Efè pwoteksyon asid alfa-lipoik kont 5- mukozit gastwoentestinal ki pwovoke fluorouracil nan rat 1 pati

Résumé: Asid alfa-lipoik (ALA) itilize anpil nan fòmil multivitamin ak pwodwi anti-aje. Objektif etid sa a se te mennen ankèt sou benefis potansyèl pwoteksyon ALA sou 5-fluorouracil ({5-FU) pwovoke mukozit gastwoentestinal nan rat albino Wistar. Tisi ki soti nan vant, ti trip ak gwo trip yo te retire, epi yo te jwenn seri san pou idantifye endis byochimik tankou TNF-, IL-1, MDA, GPx, SOD, MMP-1, {{ 8}}, -8, ak TIMP-1. Yo te fè yon etid istopatolojik tou. Rezilta yo te revele nivo mikozit TNF-, IL-1, MDA, MMP-1, -2, -8, ak TIMP-1 nan tou de tisi yo ak nan sera. ak valè sa yo tonbe dramatikman apre tretman ALA. Redwi SOD ak aktivite GPx nan gwoup mukozit yo te ranvèse nan gwoup ALA-trete yo. Domaj ki te pwodwi pa mukozit nan lestomak la ak ti trip te regrèt nan gwoup la trete ALA, dapre evalyasyon istopatolojik. Se poutèt sa, aplikasyon sipleman ALA nan 5-terapi FU ka aji kòm yon entèvansyon pwoteksyon pou pasyan kansè ak mukozit gastwoentestinal. Nan limyè de konklizyon yo, ALA, yon antioksidan ki sòti nan manje ak pwopriyete pleyotropik, ka yon tretman efikas pou 5-FU-induit mukozit gastwoentestinal, epi anpeche estrès oksidatif, enflamasyon, ak domaj tisi nan pasyan kansè k ap resevwa {{ 24}}FU terapi.

Glycoside nan cistanche ka ogmante tou aktivite SOD nan tisi kè ak fwa, epi redwi siyifikativman kontni lipofuscin ak MDA nan chak tisi, efektivman elimine divès radikal oksijèn reyaktif (OH-, H₂O₂, elatriye) ak pwoteje kont domaj ADN ki te koze. pa OH-radikal. Cistanche phenylethanoid glikozid gen yon kapasite gaya scavenging nan radikal gratis, yon pi wo kapasite diminye pase vitamin C, amelyore aktivite a nan SOD nan sispansyon espèm, redwi kontni an nan MDA, epi yo gen yon sèten efè pwoteksyon sou fonksyon manbràn espèm. Cistanche polisakarid ka amelyore aktivite SOD ak GSH-Px nan eritrosit ak tisi nan poumon sourit eksperimantal senesan ki te koze pa D-galaktoz, osi byen ke diminye kontni an nan MDA ak kolagen an nan poumon ak plasma, ak ogmante kontni an nan elastin, gen yon bon efè scavenging sou DPPH, pwolonje tan an nan ipoksi nan sourit senesan, amelyore aktivite a nan SOD nan serom, ak retade koripsyon fizyolojik nan poumon nan sourit senesan eksperimantal Avèk koripsyon selilè mòfolojik, eksperyans yo te montre ke Cistanche gen bon kapasite antioksidan. epi li gen potansyèl pou yo vin yon dwòg pou anpeche ak trete maladi po aje. An menm tan an, echinacoside nan Cistanche gen yon kapasite siyifikatif pou retire radikal gratis DPPH epi li ka retire espès oksijèn reyaktif, anpeche degradasyon kolagen an gratis radikal-induit, epi tou li gen yon efè reparasyon bon sou domaj anyon radikal gratis timin.

Klike sou Cistanche Tubulosa

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

1. Entwodiksyon

Asid alfa-lipoik (ALA) prezan nan yon pakèt manje, ki gen ladan legim (epina, bwokoli, tomat) ak vyann (espesyalman viscera), osi byen ke plizyè sipleman nitrisyonèl [1,2]. ALA gen anpil efè antioksidan, ki gen ladan aktivasyon an nan mekanis antioksidan andojèn ak chelation nan iyon metal tankou fè, zenk, ak kwiv [3,4]. Kòm yon molekil organosulfur, ALA ka elimine espès oksijèn reyaktif (ROS) epi ranfòse aktivite anzim antioksidan tisi tankou glutatyon peroksidaz (GPx) ak superoksid dismutase (SOD) [5-7]. Akòz pwopriyete antioksidan li yo, yo jwenn ALA diminye lanmò selil ki depann de ALA nan kansè nan poumon [8], kansè nan tete [9], ak kansè nan kolon [10]. Anplis de sa, rechèch pi bonè te montre ke ALA posede pwopriyete anti-enflamatwa [11-16]. ALA travay pou redwi enflamasyon pa modulation ekspresyon de cytokines enflamatwa tankou timè necrosis faktè-alfa (TNF-) ak interleukin-1 (IL{-1) [17,18]. Benefis famasi ALA yo te pwouve nan yon gran varyete domèn ki gen rapò ak medsin, ki gen ladan modèl kadyovaskilè, neropwotektif, mantal, ak anti-aje [19].

Kansè se kòz prensipal mòtalite nan chak peyi ak yon gwo obstak nan lonjevite [20]. Efè segondè yo nan medikaman chimyoterapi yo se youn nan faktè ki pi enpòtan nan feblès nan batay la kont kansè, ak mukozit se youn nan maladi ki pi souvan rankontre nan pasyan kansè [21]. Mukozit se yon kondisyon enflamatwa patolojik karakterize pa ilsè ak enflamasyon nan mukoza nan sistèm gastwoentestinal la [22]. Mukozit ogmante itilizasyon analgesic opioid akòz doulè ak akselere tranzisyon an nan nitrisyon total parenteral akòz pwoblèm nitrisyonèl [23]. Mukozit ak difikilte ki gen rapò ak mikozit diminye kalite lavi pasyan an, pandan y ap devlopman nan kondisyon ki menase lavi ak repons negatif nan terapi se yon kòz enkyetid akòz move tretman blesi [24].

Medikaman chimyoterapi ki pi souvan itilize nan maladi gastwoentestinal se analòg pirimidin 5-fluorouracil (5-FU). 5-FU egzèse efè antikansè li yo lè li anpeche thymidylate synthase (TS) epi li entegre metabolit li yo nan RNA ak ADN [25]. Sepandan, ajan sa a pwovoke mukozit gastwoentestinal, yon efè segondè grav feblès [26]. An patikilye, degradasyon nan balans oksidan-antioksidan, yon ogmantasyon nan nivo pro-enflamatwa sitokin, ak aktivite anzim proteolitik jwe yon gwo wòl nan devlopman efè negatif sa yo. Malgre ke medikaman antioksidan ak anti-enflamatwa yo te itilize nan yon tantativ pou adrese pwoblèm sa a, yon metòd terapetik patikilyèman solid poko idantifye [27,28].

Jiska prezan, plizyè etid rapòte itilizasyon 5-FU ak ALA ansanm nan diferan kansè; sa yo enkli timè nan matris ak kolorektal [29,30]. Anplis de sa, medikaman oksilyè ki ta ka enkòpore nan pwosedi tretman pou anpeche pasyan kansè nan efè negatif mukozit gastwoentestinal pwovoke pa 5-FU ta yon avantaj. Kidonk, objektif etid sa a se te detèmine efè byolojik lè l sèvi avèk ALA nan rat ak yon modèl mukozit ki te kreye pa 5-FU, anplis egzamine posiblite itilizasyon li kòm yon ajan kandida nan pwotokòl tretman.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Bèt

Bèt yo te pran nan Inite Eksperyans Animal nan Near East University. Rat yo (Wistar albino, tou de sèks) yo te kenbe anba yon sik nwa / limyè 12:12 h depi nan kòmansman an nan yon tanperati chanm nan 22 ± 2 ◦C nan yon etablisman imidite kontwole (50 ± 5 pousan). Manje te ad libitum san okenn restriksyon sou manje estanda rat yo ak dlo pou bwè. Rat yo te loje nan yon kaj plexiglass (4 rat pou chak kaj ak dimansyon 60 × 40 × 40 cm). Pwotokòl etid la te otorize pa Komite Etik Eksperyans Lokal Animal Near East University (Apwobasyon No. 2019/01 sou 17 janvye 2019 ak 2020/11 sou 27 Novanm 2020), ak direktiv etik mansyone nan Deklarasyon 1964 nan èlenki ak amannman pita li yo. yo te swiv.

Yo te distribye trant-de rat Wistar Albino tou de sèks ki peze 200-250 g nan kat gwoup uit rat chak (n=8): Kontwòl, ALA, mukozit, ak mukozit plis gwoup ALA. Gwoup Kontwòl la te resevwa sèlman intraperitoneal (ip) saline (SF) yon fwa pa jou pou yon semèn. Gwoup ALA a te resevwa sèlman ALA nan yon dòz 100 mg / kg ip yon fwa pa jou pou yon semèn soti nan jou 1 [31,32]. Gwoup mukozit la te trete ak SF (ip) nan jou 1 ak 400 mg/kg 5-FU ip depi jou 2 rive nan fen eksperyans la [33]. Gwoup mukozit plis ALA te resevwa 100 mg/kg ip ALA nan jou 1 ak 400 mg/kg ip 5-FU nan jou 2. Lè sa a, yo te kontinye administrasyon 100 mg/kg/jou ip ALA jiska fen eksperyans lan. . Bèt yo te kontwole pou yon semèn ki pa gen okenn mòtalite ki gen eksperyans pandan tan sa a. Bèt yo nan tout gwoup yo te euthanized nan fen peryòd rechèch la pa administrasyon an nan yon konbinezon de yon surdozaj ketamin/xylazine. Esay laboratwa yo te fèt nan laboratwa dyagnostik ak laboratwa istopatoloji nan Lopital Animal, Near East University.

2.2. Koleksyon san ak tisi echantiyon

Echantiyon san yo te jwenn epi soumèt nan laboratwa a nan tib separasyon serom. Echantiyon serom yo te separe nan 2000 × g pou 10 min epi yo te kenbe nan -80 ◦C jiskaske plis analiz. Pou elimine siplemantè san, vant, ti trip, ak tisi gwo trip yo te kolekte epi rense ak solisyon tanpon fosfat (pH=7.4). Lè sa a, apre yo te lage nan laboratwa a, yo te sibi yon pwosedi omojenizasyon. Yo te fè omojènize tisi dapre pwotokòl manifakti a lè l sèvi avèk tanpon RIPA (atik No. 10010263, Pakèt No. 0490889-1, Cayman Chemicals, Ann Arbor, MI, USA) ak seri moulen tisi Dounce (D8938, Lot. 3110, Sigma). -Aldrich, Saint Louis, MO, USA) sou glas. Apre omojènizasyon, echantiyon yo te santrifuje nan 1600 × g pou 10 min nan plis 4 ◦C. Teknoloji detèminasyon Bradford pwoteyin yo te itilize pou quantifier nivo pwoteyin nan echantiyon tisi yo, epi supernatant yo te jele nan -80 ◦C pou envestigasyon ki vin apre.

2.3. Mezi endis byochimik

Aktivite alanin transaminase (ALT), aspartate transaminase (AST), fosfataz alkalin (ALP), laktat dehydrogenase (LDH), lipase (LIP), amilaz (AMY), kreyatinin, nitwojèn ure san (BUN), pwoteyin total (TP) , ak nivo albumin yo te mezire kòm endis byochimik nan echantiyon serom lè l sèvi avèk yon BS-240 VET Clinical Chemistry Analyzer (Mindray, Shenzhen, Lachin).

2.4. Mezi Cytokines nan sera ak tisi

Yo te mezire konsantrasyon TNF- ak IL-1 nan sewo ak tisi echantiyon yo lè l sèvi avèk twous tès imunosorban lye ak anzim ki disponib pou rat espesifik (ELISA) (ELR-TNF- ak ELR-IL1 -, RayBiotech Life). Inc., Norcross, GA, USA) swiv enstriksyon manifakti yo.

2.5. Mezi metaloproteinaz matris (MMP) ak inibitè tisi metaloproteinaz-1 (TIMP-1) nan sèr ak tisi

MMPs ak TIMP-1, ki patisipe nan yon varyete de pwosesis byolojik, tankou kansè ak enflamasyon, yo te mezire nan tou de omojene tisi ak nan sera lè l sèvi avèk enstriksyon manifakti a ak rekòmandasyon nan analiz ELISA espesifik rat ki disponib nan komèsyal (MMP{). {2}} E-EL-R0617; Elabscience, Wuhan, Lachin; MMP-2 ELR-MMP2; MMP-8 ELR-MMP8; TIMP-1 ELR-TIMP-1 RayBiotech Life Inc., Norcross, GA, USA). Konsantrasyon serik MMP yo ak TIMP-1 yo te eksprime kòm pg/mL, pandan ke nivo tisi yo te eksprime kòm pg/mg pwoteyin.

2.6. Mezi Malondialdehyde (MDA), GPx, ak SOD nan tisi

Nivo MDA nan tisi yo te evalye lè l sèvi avèk twous tès ki disponib nan komès pou detèmine eta peroksidasyon lipid (TBARS Assay Twous, atik No. 10009055, Cayman Chemicals, Ann Arbor, MI, USA). Prensip la mezire baze sou reyaksyon an ak asid thiobarbituric (TBA) nan dlo bouyi pou 60 min nan yon mwayen asid ak mezi absorpsyon nan melanj reyaksyon an nan 532 nm (Ohkawa et al., 1979). Yo te itilize yon VersaMax Tunable Microplate Reader pou mezire absorbans la (Molecular Devices, San Jose, CA, USA). Konsantrasyon MDA nan tisi yo te eksprime kòm nmol MDA / mg pwoteyin.

Nan tisi yo, yo te evalye aktivite GPx ak SOD lè l sèvi avèk twous tès pare pou itilize. (RANSEL RS505, RANSOD SD125, Randox Laboratories Ltd., Crumlin, UK) lè l sèvi avèk yon analizè otomatik BS-240 VET Chimi klinik (Mindray, Shenzhen, Lachin). Kantite GPx ak SOD nan echantiyon tisi yo (lestomak, ti ​​trip, ak gwo trip) te eksprime kòm pwoteyin U/mg.

2.7. Evalyasyon istopatolojik

Tisi lestomak la, ti trip, ak gwo trip yo te jwenn imedyatman apre peryòd eksperimantal la te fikse nan 10 pousan (v/v) fòmalin net pou 24 èdtan nan tanperati chanm. Apre fiksasyon, tisi yo te mete sou yon aparèy pou swiv tisi, Leica TP1020 (Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Almay). Lè sa a, tisi yo te pran nan aparèy la swiv tisi yo te entegre nan parafine. Seksyon 5-µm epesè yo te koupe nan tisi yo avèk èd nan yon mikrotom Leica RM2255 (Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Almay), epi yo te fè tach ematoksilin ak eozin (HE) woutin. Seksyon yo te egzamine istomorfolojik ak yon mikwoskòp limyè Leica DM500 makonnen ak Leica Microsystem Framework entegre sistèm analiz dijital D (Leica Application Suite vèsyon 3.0 Seri 38132019, Leica ICC50 HD, Leica Biosystems Nussloch GmbH, Nußloch, Almay).

2.8. Analiz estatistik

Yo te itilize lojisyèl GraphPad Prism pou analiz estatistik (vèsyon 7.04, GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Done yo tout te eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda (X ± SD). Yo te itilize yon analiz de divèjans (ANOVA) tès pou konpare gwoup done yo, ki te swiv pa tès konparezon miltip Tukey a. Anplis de sa, yo te itilize tès Kruskal-Wallis pou konpare nòt istomorfolojik nan mitan gwoup yo. Yon diferans nan p <0.05 te konsidere kòm estatistik enpòtan.

3. Rezilta yo

3.1. ALA Afekte pozitivman endis byochimik yo

Tablo 1 montre aktivite anzim serik ak konsantrasyon metabolit yo. Lè yo konpare ak gwoup Kontwòl la, gwoup Mukozit la te gen yon nivo ki pi wo nan albumin, ALT, AST, ALP, LDH, amilaz, lipaz, BUN, kreyatinin, ak TP (p <0.05). –0.0001). Sepandan, te gen yon diferans enpòtan nan albumin, AST, ALT, ALP, LDH, BUN, kreyatinin, amilaz, BUN, ak nivo kreyatinin ant gwoup ALA plis mukozit ak gwoup mukozit la (p <0.05-0.001). ALP, ALT, AST, LDH, ak nivo amilaz yo te tou anpil diferan ant gwoup mukozit ak ALA (p <0.05-0.0001). An konsekans, nivo anzim fwa yo, anzim pankreyas, ak metabolit yo te obsève yo dwe dramatikman redwi nan gwoup mukozit la lè yo te ajoute ALA nan tretman an.

3.2. ALA Diminye Pwodiksyon Sitokin Pro-enflamatwa

Nivo pro-enflamatwa sitokin TNF- ak IL-1 nan echantiyon serom, lestomak, ti ​​trip, ak gwo trip ka wè nan Figi 1. Nivo TNF- ak IL{-1 nan sera ak tout tisi bèt nan gwoup mukozit la te siyifikativman pi wo lè yo konpare ak kontwòl, ALA, ak gwoup mukozit plis ALA (p < 0.05–0.0{ {17}}{{20}}1). Sepandan, nivo TNF- ak IL-1 nan sera ak tout tisi yo te redwi anpil nan gwoup mukozit plis ALA konpare ak gwoup mukozit la (p <{25}}.05-0.0001). Ant kontwòl ak mukozit plis gwoup ALA, te gen yon diferans sibstansyèl nan nivo yo nan TNF- nan ti ak gwo trip yo. (p <0.01). Te gen tou diferans enpòtan nan nivo TNF nan gwo ak ti trip ant ALA ak mukozit plis gwoup ALA. (p <0.01, p <0.001, respektivman). Anplis de sa, te gen diferans estatistik enpòtan ant kontwòl ak mukozit plis gwoup ALA an tèm de IL{24}} nivo nan vant lan (p <0.05). Se poutèt sa, ALA parèt siyifikativman siprime nivo pro-enflamatwa sitokin nan mukozit.

3.3. Tretman ALA diminye peroksidasyon lipid ak ogmante aktivite anzim antioksidan nan tisi yo.

Nivo MDA, GPx, ak aktivite SOD yo te quantifye pou evalye estati peroksidasyon ak antioksidan nan nivo tisi (Figi 2). Nivo MDA nan lestomak gwoup mukozit, ti trip ak gwo trip la te siyifikativman pi wo pase nan gwoup Kontwòl, ALA, ak gwoup Mukozit plis ALA (p <0.05–0 .0001). Anplis de sa, nivo MDA nan gwo trip gwoup mukozit plis ALA yo te anpil diferan de gwoup kontwòl ak ALA (p <0.0001).

Rat nan gwoup Kontwòl ak ALA yo te gen yon nivo SOD siyifikativman pi wo nan tout tisi pase rat nan gwoup Mukozit la (p <{{0}}.05–0.{{8} }}{{10}}01). Nivo SOD nan echantiyon gwo trip yo te siyifikativman diferan nan gwoup ALA ak mukozit plis ALA (p <0.01). Nan echantiyon vant yo, nivo SOD yo te siyifikativman pi ba nan gwoup ALA ak mukozit plis ALA (p <0.05). Anplis de sa, nivo SOD nan ti trip rat ki soti nan gwoup mukozit la te pi ba anpil pase nivo SOD nan gwoup ALA (p <0.05). Sepandan, nivo SOD nan vant ak gwo trip bèt nan mukozit ak mukozit plis gwoup ALA yo te anpil diferan (p <0.05-0.0001).

3.4. Tretman ALA Ogmante Nivo Tisi MMP ak TIMP-1

MMP{{0}}, MMP-2, MMP-8, ak TIMP-1 aktivite (Tablo 2) nan serom, lestomak, ti ​​trip, ak gwo trip yo te siyifikativman. pi wo nan gwoup Mukozit la an konparezon ak gwoup Kontwòl ak ALA (p < 0.05–0.0001). Ogmantasyon nan MMP-1, MMP-2, MMP-8, ak TIMP-1 nivo nan sewo rat mukozit ak nan vant, ti trip, ak gwo trip yo te siyifikativman siprime nan Mukozit plis ALA rat (p <0.05-0.0001), byenke pa te gen okenn diferans enpòtan nan nivo MMP serik-8 ant gwoup Mukozit plis ALA ak Mukozit.