Glikozid feniletanoid pwovoke apoptoz nan selil Eca-109 atravè chemen ki depann de mitokondri yo.

Entwodiksyon

Kansè nan èzofaj se youn nan kalite kansè ki pi komen ak 11yèm pi gwo pousantaj morbidite ak 6yèm pi gwo pousantaj mòtalite globalman, e li te lakòz ~439,000 mòtalite an 2015. Ensidans kansè nan èzofaj yo varye anpil pami diferan rejyon, ak lès. Azi ak lès ak Sid Afrik te montre pi gwo pousantaj ensidans ak Afrik lwès te montre pousantaj ki pi ba yo an 2012. Nan Lachin, estime ka kansè nan èzofaj yo ak mòtalite yo te 477,000 ak 375,000, respektivman. , nan 2015. Malgre ke pousantaj morbidite nan kansè nan èzofaj te diminye nan mitan ak mitan-wo mitan peyi endèks sosyodemografik ant 2005 ak 2015, to mòtalite a rete wo akòz pronostik la pòv. Yo te itilize konbinezon reseksyon chirijikal ak chimyoterapi oswa radyoterapi pou trete kansè nan èzofaj, sepandan, yo te rapòte ke ant 2003 ak 2014 5-pousantaj siviv ane a te rete.<20% in China, USA and Europe. For these reasons, it is urgent to develop novel therapeutic agents to treat esophageal cancer. used to treat various cancer types, including non Traditional Chinese herbal medicine (CHM) -small cell lung cancer, colorectal cancer, and hepatocellular carcinoma. Recently, clinical trials reported that the combination of CHM with chemotherapy or radiotherapy not only demonstrated several benefits on the quality of life and alleviating side effects induced by chemotherapy or radiotherapy but also improved the survival rate of patients with non-small cell lung, liver, gastric, colorectal, nasopharyngeal or cervical cancer. However, there is conflicting evidence regarding the efficacy of CHM treatment on esophageal cancer. Numerous studies determined that several herbal medicines or components could inhibit the growth of esophageal cancer cells in vitro and in vivo, including Andrographis paniculata, Daikenchuto, icariin, Rosa Roxburghii Tratt and Fagopyrum Cymosum, Jaridonin, Marsdenia tenacissima, OP16 (a novel ent-kaurene diterpenoid), Qigesan and Tonglian decoction. Cistanche is a type of CHM and exerts various biological functions, including anti‑oxidation, anti‑inflammation, and neuroprotection. Our previous studydemontre saCistanche tubulosa phenylethanoid glikozid(CTPG) ta ka siprime kwasans selil melanom B16-F10 nan vitro ak nan vivo (24). Sepandan, solubility dlo pòv nan CTPG te itilize deja limite devlopman dwòg la. Se poutèt sa, yo te itilize dlo-idrosolubl CTPG (CTPG-W) epi yo te envestige efè antitumoral sou selil kansè nan èzofaj yo (Eca-109). Yo te detèmine ke CTPG-W te kapab depandan dòz anpéché viabilité Eca-109 selil yo atravè endiksyon apoptoz atravè yon chemen ki depann de mitokondriyo.

NATIRÈL CISTANCHE TUBULOSA POU AMELIORE FONKSYON SEKSYÈL PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Materyèl ak metòd

Bèt.

Sourit C57BL/6 fi (6-8 semèn, ~ 25 g) yo te achte nan Beijing Laboratory Animal Research Center (Beijing, Lachin) epi yo te loje nan tanperati ki kontwole (25˚C), limyè-siklèt (12/). 12) Etablisman Animal nan Xinjiang University (Urumqi, Lachin). Tout bèt yo te resevwa dlo ak manje san patojèn.

Liy selilè ak kilti.

Liy selilè kansòm èzofaj imen an (Eca-109) te konsève pa Xinjiang Key Laboratory of Byological Resources and Genetic Engineering (Kolèj Syans lavi ak Teknoloji, Xinjiang University, Urumqi, Lachin) ak kiltive nan RPMI{{1} } mwayen (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA) complétée ak 10% chalè-inaktive fetis serom bovine (FBS; MRC, EN MOASAI Byolojik Teknoloji co, Ltd, Jiangsu, Lachin), 1% L -glutamin (100 mM), 100 U/ml penisilin ak 100 µg/ml streptomycin nan 37˚C nan yon atmosfè imidite ki gen 5% CO2.

Kwomatografi likid segondè-pèfòmans (HPLC).

CTPG-W (cat. No. SGJG20170410) te achte nan men Shanghai Upbio Tech Co., Ltd. (Shanghai, Lachin). Konpoze prensipal yo nan CTPG yo te kalifye ak quantifier pa HPLC dapre etid anvan nou an (24). Yon ti tan, HPLC te fèt sou yon kolòn ZORBAX SB-C18 (250x4.6 mm; 5 µm) nan 30˚C epi elite ak 0.2% solisyon asid fòmik ak yon gradyan nan metanol kòmanse nan 23%, kòm 1 ml yo te ajoute chak minit. pou 45 min jiskaske yo rive nan 31%. Yon total de 10 µl echantiyon yo te enjekte ak detekte nan 330 nm. Yo te achte estanda echinacoside nan Shanghai Baoban Biotech Co, Ltd (Shanghai, Lachin), epi yo te achte estanda acteoside nan Sigma-Aldrich (Merck KGaA, Darmstadt, Almay). Yo te itilize estanda yo pou analize eleman CTPG-W yo.

MTT tès.

Pwopagasyon selil yo te mezire ak yon tès MTT. Selil Eca{{0}} yo te vaksinen nan 96-plak byen nan yon dansite 5x103 selil nan 100 µl RPMI{{5 }} mwayen/byen ak kiltive nan 37˚C pou 24 èdtan, Lè sa a, trete ak diferan konsantrasyon (0, 200, 400, 600, ak 800 µg/ml) nan CTPG-W oswa 0.4% dimethyl sulfoxide (DMSO) pou 24, 48 ak 72 h. DMSO te itilize kòm kontwòl sòlvan (800 µg/ml CTPG-W ki gen 0.4% DMSO). Cisplatin (20 µg/ml) te itilize kòm kontwòl pozitif. Answit, yo te jete supernatant la apre santrifujasyon nan 225 xg pou 5 min nan tanperati chanm epi yo te ajoute 100 µl solisyon MTT (0.5 mg/ml nan mwayen RPMI-1640 san FBS) nan chak pi epi yo te enkube a 37˚C pou 3. h. Kristal formazan ki te fòme yo te fonn nan 200 µl DMSO. Valè dansite optik (OD) yo te mezire nan yon longèdonn 490 nm pa yon lektè microplate 96-byen (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA). Vitabilite selil relatif la te kalkile dapre fòmil la: Viabilite selil (%) =(ODtreated/ODuntreated)x100%. Yo te obsève mòfoloji selil Eca-109 ak yon mikwoskòp fliyoresan Envèse (agrandisman, x200) (Nikon Eclipse Ti-E; Nikon Corporation, Tokyo, Japon).

Pou pwopagasyon splenosit yo, sourit C57BL/6 yo te euthanized pa dislokasyon nan matris, ak larat yo te izole. Yo te fè sispansyon yon sèl selil la epi yo te simen splenosit nan 96-plak byen nan yon dansite 1x105 selil/pou nan 100 µl RPMI-1640 mwayen, epi yo trete yo ak konsantrasyon diferan. (0, 200, 400, 600, ak 800 µg/ml) CTPG-W pou 24, 48 ak 72 èdtan nan 37˚C ak 5% CO2. Pwopagasyon splenosit yo te mezire pa tès MTT, dapre pwotokòl ki endike anwo a. Endèks eksitasyon=ODtrete/Opa trete.

Mezi apoptoz ak sik selilè. Selil Eca{{{0}} yo te kiltive nan asyèt 6{0 mm nan yon dansite 2.5x1{05 selil/plat pou 24 èdtan epi yo te trete ak diferan konsantrasyon ({{31} }, 200, 400, 600, ak 800 µg/ml) CTPG-W oswa 0.4% DMSO pou 24 èdtan nan 37˚C ak 5% CO2. Selil yo te ranmase ak tache ak yon Annexin V-fluorescein isothiocyanate (FITC)/Propidium iodide (PI) Apoptosis Deteksyon twous (Shanghai Shengsheng Biotechnology Co, Ltd, Shanghai, Lachin), dapre pwotokòl manifakti a. Echantiyon yo te kolekte pa flow cytometry (BD FACSCalibur; BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) ak analize pa FlowJo 7.6 (Tree Star, Inc., Ashland, OSWA, USA). Pou analize efè CTPG-W sou sik selil la, yo te simen 2.5x105 Eca-109 selil yo nan plat kilti 60 mm epi yo te trete ak CTPG-W (0, 100, 200, ak 400 µg/ml) oswa 0.4. % DMSO pou 24 èdtan nan 37˚C ak 5% CO2. Tout selil yo te rekòlte epi lave de fwa ak glas PBS (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.), Lè sa a, fiks yo nan 70% etanòl frèt nan 4˚C pou 30 min. Apre lave de fwa ak PBS frèt, selil yo te resuspend nan 300 µl tanpon tach PI/RNase (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) pou 10 minit nan tanperati chanm. Distribisyon sik selilè a te analize ak lojisyèl ModFit LT 3.0 pa flow cytometry (BD FACSCalibur).

NATIRÈL CISTANCHE TUBULOSAAnti FatigPwoteje Fwa PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Analiz de potansyèl manbràn mitokondriyo (Δψm) ak espès oksijèn reyaktif (ROS).Pou analize Δψm yo, yo te trete selil Eca{{{0}} ak CTPG-W (0, 400, 600, ak 800 µg/ml) oswa 0.4% DMSO pou 24 h nan 37˚C ak 5% CO2, ak tache ak twous tès potansyèl manbràn mitokondriyo ak JC-1 (Beyotime Institute of Biotechnology, Shanghai, Lachin), dapre pwotokòl manifakti a, pou 20 min nan 37˚ C. Apre lave de fwa ak tanpon lave JC-1 (Beyotime Institute of Biotechnology), echantiyon yo te resuspende ak 300 µl tanpon lave JC-1 epi analize pa sikometri koule (BD FACSCalibur). Yo te obsève fluoresans lank JC-1 nan selil Eca-109 tou ak yon mikwoskòp fliyoresan Envèse (agrandisman, x200; Nikon Eclipse Ti-E). Pou analiz de ROS, selil Eca-109 yo te trete ak CTPG-W (0, 400, 600, ak 800 µg/ml) pou 2, 4, 6, 12 ak 24 èdtan, epi yo tache ak Espès Espès Oksijèn Reyaktif. twous (Beyotime Institute of Biotechnology), dapre pwotokòl manifakti a, pou 20 minit nan 37˚C. Apre lave twa fwa ak PBS frèt, echantiyon yo te kolekte pa flow cytometry (BD FACSCalibur) epi analize pa lojisyèl FlowJo 7.6.

Figi 1. Kontwòl kalifye CTPG-W. Konpozan yo nan CTPG-W yo te analize kalitatif ak quantitative pa segondè-pèfòmans likid kromatografi ak konpare ak estanda yo nan echinacoside ak acteoside. CTPG-W, dlo-idrosolubl phenylethanoid glikozid nanC. tubulosa.

Aktivite radikal 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). Aktivite radikal gratis CTPG-W detèmine ak yon tès radikal gratis DPPH dapre pwotokòl la pibliye ak yon modifikasyon minè, kòm metanol te ranplase ak etanòl pou fonn DPPH (25,26). Pou mezi nan eta estab, yo te melanje 150 µl DPPH (100 mmol/l) nan etanòl ak diferan konsantrasyon CTPG-W (25, 50, 75, 100, 250, 300, 400, 500 ak 600 µg/ml) nan 50 µl PBS, epi enkube nan fè nwa a pou 30 min nan tanperati chanm. Absorbans nan 517 nm te detekte nan prezans ak absans CTPG-W. Yo te itilize yon total de 50 µl Vitamin C kòm kontwòl pozitif. Yo te kalkile aktivite radikal DPPH la ak fòmil la: Scavenging (%)=[1-(Asample-Ablank)/A0] x100, kote Ablank se absorpsyon kontwòl la (san DPPH), Asample se absorpsyon echantiyon an ak A0 se absorpsyon PBS ak DPPH.

Analiz Western blot. Selil Eca{{0}} yo te trete ak CTPG-W ({0, 200, 600 µg/ml) oswa 0.4% DMSO pou 24 èdtan nan 37˚C ak 5% CO2. Sa ki annapre yo lave de fwa ak PBS, selil yo 

Figi 2. Efè CTPG-W sou kwasans selil Eca-109 ak splenosit yo. (A) Selil Eca -109 yo te trete ak diferan konsantrasyon CTPG-W pou 24, 48, ak 72 èdtan, epi apre sa yo te detekte viabilite selil yo ak yon tès MTT. (B) Chanjman mòfolojik selil Eca-109 yo sou tretman CTPG-W nan 24 èdtan. (C) Splenosit nan sourit C57BL / 6 yo te trete ak konsantrasyon diferan nan CTPG-W pou 24, 48, ak 72 èdtan, ak Lè sa a, pwopagasyon an te analize ak yon tès MTT.**P<0.01 and ***P<0.001, compared with the control. CTPG-W, water-soluble phenylethanoid glycosides of C. tubulosa.

yo te lysed nan Radioimmunoprecipitation Assay Lysis tanpon (Beijing ComWin Biotech Co, Ltd, Beijing, Lachin) pou 20 min sou glas. Apre santrifugasyon nan 10,000 xg pou 10 min nan 4˚C, yo te kolekte supernatant yo, epi konsantrasyon pwoteyin yo te detekte ak yon twous asid bicinchoninic (Thermo Fisher Scientific, Inc.) dapre pwotokòl manifakti a. Western blot analiz te fèt dapre deskripsyon anvan nou an (24). Antikò yo kont kaspas-7 (cat. No. D120077), kaspaz-8 (kat. No. D155240), kaspas-9 (kat. No. D220078), lenfom selil B{ {13}} (Bcl-2)-asosye X (Bax) (cat. No. D220073) ak Bcl-2 (kat. No. D260117), ak anti-sorit IgG-refor peroksidaz (HRP). ) (cat. No. D111050) ak anti-lapen IgG-HRP (cat. No. D110058) yo te achte nan men BBI Life Sciences (Shanghai, Lachin). Antikò yo kont kaspas-3 (cat. No. E-AB-10050) ak kaspas aktif{-3 (kat. No. E-AB{-22115) te achte nan men Elabscience ( Wuhan, Lachin). Lòt antikò kont caspase-7 (cat. No. 9492), poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) (kat. No. 9542), cytochrome c (cat. No. AC909), c-Jun NH{ {37}}terminal kinase (JNK) (cat. No. 9252S) ak -aktin (cat. No. 58169) yo te jwenn nan Cell Signaling Technology, Inc. (Danvers, MA, USA). Tout antikò prensipal ak segondè yo te dilye nan 1:1, 000. Antikò prensipal yo te enkubate nan 4˚C lannwit lan epi antikò segondè yo te enkubate nan 37˚C pou 1 èdtan.

Figi 3. Apoptoz selil Eca-109 CTPG-W pwovoke. Selil yo te trete ak diferan konsantrasyon nan CTPG-W pou 24 èdtan. (A) Selil Eca-109 apoptotik ak nekrotik yo te analize pa sikometri koule. Panèl anwo a montre pwen endividyèl yo epi panèl pi ba a montre done rezime yo. *P<0.05 and ***P<0.001, compared with the control. (B) Total protein was isolated and the expression levels of Bax and Bcl-2 were detected with western blot analysis. Bcl-2, B-cell lymphoma-2; Bax, Bcl-2-associated X; DMSO, dimethyl sulfoxide; CTPG-W, water-soluble phenylethanoid glycosides of C. tubulosa.

Pwoteyin sib yo te detekte lè l sèvi avèk yon twous tès kimiluminesans amelyore (Beyotime Institute of Biotechnology), dapre pwotokòl manifakti a.

Analiz estatistik. Siyifikasyon estatistik te kalkile pa yon sèl-fason analiz de divèjans ak tès post hoc Tukey a ak rezilta yo te analize lè l sèvi avèk GraphPad Prism 5. 0 lojisyèl (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) nan mitan gwoup tretman ak kontwòl. Tout done yo te prezante kòm mwayèn ± devyasyon estanda. P<0.05 was considered to indicate a statistically significant difference.

CISTANCHE TUBULOSA EXTRACT POU AMEYORE FONCTION REN PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Rezilta yo

CTPG-W siprime kwasans selil Eca-109 yo.

Konpozan yo nan CTPG-W yo te kalifye ak quantifiée pa HPLC (Fig. 1), ki te konpare ak estanda yo nan echinacoside ak acteoside. Dapre tan retansyon pik yo ak zòn pik yo, CTPG-W te genyen 39.16% nan echinacoside ak 2.44% nan acteoside. Premyèman, yo te detèmine efè CTPG-W sou viabilite selil Eca-109 ak yon tès MTT. CTPG-W te fonn nan DMSO nan 200 mg/ml epi dilye ak mwayen RPMI-1640 ki gen 10% FBS chalè-inaktive nan konsantrasyon endike yo. Selil Eca-109 yo te trete ak CTPG-W epi yo te analize viabilite selil yo ak yon tès MTT nan pwen tan ki endike yo. Tretman CTPG-W redwi siyifikativman viabilite selil Eca-109 nan yon fason ki depann de dòz ak tan (P<0.001; Fig. 2A). The morphology of Eca-109 cells was observed with an inverted fluorescence microscope (magnification, x200) following CTPG‑W treatment for 24 h, which changed notably in a dose-dependent manner, with the cells shrinking and becoming round following CTPG-W treatment (Fig. 2B). These results indicate that CTPG-W suppresses the growth of Eca-109 cells. The effect of CTPG-W on the proliferation of splenocytes was also detected with an MTT assay. CTPG-W significantly promoted the proliferation of splenocytes in a dose-dependent manner (Fig. 2C), indicating that it has no cytotoxic effect on splenocytes. 

Figi 4. Efè CTPG-W sou distribisyon sik selilè nan selil Eca-109. Diferan konsantrasyon CTPG-W yo te itilize pou trete selil Eca-109 pou 24 èdtan epi yo te analize distribisyon sik selil pa sikometri koule. *P<0.05 and **P<0.01, compared with the control. DMSO, dimethyl sulfoxide; CTPG-W, water-soluble phenylethanoid glycosides of C. tubulosa.

CTPG-W pwovoke apoptoz nan selil Eca-109 yo. Pou envestige si CTPG-W te siprime kwasans selil Eca-109 atravè endiksyon apoptoz oswa nekwoz, selil yo te trete ak diferan konsantrasyon CTPG-W. Apre 24 èdtan, yo te detekte apoptoz ak nekwoz selil Eca-109 ak tach Annexin V/PI. Jan yo montre nan Fig. 3A, selil Annexin V- / PI + yo te fèmen kòm selil nekrotik, ak selil Annexin V + / PI + ak Annexin V + / PI- yo te gated kòm selil apoptotik. CTPG-W prensipalman pwovoke apoptoz nan selil Eca-109 nan yon fason ki depann de dòz, byenke selil Eca-109 nekrotik yo te ogmante tou siyifikativman anba tretman 600 ak 800 µg/ml CTPG-W (P<0.001 at 600 µg/ml and P<0.05 at 800 µg/ml). Consistently, the levels of pro-apoptotic Bax and anti-apoptotic Bcl-2 in Eca-109 cells were upregulated and downregulated, respectively, upon CTPG-W treatment (Fig. 3B). The results indicated that CTPG-W primarily inhibited the growth of Eca-109 cells through the induction of apoptosis.

CTPG-W pwovoke arè sik selilè nan faz S nan selil Eca-109 yo. Twoub nan sik selil kansè a pral siprime kwasans selil ak ankouraje apoptoz (27). Yo te detekte distribisyon sik selil la nan selil Eca-109 ak tach PI apre tretman CTPG-W pou 24 èdtan. Yo te obsève ke selil ki nan faz S la te ogmante epi selil ki nan faz G0/G1 yo te endike yon diminisyon siyifikatif jeneral sou tretman CTPG-W (P).<0.05;Fig. 4), indicating that CTPG-W arrests the Eca-109 cell cycle at the S phase.

CTPG-W diminye Δψm ak pwovoke liberasyon cytochrome c. Apoptoz ka pwovoke pa yon chemen depandan mitokondriyo (28,29). Manm pro- ak anti-apoptotik nan fanmi pwoteyin BCL-2 sèvi wòl enpòtan nan règleman an nan entegrite manbràn mitokondriyo (30,31). Apre tretman CTPG-W pou 24 èdtan, Δψm la te evalye lè l sèvi avèk tach JC-1. JC-1 total (fluoresans wouj detekte nan FL-2) pral dezentegre nan monomè (fluoresans vèt detekte nan FL-1) lè Δψm ap diminye (32). Jan yo montre nan Fig. 5A, frekans FL-1+ FL-2-/+ selil yo ogmante anpil nan yon fason ki depann de dòz la, sa ki endike Δψm selil Eca-109 yo diminye. Chanjman fliyoresans nan selil Eca-109 yo te obsève tou ak yon mikwoskòp fliyoresan Envèse (figi 5B). Avèk ogmantasyon konsantrasyon CTPG-W, fliyoresans wouj la diminye ak fliyoresans vèt la ogmante, ki konsistan avèk done ki soti nan sitometri koule. Li te tou obsève ke nivo a cytochrome c nan cytosol la te miyò ogmante (figi 5C), ki se yon rezilta nan yon rediksyon nan Δψm. Sa a ranfòse konklizyon ki soti nan konte ogmante FL-1+ FL-2-/+ selil ki Δψm diminye kòm rezilta tretman CTPG-W. Yo rapòte ke JNK ka kontwole aktivasyon fanmi pwoteyin BCL-2 ki lakòz liberasyon cytochrome c (33-35). Li te detèmine tou ke nivo JNK te miyò regilasyon apre tretman CTPG-W (Fig. 5C). Rezilta yo endike ke CTPG-W ka pwovoke apoptoz selil Eca-109 atravè yon chemen ki depann de mitokondriyo.

Figi 5. Rediksyon Δψm ak regilasyon cytochrome c ak JNK. Selil Eca-109 yo te trete ak diferan konsantrasyon CTPG-W pou 24 èdtan. (A) Δψm te detekte pa tach JC-1 ak echantiyon yo te analize pa sikometri koule. Pwen endividyèl yo montre chanjman ki fèt nan fliyoresans JC-1. Frekans FL-1+ FL-2-/+ selil yo montre nan panèl ki pi ba a. ***P<0.001, compared with the control. (B) The changes in JC‑1 fluorescence were observed with an inverted fluorescence microscope. (C) The levels of cytochrome c and JNK were detected with western blot analysis. The different bands of JNK represent 54 and 46 kDa proteins. DMSO, dimethyl sulfoxide; CTPG-W, water-soluble phenylethanoid glycosides of C. tubulosa; JNK, c-Jun NH2-terminal kinase.

Figi 6. Nivo ROS nan selil Eca-109 sou tretman CTPG-W ak aktivite antioksidan CTPG-W. (A) Selil Eca -109 yo te trete ak diferan konsantrasyon nan CTPG-W ak nivo ROS yo te analize pa sikometri koule nan pwen tan endike yo. *P<0.05, **P<0.01 and ***P<0.001, compared with the control. (B) The free radical scavenging activity of CTPG-W was determined with a 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl assay. CTPG-W, water-soluble phenylethanoid glycosides of C. tubulosa; ROS, reactive oxygen species; MFI, mean fluorescence intensity.

Efè CTPG-W sou jenerasyon ROS intraselilè.ROS te kapab redwi Δψm pou pwovoke apoptoz (36). Pou envestige si CTPG-W ka ogmante pwodiksyon ROS, selil Eca-109 yo te trete ak diferan konsantrasyon CTPG-W. Selil yo te kolekte nan pwen tan ki endike yo epi yo tache ak DCFH-DA. Pwodiksyon ROS intraselilè nan selil Eca-109 yo te detèmine pa sikometri koule. Jan sa montre nan Fig. 6A, 800 µg/ml CTPG-W ogmante siyifikativman pwodiksyon ROS soti nan 2-6 h, epi diminye soti nan 12-24 h. Anplis de sa, 400 µg/ml CTPG-W ogmante siyifikativman pwodiksyon ROS soti nan 12-24 h. Anplis de sa, 200 µg / ml CTPG-W pa t 'miyò chanje pwodiksyon ROS. Chanjman dinamik nan pwodiksyon ROS yo ka asosye ak apoptoz selil Eca-109. Yo te detèmine tou ke CTPG-W te gen aktivite gratis radikal (figi 6B), ki ka asosye ak pwodiksyon ROS diminye nan selil Eca -109 trete ak 800 µg/ml CTPG-W apre 12 èdtan.

Figi 7. Nivo cleaved-caspases ak cleaved-PARP apre tretman CTPG-W. Pwoteyin yo te izole nan selil Eca-109 ki te trete ak CTPG-W pou 24 èdtan epi nivo cleaved-caspases ak cleaved-PARP te detekte ak analiz Western blot. DMSO, dimethyl sulfoxide; CTPG-W, dlo-idrosolubl phenylethanoid glikozid nanC. tubulosa; PARP, poly (ADP-riboz) polymerase.

CTPG-W kontwole aktivite caspase-3, caspase-7, caspase-9 ak PARP. Liberasyon cytochrome c akòz rediksyon Δψm ka aktive proteaz caspase yo pou pwovoke apoptoz (29,30,37). Apre tretman CTPG-W pou 24 èdtan, aktivasyon caspase -3, 7, 8, 9, ak PARP te detekte pa analiz Western blot. Konpare ak kontwòl la, nivo cleaved-caspase-9, cleaved-caspase-7, cleaved-caspase-3 ak cleaved-PARP, men se pa nivo cleaved-caspase{{20 }}, yo te upregulated pa tretman CTPG nan yon fason ki depann de dòz (figi 7). Rezilta sa yo endike ke CTPG-W redwi Δψm ak ankouraje lage cytochrome c pou aktive caspases ki pwovoke apoptoz selil Eca-109 yo.

Diskisyon

CHM tradisyonèl yo ta ka pwovoke apoptoz nan selil kansè nan èzofaj atravè diferan chemen, ki gen ladan reseptè lanmò extrinsèques, ak chemen estrès mitokondriyo ak andoplasmik retikul (29). Etid anvan nou an te demontre ke CTPG, kòm eleman prensipal C. tubulosa, anpeche kwasans selil melanom B16-F1{0 atravè endiksyon apoptoz atravè yon chemen ki depann de mitokondriyo (24). Nan etid sa a, yo te envestige efè antitumoral CTPG-W sou selil Eca-109 epi yo te detèmine ke CTPG-W te siprime kwasans selil Eca-109, pwovoke apoptoz, ak arete sik selilè, redwi Δψm, ogmante liberasyon cytochrome c ak aktive caspases. CTPG ak CTPG-W ta ka pwovoke apoptoz ak arè sik selil nan selil kansè yo. Sepandan, mekanis egzat yo diferan akòz eleman diferan nan CTPG (26.64% echinacoside, 10.19% acteoside, ak 1.71% isoacteoside) ak CTPG-W (39.16% echinacoside ak 2.44% acteoside). CTPG te arete selil B16-F10 nan faz G0/G1, men CTPG-W te arete selil Eca-109 nan faz S (24). Pwodiksyon ROS te ogmante depann de dòz la pa CTPG, men li te endike yon chanjman nan yon fason ki depann de tan pa yon gwo dòz CTPG-W, ki te ogmante anpil nan kòmansman tretman CTPG-W (2-6 h) ak diminye anpil apre 12 èdtan, konpare ak kontwòl la. Yon rezon posib se ke eleman nan pi gwo nan CTPG-W se echinacoside. Plizyè etid rapòte ke echinacoside ta ka anpeche pwodiksyon ROS ak apoptoz ROS-induit pou egzèse efè neuroprotective ak anti-aje li yo (38-40). Menm jan an tou, yo te obsève aktivite gratis radikal la nan etid la. Se poutèt sa, yo te espekile ke kèk eleman, ki gen ladan verbascoside, iso-verbascoside, ak salidroside nan yon gwo dòz CTPG-W ta ka imedyatman pwovoke jenerasyon ROS lakòz apoptoz nan selil Eca-109 (41,42), ak Lè sa a ROS te scavenged pa echinakozid. Yon lòt rezon posib pou diferans ki genyen nan pwodiksyon ROS pa CTPG ak CTPG-W se ke diferan liy selil yo te itilize nan etid sa a ak etid anvan an (24). Dong et al (43) te rapòte ke echinacoside ta ka pwovoke apoptoz nan selil kansè kolorektal imen SW480 atravè jenerasyon domaj ADN oksidatif san yo pa ogmante nivo ROS.

Tretman CTPG-W redwi Δψm ak lakòz liberasyon cytochrome c, ki ankouraje klivaj caspase -9 (28). Toujou, nivo cleaved-caspase-9 yo te ogmante pa tretman CTPG-W. Apre sa, kaspas aktif -9 ka aktive kaspas -3 pou pwovoke apoptoz (44). Nivo cleaved-caspase-3 yo te ogmante tou pa tretman CTPG-W. Sepandan, caspase -8 pa te aktive pa CTPG-W, ki endike ke chemen an reseptè lanmò extrinsèques pa te enplike nan apoptoz la pwovoke pa CTPG-W. Obsèvasyon sa yo endike ke CTPG-W pwovoke apoptoz nan selil Eca-109 atravè aktivasyon an nan yon chemen depandan mitokondriyo.

PARP sèvi wòl enpòtan nan estabilite jenomik epi yo ka koupe pa kaspas aktif yo, patikilyèman kaspas -3 ak -7 (45). Yo te detèmine ke tretman CTPG-W aktive caspase-3 ak -7, ki ka fender PARP pou anpeche reparasyon ADN ak lakòz apoptoz.

CTPG-W tou depann de dòz ak tan-yo siprime kwasans selil epatoselilè BEL-7404 moun (done ki pa pibliye). Malgre ke CTPG-W anpeche kwasans selil Eca-109 ak BEL{-7404, li ankouraje pwopagasyon splenosit, ki ka akòz kontni an nan polisakarid (~50%) nan CTPG-W (46). ). Menm jan an tou, plizyè etid rapòte ke polisakarid ka ankouraje pwopagasyon splenosit (46-49). Nan modèl sourit la, li te detèmine ke CTPG-W ogmante siyifikativman endèks larat la, konpare ak gwoup kontwòl la, men li pa afekte pwa kò a ak lòt endèks ògàn yo ki gen ladan kè, fwa, ren, ak poumon (done ki pa pibliye), ki endike ke CTPG-W pa gen okenn efè sitotoksik sou selil nòmal yo.

Ansanm, done yo endike ke CTPG-W anpeche kwasans selil Eca-109 pa endiksyon apoptoz atravè yon chemen ki depann de mitokondriyo.

NATIRÈL CISTANCHE TUBULOSA POU AMELIORE FONKSYON SEKSYÈL PHGS75% ECH 30% ACT 12%