htLang
Kay / Konesans / Sanisfè

Konesans

Pati2: Downregulation nan Renal HSA-miR-127-3p kontribye nan aktivasyon nan kalite kalite I Entèferans siyal chemen nan ren Lupus Nephritis

May 09, 2022

Pou plis enfòmasyon. Kontaktina.xiang@wecistanche.com

Sistèm iminitèse "gadyen" kò nou an epi li se zam ki pi efikas kont envazyon patojèn. Moun ki gen iminite ki ba gen plis chans pou yo malad. Rezilta eksperimantal yo montre ke engredyan aktif yo nan Cistanche ka amelyore iminite kò a.

Ann pran yon gade pi pre.

1.Total glikozif nan Cistanchetibouloz

Glikoz total de tibulosa cistanche siyifikativman amelyore pwodiksyon antikò, ki kantite periferik san Tlymphocytes, fonksyon an phagocyic nan macrophages peritoneal, ak reta-kalite reyaksyon ipèrsensitivite nan Coγ-ray-blese. Endèks la, endèks la depanse, ak pousantaj siviv te montre ke total glikoz yo total de Cistanchetiboulozte gen yon efè pwoteksyon fò sou fonksyon iminitè a nan radyasyon-blese.

2.Cistanche polysaccharides

Sispanntiboulozpolysacarides nan Cistanche ka diminye kontni an nan MDA nan sèvo a, kè, ak fwa nan modèl bèt iminocompromised, ogmante aktivite temwen nan kè ak tisi nan sèvo, fonksyon an fago nan peritoneal macrophages, pwopagasyon lenfosit, depanse T lymphocytes kontni an nan IL-2 ak konsantrasyon nan ion kalsyòm nan timosyotes te montre ke polysacarchide nan Cistanche deserticola te kapab amelyore fonksyon an iminitè nan kò an.

3.debaz

Engredyan aktif nan Cistanchetibouloz, Xinjiang, ki te koze D-galaksi siyifikativman diminye kontni an nan MDA nan kè a, fwa, ak tisi nan sèvo nan modèl la aje subate, ak siyifikativman ogmante aktivite a telomerase nan kè a ak tisi nan sèvo. Fonksyon fagostik la nan fagocyt te amelyore, ak pwopagasyon an nan lenfosit ak kontni an nan IL-2 nan san periferik yo te siyifikativman ogmante. Li montre ke Verbascum ka amelyore fonksyon iminitè a nan kò a.

Rezime: Kit ou gen iminite ki ba oswa pòv akeri iminite, ou ka manje manje ki gen rapò ak sistans kontwole pwòp iminite ou.

effects of cistanche tubulosa adalah improve immunity (25)

Klike sou yo konnen sou cistanche tibulosa ak ki kote yo achte sispann

REZILTA

Hsa-miR-127-3p ls yon Regilatè Negatif nan IFN-I Siyal Pathway

Nan efò anvan nou pou etidye renovasyon ren nan LN, nou konpare Des miRNA yo nanRenbyopsi ki soti nan pasyan LNN ak yon gwoup kontwòl nòmal (ki dekri nan materyèl ak METÒD). Te gen yon modèl ekspresyon miRNA distenk nan tisi yo ren nan pasyan LN (Figi S1). Pami diferans ki te eksprime miRNAs, nou chwazi 9 miRNAs ki te degregle (omwen pa 50%) ak konsève (ant moun ak sourit) ak teste wòl yo nan chemen an IFN-mwen siyal pa ISRE-liciferase repòtè a. Lè ou konsidere sous la limite nan selil prensipal imen yo epi yo ap limite nan kapasite pwopagasyon vitro, nou tès depistaj ak verifye fonksyon an regilasyon nan miRNAs yo ak etidye mekanis yo molekilè ki asosye lè l sèvi avèk selil Hela. Kòm konpare ak lòt 8 miRNAs, ekspresyon nan gen-miR-127-3p siyifikativman entèdi ISRE medyatè endiksyon nan aktivite luciferase nan selil Hela yo ankouraje pa IFN-α (Figi 1A ak Figi S2). Se konsa, nou te chwazi plis etid gen-miR-127-3p. Anplis SIN-α, IFN-β (yon lòt manm nan IFN-I), ankouraje endiksyon nan aktivite ISRE-lisiferaz ta ka tou entèdi pa gen-miR-127-3p (Figi S3). IFN-mwen ka tou pwovoke ekspresyon jenetik medyatè pa eleman gaz (3). Kòm espere, ekspresyon nan gen-miR-127-3p inibitasyon gaz-medyatè endiksyon nan aktivite lisiferaz ki ankouraje pa IFN-α (Figi 1A). Depi miRNAs rekonèt objektif yo pa pè baz konplemantè nan sekans grenn yo nan sit sa yo sib sou mRNAs sib (6). Fonksyon inibitè sa a gen-miR-127-3p sou chemen sin-mwen siyal te elimine pa mitasyon an nan sekans grenn li yo (Figi 1A). Ki konsistan avèk rezilta sa yo, ekspresyon de gen-miR-127-3p entèdi SIN-α ankouraje fosfò nan STATL ak STAT2, ak yon efè pi fò sou STAT2, nan selil Hela (Figi 1B ak S4). Pou pwouve ke efè inhibition sa a nan gen-miR-127-3p pa te limite a selil Hela yo, nou plis verifye ke ekspresyon de gen-miR-127-3p entèdi sin-estimile fosfoloji nan STAT2 nan de kalite selil adisyonèl (Figi S5).

Tovalidatehsa-miR-127-3p fonksyon kòm yon regilatè negatif selilè nan IFN-I siyal chemen nan selil rezidansyèl yo, nou fè ISRE-ak gaz-luciferase repòtè a lè l sèvi avèk HRMC prensipal, ki ka reponn a stimuli iminitè ak patisipe nan patojèn la nan LN jan sa endike nan etid anvan yo (12-15). Nou te jwenn gen-miR-127-3p antagomir amelyore ISREORGAS medyatè endiksyon nan aktivite lisiferaz ki ankouraje pa IFN-α nan prensipal HRMCs (Figi 1C). Pli lwen, gen-miR-127-3p antagomir amelyore fosfò a nan STAT2 ki ankouraje pa IFN-α nan HRMCs prensipal (Figi 1D ak S6).

Hsa-miR-127-3p negatively regulates IFN-I signaling pathway. (A) Hela cells transfected with ISRE-luciferase reporter (left) or GAS-luciferase reporter (right) and pRL-TK vectors together with negative control mimics (NC), hsa-miR-127-3p mimics, or hsa-miR-127-3p mutants (mut) were stimulated with universal type I interferon for 8 h. Firefly (F) and renilla (R) luciferase activities were measured. (B) Hela cells transfected with negative control mimics (-) or hsa-miR-127-3p mimics (+) were stimulated with universal type I interferon for 0- or 10-min. Western blot for STAT-1 and STAT-2, and phosphorylated STAT-1(pY701) and STAT-2 (pY690). (C) Primary HRMCs transfected with ISRE-luciferase reporter (left) or GAS-luciferase reporter (right) and pRL-TK vectors together with negative control antagomiR (antagomiR-NC), or hsa-miR-127-3p antagomiR (antagomiR-127-3p) were stimulated with universal type I interferon for 8 h. F and R luciferase activities were measured. (D) Primary HRMCs transfected with negative control antagomiR (-), or hsa-miR-127-3p antagomiR (+) were stimulated with universal type I interferon for 0- or 15-min. Western blot for STAT-2 and STAT-2(pY690). (A, C) The induction fold was calculated by dividing the F/R ratio of a sample in experimental groups by the F/R ratio of an unstimulated control sample. (B, D) Representative pictures from at least 3 independent experiments. (A, C) Data from at least 3 independent experiments are plotted and presented as mean ± SEM. P values were determined by Mann-Whitney U-test

Apre sa, nou te fè mikwo-òganis pou analize efè inhibition nan gen-miR-127-3p sou ekspresyon jèn lè l sèvi avèk echantiyon RNA

soti nan SIN-α trete selil ela yo ki te deja transfekte ak gen-miR-127-3p oswa divès kalite kontwòl (transfeksyon mock, mik kontwòl negatif, gen-miR-127-3p mizik mizik). Nou kalkile jenetik yo diferansyèlman eksprime nan IFN-o trete selil Hela (upregulated oswa downreglele pa 1.5-pliye)ant diferan pè konparezon (gen-miR-127-3p mimics vs mock, gen-miR-127-3p mimics vs mimics kontwòl negatif, e gen-miR-127-3p mimics vs gen-miR-127-3p mizik mizik), rekipere tout jenetik yo ki te entèdi pa gen-miR-127-3p ak fè yon analiz pou idantifye anrichi motif cis-regilasyon nan gen-miR-127-3p jenere lè l sèvi avèk iRegulon Plugin sou Cytoscape platfòm (10). Nou te jwenn ke cis-regilasyon motif ki itilize paIFN-I en TFS (tankou STAT-1, STAT-2, ak IRFproteins), domine motif yo tèt anrichi (9out nan tèt 10 motif yo)(Figi 2A). Sa a plis pwouve ke gen-miR-127-3p sitou anpeche SIN-mwen en siyal en. Anplis de sa, ki soti nan done yo mikwo-òganis, nou te jwenn overexpression nan gen-miR-127-3p entèdi endiksyon an nan anpil ISGs, ki gen ladan sa yo ki konstitye siyati a 21-jene sinik itilize pou evalye efikasite nan anifrolumab nan bloke SIN-I siyal (8). Ki konsistan avèk rezilta anvan yo, gen miR-127-3p mizik mizik pa t 'kapab anpeche ISGs sa yo (Figi 2B). Nou verifye anpèchman an nan gen-miR-127-3p sou de reprezantan ISGs (IFIT3 ak CXCL10) pa eksperyans adisyonèl endepandan (Figi 2C). Pandan ke gen-miR-127-3p antagomir amelyore endiksyon an nan IFIT3 ak CXCL10 pa IFN-α nan prensipal HRMCs (Figi 2D). Se poutèt sa, gen-miR-127-3p fonksyon kòm yon regilatè negatif nan chemen an SIN-mwen siyal.

Hsa-miR-127-3p inhibits the induction of IFN stimulated genes. (A) Hsa-miR-127-3p inhibited genes as compared with the controls (mock transfection, negative control mimics and hsa-miR-127-3p mutant mimics) in IFN-a treated Hela cells were used for the enrichment analysis of cis-regulatory motif using iRegulon plugin on Cytoscape platform. Big dots with deeper green color represent the motifs with higher normalized enrichment scores. (B) Heatmaps show the expression of the ISGs that constitute a 21-gene IFN signature (YAO score) (left) and additional top 21 IFN induced genes (right) in Hela cells that were transfected and stimulated as indicated in the pictures. Mock transfected Hela cells without IFN stimulation was used as baseline control. Red = upregulated; White = no change; Blue = downregulated. (C) qPCR analysis was performed for IFIT3 and CXCL10 in Hela cells transfected with negative control mimics (NC) or hsa-miR-127-3p mimics and stimulated with universal type I interferon for 8 h. (D) qPCR analysis was performed for IFIT3 and CXCL10 in primary HRMCs transfected with antagomiR-NC or antagomiR-127-3p and stimulated with universal type I interferon for 8 h. (C, D) The induction fold was calculated by dividing the relative expression of IFIT3 (or CXCL10) of a sample in experimental groups by the relative expression of IFIT3 (or CXCL10) of an unstimulated control sample. Data from at least 3 independent experiments are plotted and presented as mean ± SEM. P values were determined by Mann-Whitney U-test.

cistanche tubulosa extract benefits improve immunity

JAK1 Se yon Bona Fide Sib Jenèz nan Hsa-MiR-127-3p

Depi gen-miR-127-3p anpeche fosfò a tirozin nan STAT1 ak STAT2 ak endiksyon an nan pifò ISGs ankouraje pa IFN-I, nou ipotèz ki gen-miR-127-3p ka vize molekil tradiksyon siyal siyal nan SIN-I siyal chemen siyal, tankou JAK1 ak TYK2. Se poutèt sa, nou egzamine nivo yo pwoteyin nan JAK1 ak TYK2 nan selil yo ki transfekte ak gen-miR-127-3p oswa kontwòl mimic. Nou te jwenn ekspresyon de gen-miR-127-3p diminye ekspresyon JAK1 nan tou de nivo pwoteyin ak nivo MRNA, men se pa TYK2 (Figi 3A ak S7, S8). Se konsa, nou deside teste si JAK1 te yon sib nan gen-miR-127-3p.

Pa 2 algorism diferan (16,17), nou prevwa 3 potansyèl gen-miR-127-3pbinding souJAK1 MRNA, ak yon sèl sit obligasyon nan 3'UTR ak de lòt yo nan sekans lan kodaj (CDS) (Figi S9). Malgre ke fèb, gen-miR-127-3p mizik entèdi ekspresyon an nan luciferase jenere fusion ak bèt sovaj JAK13'UTR, pandan y ap mitasyon nan sekans sib la nan JAK1 3'UTR aboli anpèchman an (Figi 3B). Anplis de sa, nou te klonaje yon rejyon kodaj JAK1 ki gen 2 a gen sit sib miR-127-3p nan vektè a PCDNA3.1. Lè sa a, nou te fè yon fòm mityèl nan ekspresyon tansyon JAK1 plamisyon pa deranje 2 a gen-miR-127-3p sib sib. Nou te jwenn ke gen-miR-127-3p ta ka tou anpeche ekspresyon an nan twonpe JAK1 soti nan plas sovaj men se pa yon sèl la mutant (Figi 3C ak S10). Lè ou konsidere efè inhibition endepandan de gen-miR-127-3p souJAK1-3'UTROR JAK1-CDS te fèb, nou pwopoze ki gen-miR-127-3p aji sou sit sa yo obligatwa ansanm reyalize yon anpèchman enpòtan nan ekspresyon an nan JAK1. Pou plis verifye relasyon sa a vize ant gen-miR-127-3p akJAK1, nou montre ke JAK1 MRNA te anrichi nan konplèks la Ago2 nan selil yo kote ki gen-miR-127-3p te siprime, men se pa nan selil yo siprime fòm lan mutant nan gen-miR-127-3p (Figi 3D).

JAK1 is a bona fide target gene of hsa-miR-127-3p. (A) Hela cells were transfected with negative control mimics (NC) or hsa-miR-127-3p mimics and then cultured for 24 h. Whole cell lysates were prepared, and Western blot was performed for JAK1, TYK2, and b-Tubulin. (B) Hela cells were transfected with psiCHECK2, psiCHECK2-JAK1-3’UTR, or psiCHECK2-JAK1-3’UTR-mutant plasmids together with hsa-miR-127-3p mimics and then cultured for 24 h. Cell lysates were prepared, and firefly and renilla luciferase activities were measured. The ratio of renilla to firefly luciferase activity was calculated for each sample. (C) U4A cells were transfected with pcDNA3.1-JAK1t, or pcDNA3.1-JAK1t-mutant plasmids together with negative control mimics (NC) or hsa-miR-127-3p mimics and then cultured for 24 h. Whole cell lysates were prepared, and Western blot was performed for wild type HA-tagged JAK1 truncates (JAK1CDS), mutated HA-tagged JAK1 truncates (JAK1CDSmut), and b-Tubulin. (D) Hela cells were transfected with hsa-miR-127-3p mimics or hsa-miR-127-3p mutant mimics (mut) and then cultured for 12 h. Cell lysates were prepared, and RNA immunoprecipitation was performed. The levels of JAK1 mRNA were quantified for each sample. And the enrichment fold of JAK1 mRNA in anti-Ago2 antibody pull-down products compared to IgG was calculated. (A, C) Representative pictures from at least 3 independent experiments. (B, D) Data from at least 3 independent experiments are plotted and presented as mean ± SEM. P values were determined by MannWhitney U-test.

Pli lwen, nou te jwenn, ke nivo yo nan gen-miR-127-3p nan byopsi ren soti nan pasyan LNN yo te siyifikativman pi ba pase sa yo ki nan kontwòl nòmal (Figi 4A), pandan y ap nivo yo nan JAK1 ak IFIT3 nan byopsi ren soti nan pasyan LNN yo te siyifikativman pi wo pase sa soti nan kontwòl nòmal (Figi 4B, C). Anplis de sa, te gen yon korelasyon negatif ant nivo yo nan gen-miR-127-3p ak JAK1 (oswa SIIT3)nan byopsi ren soti nan pasyan LNN (Figi 4D, E). Se poutèt sa, JAK1 se yon jenetik bona fide nan gen-miR-127-3p.

Negatve association of the expression levels of JAK1 or IFIT3 with hsa-miR-127-3p in renal tissues of LN patients. Total RNAs were extracted from kidney biopsies of normal controls (n=11) and LN patients (n=14) and subjected to qPCR analysis for hsa-miR-127-3p (A), JAK1 (B) and IFIT3 (C). (D, E) Correlation between the levels of hsa-miR-127-3p and JAK1 (D), or IFIT3 (E) in kidney biopsies from LN patients (n=14). (A-C) Data from each subject of the normal and LN groups are plotted and presented as mean ± SEM. P values were determined by Mann-Whitney U-test. (D, E) Each dot represents individual LN patients. P values were determined by Spearman’s correlation test

effects of cistanche：improve kidney function4

DISKISYON

Nan etid la kounye a, nou kontinye efò anvan nou yo eksplore fonksyon yo nan disregle renovasyon miRNS nan LN. Isit la, nou konsantre sou degre miRNAs nan byopsi ren soti nan pasyan LNN. Nou te chwazi 9 nan yo pou analiz la ki baze sou kritè 2: konsèvasyon ak degre nan downregulation (detaye nan RESULTS). Depi IFN-I kritik nan devlopman nan SLE andLN (3), nou tès depistaj 9 miRNAs pou regilatè potansyèl nan chemen sin-mwen siyal. Nou idantifye gen-miR-127-3p kòm yon regilatè negatif nan chemen an SIN-mwen siyale pa montre li te kapab anpeche fosfoloji a nan pwoteyin STAT ak ISRE (oswa gaz) medyatè endiksyon nan ekspresyon jenetik ki ankouraje pa SIN-α. Nou te jwenn efè inhibitionry sa a ki te egziste nan plizyè kalite selil distenk. Pli lwen, ekspresyon nan gen-miR-127-3p te kapab anpil diminye endiksyon an nan ISGs. Ki sa ki nan plis, gen konsiderab sipèpoze ant gen-miR-127-3p ini isgs ak anifrolumab siprime SIN siyati-17 soti nan 21 siyati siyati yo ta ka inibite pa gen-miR-127-3p-ki itilize yo evalye efikasite anifrolumab a (18). Nan nòt, yon faz resan 3 esè klinik sijere ke administrasyon chak mwa nan benefis nivolumab benefis SLE kòm konpare ak plasebo (2). Se konsa, rezilta nou yo endike ke gen-miR-127-3p ka sèvi kòm yon maladi blokaj IFN-I (20). Sa a plis ranfòse potansyèl ki ka geri ou nan gen-miR-127-3p nan trete maladi otomatik.

Gen kesyon ki pa rezoud pou etid nan lavni. Youn nan se ke nou toujou pa konnen mekanis egzak la pou downregulation nan gen-miR-127-3p nan ren an nan LN, ki pral ede nou konprann patojèn LNN. Done preliminè ki pa pibliye nou yo endike ke aktivasyon alontèm nan chemen sin-mwen siyal siyal siprime gen-miR-127-3p ekspresyon. Se konsa, ka gen yon bouk manje manje ki te fòme pa SIN-I ak diminye intracellular gen-miR-127-3p, ki anplifye SIN-I siyal. Lòt la se, jouk koulye a, nou pa t 'kapab egzamine efè yo nan efè inhibitiono nan gen-miR-127-3p sou JAK1 paske gen-miR-127-3p sekans obligasyon nan jenetik la JAK1 pa egziste nan mitan. Nan tan kap vini an, enjenyè eksprime jenetik la JAK1 te kapab ede klarifye gen-miR-127-3p nan efikasite vivan nan anpeche JAK1 ak siyal ki asosye li yo.

Pou rezime, nou montre ke JAK1 se yon sib fide bona nan gen-miR-127-3p ak degre nòmal nan renal gen-miR-127-3p kontribye nan patojèn LN pa amelyore ekspresyon an nan JAK1 ak aktivasyon ki vin apre nan SIN-mwen siyal chemen nan ren. Depi JAK1-ki asosye nan chemen siyal yo enpòtan anpil pou devlopman nan anpil maladi otomatik (4), etid nan lavni yo garanti yo eksplore gen-miR-127-3p efè terapetik sou LN oswa lòt maladi otomatik ki gen rapò ak domaj ògàn ki gen rapò ak abnolisyon nòmal nan JAK1.

effects of herba cistanches：improve kidney function


Ou ka renmen tou