.Biopsi ki estoke nan 4 pousan fòmaldeyid yo te entegre nan parafine epi yo te koupe an tranch 4 μm. Answit, koup yo te tache ak asid peryodik Schiff epi yo te bay nòt sou nekwoz selil tubulè proximal (sòti soti nan modere a grav: 1-5), èdèm (sòti soti nan modere a grav: 1-4), ak vakyolasyon selil tubulèr proximal yo ( soti nan modere rive grav: 1-4).21 De chèchè te fè evalyasyon istopatolojik avèg. Yon patolojis klinik endepandan ki gen anpil eksperyans nan evalye siy istopatolojik nan blesi apre perfusion machin nan rat ak ògàn porsin valide nòt yo.
Kalkil.Rezistans vaskilè entrarenal (IVR) te kalkile lè w divize presyon atè mwayen pa koule (eksprime an mmHg/mL min). Yo te kalkile clearance kreatinin pou estime pousantaj filtraj glomerulè lè l sèvi avèk ekwasyon sa a: [kreyatinin nan pipi]* koule pipi / [kreyatinin nan perfusate].
Analiz estatistik.Tout done yo eksprime kòm mwayen an ± erè estanda nan mwayèn nan. Lè w konpare de gwoup nan yon sèl moman, yo te evalye diferans yo lè l sèvi avèk yon tès t Student ki pa pè. Yo te teste diferans pou pwodiksyon pipi total, nòt mòfolojik, ak ekspresyon jèn yo lè l sèvi avèk analiz divèjans. Tout tès estatistik yo se de-ke epi P mwens pase oswa egal a 0.05 te konsidere estatistik enpòtan. Yo te itilize SPSS Statistics vèsyon 23 (IBM, Armonk, NY) pou tout analiz. Yo te kalkile zòn anba koub la (AUC) dapre règ trapèz la, epi yo te itilize pou apwoksimatif clearance total kreyatinin, kantite total pwoteyin ki elimine nan pipi a, ak nivo total ASAT ak LDH nan perfusate la.
Nòt: tradisyonèl Chinwa zèb medsin cistanche (ke yo rele tou "dragon zèb la" ak "dezè ginseng"), ap grandi sèlman nan dezè yo arid ak cho. Kòm youn nan nèf remèd fèy imòtèl yo, Cistanche (cistanche tubulosa / cistanche deserticola / desertliving cistanche / cistanche salsa) kontni ak engredyan rich efikas tankou echinacoside, acteoside, total phenylethanoid glikozid, flavonoid, polisakarid, elatriye engredyan efikas sa yo te fè cistanche yon presye. zèb nourisan ak materyèl manje pou iminite moun, ògàn entèn yo, ak selil nan sèvo ak newòn, elatriye. Etid modèn famasi yo konfime efè sa yo nan cistanche (benefis cistanche): amelyore iminite; amelyore fonksyon seksyèl ak fonksyon ren; anti-fatig; anti-aje; amelyore memwa; maladi anti-Parkinson; maladi anti-alzayme a; antioksidasyon; fasilite-konstipasyon; anti-enflamatwa; ankouraje kwasans zo, blanchi po; pwoteje fwa; elatriye.